缺氧性肺动脉高压大鼠肺iNOS表达的实验研究

目的　观察慢性缺氧大鼠肺组织诱生型一氧化氮合酶 (iNOS)表达的变化 ,并探讨iNOS在肺动脉高压发病中的作用。　方法　运用血清学检验及免疫组织化学方法观察血一氧化氮 (NO)、肺组织iNOS蛋白表达的变化。　结果　正常组大鼠iNOS表达呈弱阳性 ,慢性缺氧后肺组织iNOS蛋白表达呈强阳性 ,血一氧化氮水平升高 (P <0 0 1 )。　结论　一氧化氮合酶表达增强及一氧化氮参与慢性缺氧性肺动脉高压发病过程 ,诱生型一氧化氮合酶的表达及一氧化氮的血管舒张作用与氧自由基作用的放大效应可能是肺动脉高压形成的重要因素     

ALF大鼠eNOSmRNA,iNOSmRNA表达的实验研究

目的：从分子水平探讨急性肝功能衰竭（acute liver failure,ALF)大鼠机体重脏器eNOSmRNA,iNOSmRNA表达的变化,揭示其在ALF时多脏器功能障碍中的作用,方法：通过切除大鼠90％肝脏制备急性肝功能衰竭模型,并在ALF6h及应用NO供体或／和NOS抑制剂6h分别处死动物,取其肝,肺,肾,小肠和大肠制备组织切片,应用原位杂交方法测定每一组织eNOSmRNA和iNOSmRNA活性表达情况,结果：eNOSmRNA表达在ALF6h肺,大肠显示增加,而iNOSmRNA在肝,肺,肾,小肠和大肠表达明显增;ALF12h,应用NO供体和／或NOS抑制剂,肺,大肠表达eNOSmRNA下降,同时肝,肺,肾,小肠和大肠iNOSmRNA表达均明显降低。结论：急笥肝功能衰竭早期（6h)肺,大肠eNOSmRNA和肝,肺,肾,小肠和大肠iNOSmRNA表达显著增高,其翻译合成iNOS诱导产生的大量NO,可能参与早期脏器功能的损害,而应用NO供体和／或NOS抑制剂eNOSmRNA和iNOSmRNA的表达均明显降低,从而减轻对脏器的损害。     

一氧化氮与慢性肺动脉高压发病机制的研究进展

一氧化氮 (ｎｉｔｒｃｏｘｉｄｅ ,ＮＯ)是近年来发现的第一个体内气体信使分子 ,其生物学功能包括心血管系统、神经系统、免疫系统、神经毒性和细胞毒性等生理病理过程。现已证明内皮源性舒张因子就是ＮＯ。乙酰胆碱类舒血管物质系首先作用于血管内皮使之释放ＮＯ ,随之产生效应。本文主要讨论ＮＯ在肺动脉高压 (ｐｕｌｍｏｎａｒｙｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ ,ＰＨ)发病机制的研究进展。1　ＮＯ的生成和代谢ＮＯ的结构简单 ,性质活泼 ,易扩散。生物半衰期约 4～ 5ｓ ,其活性由ＮＯ的合成和破坏之间的平衡所决定。ＮＯ的合成需要前体Ｌ 精氨…     

银杏叶提取物GBE50对慢性间歇性缺氧大鼠肺动脉高压的保护作用及其对iNOS mRNA表达的影响

目的:观察GBE50对缺氧大鼠肺动脉高压的保护作用。方法:复制常压低氧肺动脉高压大鼠模型。30只健康SD大鼠随机分为正常对照组(N)、模型组(M)和GBE50组。GBE50组于每天缺氧后按照80 mg.kg-1口服GBE50,21天后观察管腔面积/管总面积(LA%)、RT-PCR测肺组织中的iNOS(诱导性NO合酶)活性的变化、用放免法测血浆中cGMP、NO含量。结果:与正常对照组比较,模型组cGMP、LA%明显降低(P0.01),iNOS mRNA表达明显升高(P0.01)和NO的含量明显增加(P0.05)。与模型组比较,GBE50组LA%、iNOS mRNA明显下降(P0.05)和NO的含量明显增加(P0.05),cGMP含量差异无统计学意义(P0.05)。结论:GBE50对慢性间歇性缺氧大鼠肺动脉高压有一定的保护作用。     

野百合碱诱导肺动脉高压模型大鼠血浆ET-1和NO水平的变化

目的:探讨野百合碱(MCT)诱导肺动脉高压(PH)模型大鼠血浆内皮素-1(ET-1)和一氧化氮(NO)水平的变化。方法:成年雄性SD大鼠20只随机分为正常对照组(n=10)和MCT模型组(n=10)。通过腹腔注射MCT建立肺动脉高压大鼠模型,用放免测定法和比色分析法分别测定血浆中ET及NO的含量。结果:在注射MCT3周后,平均肺动脉压对照组为(18.13±4.33)mmHg,模型组为(31.65±8.52)mmHg(P<0.01),血浆ET明显升高(61.08±9.46vs95.92±15.78),NO下降(115.32±27.15vs52.24±8.71)(P<0.01)。结论:野百合碱引起肺动脉高压的作用机制可能与其改变内皮素、一氧化氮血管活性物质含量有关。     

NOS、ET-1在大鼠食管静脉曲张形成中的动态表达及意义

目的：探讨iNOS、ecNOS、ET-1在门脉高压食管静脉曲张大鼠食管局部的动态变化及意义。方法：实验组大鼠行门静脉两步结扎加左肾上腺静脉结扎，并按门静脉完全结扎后7，14，21d分为3组(S7、S14、S21)，对照组亦相应分为3组(D7、D14、D21)；应用免疫组织化学SP法检测iNOS、ecNOS、ET-1在下段食管中的表达情况。结果；与相应对照组比较，iNOS、ecNOS在实验组表达强度皆增强，ET-1在S14、S21组增强。结论：在门脉高压大鼠食管静脉曲张形成中，NO升高可能是早期事件，并可能是激发食管局部体液因子改变的关键；ET-1可能在食管曲张静脉维持和发展阶段起一定作用。     

芦丁对大鼠缺血再灌注心肌组织iNOS和eNOSmRNA表达的影响

目的：研究芦丁对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用及其机制。方法通过左冠状动脉结扎建立SD大鼠心肌缺血再灌注模型,将大鼠随机分为对照组、模型组、芦丁组、L-NAME（eNOS 抑制剂）组,ELISA 法检测血清一氧化氮（NO）水平,免疫抑制法检测血清肌酸激酶同工酶（CK-MB）浓度,实时荧光定量 PCR分析各组心肌组织iNOS 和eNOS mRNA 表达的变化。结果与模型组比较,芦丁组血清 NO 水平增高（P＜0.01）,CK-MB 浓度下降（P＜0.01）,eNOS mRNA 表达升高（P＜0.01）,iNOS mRNA 表达下降（P＜0.01）。结论芦丁缺血预处理对心肌起到了保护作用,其机制可能与上调心肌组织eNOS mRNA 、下调iNOS mRNA 表达有关。     

低氧对大鼠肺组织一氧化氮合酶分布及活性的影响

本研究利用低压缺氧性肺动脉高压大鼠模型，通过NADPH－d组织化学染色对肺组织一氧化氮合酶（NOS）进行定性及定位分析、并利用3H－L一精氨酸转化实验定量测定肺组织NOS的活性，以观察低氧对大鼠肺组织NOS分布及活性的影响，旨在探讨NO及NOS在缺氧性肺动脉高压形成中的作用。酶活性测定结果表明缺氧2周大鼠肺组织总NOS活性略有升高，其中原生型NOS（CNOS）活性显著降低（P＜0．05），诱生型NOS（iNOS）活性极显著升高（P＜0．01），NADPH－d染色结果显示肺血管内皮及平滑肌细胞NOS活性均明显增强。提示缺氧可能使肺血管内皮CNOS活性降低，NO生成减少，从而导致肺血管收缩反应增强，肺动脉压升高；缺氧还可能诱导肺血管内皮和平滑肌细胞iNOS表达和活性增加，在缺氧性肺血管收缩反应和结构重组中起到一定的调节作用，从而限制肺动脉压的过度升高。     

eNOS与HSP90在肺动脉高压内皮表达的研究

目的 探讨内皮一氧化氮合成酶（Endothelial nitric oxidesynthase，eNOS）与热休克蛋白90（Heat shock protein 90，HsP90）在肺动脉高压（PH）发病机制中的关系与作用。方法以持续性肺动脉高压的胎羊模型（PH组）为研究对象，以正常胎羊为对照（NC组），利用免疫沉淀和Western印迹等技术，检测各组胎羊肺动脉内皮细胞eNOS和HsPgo的表达量及eNOS和HSP90两者的结合情况。结果PH组内皮eNOS的表达水平、eNOS和HSP90结合量与NC组相比均呈显著性降低（P〈0．05）。结论PH形成时内皮和eNOS功能受损，表现为eNOS的表达或eNOS与HsPgo结合量的减少，导致NO生成减少而氧自由基增加。     

钙敏感受体与内源性一氧化氮在致大鼠高肺血流性肺动脉高压形成中的意义

目的 探讨钙敏感受体(CaSR)与内源性一氧化氮在致大鼠高肺血流性肺动脉高压形成中的机制.方法 将24只SD大鼠随机分为实验组即肺动脉高压组(PAH组)和对照组,实验组行左肺切除手术.饲养30 d后,用右心导管法分别测定两组大鼠肺动脉平均压;检测右心室/体重(right ventricle/body weight,RV/ BW)和右心室/左心室+室间隔(right ventricle/left ventricle plus septum,RV/LV+S)比值,并以光学显微镜观测肺血管结构的变化,同时检测血浆一氧化氮(nitric oxide,NO)含量.应用RT PCR方法检测两组大鼠肺动脉内皮细胞CaSR mRNA的表达.结果 PAH大鼠肺动脉平均压(PAMP)、RV/BW及RV/(LV+S)比值均明显高于对照组(P＜0.05),光镜下肺小动脉内皮细胞明显增生,中膜厚度明显增加(P＜0.05),同时检测出PAH肺动脉内皮细胞的表达,亦比对照组明显增高(P ＜0.05);PAH组大鼠血浆中NO含量比对照组明显升高(P＜0.05).结论 高肺血流时肺动脉内皮细胞CaSR mRNA表达的改变可能通过改变NO的产生和损伤线粒体等途径参与肺动脉高压的形成.     

内皮素和一氧化氮在野百合碱引起肺动脉高压时的变化

观察在野百合碱复制的大鼠肺动脉高压模型中内皮素和一氧化氮含量变化。     

消瘀片对粥样硬化兔血管壁组织ET-1 mRNA和NOSmRNA表达的影响

采用原位杂交和ＲＴ－ＰＣＲ方法,观察消瘀片治疗１６周动脉粥样硬化兔后对血管壁组织ＥＴ－１ｍＲＮＡ和ＮＯＳｍＲＮＡ表达的影响。结果显示,粥样硬化组的ＥＴ－１ ｍＲＮＡ和ｉＮＯＳｍＲＮＡ表达较多,而ｃＮＯＳｍＲＮＡ表达较少。使用消瘀片后动脉 的ＥＴ－１ｍＲＮＡ表达明显减少,提示血浆和血管壁组织中的ＥＴ－１减少是由于ＥＴ－１ｍＲＮＡ转录水平降低所致。     

Inhibition of Expression of Hypoxia-inducible Factor-la mRNA by Nitric Oxide in Hypoxic Pulmonary Hypertension Rats

Summary In order to study the effect of nitric oxide (NO) on the expression of hypoxia-inducible factor-1 alpha (HIF-1α) mRNA in hypoxic pulmonary hypertension (HPH) rats, 30 healthy male Wistar rats were randomly divided into normoxic control group, chronic hypoxic group and hypoxia plus L-argine (L-Arg) group. The animal model of HPH was developed. The mean pulmonary arterial pressure (mPAP) was measured by inserting a microcatheter into the pulmonary artery. The HIF-1α mRNA expression levels were detected by in situ hybridization (ISH) and semiquantitative RT-PCR. It was found that after 14 days hypoxia, the mPAP in normoxic control group (17.6±2.7 mmHg,l mmHg=0.133 kPa) was significantly lower than that in chronic hypoxic group (35.8 ±6.1 mmHg,t=0.2918,P<0.05) and mPAP in chronic hypoxic group was higher than that in hypoxia plus L-argine group (24.4±3.8 mmHg,t=0.2563,P<0.05). ISH showed that the expression of HIF-1α mRNA in the intraacinar pulmonary arteriolae (IAPA) in normoxic control group (0.1076±0.0205) was markedly weaker than that in chronic hypoxic group (0.3317±0.0683,t=3.125,P<0.05) and that in chronic hypoxic group was stronger than that in hypoxia plus L-argine group (0.1928±0.0381,t=2.844,P<0.05). RT-PCR showed that the content of HIF-1α mRNA in chronic hypoxic group (2.5395±0.6449) was 2.16 times and 1.75 times higher than that in normoxic control group (1.1781±0.3628) and hypoxia plus L-argine group (1.4511±0.3981), respectively. It is concluded that NO can reduce the mPAP by the inhibition of the expression of HIF-1α mRNA, which may be one of the mechanisms through which NO affects the pathogenesis of HPH. AO Qilin, male, born in 1971, Lecturer, M. D., Ph. D. This project was supported by a grant from National Natural Sciences Foundation of China (No. 39730190).     

亚硝酸钠和单硝酸异山梨酯对高肺血流肺动脉高压大鼠肺动脉压力和肺血管重塑的影响

目的 比较口服亚硝酸钠和单硝酸异山梨酯对高肺血流肺动脉高压大鼠肺动脉压力和肺血管重塑的影响.方法 健康雄性SD大鼠40只,将大鼠按随机数字表法分为假手术组(S组)、肺动脉高压组(P组)、亚硝酸钠组(T1组)、单硝酸异山梨酯组(T2组).P组、T1组、T2组大鼠通过腹主动脉-下腔静脉分流法建立左向右分流肺动脉高压大鼠模型.饲养11周后连续21 d每天分别给予T1组、T2组大鼠6 mg/kg亚硝酸钠和5 mg/kg单硝酸异山梨酯灌胃干预,余2组给予等量的生理盐水.14周后,监测平均动脉压(MAP)、平均肺动脉压(mPAP)的变化;计算右心室肥厚指数:右心室质量/(左心室质量+室间隔质量)[RV/(LV+S)]、右心室质量/体质量(RV/BW)及(左心室+室间隔质量)/体质量[(LV +S)/BW];硝酸根还原酶法检测血及肺组织中NO含量变化;HE染色光镜下观察肺动脉的病理改变.结果 与S组比较,分流手术后P组大鼠mPAP、RV/(LV+S)和RV/BW升高,BW降低,血清NO含量降低(P＜0.05),光镜下肺动脉管壁增厚,表明肺动脉高压模型建模成功;与P组比较,T1组和T2组mPAP、RV/(LV+S)和RV/BW均明显降低(P＜0.05),T1组血清NO含量明显升高(P＜0.05),T2组血清NO含量升高,但差异无统计学意义(P＞0.05);与T1组比较,T2组mPAP比T1组下降幅度大;T1组、T2组光镜下肺动脉病理学损伤程度明显减轻.4组大鼠MAP、(LV+S)/BW、肺匀浆NO含量比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 长期口服亚硝酸钠和单硝酸异山梨酯均能降低高肺血流肺动脉高压大鼠平均肺动脉压力,减轻肺血管重塑;单硝酸异山梨酯的降平均肺动脉压力作用大于亚硝酸钠.     

氧疗对慢性低氧高二氧化碳性肺动脉高压大鼠肺血管重构及血浆内皮素的影响

目的：探讨长期氧疗对慢性低氧高二氧化碳性肺动物高压大鼠肺动脉压，肺血管重构及血浆内皮素变化的影响。方法：将SD大鼠分4组：正常对照组（NC），慢性低氧4w后伴高二氧化碳2w组（HH），HH后吸空气3w组（HC）与HH后氧疗3w组（HO）。观察各组大鼠平均肺动脉压（mPAP),右心室，左心室＋空间隔重量比（RV／LV＋S），血浆内皮素－1（ET－1）浓度及肺细小动脉显微结构变化。结果：（1）mPAP,RV/V S及血浆ET－1浓度：HO组比HC组明显降低（P＜0．01）。(2)mPAP与血浆ET－1呈良好的相关性。（3）光镜下HH组肺细小动脉内弹力板扭曲，中膜平滑肌细胞增生，管腔明显狭窄，HO组肺细小动脉内弹力板扭曲明显减轻，中膜平滑肌层变薄，管壁较均匀一致。结论：长期氧疗可明显降低慢性低氧高二氧化碳肺动脉高压大鼠血浆ET－1的浓度及肺动脉压，减轻肺血管的重构。     

门脉高压症猪脾组织中内皮素受体及诱导型一氧化氮合酶mRNA表达的意义

探讨胆汁性肝硬化门脉高压症猪脾组织中内皮素受体(ETR)及诱导型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA的表达及其对内脏血流动力学的影响.采用原位杂交方法检测实验组(n=10)和对照组(n=5)猪脾组织冰冻切片中ETR(ETAR、ETBR)及iNOS mRNA的表达.同时监测猪的门脉血流量(Qpv)、门静脉压(PPv)及平均动脉压(MAP).结果,实验组ETAR mRNA表达水平与对照组无显著差异(P＞0.05),而ETBR及iNOS mRNA表达水平显著高于对照组(P＜0.01),其中ETAR mRNA表达主要位于血管平滑肌细胞中;ETBR mRNA主要位于脾窦内皮细胞;iNOS mR-NA主要在血管平滑肌细胞、巨噬细胞和内皮细胞中.ETAR mRNA的表达与Qpv、Ppv无明显相关(P=0.11或P=0.08);ETBR与iNOS mRNA的表达水平分别与Qpv、PPv呈正相关(P＜0.05或P＜0.01);而分别与MAP呈负相关(P＜0.05或P＜0.01).研究表明ETBR及iNOS mRNA的表达可能在门脉高压症和内脏高血流动力学中起重要作用.     

慢性缺氧性肺动脉高压大鼠内皮素与心房钠尿肽的变化

内皮素（ET）是迄今发现最强的内源性缩血管物质，并能使血管平滑肌细胞分裂增殖。心房钠尿肽（ANP）具有利钠、利尿、扩张血管等作用。这两种血管活性多肽对心血管系统的作用相互抬抗。本实验采用放射免疫测定法测定慢性缺氧性肺动脉高压大鼠的血浆、心肌组织ET及ANP水平，并观察两者之间变化关系，为研究肺动脉高压提供依据。1材料和方法1．1大鼠肺动脉高压模型制备健康雄性SD大鼠24只，体重150～300g，由第二军医大学实验动物中心提供。随机分成两组：实验组12只，置于低压舱中，舱内预先给予碱石灰（60g／d），抽真空，海拔上升速…     

慢性缺氧性肺动脉高压大鼠内皮素与心房钠尿肽的变化

观察慢性肺动脉高压大鼠血产乐内皮素、心房钠尿肽含量改变并探讨其机理。复制大鼠慢性缺氧性肺动有高压模型，采用免疫测定法观察其血浆、心肌组织ＥＴ和ＡＮＰ含量。结论肺动脉高压时，ＥＴ与ＡＮＰ的合成及释放增加，两者作用相互对抗，为临床诊断及治疗肺动脉高压提供参考。     

线粒体定位eNOS对肺动脉内皮细胞ROS和NO的调控研究

目的探讨肺动脉内皮细胞线粒体定位的eNOS减少与新生儿持续性肺动脉高压(persistent pulmonaryhypertension of the new born,PPHN)的相关性。方法 PPHN的胎羊模型并分离肺动脉内皮细胞,运用免疫荧光、Western Blot和特异性靶向eNOS(endothelial nitric oxide synthase)等方法,比较正常胎羊和持续性肺动脉高压的胎羊来源肺动脉内皮细胞的eNOS线粒体定位与胞内活性氧ROS(reactive oxygen species)和一氧化氮NO(nitric oxide)的关系。结果在持续性肺动脉高压来源的肺动脉内皮细胞中,Western Blot结果显示线粒体定位的eNOS减少;用Mito-HE荧光探针标记肺动脉内皮细胞中ROS,显示在PPHN的肺动脉内皮细胞中ROS增加;在293HEK细胞过表达不同靶向的eNOS,在线粒体过表达eNOS可减少胞内ROS含量。结论线粒体定位的eNOS可能通过ROS调控胞内NO的量,从而影响血管的舒张。我们的研究揭示了PPHN发病新的机制并为PPHN治疗提供了潜在的靶向位点。     

L-精氨酸脂质体对慢性低O2高CO2肺动脉高压大鼠的影响

目的:观察L-精氨酸(LA-Arg)脂质体对慢性低氧高二氧化碳性肺动脉高压、右心室肥大大鼠的影响并探讨其机制.方法:将40只健康雄性SD大鼠随机分为4组:正常对照组(NC组)、低氧高二氧化碳4 w组(HH组)、低氧高二氧化碳加L-Arg4w组(LA组)和低氧高二氧化碳加L-Arg脂质体4 w组(LL组).采用化学比色法测定肺组织匀浆eNOS活性,用液体闪烁仪测定[3H]-瓜氨酸的生产量,计算肺动脉总一氧化氮舍酶(tNOS)的活性,组织原位杂交观测肺细小动脉eNOSmRNA的表达变化.结果:①HH组平均肺动脉压力(mPAP)和右心室重量与左心室加室间隔重量比(RV/LV S)均高于NC组,LL组均明显低于LA组与HH组.②HH组的肺组织匀浆tNOS含量明显高于NC组(P＜0.01),LL组高于LA组(P＜0.05),而LA组与HH组无明显差异.③HH组的肺动脉tNOS活性显著高于NC组(P＜O.01),而LL、LA、HH三组的tNOS活性之间均无明显差异(P＞0.05).④HH组的肺细小动脉eNOSmRNa的平均吸光度值低于NC组(P＜0.05),LA组高于HH组(P＜0.05),而LL组明显高于HH组和LA组(P均＜0.01).结论:L-Arg脂质体较L-Arg有更明显的降低慢性低氧高二氧化碳大鼠肺动脉压和减轻右室重构的作用,其机制可能与L-Arg脂质体促进L-Arg的跨膜转运有关.