抑制PI3K/Akt信号转导通路提高化疗效果的实验研究

目的:探讨通过抑制PI3K/Akt信号转导通路提高抗癌药物对恶性肿瘤细胞的杀伤作用。方法:采用噻唑蓝(MTT)比色法检测塞莱昔布、顺铂及多西紫杉醇单独或联合PI3K抑制剂LY294002对人宫颈癌HeLa细胞和人乳腺癌MCF7细胞的抑制率;采用流式细胞技术检测药物单独或联合作用对HeLa细胞和MCF7细胞凋亡的影响。结果:①联合LY294002能够显著提高塞莱昔布、顺铂及多西紫杉醇对HeLa细胞和MCF7细胞抑制率(P<0.05)。②LY294002与塞莱昔布、顺铂及多西紫杉醇的协同治疗指数均小于1,具有协同治疗作用。③联合LY294002能够增加HeLa细胞和MCF7细胞的凋亡水平。结论:抑制PI3K/Akt信号转导通路能够显著提高塞莱昔布、顺铂及多西紫杉醇对HeLa细胞和MCF7细胞的杀伤作用。     

抑制P13K／Akt通路提高肺腺癌细胞化疗的效果

摘要：目的探讨PI3K／Akt信号转导通路抑制剂LY294002对肺腺癌细胞株A549及裸鼠移植瘤化疗的增敏作用。方法采用MTT法及流式细胞仪检测LY294002、紫杉醇、LY294002联合紫杉醇对A549细胞增殖及凋亡的影响；通过裸鼠移植瘤模型检测LY294002、紫杉醇、LY294002联合紫杉醇对A549细胞成瘤性的影响。结果LY294002可增强紫杉醇对A549细胞的抑制作用，并且可提高其凋亡率。裸鼠移植瘤实验显示，LY294002与紫杉醇均可抑制移植瘤的生长，联用后抑瘤率增加。结论LY294002可增强紫杉醇对A549细胞、裸鼠移植瘤的化疗的敏感性，抑制PI3K／Akt信号转导通路可提高肺腺癌化疗的效果。     

抑制PI3K/Akt通路提高HeLa细胞化疗效果的实验研究

目的探讨抑制PI3K/Akt信号转导通路提高抗癌药物对人宫颈癌HeLa细胞的杀伤作用。方法采用MTT法检测Celecoxib、DDP及Docetaxel单独或联合PI3K抑制剂LY294002对人宫颈癌HeLa细胞的抑制率;采用流式细胞技术检测药物单独或联合作用对HeLa细胞凋亡的影响。结果(1)联合LY294002能够显著提高Celecoxib、DDP及Docetaxel对HeLa细胞抑制率;(2)LY294002与Celecoxib、DDP及Docetaxel的协同治疗指数均小于1,二者起协同治疗作用;(3)联合LY294002能够增加HeLa细胞的凋亡水平。结论抑制PI3K/Akt信号转导通路能够显著提高Celecoxib、DDP及Docetaxel对HeLa细胞杀伤作用。     

PI-3K/Akt抑制剂LY294002对卵巢癌细胞A2780/Taxol多药耐药性的逆转作用

背景与目的:磷脂酰肌醇(phosphatidylinositol 3 kinase,PI-3K)可抑制细胞凋亡,对PI-3K抑制剂的研究可以更好地了解PI-3K的促癌机制,为多种癌症如卵巢癌、乳腺癌等的基因治疗提供线索。本研究目的在于探讨PI-3K/Akt信号通路抑制剂LY294002对卵巢癌耐紫杉醇细胞株A2780/Taxol多药耐药的逆转作用。方法:用LY294002处理A2780/Taxol细胞,流式细胞术检测细胞凋亡,MTT法检测细胞对紫杉醇的药物敏感性,RT-PCR检测MDR1mRNA的表达,Western blot方法分析LY294002作用前后磷酸化Akt及P-gp蛋白的表达。结果:10和50μmol/L LY294002干预A2780/Taxol细胞24h后,A2780/Taxol细胞凋亡率分别为(8.84±1.65)%和(20.78±2.47)%,显著高于未干预细胞的凋亡率(1.25±0.78)%(P<0.05);A2780/Taxol细胞对紫杉醇的半数抑制浓度(IC50)显著降低(P<0.01),相对逆转效率最高可达(78.08±0.37)%;MDR-1mRNA、磷酸化Akt及P-gp蛋白均明显降低。结论:PI-3K/Akt信号通路的激活与卵巢癌细胞多药耐药的产生有关,PI-3K/Akt抑制剂LY294002可逆转卵巢癌细胞A2780/Taxol的多药耐药。     

PI3K/Akt抑制剂LY294002对大肠癌细胞化疗增敏作用的探讨

目的 探讨PI3K/Akt特异性抑制剂LY294002与化疗药物联合使用对大肠癌细胞(HCT-8)化疗效果的影响.方法 将LY294002联合化疗药物作用于大肠癌细胞系HCT-8,MTT法检测单独使用5-Fu、奥沙利铂及联合PI3K抑制剂LY294002,对体外培养的大肠癌细胞系HCT-8增殖的抑制作用,流式细胞术检测HCT-8的凋亡率.结果 联合LY294002作用后,5-Fu、奥沙利铂对大肠癌细胞系HCT-8增殖的抑制作用明显增强(P<0.05),且能提高其凋亡率(P<0.05).结论 LY294002能有效提高化疗药物5-Fu、奥沙利铂体外对HCT-8细胞抑制作用的敏感性,抑制PI3K介导的信号转导通路,可明显提高大肠癌的化疗效果.     

抑制PI3 K/ Akt 通路提高肺腺癌细胞化疗的 效果

 目的　探讨PI3 K/ Akt 信号转导通路抑制剂L Y294002 对肺腺癌细胞株A549 及裸鼠移植瘤化 疗的增敏作用。方法　采用MTT 法及流式细胞仪检测L Y294002 、紫杉醇、L Y294002 联合紫杉醇对 A549 细胞增殖及凋亡的影响;通过裸鼠移植瘤模型检测L Y294002 、紫杉醇、L Y294002 联合紫杉醇对 A549 细胞成瘤性的影响。结果　L Y294002 可增强紫杉醇对A549 细胞的抑制作用,并且可提高其凋亡 率。裸鼠移植瘤实验显示,L Y294002 与紫杉醇均可抑制移植瘤的生长,联用后抑瘤率增加。结论　 L Y294002 可增强紫杉醇对A549 细胞、裸鼠移植瘤的化疗的敏感性,抑制PI3 K/ Akt 信号转导通路可提 高肺腺癌化疗的效果。     

醉茄素A对非小细胞肺癌A549细胞增殖、凋亡及PI3K／Akt信号通路的影响

目的 探讨醉茄素A（WFA） 对非小细胞肺癌（NSCLC）A549细胞增殖、凋亡及PI3K／Akt信号通路的影响。方法 采用0、2.5、5.0、10.0、20.0μmol／L WFA 处理A549细胞,采用四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法检测上述浓度处理24、48、72和96h的细胞增殖抑制率,Hoechst染色和磷酯酰丝氨酸结合蛋白 异硫氢酸荧光素／碘化丙啶双染法（Annexin V-FITC／PI）检测各浓度组48h的细胞凋亡情况,流式细胞仪检测各浓度组48h的细胞周期分布情况,免疫印迹检测各浓度组48h凋亡相关基因（Bcl-2、Bax和Cleaved caspase-3）和PI3K／Akt信号通路重要蛋白Akt及其磷酸化形式p-Akt的蛋白水平。结果 WFA 可抑制细胞增殖,并呈剂量和时间依赖性（P＜0.05）;0、2.5、5.0、10.0、20.0μmol／L WFA作用48h后A549细胞的凋亡指数分别为2.75±0.64、4.61±1.36、9.75±2.78、12.92±3.42和18.68±4.31,组间差异有统计学意义（P＜0.05）。除2.5μmol／L外,其余浓度组的早、晚期凋亡率、凋亡促进基因（Bax和Cleaved caspase-3）水平及G0／G1期细胞比例均高于0μmol／L,凋亡抑制基因Bcl-2水平及S期和G2／M期细胞比例均低于0μmol／L（P＜0.05）; 2.5、5.0、10.0、20.0μmol／L的组间差异有统计学意义（P＜0.05）。随着浓度升高,p-Akt／Akt值呈降低趋势,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 WFA能够抑制A549细胞的增殖及凋亡,可能通过抑制PI3K／Akt通路激活实现。     

红花多糖抑制PI3K/Akt信号通路诱导人胃癌细胞凋亡的研究

目的 探讨红花多糖通过抑制PI3K/Akt信号通路调控胃癌细胞凋亡的机制。方法 MTT比色法观察SPS对人胃癌SGC-7901细胞体外增殖的抑制作用,流式细胞仪(FCM)分析细胞凋亡,实时荧光定量RT-PCR法和Western Blot法检测蛋白激酶B(Akt)基因及蛋白的表达情况。结果 红花多糖在一定范围内以剂量依赖方式和时间依赖方式抑制SGC-7901胃癌细胞生长。流式细胞仪检测,SGC-7901细胞经红花多糖处理24 h,其早期凋亡率、细胞坏死或晚期凋亡率显著增加,呈现明显的剂量依赖性。Real-time PCR和Western Blot检测发现,SPS处理的细胞Akt基因及蛋白表达量明显下降。结论 红花多糖对人胃癌SGC-7901细胞体外增殖具有明显的抑制作用,该抑制作用具有一定的时间依赖性和剂量依赖性;红花多糖能够下调Akt mRNA表达,降低Akt和p-Akt蛋白的表达量,抑制Akt通路发挥抗肿瘤作用。     

HER2/neu过表达通过PI3K/Akt通路对乳腺癌细胞MCF7中p53基因表达及细胞生长和放疗敏感性的影响

目的 研究HER2／neu基因过表达通过磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)通路对乳腺癌细胞MCF7野生型p53基因表达、细胞增殖及对γ射线照射敏感性的影响。方法 以脂质体介导的HER2／neu基因转染MCF7细胞,用G418筛选阳性克隆。通过Western blot鉴定HER2／neu蛋白的表达,并检测p53、信号转导分子Akt和p-Akt蛋白含量的变化及PI3K通路抑制剂LY294002对上述蛋白表达水平的影响。以MTT法检测细胞增殖以及细胞对γ射线照射的敏感性。结果 共获得18个稳定转染HER2／neu基因的阳性克隆,其中1个克隆有HER2／neu基因过表达。过表达HER2／neu的MCF7细胞p-Akt蛋白含量升高,p53蛋白含量低于对照组细胞,LY294002能够抑制p-Akt蛋白和p53蛋白的变化。同时,过表达HER2／neu基因的MCF7细胞生长速度高于对照组细胞,对γ射线照射治疗的敏感性降低,而LY294002能够抑制细胞生长并增强放射治疗的敏感性。结论 MCF7细胞中HER2／neu基因的过表达,能够通过激活PI3K通路导致野生型p53蛋白含量减少、细胞增殖加快及放疗的敏感性降低,这可能是某些p53蛋白为野生型的肿瘤患者对治疗产生抗性的原因。     

二苯乙烯苷抑制人乳腺癌MCF-7细胞增殖及对P13K／Akt信号通路的影响

目的：研究二苯乙烯苷（2,3,5,4’tetrahhydroxystilbene-2-O-β-D-glucoside,THSG）对体外培养的人乳腺癌MCF-7细胞增殖的作用及对P13K／Akt信号通路的影响。方法：M。rr法检测细胞增殖活性,AnnexinV／PI双标法检测细胞凋亡,Western印迹法检测PTEN、p-PKB、cvclinD1、Bcl-2、caspase3和NF-κB蛋白的表达,RT—PCR检坝4P13K上游抑制物PTENmRNA的表达。结果：1、10和100μmol／L的THSG处理细胞24、48和72h后,明显抑制MCF-7细胞增殖,100μmol／L作用48h的增殖抑制率为41．8％（P〈0．05）,但低浓度（0．1、0．01μmol／L）THSG出现弱的促增殖作用。1、10和100μmol／LTHSG作用48h后,MCF-7细胞凋亡率分别为（6．25&#177;0．65）％、（5．04&#177;0．83）％和（7．98&#177;0．67）％。1、10和100μmol／LTHSG上调PTEN的蛋白表达量,下调p-PKB和cyclinDI的蛋白表达,均呈剂量依赖性;而对NF-κB、Bcl-2和caspase-3表达却无明显影响。THSG能轻徽上调PTENmRNA水平。结论：THSG可抑制MCF-7细胞增殖,该作用可能是通过抑制P13K／Akt信号通路实现的。     

PI3K/Akt/mTOR信号传导通路与恶性肿瘤浸润和转移的研究进展

PI3K/Akt/mTOR信号通路作为细胞内重要信号传导通路之一,通过影响下游多种效应分子的活化状态,在细胞内发挥着抑制凋亡、促进增殖的关键作用,它与人类多种肿瘤的发生发展密切相关.本文综述了PI3K/Akt/mTOR信号通路的组成与功能、调节以及其抗肿瘤细胞凋亡作用机理等方面的研究进展,并就其抗细胞凋亡作用在肿瘤治疗中的应用作了评述,期待为以PI3K/Akt/mTOR信号通路中关键分子为靶点的肿瘤治疗研究提供参考.     

PI3K/AKT特异性抑制剂LY294002对卵巢癌化疗增敏作用的研究

目的:探讨磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)抑制剂LY294002对卵巢癌化疗效果的影响.方法:将LY294002单独或与顺铂、紫杉醇联合作用于卵巢癌A2780、SKOV3细胞.MTT法检测DDP、顺铂单独或联合LY294002处理后对A2780、SKOV3细胞的抑制率;采用流式细胞技术检测药物单独或联合作用对A2780和SKOV3细胞凋亡的影响;应用Western blot检测A2780和SKOV3细胞中AKT及磷酸化AKT(p-AKT)蛋白表达的变化.结果:联合应用LY294002能够显著提高DDP、paclitaxel对A2780和SKOV3细胞抑制率;LY294002与DDP、paclitaxel的协同治疗指数小于1,二者起协同治疗作用;联合LY294002能够增加A2780和SKOV3细胞的凋亡水平.LY294002干预组与对照组相比p-AKT蛋白的表达降低,差异有统计学意义(P<0.01).结论:LY294002能够有效提高卵巢癌A2780和SKOV3细胞对化疗药物DDP和paclitaxel的敏感性,抑制PI3K/AKT介导的信号传导通路,可明显提高卵巢癌细胞的化疗效果.     

Ad-PTEN增强LY294002对人胶质瘤细胞系U251的生长抑制作用

目的在体外实验中,利用携带野生型PTEN基因的重组腺病毒（Ad—PTEN）和P13K的小分子抑制剂LY294002联合抑制P13K／AKT信号通路,观察两者联合对人胶质瘤细胞系U251生长有无正向协同作用及探讨产生这种作用的机制。方法15251细胞按处理方式不同分为4组：DMSO对照组、空载病毒对照组、LY294002组和联合组（LY294002＋Ad—PTEN组）。在U251细胞系中导入LY294002并转染Ad—PTEN病毒后,提取总蛋白,用Westernblotting检测PTEN表达状态及P13K、AKT表达情况;用MTT法检测Ad—PTEN和LY294002对U251生长抑制率、流式细胞仪检测细胞周期、AnnexinV法检测细胞凋亡,观察导人LY294002和转染Ad—PTEN后U251增殖能力的改变;用划痕实验、Transwell实验观察LY294002及Ad—PTEN对U251迁移和侵袭能力的影响;Westernblotting检测P13K／AKT信号通路下游相关蛋白表达水平变化。结果Westernblotting显示：与DMSO组和空载病毒组相比,LY294002组P13K、AKT蛋白表达水平明显降低,联合组（LY294002＋Ad—PTEN）的WEN蛋白明显上调,而P13K、AKT蛋白下降水平比LY294002组更为显著。联合组与LY294002组、空载病毒组、DMSO组相比细胞周期阻滞在G0／G1期;联合组凋亡率比其他三组明显增加;自培养第2天起,联合组细胞增殖速率呈下降趋势。联合组侵袭和迁移细胞的相对数少于LY294002组、空载病毒组和DMSO组。Westernblotting结果证明位于P13K／AKT下游的MMP-2、MMP-9、PCNA、Bcl-2、CyclinD1、NF—KB、FAK蛋白表达水平显著下调。结论小分子抑制剂LY294002能够有效抑制U251中P13K、AKT蛋白的表达,联合转染Ad—PTEN后不仅能提高PTEN蛋白的表达水平,对P13K、AKT的抑制更为显著。在体外实验中,联合Ad—PTEN和LY294002能够有效地通过阻滞细胞周期、减少细胞凋亡来抑制U251的增殖能力,并能够抑制细胞的侵袭和迁移能力,两者联合使用具有正向协同作用。联合Ad—PTEN和LY294002对U251的生长与侵袭的抑制作用与P13K／AKT下游的MMP-2、MMP-9、PCNA、Bcl-2、CyclinD1、NF—KB、FAK蛋白表达水平下调有关。联合腺病毒转染技术和小分子抑制剂调控P13K／AKT信号通路是治疗胶质瘤的新途径。     

PI3K/Akt途径在朊蛋白介导胃癌耐药中的作用研究

目的:探讨PI3K/Akt途径在朊蛋白(PrPc)介导胃癌耐药中的作用.方法:脂质体基因转染法建立高表达PrPc的胃癌细胞亚系.Western印迹检测转染细胞中Akt蛋白的表达.噻唑蓝(MTT) 比色法测定单独或联用PI3K抑制剂LY294002时转染细胞对化疗药物的敏感性.流式细胞仪检测单独或联用LY294002时转染细胞内阿霉素蓄积和潴留.结果:将PrPc正义载体pcDNA-PrP转入SGC7901,成功建立PrPc高表达胃癌细胞亚系并命名为PS;空载体转染细胞命名为BS.Western-Blot显示磷酸化Akt在PS中的表达较BS及SGC7901增高,而三者的总Akt则无差别.未经LY294002处理时,在阿霉素或长春新碱的作用下,PS的存活率分别为91.4%±3.4%和89.4%±3.8%,较BS(79.2%±4.3%和75.9%±2.1%)明显增高(均 ),PS细胞内阿霉素蓄积量和潴留量分别为4.4±0.3和4.2±0.4,明显低于BS(8.2±0.5和8.0±0.3)(均 );当联合LY294002处理后,PS在两种药物作用下的存活率均随着LY294002浓度的增加逐渐降低,并均在LY294002为30μmol/L时接近BS(均 ),PS细胞内阿霉素蓄积量和潴留量逐渐增高,并均在LY294002为30μmol/L时接近BS(均 ).结论:PrPc介导的胃癌耐药与PI3K/ Akt途径活性密切相关,抑制PI3K/ Akt途径活性可逆转PrPc介导的胃癌耐药.     

胃肠道间质瘤PI3K-Akt信号转导通路介导的细胞凋亡相关因子的检测及其意义

目的:研究P13K/Akt信号转导通路介导的细胞凋亡相关因子在胃肠道间质瘤(GIST)中的表达及意义.方法:RT-PCR检测P13K、NF-κB、XIAP、bcl-2与survivin在:124例GIST及癌旁正常组织中mRNA水平.结果:在GIST中,PI3K、NF-κB mRNA表达与NIH分级、肿瘤侵袭转移、黏膜受侵密切相关,而与年龄、性别、组织学类型无关.XIAP mRNA随NIH分级表达上调;XIAP表达与GIST组织分化程度呈负相关,即分化程度越低,XIAP阳性表达率愈高,伴有肿瘤侵袭转移的GIST病例XIAP表达水平较高,同时XIAP的表达与黏膜受侵密切相关,而与年龄、性别、组织学类型无关.bcl-2 mRNA水平表达上调,与NIH分级、黏膜受侵有关,而与年龄、性别、组织学类型、转移复发及周围组织浸润无关.survivin mRNA在GIST中的表达与NIH分级、肿瘤侵袭转移、黏膜受侵等因素有关,而与年龄、性别以及组织学类型无关.由于NF-κB的调控作用,各指标之间mRNA的水平变化旱正相关.结论:GIST中PI3K/Akt信号转导通路的活化可以进一步激活NF-κB mRNA,从而进入细胞核内调控凋亡相天因子XIAP、bcl-2以及survivin mRNA水平的表达.     

PI3K／Akt／inTOR信号传导通路与恶性肿瘤浸润和转移的研究进展

PI3K／Akt／mTOR信号通路作为细胞内重要信号传导通路之一,通过影响下游多种效应分子的活化状态,在细胞内发挥着抑制凋亡、促进增殖的关键作用,它与人类多种肿瘤的发生发展密切相关。本文综述了PI3K／Akt／mTOR信号通路的组成与功能、调节以及其抗肿瘤细胞凋亡作用机理等方面的研究进展,并就其抗细胞凋亡作用在肿瘤治疗中的应用作了评述,期待为以PI3K／Akt／mTOR信号通路中关键分子为靶点的肿瘤治疗研究提供参考。