鱼金抑制乙型流感病毒诱导细胞凋亡研究

目的探讨鱼金注射液阻断乙型流感病毒诱导狗肾传代细胞（Madin-Darby canine kidney，MDCK）凋亡。方法采用瑞氏染色法光镜下观察细胞形态变化、原位末端标记术测定细胞凋亡率。结果病毒感染组MDCK细胞凋亡百分率显著高于其他组（P〈0.001）；试验组、药物对照和细胞对照组比较无差异（P〉0．05）；原位末端标记组细胞凋亡显著高于瑞氏组（P〈0．01）。结论该研究提示乙型流感病毒可诱导MDCK细胞凋亡，而鱼金能阻断乙型流感病毒诱导MDCK细胞凋亡。     

中草药提取液对流感病毒诱导细胞凋亡的影响

探讨金银花、黄芩和连翘的提取液对甲3型流感病毒诱导狗肾传代细胞(MDCK细胞)凋亡的影响。方法采用金银花、黄芩和连翘3种中草药的提取液进行抗病毒试验,以细胞病变、姬姆萨染色在光镜下观察细胞形态学变化,Annexin V和PI双染用流式细胞仪测定细胞凋亡率,评价药物对甲3型流感病毒诱导MDCK细胞凋亡的影响。结果在MDCK细胞上甲3型流感病毒(血凝滴度为1∶64)的TCID50为0.65.100μL-1;实验浓度:金银花为1∶256(1.95g.L-1),黄芩为1∶64(7.81g.L-1),连翘为1∶64(7.81g.L-1)。在光镜下观察甲3型流感病毒对照组的MDCK细胞,可见被感染的MDCK细胞出现了细胞凋亡特有的形态学变化。Annexin V和PI双染经流式细胞仪测定显示3种药物实验组的细胞凋亡率[金银花(28.13±3.30)%、黄芩(13.47±3.04)%、连翘(19.17±6.55)%]均显著低于病毒对照组[(54.10±4.58)%](P<0.001)。结论 7.81g.L-1的黄芩及7.81g.L-1的连翘均能抑制100TCID50的甲3型流感病毒诱导MDCK细胞凋亡。1.95g.L-1的金银花不能够有效抑制100TCID50的甲3型流感病毒诱导MDCK细胞凋亡。     

甲型流感病毒H3N2诱导狗肾传代细胞凋亡的研究

目的探讨甲型流感病毒对体外培养的狗肾传代细胞系(MDCK)的凋亡诱导作用.方法用不同血凝单位的甲型流感病毒感染MDCK细胞,经HE染色、琼脂糖凝胶电泳以及流式细胞术等方法检测凋亡情况.结果甲型流感病毒感染MDCK后,在细胞形态上呈现凋亡特有变化;电泳出现典型梯状条带;Annexin-V染色流式细胞仪检测出在一定范围内,细胞凋亡率与病毒的浓度呈正相关.结论甲型流感病毒能够诱导体外培养的MD-CK细胞凋亡,且在一定范围内,细胞凋亡率与病毒的浓度呈正相关.     

鱼腥草抗流感病毒诱导细胞凋亡的研究

目的 :探讨鱼腥草抑制甲3型流感病毒 (H3N2 )诱导细胞凋亡的作用。方法 :瑞氏染色法光镜下观察狗肾传代细胞 (Madin -Darbycaninekidney ,MDCK)细胞形态学变化并计算凋亡率 ;琼脂糖凝胶电泳比较在有无鱼腥草作用下的甲3型流感病毒作用后的细胞DNA条带差异。结果 :光镜观察表明病毒感染组MDCK细胞出现细胞凋亡所特有的形态学变化 ,且该组细胞凋亡的百分率显著高于其它组 (P <0 .0 1) ;被感染的MDCK细胞DNA琼脂糖电泳呈特征性“梯状条带”[1] ,而鱼腥草作用后的细胞则没有出现。结论 :鱼腥草具有抑制H3N2 诱导细胞凋亡的作用。     

加味神术散雾化剂抗流感病毒的实验研究

目的探讨加味神术散雾化剂在体外对甲型H1N1流感病毒增殖的影响。方法以甲型H1N1流感病毒感染狗肾传代细胞（MDCK cell）为载体,观察加味神术散雾化剂不同药物浓度对流感病毒引起的细胞病变（CPE）的影响。采用Reed-Muench法计算流感病毒对MDCK细胞的半数细胞感染量(TCID50)。采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法（MTT）测定光密度（OD）值,计算不同药物对MDCK细胞的破坏率,通过Probit回归计算不同药物对MDCK细胞的最大无毒浓度（TC0）及半数中毒浓度(TC50)。计算不同药物对流感病毒增殖的抑制率,通过Probit回归计算半数抑制浓度(IC50)和治疗指数（TI）。结果甲型H1N1流感病毒对MDCK细胞的TCID50为10-8/0.1mL。加味神术散雾化剂对MDCK细胞的TC50为366.63μg/mL,TC0为31.25μg/mL;利巴韦林对MDCK细胞的TC50为109.85μg/mL,TC0为8.02μg/mL。加味神术散雾化剂对流感病毒直接抑制作用的IC50=9.79μg/mL,TI=37.45;对预防流感病毒感染的IC50=8.72μg/mL,TI=41.04;对治疗流感病毒感染的IC50=17.40μg/mL,TI=21.07。利巴韦林对预防流感病毒感染的IC50=84.30μg/mL,TI=1.30。结论加味神术散雾化剂可明显抑制甲型H1N1流感病毒在MDCK细胞中的增殖,具有抗甲型H1N1流感病毒作用。     

麻杏石甘汤对A型流感病毒感染的犬肾传代细胞凋亡的影响

目的:探讨麻杏石甘汤对A型流感病毒感染的犬肾传代(MDCK)细胞凋亡的影响. 方法:运用原位末端标记技术和流式细胞术分别检测最大无毒限量的麻杏石甘汤对A型流感病毒感染的MDCK细胞凋亡百分率与细胞周期变化的影响. 结果:麻杏石甘汤能显著降低A型流感病毒感染的MDCK细胞的凋亡百分率,下调其G1/G0期细胞比例,上调其S期、G2/M期细胞比例以及细胞增殖指数(PI)值. 结论:麻杏石甘汤通过调整流感病毒感染的MDCK细胞的细胞周期,降低细胞凋亡百分率而发挥抗流感病毒作用.     

纳米银对流感病毒H3N2灭活作用的探讨

[目的]探讨纳米银(Nanosilver,NaAg)对流感病毒H3N2的灭活作用。[方法]采用血球凝集试验、鸡胚培养法、MTT分析法、血球吸附试验探讨NaAg对流感病毒H3N2的灭活作用。利用透射电镜、流式细胞仪检测病毒诱导细胞的凋亡。[结果]NaAg/H3N2组血球凝集试验效价为1∶2,鸡胚尿囊液血凝效价低于1∶2,流感病毒H3N2对照组血球凝集试验效价、鸡胚尿囊液血凝效价均为1∶1024,二者比较差异具有显著性意义(P<0.001);NaAg溶液在狗肾MDCK细胞上最大无毒浓度为25μg/mL;流感病毒H3N2在MDCK细胞上半数感染浓度(TC ID50)为10-3.5/0.1 mL。等体积的50μg/mL NaAg与40 TC ID50流感病毒H3N2溶液室温充分混和作用2 h后感染MDCK细胞,细胞的存活率为(98.16±2.67)%,而20 TC ID50流感病毒H3N2感染MDCK细胞,细胞的存活率为(35.21±1.45)%,二者比较差异具有非常显著性意义(P<0.001)。25μg/mLNaAg溶液有效抑制了20 TC ID50流感病毒H3N2诱导MDCK的细胞凋亡。[结论]纳米银对流感病毒H...     

甲型H1N1流感病毒致宿主细胞脱氧核糖核酸氧化损伤的研究

目的:通过检测DNA损伤标志物8-氧鸟嘌呤脱氧核苷(8-oxo-dG)在甲型H1N1型流感病毒感染MDCK细胞中的表达,初步探讨甲型H1N1型流感病毒诱导细胞凋亡的脱氧核糖核酸(DNA)损伤机制.方法:MDCK细胞培养后.甲型H1N1流感病毒感染继续培养0h、1h、3h、6h、12h、24h、48h,细胞爬片免疫组织化学方法检测各时间点DNA损伤标志物8-oxo-dG的表达.结果:甲型H1N1流感病毒感染后各时间点实验组MDCK细胞8-oxo-dC的表达均显著高于相应的正常对照组(P<0.05),病毒感染各组间两两比较发现各组间差异显著.结论:甲型H1N1流感病毒感染能造成宿主细胞DNA氧化损伤.     

流感病毒在MDCK细胞中分离与培养的影响因素

目的探求流感病毒在MDCK（狗肾细胞）中培养的影响因素。方法将流感病毒吸附接种于MDCK细胞,对一些因素（样本处理情况、吸咐和培养时间、血清浓度、胰酶浓度、接种量和传代次数等）进行比较。结果样本反复挤压,最佳收获病毒时间为72h;加牛血清白蛋白组分V和维持液中终浓度为2．5μg/ml的胰酶可明显提高细胞增殖病毒的血凝效价。结论通过对MDCK细胞培养与增毒的影响因素分析,明显提高流感病毒分离与增毒的效价。     

季节性流感病毒MDCK细胞培养特性研究

目的了解季节性流感病毒在MDCK细胞上培养第一代血凝试验（HA）阴性的标本，全部盲传后增加的HA阳性毒株数量。方法采集2011年长沙市哨点和暴发疫情流感样病例的鼻咽拭子标本，在MDCK细胞培养第一代HA阴性的，全部盲传，再用HA试验确定增加的阳性毒株数量。结果2011年766份流感样病例鼻咽拭子标本，MDCK细胞培养第一代HA阳性毒株59份，占全年阳性的56．19％（59／105）；MDCK细胞培养第一代阴性，盲传后增加的HA阳性毒株46份，占全年阳性的43．81％（46／105）。流感病毒MDCK细胞培养第一代HA阴性标本经盲传后，流感病毒阳性毒株数可增加43．81％。经Pearson统计软件分析，差异有统计学意义（x2=14．449，P=0．000）。     

流感病毒鼠肺适应株FM1诱导犬肾细胞MDCK凋亡的实验研究

流感病毒鼠肺适应株FM1攻击犬肾细胞36 h后,通过对其细胞形态学的观察、DNA电泳图谱的分析及流式细胞仪的检测,显示受到病毒攻击后犬肾细胞在形态学上主要表现为细胞圆缩,核固缩、碎裂等,在细胞周围形成典型的圆形凋小体;琼脂糖凝胶电泳实验图谱可见到清晰的ladder梯状条带;流式细胞仪的检测提示在正常的二倍体峰前可见明显的亚二倍体峰,并有一定的细胞凋亡率.根据以上结果可得出结论:在流感病毒鼠肺适应株FM1攻击犬肾细胞MDCK后诱导了细胞凋亡的发生.     

复方感冒冲剂体外抗流感病毒作用

目的探讨复方感冒冲剂体外对流感病毒（H3N2）的抑制作用,为临床合理用药提供科学依据。方法使用狗肾传代细胞（Madin-Darby canine kidney,MDCK）建立体外病毒感染模型。将病毒与药物通过三种不同给药方式,通过细胞病变法观察复方感冒冲剂对流感病毒的抑制及对被感染细胞的保护作用。结果复方感冒冲剂在感染病毒同时加药方式下对流感病毒（H3N2）感染的MDCK细胞有明显的保护作用;在先给药再感染病毒的方式下对MD-CK细胞的保护作用较弱;在先加病毒后加药的方式下,复方感冒冲剂对病毒感染的MDCK细胞无明显保护作用。结论复方感冒冲剂具有体外抗流感病毒作用,其药效发挥可能依赖机体的代谢并与给药方式有关。     

流感病毒致病机理的研究进展

流感病毒感染可损伤呼吸道上皮细胞、肺上皮细胞,也可损伤肺外器官。依据病毒型别和感染部位不同而有不同的病理表现。流感病毒诱导宿主细胞凋亡的机制错综复杂,包括半胱天冬酶（caspase）、Fas/FasL、P53和PI3K/Akt信号通路、IKK-NF-κB信号通路、JNK和P38MAPK。同时细胞凋亡与流感病毒编码蛋白和其他因素也有关系。     

用MDCK细胞培养副流感病毒的初步尝试

目的:初步探索用MDCK细胞培养副流感病毒。方法:用不同血凝效价副流感病毒感染MDCK细胞,观察副流感病毒在细胞上的生长情况,并检测血凝效价的变化。结果:1∶512副流感病毒感染MDCK细胞后24h即出现明显的细胞病变效应,但病毒的血凝效价有所下降。结论:副流感病毒可以引起MDCK细胞出现细胞病变效应,但在该细胞内不能复制。     

流感病毒诱导肿瘤细胞凋亡及对其端粒酶活性的影响

目的 为观察并比较不同型流感病毒诱导肿瘤细胞凋亡能力的差异，并探讨肿瘤细胞端粒酶活性变化与凋亡之间的关系。方法 用A1、B型流感病毒及经紫外线照射后的病毒分别感染Hela细胞，于不同时间取细胞分别在电镜下观察细胞的形态，Annexin V-FITC染色流式细胞仪检测凋亡百分率，并用PCR-ELISA法检测肿瘤细胞端粒酶活性。结果 A1型流感病毒（UV-A1）及B型流感病毒（UV-B）作用于Hela细胞后24h，电镜下可见细胞凋亡的特征性改变。流式细胞仪检测肿瘤细胞凋亡百分率随时间延长而增高，于12-24h达高峰，其中UV-B诱导凋亡百分率最高达38．6％，Uv-A1最高为23．9％。紫外线照射后的UV-B最高达到20．9％。UV-A1最高达到10．1％；此外，Hela细胞端粒酶活性均有所下降，其中UV-B诱导后的Hela细胞端粒酶活性下降比A1型更明显，同时，紫外线照射后的UV-B诱导的Hela细胞端粒酶活性也略降低。结论 UV-B在导肿瘤细胞凋亡的能力及降低其端粒酶活性方面都比UV-A1要强，而且经紫外线照射后的UV-B仍然具有一定的诱导Hela细胞凋亡的能力；流感病毒降低肿瘤细胞的端粒酶活性可能是其诱导肿瘤细胞凋亡的又一重要机制。     

流感病毒诱导肿瘤细胞凋亡的研究

目的:探讨流感病毒与经紫外线照射后的流感病毒是否具有诱导肿瘤细胞凋亡的能力。方法:流感病毒及经紫外线照射后的病毒分别以20m.o.i.感染Hela细胞,于不同时间取细胞分别在电镜下观察细胞超微结构的改变,Annexin-VFITC/PI流式细胞仪进行凋亡定量分析。结果:流感病毒作用于Hela细胞后6h电镜下即可见细胞凋亡的改变。流式细胞仪检测肿瘤细胞凋亡百分率随时间延长而增高,于12～24h达高峰,流感病毒诱导凋亡百分率最高达40.2%,紫外线照射后的流感病毒最高达16.4%。结论:流感病毒与经紫外线照射后的流感病毒均有诱导肿瘤细胞凋亡的能力,但流感病毒诱导肿瘤细胞凋亡的能力要比经紫外线照射后的流感病毒强。     

常染色体显性遗传性多囊肾病囊肿液对肾小管上皮细胞增殖和凋亡的影响

目的：观察常染色体显性遗传性多囊肾病（ADPKD）囊肿液对肾小管细胞增殖，凋亡以及细胞周期的影响，以初步探讨ADPKD囊肿发生，发展的机制。方法：用不同浓度的ADPKD囊肿液处理MDCK和LLC－PK1两株肾小管细胞，采用MTT法观察细胞增殖，用流式细胞术检测细胞周期和凋亡指数。结果：（1）与对照组相比，不同浓度（10％，20％，40％，60％，V／V）ADPKD囊肿液作用24h能明显促进上述两株肾小管细胞增殖，并呈剂量依赖性；而且明显影响细胞周期，使G0－G1期细胞增多，S期细胞减少，（2）高浓度（40％，60％）ADPKD囊肿液作用48h对MDCK细胞仍有上述作用，但对LLC－PK1细胞则无类似作用。（3）不同浓度ADPKD囊肿液均不诱导上述两株细胞凋亡。结论：ADPKD囊肿液可剂量依赖性地促进肾小管细胞增殖，并在24h达作用高峰，但并不诱导肾小管细胞凋亡，其机制可能与囊肿液通过激活G1期细胞，使细胞未从G1期脱出细胞周期而发生凋亡有关。     

流感病毒诱导肿瘤细胞凋亡的研究

目的：探讨流感病毒与经紫外线照射后的流感病毒是否具有诱导肿瘤细胞凋亡的能力。方法：流感病毒及经紫外线照射后的病毒分别以20m．o．i．感染Hela细胞，于不同时间取细胞分别在电镜下观察细胞超微结构的改变．Annexin-VFITC/／PI流式细胞仪进行凋亡定量分析。结果：流感病毒作用于Hela细胞后6h电镜下即可见细胞凋亡的改变。流式细胞仪检测肿瘤细胞凋亡百分率随时间延长而增高，于12～24h达高峰，流感病毒诱导凋亡百分率最高达40．2％，紫外线照射后的流感病毒最高达16．4％。结论：流感病毒与经紫外线照射后的流感病毒均有诱导肿瘤细胞凋亡的能力，但流感病毒诱导肿瘤细胞凋亡的能力要比经紫外线照射后的流感病毒强。     

五加皮体外抗甲型流感病毒的作用

目的筛选出五加皮最佳的给药方式并找出五加皮水浸液体外抗流感病毒的最大无毒浓度。方法采用流感病毒H1N1鸡胚传代,用血凝实验测定病毒效价;病毒感染细胞后观察CPE,采用Karber公式计算病毒的TCID50,用100TCID50的病毒液感染MDCK细胞;五加皮的水浸液作用于未经病毒感染的MDCK细胞48h,采用MTT法检测找出药物对细胞的最大无毒浓度。分别采用治疗给药、预防给药、直接灭活3种方式作用于MDCK细胞,观察药物对病毒的作用,并计算药物的抗病毒有效率（ER）。结果 1病毒感染MDCK细胞浓度为：100TCID50=2.14×10^-3;2药物作用于MDCK细胞的最大无毒浓度为1.78 mg/m L,其细胞存活率高达99.4%;33种给药方式中,五加皮水浸液治疗给药组没有作用（ER﹤0）,预防给药组（ER=78.26%）及直接灭活病毒组（ER=27.78%）抗病毒均有效,其中预防给药组的抗病毒有效率最高,作用效果最好。结论五加皮在体外具有较好的抗甲型流感病毒的作用,且预防给药方式抗病毒效果最好。     

桂枝挥发油及桂皮醛抗流感病毒的机制研究

目的 考察桂枝挥发油及其主要成分桂皮醛体外对甲型流感病毒鼠肺适应株A/PR/8/34（H1N1）的直接杀灭作用,探讨其抗流感病毒作用机制中Toll样受体7（TLR7）信号通路的作用。方法 以流感病毒感染的狗肾传代细胞（MDCK）为载体,测定桂枝挥发油及桂皮醛体外抑制流感病毒增殖的半数抑制浓度（IC₅₀）和治疗指数（TI）;ELISA法检测MDCK细胞干扰素-β（IFN-β）的分泌;RT-PCR法考察MDCK细胞中Toll样受体3（TLR3）、TLR7、肿瘤坏死因子受体相关因子3（TRAF-3）、白介素-1受体相关激酶4（IRAK-4）、IFN-β基因的表达。结果 桂枝挥发油及桂皮醛对流感病毒有明显的直接杀灭作用,IC₅₀分别为1.85×10^?7、5.77×10^?7 g/mL,TI分别为27.04、9.51。与病毒组比较,桂枝挥发油和桂皮醛0.25×10^?5 g/mL显著升高感染甲型流感病毒的MDCK细胞上清液中IFN-β的量（P＜0.05）,显著上调细胞中TLR7、IRAK-4、IFN-β mRNA表达水平（P＜0.05）。结论 桂枝挥发油及桂皮醛对流感病毒H1N1的增殖有显著抑制作用,作用机制可能与其激活TLR7信号通路、活化IRAK-4、诱导IFN-β高表达有关。