PBMCs中HBV逆转录酶P基因的mRNA表达X基因的整合与肝细胞癌变的关系

目的在外周血单个核细胞(PBMCs)中研究乙型肝炎病毒(HBV)DNA多聚酶/逆转录酶P基因的mRNA表达、X基因的整合与肝细胞癌变的关系。方法设计HBV P基因引物P1、P2,及X基因引物X1、X2。分离HBsAg阳性40例原发性肝癌病人及36例慢性乙肝病人PBMCs,分别提取其基因组总DNA和总RNA,RNA逆转录合成cDNA;PCR检测HBV的X基因整合;RT-PCR方法检测HBV的DNA多聚酶/逆转录酶P基因在PBMCs中的mRNA表达。结果PBMCs中X基因片段的整合率在HCC组为79.5%(31/40),与CH组的整合率50%(18/36)无统计学差异(P>0.05)。P基因的mRNA表达率HCC组为10%(4/40),与CH组表达率33.3%(12/36)有统计学差异(P<0.05)。结论在HCC阶段HBV病毒复制相对静止,大量X基因整合最终导致HCC的发生。     

HBV侵犯外周血单个核细胞对干扰素-γ表达的影响

目的:探讨HBV侵犯外周血单个核细胞(PBMCs)对干扰素-γ(IFN-γ)表达和分泌水平的影响。方法:巢式PCR检测120例慢性HBV感染者PBMCs中HBVDNA;采用实时定量RT-PCR和ELISA法分别检测PBMCs中IFN-γmRNA的表达及血清IFN-γ的分泌水平。结果:120例慢性HBV感染者PBMCs中HBVDNA阳性率为62.5%,且HBeAg阳性组PBMCs中HBVDNA阳性率(80.0%)明显高于HBeAg阴性组(45.0%);慢性HBV感染者IFN-γmRNA的表达和分泌水平均低于健康对照组;慢性HBV感染者PBMCs中HBVDNA阳性组IFN-γmRNA的表达和分泌水平均明显低于HBVDNA阴性组;HBeAg阳性组IFN-γ表达和分泌水平均明显低于HBeAg阴性组。结论:慢性HBV感染者IFN-γ的表达和分泌水平与HBV侵犯PBMCs有关,亦与不同疾病状态相关。     

同一HBV感染者外周血单个核细胞与肝组织中HBV DNA

用聚合酶链反应(PCR)及Southern印迹杂交检测了16例慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染者外周血单个核细胞(PBMCs)及肝组织中HBV DNA.有13例同时在PBMCs及肝组织中检出HBV DNA,1例仅在PBMCs中检出,1例只在肝组织中检出。结果表明,在慢性HBV感染过程中PBMCs可同时被感染。     

慢性乙型病毒性肝炎免疫功能变化

目的 :探讨慢性乙型病毒性肝炎患者细胞免疫功能状态。方法 :测定 5 6例慢性乙型病毒性肝炎患者及2 3例正常人外周血T细胞亚群。结果 :慢性乙型病毒性肝炎组CD3 + 细胞百分比、CD4+ 细胞百分比及CD4+ /CD8+ 比值明显降低 (P <0 .0 5 ,P <0 .0 5及P <0 .0 0 1) ,CD8+ 细胞百分比明显增高 (P <0 .0 0 1) ,与对照组比较有显著差异。结论 :慢性乙型病毒性肝炎患者T细胞介导的细胞免疫功能紊乱 ,与慢性乙型病毒性肝炎病人HBV持续复制、肝组织免疫病理损伤及病程慢性化可能有一定的关系。     

Toll样受体4在乙型肝炎组织及细胞株HepG2/HepG2.2.15内的表达特征

 [目的]探讨Toll样受体4（TLR4）在乙型肝炎组织及细胞株HepG2/HepG2.2.15内的表达特征。[方法]采用免疫组化染色法检测慢性乙型病毒性肝炎（CHB）63例、慢性重型肝炎（CSH）11例及健康对照组10例肝组织TLR4的表达,综合评分法判断结果。常规培养肝癌细胞株HepG2及HepG2.2.15,采用直接免疫荧光流式细胞术（FCM）检测TLR4在细胞上表达的平均荧光强度（MFI）及阳性细胞率。[结果]TLR4在慢性乙型病毒性肝炎及慢性重型肝炎患者肝组织上的表达明显高于健康对照组（P〈0.01）,主要表达于肝细胞胞浆及部分胞膜,在慢性乙型病毒性肝炎中,TLR4的表达强度与肝组织炎症活动度分级（G）呈显著正相关（r=0.632,P〈0.001）。TLR4在肝癌细胞株HepG2.2.15上表达的平均荧光强度及阳性细胞率分别为18.24±8.18、（17.79±9.46）%,明显高于HepG2的2.33±0.41、（1.71±0.77）%（P〈0.001）。[结论]TLR4的表达与乙型病毒性肝炎肝组织的炎症活动密切相关,而乙型肝炎病毒可直接上调细胞TLR4的表达,故TLR4参与了乙型病毒性肝炎发病过程中的免疫反应并极有可能与免疫损伤有关。     

Toll样受体4在乙型肝炎组织及细胞株HepG2/HepG2.2.15内的表达特征

[目的]探讨Toll样受体4（TLR4）在乙型肝炎组织及细胞株HepG2/HepG2.2.15内的表达特征。[方法]采用免疫组化染色法检测慢性乙型病毒性肝炎（CHB）63例、慢性重型肝炎（CSH）11例及健康对照组10例肝组织TLR4的表达,综合评分法判断结果。常规培养肝癌细胞株HepG2及HepG2.2.15,采用直接免疫荧光流式细胞术（FCM）检测TLR4在细胞上表达的平均荧光强度（MFI）及阳性细胞率。[结果]TLR4在慢性乙型病毒性肝炎及慢性重型肝炎患者肝组织上的表达明显高于健康对照组（P〈0.01）,主要表达于肝细胞胞浆及部分胞膜,在慢性乙型病毒性肝炎中,TLR4的表达强度与肝组织炎症活动度分级（G）呈显著正相关（r=0.632,P〈0.001）。TLR4在肝癌细胞株HepG2.2.15上表达的平均荧光强度及阳性细胞率分别为18.24±8.18、（17.79±9.46）%,明显高于HepG2的2.33±0.41、（1.71±0.77）%（P〈0.001）。[结论]TLR4的表达与乙型病毒性肝炎肝组织的炎症活动密切相关,而乙型肝炎病毒可直接上调细胞TLR4的表达,故TLR4参与了乙型病毒性肝炎发病过程中的免疫反应并极有可能与免疫损伤有关。     

慢性HBV感染者外周血单个核细胞中miR-194-5p和MagT1表达水平检测及其意义

目的：检测慢性乙型肝炎病毒（HBV）感染者外周血单个核细胞（PBMCs）中miR-194-5p和镁离子（Mg²⁺）转运蛋白1（MagT1）表达水平,阐明其可能的临床意义。方法：收集40例健康体检者（健康对照组）、40例HBV携带者（HBV携带组）、40例轻中度慢性乙型肝炎（轻中度CHB组）和40例重度慢性乙型肝炎（重度CHB组）患者的临床资料。采集各组研究对象外周血并利用Ficoll-Hypaque密度梯度离心法分离PBMCs,采用RT-PCR法检测各组研究对象PBMCs中miR-194-5p及MagT1 mRNA表达水平,Western blotting法检测各组研究对象PBMCs中MagT1蛋白表达水平,检测各组研究对象外周血和PBMCs中Mg⁺水平,流式细胞术检测各组研究对象PBMCs中CD8+T淋巴细胞表面分子程序性死亡受体1（PD-1）和自然杀伤细胞受体2群D分子（NKG2D）表达水平。在293T细胞中分别转染miR-194-5p mimic质粒（miR-194-5p mimic组）和miR-NC质粒（miR-NC组）,应用双荧光素酶报告基因实验检测2组293T细胞中荧光素酶活性。结果：与健康对照组比较,HBV携带组、轻中度CHB组和重度CHB组患者PBMCs中MagT1 mRNA和蛋白表达水平、Mg²⁺水平及CD8+T淋巴细胞表面分子NKG2D表达水平均明显降低（P<0.05）,miR-194-5p mRNA及CD8+T淋巴细胞表面分子PD-1表达水平升高（P<0.05）。与HBV携带组和轻中度CHB组比较,重度CHB组患者PBMCs中MagT1 mRNA和蛋白表达水平、Mg²⁺水平及CD8+T淋巴细胞表面分子NKG2D表达水平均降低（P<0.05）,miR-194-5p mRNA及CD8+T细胞表面分子PD-1表达水平降低（P<0.05）。与HBV携带组比较,轻中度CHB组患者PBMCs中MagT1 mRNA和蛋白表达水平、Mg²⁺水平及CD8+T淋巴细胞表面分子NKG2D表达水平降低（P<0.05）,miR-194-5p mRNA及CD8+T淋巴细胞表面分子PD-1表达水平升高（P<0.05）。双荧光素酶报告基因实验,MagT1是miR-194-5p靶基因。结论：miR-194-5p可能通过靶向下调MagT1表达,引起MagT1介导的Mg²⁺内流障碍,造成CD8+T淋巴细胞免疫活性降低,导致乙型肝炎慢性发展。     

妊娠并发乙型病毒性肝炎联合免疫阻断母婴传播136例临床分析

乙型病毒性肝炎由乙型肝炎病毒 (HBV)引起。我国是乙型病毒性肝炎的高发区 ,在孕妇中HBsAg的携带率为5 %～10 % ,妊娠并发乙型肝炎的发病率为 0 .0 2 5 %～ 1.6 %。HBV经母婴传播所引起的HBV感染约占我国婴幼儿感染的 1/ 3。人群中 4 0 %～ 5 0 %的慢性HBsAg携带者是母婴传播造成的[1] 。本文将我院 4年中妊娠并发乙型病毒性肝炎联合免疫阻断母婴传播 136例临床分析如下。1　资料与方法1.1　一般资料　 136例乙肝带毒孕妇 (包括HBV无症状携带者 82例 ) ,年龄最小 2 1岁 ,年龄最大 36岁。1.2　方法　乙肝免疫球蛋白 (HBIg)与乙肝疫…     

PreS1Ag与HBcAg检测在诊断乙肝病毒复制的意义

目的分析乙型肝炎病毒（HBV）前S1抗原（PreS1Ag）、核心抗原（HBcAg）与HBV DNA之间的关系,探讨对判断乙肝病毒的复制与指导乙肝的治疗的意义。方法收集门诊和住院乙型病毒性肝炎患者血清标本435例,检测血清乙肝标志物（两对半）、PreS1Ag、HBcAg及HBV DNA,统计分析其中的HBV DNA≥103拷贝/ml（HBV DNA阳性）的393例。结果在HBV DNA阳性393份标本中PreS1Ag、HBcAg和HBeAg表达阳性率分别为83.7%（329/393）,44.3%（174/393）与52.5%（205/393）。PreS1Ag的阳性表达率最高,与HBcAg和HBeAg的表达阳性率差异有统计学意义（P〈0.05）。而HBcAg和HBeAg的表达阳性率无统计学差异（P〉0.05）,PreS1Ag阳性标本中的,HBcAg阳性和阴性百分率的差异有统计学意义（P〈0.05）。结论检测PreS1Ag和HBcAg与HBV DNA关系密切,反映乙肝病毒复制状况。建议在传统两对半的基础上联合检测PreS1Ag和HBcAg。     

肾组织中HBV的检出及其意义

目的：探讨HBsAg,HBcAg及HBV DNA在乙型肝炎病毒感染者肾脏组织中的表达情况及其意义。方法：对63例乙型肝炎病毒相关性肾炎（HBV-GN）患者、20例非乙型肝炎病毒相关性肾炎（NHBV-GN）患者、12例血清HBV标志阳性的其它肾病（肾结核、肾结石、肾细胞癌、肾萎缩等）患者用免疫组织化学方法检测肾穿刺活检组织HBsAg和HBcAg的表达;继而应用聚合酶链反应（PCR）技术对其阳性病例进一步检测肾组织HBV DNA。 结果： HBV-GN患者肾脏组织中均可检出HBsAg和HBcAg阳性颗粒,阳性率分别为76.2%(48/63),42.9%(27/63);20例NHBV-GN患者肾组织均未检出HBsAg和HBcAg,与HBV-GN患者相比有统计学意义(P<0.05);12例肾病患者肾组织HBsAg和HBcAg阳性率均为66.7%,与HBV-GN患者相比无统计学意义(P>0.05)。血清HBeAg 阳性与血清HBeAg阴性的HBV-GN患者相比,肾脏组织中HBsAg和HBcAg表达情况差异无显著性 (P>0.05)。17例免疫组织化学阳性的HBV-GN患者肾组织检出HBV DNA 13例,阳性率为76.5%,8例免疫组织化学阳性的其它肾病患者肾组织检出HBV DNA 2例,阳性率为25%,两者比较有统计学意义(P<0.05)。结论：HBV定位肾脏,不仅可引起肾脏损害,并对病毒的复制、保存及乙型肝炎的传播有一定作用。     

PCR检测乙肝病人肝组织和血中HBVDNA

采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）结合地高辛素标记的乙肝病毒ＤＮＡ探针（ＨＢＶＤＮＡ－Ｄｉｇ）杂交技术检测了４９份乙型肝炎患者的肝组织标本和４６份血清标本中的ＨＢＶＤＮＡ。结果表明：ＰＣＲ检出乙肝病人肝组织和血清中ＨＢＶＤＮＡ阳性率比斑点杂交高（Ｐ＜０．０５）。在２１例同时检测了肝组织和血清中ＨＢＶＤＮＡ的病人中，肝组织ＨＢＶＤＮＡ阳性率为５７．１％（１２／２１）；血清阳性率为６１．３％（１３／２１）；两者总阳性率为８０．９％（１７／２１），说明用ＰＣＲ同时检测肝组织和血中ＨＢＶＤＮＡ，可明显提高ＨＢＶＤＮＡ的检出率。     

病毒性肝炎中庚肝病毒感染的分子流行病学调查

为探讨山东地区各型病毒性肝炎中庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）的感染状况,采用逆转录－套式聚合酶链反应法（ＲＴ－ｎＰＣＲ）检测１５９例病毒性肝炎血清ＨＧＶ－ＲＮＡ。结果表明：甲型和戊型肝炎ＨＧＶ－ＲＮＡ均阴性。乙型肝炎ＨＧＶ－ＲＮＡ的检出率,在急性肝炎（０／２０）、慢性肝炎（２／５０）、肝硬变（１／１０）和慢性重型肝炎（１／５）依次升高。慢性丙型肝炎ＨＧＶ－ＲＮＡ的检出率为３０．０％。非甲－戊（ＮＡ－Ｅ）型肝炎ＨＧＶ－ＲＮＡ的检出率为２３．３％,且在急性肝炎（２／１５）、慢性肝炎（２／８）、肝硬变（３／５）中依次升高。肝细胞癌４例,２例ＨＧＶ－ＲＮＡ阳性。本组ＨＧＶ－ＲＮＡ阳性１９例中,８例有输血史,７例有多次住院史,４例感染来源不清。提示ＨＧＶ感染常见于乙、丙、非甲－戊型肝炎和肝癌中,其感染途径可能与输血和医院内传播有关。     

慢性乙型肝炎病人血液单核细胞中HBV标志物的检出

本文报告在慢性乙型肝炎38例的外周血单核细胞(PBMC)和T、B淋巴细胞中检测到HBV标志物阳性29例(76.3％)。其中17例病人的PBMC中HBsAg,HBeAg和HBV-DNA阳性者分别为4,2和14例。21例病人分离出T,B淋巴细胞,其中T细胞中HBsAg,HBeAg与HBV-DNA阳性分别为2,2和1例;B细胞中分别为3,6,1例。血清HBV标志物阳性的病人其PBMC中这些标志物的检出率(13/15例)明显高于血清抗HBc和抗HBe阳性的稳定期病人(3/7例)。提示HBV可能感染和损害慢性乙型肝炎病人的淋巴细胞,这也许是乙型肝炎病人免疫功能异常的原因之一。     

应用聚合酶链反应检测支气管肺泡灌洗液中的乙肝病毒

用聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测了４５例肺科病人的支气管肺泡灌洗液（ＢＡＬＦ）中乙肝病毒（ＨＢＶ），同时对其中２４例作血清ＨＢＶ检测，发现ＢＡＬＦ中ＨＢＶ阳性率为２６．６７％（１２／４５）、血清ＨＢＶ阳性率为４１．６７％（１０／２４）；血清ＨＢＶ阳性者其ＢＡＬＦ方有可能检出ＨＢＶ、血清ＨＢＶ阴性者其ＢＡＬＦ不能检出ＨＢＶ，ＢＡＬＦ中ＨＢＶ脱氧核糖核酸（ＨＢＶ－ＤＮＡ）可以复制、有传染性。     

成人病毒性肝炎患者柯萨奇病毒感染研究

目的 :探讨成人病毒性肝炎患者中柯萨奇病毒B组 (CoxsackievirusB ,CVB)散发性感染状况。方法 :用ELISA法测定病毒性肝炎患者血清中抗CVB -IgM抗体 ,同时应用荧光定量PCR方法测定HBVDNA及HCVRNA含量。结果 :4 5 7例病毒性肝炎患者中抗CVB -IgM阳性 13例 ,其中CVB单独感染者 1例。CVB感染组与阴性对照组在临床表现、肝功能试验、HBVDNA含量等方面相比无明显差异。结论 :病毒性肝炎患者中CVB感染率为 2 .84 % ,其肝炎病原学意义有待进一步研究     

多聚酶链反应检测乙型肝炎患者外周血单个核细胞中的HBVDNA

本文应用多聚酶链反应（ＰＣＲ）技术检测了６９例乙型肝炎患者（其中慢性迁延性肝炎１７例，慢性活动性肝炎２３例，肝炎后肝硬化１２例，重症乙肝１７例）外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）中的ＨＢＶＤＮＡ存在状态。结果显示，ＰＢＭＣ中ＨＢＶ－ＤＮＡ总阳性率为４６％，而各型乙肝间ＰＢＭＣ中ＨＢＶＤＮＡ阳性率差异无显著性（Ｐ＞０．０５），提示ＨＢＶ对ＰＢＭＣ的感染，似与乙型肝炎的临床类型无明显的相关性。     

IgM型核心抗体对急性乙型肝炎及慢性活动型肝炎的诊断价值

以酶联免疫吸附试验(ELISA)检测153例各型肝炎及HBsAg携带者,试图观察(1) IgM型抗-HBc能否做为急性乙肝的血清早期诊断标志;(2) IgM型抗-HBc能否做为慢活肝血清诊断标志。检测结果:IgM抗-HBc是HBV近期感染并持续增殖的血清标志之一。     

原发型肝癌的肝内HBVDNA整合状况

应用~(32)P标记的克隆HBVDNA片段探针对30例原发型肝癌病人的肝内组织进行了DNA电泳转移Southern杂交。结果检出HBVDNA整合者21例(70％),其中癌组织整合者18例(60％),癌外组织整合者16例(53％),双份组织均整合者13例(43％)。杂交带分析发现,不同例和同例肝内不同组织的HBVDNA整合模式都不相同,提示整合具随机性并可能发生整合和/或侧翼序列的基因重排。由于探针含HBV基因组中1.4～2.8kb的DNA顺序,故结果实际反映S基因及其下游增强子的整合状况。基因重排和增强子插入整合并活化细胞原癌基因的致癌机理在本文也进行了初步探讨。     

HBsAg阴性乙型肝炎患者血清HBV-DNA检测的临床意义

应用斑点杂交方法对36例HBsAg阴性的各种类型的乙型肝炎患者进行了血清HBV-DNA的检测,33例获得阳性结果。目前认为血清和肝组织HBV-DNA的检测是判断HBV感染和复制的特异和敏感方法,对于HBV感染的临床诊断和流行病学的研究有一定意义。     

乙型肝炎病毒基因定量检测及临床应用

目的：了解乙型肝炎患者血清乙型肝炎病毒基因(HBVDNA)水平与乙型肝炎病毒(HBV)感染的临床关系及HBVDNA定量分析在拉米夫定治疗中的应用；方法：用聚合酶链反应(PCR)技术测定109例HBV感染者血清中HBVDNA水平及观察35例乙型肝炎患者拉米夫定治疗效果；结果：109例HBV感染者血清中HBVDNA水平与乙型肝炎病毒五项指标(HBV—M)的阳性模式有一定相关性，在HBsAg、HBeAg阳性模式中约有93％以上病例HBVDNA阳性，其含量最高，而在HBsAg，抗—HBe，抗—HBc阳性模式中其HBVDNA阳性检出率仅为67．7％，其含量不高。HBVDNA水平与乙型肝炎临床分型的相关性不显著(P＞0．05)。拉米夫定治疗前后血清HBVDNA含量有显著性差别(P＜0．01)；结论：应用PCR技术定量检测血清HBVDNA含量是诊断乙型肝炎和了解病毒复制与临床关系的重要指标，是指导乙型肝炎抗病毒治疗的重要手段。