养阴化瘀解毒方通过PI3K/Akt信号通路调控低氧环境下结肠癌细胞的自噬和凋亡

目的：观察不同氧浓度环境对结肠癌细胞增殖、自噬的影响，并基于磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路探讨养阴化瘀解毒方在低氧环境下对结肠癌细胞自噬及凋亡的影响。方法：HCT-116细胞分为常氧组、1%低氧组、5%低氧组，通过细胞增殖与毒性检测（MTS）法检测细胞存活率，单丹磺酰尸胺（MDC）染色观察不同氧浓度下细胞自噬荧光表达情况；在5%低氧微环境下用养阴化瘀解毒方干预HCT-116细胞，分为正常组、空白血清组、养阴化瘀解毒方组（养阴化瘀解毒方含药血清5%、15%、25%）；通过MTS法计算各组细胞的抑制率；单丹磺酰尸胺（MDC）染色检测各组自噬细胞率的变化；利用膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素（Annexin V-FITC）/碘化丙锭（PI）流式细胞术检测各组细胞凋亡率；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测不同组自噬蛋白微管相关蛋白1轻链3(LC3Ⅱ/Ⅰ)、酵母Atg6同源物（Beclin-1）、泛素结合蛋白（p62）和凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2/腺病毒E1B相互作用蛋白3(BNIP-3)、Bcl-2关联X蛋白（Bax）、活化的胱天蛋...     

甘草查尔酮B诱导小鼠黑色素瘤细胞凋亡作用

目的:研究甘草查尔酮B(licochalcone B)诱导小鼠黑色素瘤细胞(B16F0)凋亡作用并初步探讨其机制.方法:取对数生长期B16F0细胞按5 000个/孔接种于96孔板中,MTT染色法检测甘草查尔酮B(5,7.5,10,12.5,15 mg·L-1)作用24 h后,对B16F0细胞的增殖抑制作用;取对数生长期B16F0细胞按1×105个/孔接种于6孔板中,甘草查尔酮B(7.5,15mg·L-1)作用24 h后,Hoeehst 33258染色法观察细胞凋亡形态;取对数生长期B16F0细胞按5×105个/瓶接种于细胞培养瓶中,甘草查尔酮B(5,7.5,10,12.5 mg·L-1)作用24 h后,流式细胞仪检测细胞凋亡率;RT-PCR法检测与凋亡相关基因Bcl-2相关X蛋白(Bax),B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2) mRNA表达;荧光法检测半胱氨酸蛋白酶蛋白9(Caspase-9)和半胱胺酸蛋白酶蛋白3(Caspase-3)相对活性.结果:甘草查尔酮B能有效抑制B16F0细胞增殖,作用24 h后对细胞的生长有明显的抑制作用,IC.011.3 mg·L-1,在5～15 mg·L-1表现出明显的剂量依赖,细胞出现明显凋亡特征,随甘草查尔酮B浓度的增加凋亡率逐渐升高;甘草查尔酮B(10,12.5 mg·L-1)能明显下调Bcl-2/Bax,上调Caspase-3,Caspase-9的表达,其中7.5 mg·L-1甘草查尔酮B引起Caspase-9,Caspase-3的活化程度较12.5 mg·L-1高.结论:甘草查尔酮B可能通过激活线粒体调控的凋亡通路诱导B16F0细胞凋亡.     

肉桂醛氧氟沙星酰腙诱导人胰腺癌细胞凋亡的实验研究

 目的 探讨肉桂醛氧氟沙星酰腙[N-(3-苯亚丙烯基)-6-氟-1, 8-(2, 1-丙氧基)-7- (4-甲基哌嗪-1-基)-喹啉-4 (1H)-酮-3-甲酰肼,肉桂醛氧氟沙星酰腙]诱导人胰腺癌BxPC-3细胞凋亡的作用及机制。方法 用不同浓度的肉桂醛氧氟沙星酰腙处理BxPC-3细胞,采用四甲基偶氮唑蓝 (MTT)比色法,检测肉桂醛氧氟沙星酰腙对BxPC-3细胞的增殖抑制效应;采用形态学、TUNEL法和DNA琼脂糖凝胶电泳,检测细胞凋亡的发生;应用蛋白印迹技术检测凋亡相关基因 caspase-3,caspase-8,caspase-9,bcl-2,bax和细胞色素C的表达。结果 肉桂醛氧氟沙星酰腙在体外对BXPC-3细胞有显著增殖抑制效应,且呈浓度、时间依赖关系;在肉桂醛氧氟沙星酰腙作用下,BxPC-3细胞出现显著的细胞凋亡征象;Hoechst33258/PI荧光染色显示细胞固缩,核染色质聚集或断裂,形成凋亡小体;TUNEL实验统计细胞凋亡率显著高于对照组（P     

牡丹皮组分抑制“毒损因子AGEs”生成的作用及机制研究北大核心CSCD

晚期糖基化终末产物(advanced glycation end products,AGEs)可导致糖尿病及其并发症等多种疾病。该研究构建体外非酶糖基化反应模型——牛血清白蛋白/丙酮醛(BSA/MGO reaction system)与牡丹皮提取物孵育,采用HPLC和UPLC-Q-TOF-MS/MS检测辨识牡丹皮提取物与丙酮醛共孵育液中抑制AGEs生成的活性成分,筛选出salvianan、paeoniside、苯甲酰芍药苷、牡丹苷J、没食子酰氧化芍药苷、氧化苯甲酰芍药苷、5-羟基-3S-羟甲基-6-甲基-2,3-二氢苯并呋喃、没食子酰芍药苷等差异性成分,推测其为牡丹皮提取物捕捉MGO的潜在活性成分;同时采用BSA-葡萄糖反应体系考察不同浓度的牡丹皮提取物(饮片质量浓度40、80、120、160、200 mg·mL^(-1))体外抑制AGEs生成的作用规律,进一步评价牡丹皮提取物及差异成分没食子酰芍药苷和苯甲酰芍药苷抑制高糖诱导的HUVEC内AGEs生成情况,并采用AO/EB双荧光染色法观察细胞凋亡。结果显示牡丹皮提取物及差异成分对AGEs的形成有一定的抑制作用,可降低细胞凋亡。该研究为牡丹皮通过抑制毒损因子AGEs治疗糖尿病血管并发症具有参考价值。     

紫草素对子宫内膜癌细胞增殖、凋亡和顺铂耐药性的影响

目的探讨紫草素调控HNF1A-AS1/miR-20b-5p轴对子宫内膜癌细胞增殖、凋亡和顺铂耐药性的影响。方法将子宫内膜癌细胞HEC-1B分为对照组、紫草素低、中、高剂量组、si-NC组、si-HNF1A-AS1组、miR-NC组、miR-20b-5p组、pcDNA-NC+紫草素组、pcDNA-HNF1A-AS1+紫草素组、pcDNA-HNF1A-AS1+miR-NC+紫草素组、pcDNA-HNF1A-AS1+miR-20b-5p+紫草素组。CCK-8检测细胞存活率和顺铂对HEC-1B细胞的半抑制浓度值(IC_(50));流式细胞术检测凋亡;RT-PCR检测HNF1A-AS1和miR-20b-5p的表达;Western blot检测CyclinD1、Cleaved-caspase-3、MRP1表达。双荧光素酶报告基因实验和RT-PCR验证HNF1A-AS1对miR-20b-5p的靶向调控作用。结果低、中、高剂量紫草素处理后HEC-1B细胞存活率降低,细胞凋亡率升高(P0.05,P0.05),HNF1A-AS1、CyclinD1、MRP1表达降低,miR-20b-5p和Cleaved-caspase-3表达升高,IC_(50)值降低(P0.01)。干扰HNF1A-AS1表达或过表达miR-20b-5p后,HEC-1B细胞存活率降低,细胞凋亡率升高,CyclinD1、MRP1蛋白表达降低,Cleaved-caspase-3表达升高,IC_(50)值降低(P0.01)。HNF1A-AS1靶向负调控miR-20b-5p表达。过表达HNF1A-AS1可以逆转紫草素对子宫内膜癌细胞HEC-1B细胞增殖、凋亡和顺铂耐药性的影响(P0.01)。过表达miR-20b-5p可以逆转pcDNA-HNF1A-AS1对紫草素处理的子宫内膜癌细胞HEC-1B细胞增殖、凋亡和顺铂耐药性的影响(P0.01)。结论紫草素可抑制子宫内膜癌细胞存活,诱导细胞凋亡,提高其顺铂敏感性,其机制与调控HNF1A-AS1/miR-20b-5p轴有关。     

中医药治疗子宫内膜异位症的相关通路研究进展

随着现代学者对于中医药干预子宫内膜异位症（EMS）研究的深入，从分子层面上发现了许多可以通过中药调控的EMS的相关通路。无论是中药复方、单味中药还是中药活性成分在干预EMS的机制研究中均与文中所论述的信号通路有着密切的关系。中药复方、单味中药和中药活性成分可以通过直接或间接的调控相应的信号通路中关键分子表达、抑制内膜异位细胞的增殖和组织炎性改变，促进内膜异位细胞的凋亡，改变疼痛阈值，减少内膜细胞侵袭，来达到抑制内膜异位组织进展、改善内膜容受性和减少卵巢损伤的治疗作用。现通过国内外的相关研究进行总结：莪术醇等可通过阻断Janus激酶2/信号转导和转录激活因子3(JAK2/STAT3)信号通路，促进细胞凋亡并抑制血管生成；淫羊藿苷等可通过阻断核转录因子-κB(NF-κB)信号通路，从而减轻炎症、促进细胞凋亡；葛根素等可通过抑制丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路，抑制细胞增殖，促进细胞凋亡。柚皮素可激活MAPK信号通路，促进细胞凋亡；白茅苷等可通过抑制磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路，抑制细胞增殖，促进细胞凋亡；白藜芦醇等可通过阻断转化生长因子-β(TGF-β)...     

NF-κB/IκB在和厚朴酚对磷酯酰乙醇胺诱导肝癌HepG2细胞凋亡中的表达变化

目的 探讨和厚朴酚(Honokiol)对磷脂酰乙醇胺诱导肝癌HepG2细胞凋亡及对核因子κB(NF-κB)、NF-κB抑制因子(IκB)基因表达的影响.方法 体外培养肝癌HepG2细胞,实验分为对照组、Honokiol组,采用Hoechst 33258染色观察细胞凋亡形态,MTT法检测细胞增殖率,流式细胞术检测细胞凋亡率,RT-PCR检测NF-κB与IκB mRNA表达,Western blot检测NF-κB p65、IκB蛋白表达.结果 与对照组比较,PE组凋亡细胞数增多,细胞凋亡率增加,细胞增殖降低;NF-κB mRNA和蛋白表达增加,IκB mRNA和蛋白表达降低,差异均有显著性(P＜0.01).经Honokiol预处理后,细胞的增殖率较PE组增加,细胞凋亡率减少.NF-κB mRNA和蛋白表达减少,IκB mRNA和蛋白表达增加(P＜0.01).结论 和厚朴酚能抑制PE诱导的肝癌HepG2细胞凋亡,其作用机制可能与调节NF-κB/IκB表达有关.     

直立白薇苷C诱导肺癌A549细胞凋亡的作用机制

目的研究白薇诱导肺癌A549细胞凋亡的活性成分及其作用机制。方法以肺癌A549细胞为实验对象,通过硅胶柱层析等方法确定其活性成分,并利用比色法研究活性成分对半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)和Caspase-9的活性以及凋亡相关基因肿瘤坏死因子(TNF-α)、B细胞淋巴瘤/白血病-2基因(BCL2)、Caspase-3和生存素(Survivin)的影响。结果分离获得1种能诱导肺癌A549细胞凋亡的活性成分,经鉴定为直立白薇苷C。它可显著抑制A549细胞增殖、诱导A549细胞凋亡。同时增强Caspase-3和Caspase-9的活性,上调TNF-α基因表达,下调BCL2、Caspase-3和Survivin等基因表达。结论直立白薇苷C可诱导A549细胞凋亡,其机制可能与其调节Caspase家族因子活性有关。     

刺五加苷B介导PI3K/Akt/mTOR通路诱导肺癌细胞凋亡和自噬北大核心CSCD

探讨刺五加苷B对肺癌A549和H460细胞凋亡和自噬的影响及其分子机制。采用噻唑蓝比色法(methyl thiazolyl tetrazolium colorimetric,MTT)检测5、10、15、20、25、30、35、40、45 mmol·L^(-1)刺五加苷B对肺癌细胞的细胞毒作用;台盼蓝排斥实验检测不同时间刺五加苷B对肺癌细胞A549和H460存活率的影响;克隆形成实验检测刺五加苷B对肺癌细胞A549和H460增殖的影响;acridine orange/ethidium bromide(AO/EB)荧光双染、Hoechst 33342荧光染色法检测刺五加苷B对肺癌细胞A549和H460凋亡的影响,并应用Western blot法检测凋亡相关蛋白探究凋亡相关分子机制;应用AO荧光染色、Western blot法检测自噬泡以及自噬相关蛋白P62和微管相关蛋白1轻链3蛋白(microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3)的表达情况。结果显示,与对照组相比,刺五加苷B以浓度依赖的方式抑制肺癌细胞A549和H460的生长,并得到刺五加苷B对肺癌细胞A549和H460最佳作用时间均为24 h,最佳作用浓度分别为28.64、22.16 mmol·L^(-1);刺五加苷B能够抑制肺癌细胞A549和H460集落形成;与对照组相比,在刺五加苷B的作用下能够促进凋亡小体的形成诱导细胞发生凋亡,同时诱导线粒体途径相关蛋白的表达;在刺五加苷B的作用下肺癌细胞中酸性自噬泡增多,LC3Ⅱ表达增加、P62蛋白表达下降,磷脂酰肌醇3-激酶(phosphoinositide 3-kinase,PI3K)/丝氨酸-苏氨酸激酶(serine-threonine kinase,Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶标(mammalian target of rapamycin,mTOR)通路中PI3K、p-Akt和p-mTOR蛋白表达下降。研究表明,刺五加苷B能够抑制肺癌细胞生长,减少集落形成,并发现是通过线粒体途径诱导肺癌细胞发生凋亡,此外还可诱导细胞自噬的发生,其作用机制可能与PI3K/Akt/mTOR通路有关。     

基于PI3K/AKT通路研究升降通癃方对前列腺增生细胞的影响

目的:研究升降通癃方通过调节磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/丝氧酸-苏氨酸蛋白激酶(AKT)信号通路对前列腺增生细胞增殖和凋亡的影响。方法:培养人前列腺增生细胞(BPH-1),随机分为对照组、升降通癃方低、中、高浓度组、阳性组五组,分别给予各组需要的药物处理24 h后,通过四唑盐比色法(CCK8法)检测药物对BPH-1细胞增殖的影响;用细胞划痕实验测定BPH-1的水平迁移能力;通过流式细胞术(FCM)检测升降通癃方对BPH-1细胞细胞凋亡的影响;通过蛋白质印迹法(Western blot)检测药物对细胞中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)、Bcl-2关联X蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、丝氧酸-苏氨酸蛋白激酶(AKT)、重组人α晶状体球蛋白B(Cryab)蛋白表达的影响。结果:加入升降通癃方后,BPH-1的迁移能力明显受到抑制,升降通癃方高、中、低浓度组比较差异有统计学意义(均P<0.05);FCM检测结果显示,升降通癃方组低、中、高浓度组的细胞凋亡率明显高于对照组,差异具有统计学意义(均P<0.05)。Weste...     

黄芪甲苷通过PI3K/Akt/mTOR通路诱导鼻咽癌细胞自噬和凋亡

目的：探讨黄芪甲苷对鼻咽癌细胞自噬与凋亡的影响及潜在分子机制。方法：在体外实验中,通过单丹磺酰戊二胺(MDC)染色和透射电镜观察黄芪甲苷(AS-Ⅳ)对鼻咽癌细胞自噬的影响。在体内实验中,建立裸鼠移植瘤模型后采用免疫荧光法(IF)及蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组别中自噬和凋亡情况的变化及磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PI3K/Akt/mTOR)信号通路关键蛋白的表达变化。结果：与空白组比较,不同浓度AS-Ⅳ(5、10、20μmol·L^-1)作用于5-8F细胞后,各AS-Ⅳ组的自噬荧光强度均明显增强,其中,干预24 h,各AS-Ⅳ组的自噬荧光表达最强,10μmol·L^-1AS-Ⅳ组的荧光表达最明显;与空白组比较,透射电镜下自噬激活剂雷帕霉素(RAPA)诱导5-8F细胞内出现较多自噬体;3-甲基腺嘌呤(3-MA)作为自噬抑制剂,透射电镜下并未观察到5-8F细胞内有自噬体的形成;AS-Ⅳ10μmol·L^-1组细胞内结构和细胞膜完整、清楚,可见自噬体形成;与空白组比较,AS-Ⅳ各组的肿...     

补肾活血方对血管性痴呆大鼠脑海马脑源性神经生长因子介导的PI3K/AKT信号通路的影响

目的:从脑源性神经生长因子(BDNF)介导的PI3K/AKT信号通路角度探讨补肾活血方对血管性痴呆(VD)大鼠脑海马经元保护机制。方法:将70只SD大鼠随机分为假手术组14只、模型组14只、补肾活血方组(10.14g/kg、5.07g/kg)28只、尼莫地平组(0.011g/kg)14只,除假手术组外,采用两血管阻断法制备大鼠VD模型,药物组分别以10.14g/kg和5.07g/kg灌服补肾活血方药液,阳性组以0.011g/kg灌服尼莫地平药液,假手术组、模型组均以10ml/kg体重灌服生理盐水,每日1次,给药30d天后,采用透射电子显微镜观察各组大鼠脑海马神经元超微结构变化;Tunel法检测细胞凋亡变化;采用实时荧光定量PCR(RT-q PCR)和Western-blot检测海马组织BDNF、酪氨酸蛋白激酶B(Trk B)、磷脂酰肌醇3激酶(PI3-K)、丝氨酸-苏氨酸激酶(AKT)蛋白及基因表达的变化。结果:与假手术组比较,模型组大鼠脑海马组织BDNF、Trk B、PI3-K、AKT蛋白及基因表达水平均呈显著下降,脑海马神经元超微结构明显受损,细胞凋亡平均光度值显著升高,平均灰度值显著下降;与模型组比较,补肾活血方10.14g/kg和5.07g/kg剂量组均能显著提高脑海马组织BDNF、Trk B、PI3-K、AKT蛋白及基因表达,改善脑海马神经元超微结构,细胞凋亡平均光度值显著下降,平均灰度值显著升高。结论:补肾活血方可通过调控BDNF介导的PI3-K/AKT信号通路,发挥神经元保护作用。     

5F对肝癌细胞毒性、细胞凋亡及细胞周期的影响

目的调查半边旗(PsL)提取物Ent-11α-hydroxy-15-oxo-kaur-16-en-19-oic-acid(5F)对人类肝癌细胞Hep3B的抗癌效果。方法在不同的时间段,采用5F(0～80μg/ml)处理Hep3B细胞。通过MTT法检测细胞毒性,通过Annexin V-EGFP染色及caspase-3活性检测细胞凋亡,通过碘化丙锭染色检测细胞周期。结果 5F以剂量、时间依赖方式抑制Hep3B细胞增殖,Hep3B细胞Annexin V-EGFP阳性染色及caspase-3活化确定了5F诱导的细胞凋亡,5F阻滞细胞于G2期。结论 5F抑制Hep3B细胞增殖与细胞G2期阻滞及细胞凋亡有关。     

去甲斑蝥素增强马法兰抗骨髓瘤作用机制研究

目的 研究去甲斑蝥素联合马法兰对多发性骨髓瘤细胞增殖与凋亡的影响及其作用机制.方法 去甲斑蝥素单独或联合马法兰给药后,MTT法观察对人多发性骨髓瘤细胞U266株生长的抑制作用,流式细胞术检测细胞凋亡率,Westernblotting检测核因子-κB P65 (NF-κB P65)、NF-1cB抑制因子IκBα、磷酸化IBα(p-IκBα)、survivin、Bcl-2和Bax蛋白表达的影响.制备多发性骨髓瘤小鼠模型,观察去甲斑蝥素及其与马法兰联合给药对肿瘤生长的抑制作用.结果 去甲斑蝥素能增强马法兰的细胞毒和诱导细胞凋亡作用.与马法兰单独给药组比较,联合给药组使U266细胞核NF-κB P65和胞浆p-IκBα的表达量分别由113±0.08、0.83±0.08降至0.26±0.02、0.090±0.002;马法兰对IκBα的表达无影响,但去甲斑蝥素能促进IκBα的表达,二者合用能显著促进胞浆IκBα的表达;与马法兰单独给药组比较,联合给药组survivin和Bcl-2的表达量分别由1.03±0.10、0.72±0.05降至0.52±0.04、0.06±0.01,而Bax由0.29±0.03升至0.75±0.06.体内实验也证实去甲斑蝥素能增强马法兰的抗肿瘤作用.结论 去甲斑蝥素通过抑制NF-κB/p-IκBα途径,调节下游信号分子survivin、Bcl-2和Bax的表达,增强马法兰的抗骨髓瘤作用.     

川芎嗪调控miR⁃31⁃5p/Ednrb通路抑制人肺泡上皮细胞BEAS⁃2B凋亡和炎症反应

目的探讨川芎嗪(TMP)调控miR?31?5p/内皮素受体B(Ednrb)通路对人肺泡上皮细胞BEAS?2B凋亡和炎症反应的影响。方法采用1μg/mL脂多糖(LPS)处理BEAS?2B细胞构建炎症模型。将BEAS?2B细胞分为对照组、LPS组、LPS+川芎嗪5μmol/L组、LPS+川芎嗪20μmol/L组、LPS+川芎嗪80μmol/L组、LPS+miR?con组、LPS+miR?31?5p组、LPS+si?con组、LPS+si?Ednrb组、LPS+川芎嗪+pcDNA组、LPS+川芎嗪+pcDNA?Ednrb组。酶连免疫吸附实验(ELISA)试剂盒检测细胞培养液中白介素IL?1β、IL?6和TNF?α(肿瘤坏死因子)的含量;RT?qPCR和Western blot检测miR?31?5p(炎性相关微小RNA)和Ednrb(内皮素受体B)表达。双荧光素酶报告实验和Western blot验证miR?31?5p对Ednrb的靶向调控关系。结果与对照组比较,LPS组BEAS?2B细胞Ednrb蛋白、凋亡率以及IL?1β、IL?6和TNF?α的水平增加,miR?31?5p表达降低(P<0.01);与LPS组比较,LPS+川芎嗪5μmol/L组、LPS+川芎嗪20μmol/L组、LPS+川芎嗪80μmol/L组BEAS?2B细胞Ednrb蛋白表达、凋亡率以及IL?1β、IL?6和TNF?α的水平降低,miR?31?5p表达升高(P<0.05,P<0.01)。miR?31?5p靶向负性调控Ednrb表达。与LPS+miR?con组比较,LPS+miR?31?5p组BEAS?2B细胞凋亡率以及IL?1β、IL?6和TNF?α的水平降低(P<0.01);与LPS+si?con组比较、LPS+si?Ednrb组BEAS?2B细胞凋亡率以及培养液中IL?1β、IL?6和TNF?α的水平降低(P<0.01);与LPS+川芎嗪+pcDNA组比较,LPS+川芎嗪+pcDNA?Ednrb组BEAS?2B细胞凋亡率、培养液中IL?1β、IL?6和TNF?α的浓度升高(P<0.05)。结论川芎嗪通过上调miR?31?5p/Ednrb通路抑制人肺泡上皮细胞BEAS?2B凋亡和炎症反应。     

UPLC-Q-TOF-MS联合网络药理学和实验验证分析桃红四物汤治疗软组织损伤的作用机制

基于UPLC-Q-TOF-MS技术、网络药理学和实验验证方法探讨桃红四物汤(Taohong Siwu Decoction, THSWD)治疗软组织损伤(soft tissue injury, STI)的作用机制。采用UPLC-Q-TOF-MS技术鉴定THSWD化学成分;通过TCMSP数据库筛选THSWD活性成分及靶蛋白;Cytoscape软件构建“活性成分-靶点-通路”网络,STRING数据库进行蛋白互作分析;GeneCards和CTD数据库筛选STI相关靶点;DAVID数据库进行GO功能和KEGG通路富集分析;构建软组织损伤大鼠模型,通过蛋白免疫印迹法探讨THSWD对大鼠软组织损伤相关通路关键靶点的影响。筛选得到THSWD活性成分40种,潜在作用靶点141个,与STI相关靶点交集20个。活性成分作用靶点富集分析得到128条KEGG通路,主要富集在氨基酸合成与代谢、疾病信号通路、细胞凋亡、炎症等相关的通路。对“活性成分-靶点-通路”网络进行可视化分析,得到THSWD作用于STI的5种关键活性成分和6个关键蛋白。蛋白免疫印迹法实验结果表明,THSWD可以显著降低大鼠STI样本中细胞凋亡蛋白酶-3(CASP3)和B细胞κ轻肽基因增强子核因子1(NFKB1)的蛋白表达及磷酸化水平,降低前列腺素G/H合酶2(PTGS2)蛋白表达,增强细胞肿瘤抗原p53(TP53)蛋白表达。UPLC-Q-TOF-MS、网络药理学和实验验证结果表明,THSWD中活性成分可能通过调控NF-κB信号通路及细胞凋亡通路中的关键蛋白,发挥抗炎、抗氧化应激的作用,从而发挥治疗STI的作用。     

银杏内酯B对谷氨酸诱导SH-SY5Y细胞凋亡的保护作用

目的:探讨银杏内酯B对谷氨酸诱导的人神经母细胞瘤(SH-SY5Y)细胞凋亡的保护作用及其机制。方法:用2mmol/L谷氨酸诱导SH-SY5Y细胞凋亡建立模型,以不同浓度的银杏内酯B(10、50和250μmol/L)进行保护,MTT比色法检测细胞存活率;Hoechst 33258染色法观察药物作用后细胞凋亡的形态学变化;流式细胞仪检测细胞凋亡率;Fura-2/AM双波长荧光法测定细胞内钙离子浓度;Western blot检测线粒体和胞浆中Cyt C蛋白的表达。结果:2 mmol/L谷氨酸作用SH-SY5Y细胞24 h后细胞存活率为0.721±0.013,与正常组相比明显降低;细胞核固缩裂解,呈凋亡特征性改变;细胞凋亡率为(13.27±0.08)%、细胞内钙离子浓度为359±11 nmol/L,均明显升高。与凋亡组相比,银杏内酯B(10、50、250)μmol/L保护组细胞存活率分别为0.768±0.014、0.819±0.013、0.897±0.010,均明显升高;细胞核核固缩裂解减少,形态有所改善;细胞凋亡率分别为11.33±0.57、7.02±0.47、5.85±0.24;细胞内钙离子浓度为302±9 nmol/L、243±9 nmol/L、186±8 nmol/L,均明显降低;Western blot结果显示,与凋亡组相比银杏内酯B保护组可以显著减少细胞线粒体以及胞浆中Cyt C蛋白的含量。结论:银杏内酯B对谷氨酸诱导的SH-SY5Y细胞凋亡具有保护作用,其机制可能与银杏内酯B降低了细胞内钙离子的浓度及阻断了Cyt C从线粒体释放入胞浆中有关。     

三脉马钱中的一种新的吲哚生物碱——三脉马钱碱

从巴西的马钱属植物三脉马钱Strychnostrinervis(Vell.)Mart.根部得到了四种生物碱,其中的三种生物碱双去甲二氢毒马钱碱(bisnordihydrotoxiferine)(2)、降马枯素B(normacusine B)(3)及长尾马钱碱(longicaudatine)(4)为已知化合物。第四个化合物为新化合物,命名为三脉马钱碱(trinervine)(1)。作者按文献方法将采自巴西东北地区的三脉马钱根(1.5kg)进行提取,得到了总生物碱混合物(300g)。从非极性提取部分得到了(2)(330mg,0.02％),水层在0～5C下用NH_4OH调pH为9.5～10.0,然后用氯仿提     

蜂斗菜素对人胃癌SGC7901细胞增殖抑制和诱导凋亡作用

目的观察蜂斗菜素对人胃癌细胞SGC7901增殖及凋亡影响,并探讨其作用机制。方法磺酰罗丹明B(Sulforhodamine B,SRB)法检测细胞增殖抑制作用,流式细胞术检测细胞凋亡及周期阻滞,免疫印迹法(Western blot)检测肿瘤抑制基因p53蛋白的表达及细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)磷酸化水平。结果蜂斗菜素作用24、48、72 h后对人胃癌SGC7901细胞均有显著的增殖抑制作用,并具有剂量和时间依赖性;与对照组相比,蜂斗菜素作用48 h后G_1/G0期细胞比率增加,S期及G_2/M期细胞比率下降,细胞凋亡率升高;和对照组相比,蜂斗菜素作用48 h后,细胞中p53蛋白表达显著增加增加,ERK1/2磷酸化水平则显著降低。结论蜂斗菜素对人胃癌SGC7901细胞具有增殖抑制、细胞周期阻滞及诱导凋亡作用,其机制可能与增加p53蛋白表达和降低ERK1/2磷酸化水平有关。