孕鼠被动吸烟对新生大鼠肺组织TNF-α和CINC表达影响的研究

目的研究孕鼠被动吸烟对新生大鼠肺组织肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor-α, TNF-α）和细胞因子诱生的中性粒细胞趋化因子（cytokine-induced neutrophil chemoattractant, CINC）表达的影响,探讨产前被动吸烟对新生大鼠肺损伤的机制. 方法分别将SD大鼠于妊娠第1、8和15天置于烟箱内,每天被动吸烟2 h建立孕鼠被动吸烟动物模型,孕鼠每天置于无烟箱内2 h为对照组,于妊娠第20天剖宫取胎鼠测体重,采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）技术和酶联免疫吸附（ELISA）法检测新生鼠肺组织TNF-α、CINC mRNAs的表达和TNF-α的蛋白水平. 结果不同孕期被动吸烟SD大鼠所产新生鼠体重较对照组明显下降（P〈0.05或0.01）,肺组织TNF-α mRNA的表达与对照组比较明显增强 （P〈0.01）,肺组织TNF-α蛋白含量明显增加（P〈0.05或0.01）;孕鼠妊娠早、中期被动吸烟所产新生鼠肺组织CINC mRNA表达与对照组和晚期组比较明显增强（P〈0.01）. 结论孕鼠被动吸烟可影响新生大鼠肺组织炎性介质TNF-α和CINC的表达,这可能是引起新生鼠肺损伤的重要原因之一.     

血管内皮生长因子及地塞米松对肺泡Ⅱ型上皮细胞表面活性蛋白B和转化生长因子-β1表达的影响及意义

目的 探讨血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)及地塞米松对肺泡Ⅱ型上皮细胞(typeⅡalveolar epithelial cell,AECⅡ)表面活性蛋白-B(surfactant protein B,SP-B)和转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)表达的影响及意义. 方法 原代培养早产鼠AECⅡ,采用实时荧光定量聚合酶链反应技术(real-time quantitative polymerasechain reaction,real-time PCR)、免疫细胞化学染色等方法,观察不同剂量的VEGF(25 ng/ml组、50 ng/ml组和100 ng/ml组)和不同剂量的地塞米松(25 nmol/ml组、50 nmol/ml组、100 nmol/ml组、200 nmol/ml组)对AECⅡSP-B mRNA及TGF-β1 mRNA表达的影响.同时设一对照组.采用方差分析或q检验进行统计学分析. 结果 与对照组相比,25 ng/ml VEGF组及25 nmol/ml、50 nmol/ml、100 nmol/ml和200 nmol/ml地塞米松各组SP-B mRNA表达水平明显上升(13.500±3.172、3.547±0.690、5.219±0.782、3.493±0.335和3.981±1.133与1.001±0.059,q分别为-5.286、-4.943、-7.228、-9.906、-3.525,P均＜0.05).25 ng/ml VEGF组及50、100、200 nmol/ml地塞米松组TGF-β1 mRNA表达明显下降(0.451±0.078、0.579±0.019、0.422±0.020和0.769±0.025与1.019±0.226,q分别为4.110、3.356、4.551、1.901,P均＜0.05),其他各组与对照组相比差异无统计学意义(P＞0.05).免疫细胞化学结果显示,25 ng/ml VEGF组及50、100、200 nmol/ml地塞米松组AECⅡ染色阳性率分别为23％、26％、22％和29％;对照组AECⅡ染色阳性率为80％.结论 VEGF及地塞米松均有促进SP-B表达的作用,TGF-β1可能对SP-B的表达有负调控作用,VEGF和地塞米松可能是通过调控与TGF-β1有关的调控通路发挥促进SP-B表达的作用.     

内毒素对新生大鼠肺组织金属基质蛋白酶2及其抑制因子2表达影响的研究

目的　探讨金属基质蛋白酶 2 (MMP 2 )和金属基质蛋白酶抑制因子 2 (TIMP 2 )蛋白及mRNA在内毒素 (LPS)致新生大鼠肺损伤中的作用。　方法　将新生 7日龄大鼠 88只随机分为八组 ,即生理盐水对照组 (对照组 ) ,LPS注射后 30min组 ,1h ,2h ,4h ,8h组 (每组 8只 ) ,16h组 (16只 ) ,2 4h组 (2 4只 ) ,其中 16h组死亡 8只 ,2 4h组死亡 17只。观察不同时间点存活大鼠肺组织大体、光镜和电镜下的病理改变 ,应用免疫组化和RT PCR方法分别检测肺组织MMP 2和TIMP 2蛋白及mRNA的表达改变。　结果　病理改变证实了新生大鼠肺出血的发生 ,对照组MMP 2mRNA和蛋白的表达相对值分别为 (0 .5 2 3± 0 .0 30 )和 (12 6 .2 0± 17.98) ;注射LPS后 4h和 8hMMP 2mR NA(0 .82 6± 0 .5 6 7)和MMP 2蛋白 (15 0 .77± 9.80 )表达达高峰 ,差异有显著性 (P <0 .0 1)。TIMP 2蛋白及mRNA的表达无明显改变。　结论　用LPS制备了新生大鼠肺出血的动物模型 ,肺组织MMP 2的降解作用明显增加 ,可能导致肺出血的发生。     

妊娠期糖尿病胎盘组织血管内皮生长因子、基质金属蛋白酶-9和Ⅳ型胶原的表达及意义

目的 探讨血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和Ⅳ型胶原(Ⅳ-C)在妊娠期糖尿病(GDM)胎盘中的表达及其与GDM治疗的关系. 方法 选择2007年6月至12月在太原市妇幼保健医院住院分娩的GDM孕妇48例为GDM组,取同期分娩的正常晚期妊娠妇女36例为对照组,用免疫组织化学法测定VEGF、MMP-9及Ⅳ-C在胎盘中的表达并比较其表达情况. 结果 (1)GDM组胎盘VEGF、MMP-9及Ⅳ-C的阳性表达率明显高于对照组(70.8%和30.6%,64.6%和30.6%,62.5%和27.8%,P值均<0.05);(2)GDM组内血糖控制不满意者胎盘VEGF、MMP-9及Ⅳ-C的阳性表达率分别为95.2%、80.9%和85.7%,明显高于对照组(P<0.05);血糖控制满意组分别为51.9%、51.9%和44.4%,与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);(3)GDM组胎盘MMP-9的表达与VEGF和Ⅳ-C的表达均呈正相关(r=0.579,P<0.01;r=0.596,P<0.01). 结论 GDM胎盘组织中VEGF、MMP-9及Ⅳ-C的高表达与孕妇血糖控制水平有关.     

产前应用地塞米松和沐舒坦对胎鼠及仔鼠肺组织Toll样受体4表达影响的比较

目的 比较产前单次应用小剂量地塞米松与联合应用地塞米松加盐酸氨溴索(沐舒坦)对胎鼠及仔鼠肺Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)基因及蛋白表达的影响. 方法 54只SD孕鼠随机分为3组:地塞米松组(干预组1)、地塞米松加沐舒坦组(干预组2)和生理盐水对照组.妊娠17 d,腹腔注射给药,干预组1予地塞米松0.2 mg/kg,干预组2予地塞米松0.2 mg/kg加沐舒坦100 mg/kg,对照组予等体积生理盐水.分别在妊娠19d及生后3、7d取胎(仔)鼠肺组织,通过逆转录聚合酶链反应、免疫组织化学和蛋白质免疫印迹技术检测各组胎(仔)肺组织中TLR4基因转录水平及蛋白表达差异.统计学方法 采用方差分析和独立样本t检验. 结果 (1)孕19 d,2个干预组分别与对照组相比,TLR4 mRNA在胎鼠肺组织中的表达均明显增加(对照组:0.26±0.18,干预组1:0.39±0.21,t=5.866,P＜0.05;对照组:0.27±0.22,干预组2:0.46±0.13,t=9.572,P＜0.01).生后3d和7d干预组2与对照组相比,TLR4 mRNA在仔鼠肺组织中的表达均明显增加(生后3 d:0.59±0.23与0.47±0.24,t=2.295,P＜0.05;生后7 d:0.52±0.12与0.35±0.17,t=4.219,P＜0.05),但干预组1与对照组比较,差异无统计学意义(生后3 d:0.45±0.22与0.44±0.14,t=0.128,P＞0.05;生后7 d:0.40±0.16与0.36±0.12,t=1.365,P＞0.05).(2)免疫组织化学:孕19 d,2个干预组分别与对照组相比,TLR4蛋白表达量在胎鼠肺组织中的表达均明显增加(对照组:0.20±0.29,干预组1:0.35±0.32,t=7.179,P＜0.05;对照组:0.20±0.29,干预组2:0.39±0.25,t=10.764,P＜0.01).生后3d和7d干预组2与对照组相比,TLR4蛋白表达量在仔鼠肺组织中的表达均明显增加(生后3 d:0.55±0.32与0.37±0.18,t=7.121,P＜0.05;生后7d:0.41±0.29与0.25±0.24,t=6.355,P＜0.05),但干预组1与对照组比较,差异无统计学意义(生后3 d:0.40±0.21与0.37±0.18,t=0.683,P＞0.05;生后7 d:0.28±0.31与0.25±0.24,t=0.462,P＞0.05).免疫印迹法:孕19 d,2个干预组分别与对照组相比,TLR4蛋白表达量在胎鼠肺组织中的表达均明显增加(对照组:0.15±0.12,干预组1:0.27±0.20,t=7.835,P＜0.05;对照组:0.16±0.18,干预组2:0.34±0.16,t=10.470,P＜0.01).生后3d和7d干预组2与对照组相比,TLR4蛋白表达量在仔鼠肺组织中的表达均明显增加(生后3 d:0.37±0.20与0.25±0.22,t=6.379,P＜0.05;生后7 d:0.35±0.15与0.24±0.13,t=5.152,P＜0.05),但干预组1与对照组比较,差异无统计学意义(生后3 d:0.32±0.26与0.25±0.16,t=1.167,P＞0.05;生后7 d:0.29±0.19与0.24±0.10,t=1.248,P＞0.05). 结论 小剂量地塞米松可能参与调控大鼠胎肺中TLR4表达的上调,这可能是糖皮质激素促胎肺成熟的重要机制之一;小剂量地塞米松联合沐舒坦产前应用可能不仅参与调控大鼠胎肺组织中TLR4表达的上调,也上调生后大鼠肺中TLR4的表达.     

苦杏仁甙对体外高氧暴露早产大鼠肺泡Ⅱ型细胞增殖细胞核抗原、细胞周期蛋白D1及p21CIP1表达的影响

肺泡Ⅱ型细胞（type Ⅱ alveolar epithelial cell，AECⅡ）在生后肺发育和肺组织损伤修复过程中占有重要地位，高氧暴露导致肺组织损伤，其修复有赖于AECⅡ的正常增殖。增殖细胞核抗原（proliferation cell nuclear antigen，PCNA）在细胞周期G1期即开始表达，S期达高峰；细胞周期蛋白D1（cyclin D1）、p^21CIP1是主要的G1／S转换点调控蛋白。[第一段]     

高氧致新生鼠肺损伤中基质金属蛋白酶8和基质金属蛋白酶抑制剂1的动态表达及对Ⅲ型胶原的影响

基质金属蛋白酶类（matrix metalloproteinases，MMPs）是维持细胞外基质（extracellular matrix，ECM）稳定的一蛋白酶家族，它们与其特异性抑制剂（tissue inhibitors of metalloproteinases，TIMPs）结合，共同参与组织重塑等过程。MMP-8是一种胶原酶，能降解间质性胶原，在成人纤维化中起重要作用。本研究以高氧致新生鼠肺损伤模型为对象，动态观察肺组织中MMP-8、TIMP-1蛋白和mRNA表达以及Ⅲ型胶原蛋白含量的变化，以探讨在高氧致新生鼠肺损伤中MMP-8／TIMP-1对Ⅲ型胶原（collagen，Col）的作用。