白藜芦醇对帕金森病大鼠黑质多巴胺能神经元损伤的保护作用

 目的 观察白藜芦醇(Res)对脂多糖（LPS）所致大鼠黑质多巴胺能（DA）神经元损伤的保护作用。方法 黑质内注射LPS制作帕金森病（PD）大鼠模型。应用Res对实验动物进行处理。通过行为学、酪氨酸羟化酶（TH）、核因子κB（NF-κB）等免疫组化及免疫印迹技术观察Res对DA能神经元损伤的作用。结果 对照组大鼠无行为学变化,PD组大鼠平均旋转圈数为（196.90±9.52）圈,Res组为（106.57±7.89）圈,差异有统计学意义（P<0.01）。TH免疫组化结果表明,对照组大鼠黑质TH阳性神经元数量较多,胞体较大,突起明显;PD组神经元数量明显减少（P<0.01）,甚至消失,神经元胞体萎缩,突起亦不清晰。Res组TH阳性神经元数量与PD组相比明显增加（P<0.01）,神经元形态变化亦不明显。NF-κB免疫组化结果表明,对照组黑质仅见少数NF-κB阳性细胞,无明显核转位现象;PD组黑质NF-κB阳性细胞较多,胞质呈黄褐色,部分细胞核也着色,有明显核转位现象;与PD组相比,Res组NF-κB阳性细胞数明显减少（P<0.01）。小胶质细胞特异性抗体（OX-42）免疫组化结果表明,对照组大鼠黑质小胶质细胞多呈静止的“分枝样”状态,PD组多为激活状态,呈典型的“阿米巴样”;Res组激活状态的小胶质细胞与PD组相比明显减少,形态介于静止和激活状态之间。Western blot分析结果显示,与对照组相比,PD组TH蛋白表达减少,NF-κB P65蛋白表达明显增高（P<0.01）;与PD组相比,Res组TH蛋白表达增加,NF-κB P65蛋白表达显著下降（P<0.01）。结论 Res可对LPS所致黑质DA能神经元损伤起防护作用,具有抗炎及神经保护作用。     

二苯乙烯苷对大鼠原代皮层神经元氧糖剥夺损伤的保护作用

目的：探讨二苯乙烯苷对大鼠皮层神经元氧糖剥夺(oxygen-glucose deprivation,OGD)损伤的作用。方法：取孕18 d的Sprague-Dawley胎鼠皮层神经元培养7～8 d,进行OGD损伤,同时分别加入二苯乙烯苷(10、20、40μg/mL)和尼莫地平(2.5μg/mL)进行处理。设置空白对照组、OGD组、OGD并加药组(二苯乙烯苷10、20、40μg/mL)以及OGD并尼莫地平阳性对照组。损伤6 h后,用噻唑蓝[3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide,MTT]法检测细胞活力,乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)法检测LDH释放量,末端脱氧核苷酰基转移酶介导性dUTP切口末端标记(terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick end-labeling,TUNEL)法检测细胞的凋亡,免疫蛋白印迹(Western Blot)法检测Toll 样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)、核转录因子-κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)及其抑制因子IκB和磷酸化的IκB(p-IκB)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、p38及磷酸化的p38(p-p38)的蛋白表达。结果：OGD损伤后大鼠皮层神经元细胞活力显著降低,LDH释放量明显增多,细胞凋亡显著增多;二苯乙烯苷和尼莫地平均可显著抑制这一趋势。 OGD损伤引起TLR4、NF-κB、p-IκB/IκB、p-p38/p38和IL-6的异常高表达,二苯乙烯苷明显抑制这些蛋白表达。结论：二苯乙烯苷对OGD诱导的原代皮层神经元损伤的保护作用可能是通过抑制TLR4-NF-κB炎症信号通路和p38通路发挥抗炎抗凋亡效应的。     

蛋白酶体抑制剂对小鼠黑质多巴胺神经元的毒性作用

目的:观察蛋白酶体抑制剂对小鼠黑质多巴胺神经元的毒性作用.方法:8周龄C57BL/6小鼠随机分组:磷酸盐缓冲液(PBS组)和lactacystin组,二种制剂分别单侧立体定向注射于中脑前脑束(Middle forebrain bundle);12周龄时灌注取脑分离纹状体,采用HPLC法测多巴胺、5-HT及代谢产物,取中脑观察黑质区多巴胺能神经元变性及包涵体样物质形成情况.结果:Lactacystin组同侧黑质区多巴胺细胞数减少51%,并可见泛素染色阳性的类包涵体样物质形成,同侧纹状体多巴胺(DA)及其代谢产物二羟苯乙酸(DOPAC)、高香草酸(HVA)浓度分别减少52%、46%和51%,而5-羟色胺(5-HT)及5-羟吲哚乙酸(5-HIAA)浓度无改变.结论:蛋白酶体抑制剂可引起选择性黑质区多巴胺能神经元变性,并可能导致细胞内异常蛋白质聚集.     

绿茶多酚对帕金森病小鼠多巴胺能神经元保护作用研究

目的探索绿茶多酚(GTPs)对神经毒素1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)诱导的帕金森病(PD)小鼠黑质多巴胺能神经元预防性保护作用及机制。方法采用C57BL/6J小鼠共60只,分为空白对照组、预防组、MPTP组和治疗组(n=15)。MPTP组以MPTP腹腔注射7d(30mg.kg-1.d-1);预防组同以上述剂量注射MPTP前3个月开始GTPs干预至MPTP处理后3个月;治疗组以相同MPTP处理后开始GTPs干预3个月;空白对照组:腹腔注射同体积的生理盐水,连续7d,饮水中未加入GTPs,余处理方法及时长同治疗组。免疫组织化学法观察黑质多巴胺能神经元计数,比色法观察中脑超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)反映氧化应激水平。结果预防组、MPTP组和治疗组黑质多巴胺能神经元数量显著减少(P<0.05),氧化应激水平明显升高(P<0.05)。结论预防性使用GTPs对PD小鼠的多巴胺能神经元具有高于治疗的保护作用,其机制可能为预先增强抗氧化应激能力,提高发生病理改变的阈值。     

氯化锂对帕金森病小鼠黑质多巴胺能神经元保护作用的实验研究

目的研究氯化锂（LiCl）对KM小鼠中脑黑质受损伤的多巴胺（DA）能神经元的保护作用。方法利用1-甲基4-苯基1，2．3，6四氢吡啶（MPTP）腹腔注射构建帕金森病（PD）动物模型，将实验动物分为MPTP组、NS组（生理盐水组）、LiCl组、PBS组（磷酸盐生理盐水缓冲液组）。模型动物存活1周后，一部分取其中脑黑质节段，固定、包埋做连续冠状石蜡切片，以免疫组织化学染色方法，显示各组酪氨酸羟化酶（TH）和钙结合蛋白（CB）表达阳性细胞，光镜观察并细胞计数，统计学分析；另一部分取其中脑黑质组织匀浆，行TH、CB的Western blot免疫印迹方法检测．用LabWorks软件分析处理。结果免疫组织化学染色结果显示LiCl组、NS组小鼠黑质致密部TH与CB阳性神经元数量分别显著多于PBS组（P〈0．01）、MPTP组（P〈0．01）；Western blot免疫印迹结果显示LiCl组TH、CB表达水平显著高于PBS组（P〈0．05）。结论LiCl对成年PD小鼠黑质DA能神经元具有保护作用，且这种保护作用可能与细胞内CB表达增加有关。     

松果菊苷对鱼藤酮诱导的大鼠帕金森病模型黑质多巴胺能神经元的选择性保护作用（英文）

目的：观察鱼藤酮对大鼠中脑纹状体多巴胺能神经系统、肝、肾等组织的损伤及松果菊苷的干预作用。方法：雄性健康Sprague-Dawley大鼠被随机分为对照组,模型组和低、中、高剂量松果菊苷干预组。运用鱼藤酮2.75mg/（kg·d）腹腔注射4周的方法制作大鼠帕金森病模型;对照组腹腔每日注射同等体积不含鱼藤酮的溶解液;干预组除注射鱼藤酮外,分别给予松果菊苷20、40、80mg/（kg·d）灌胃处理。运用改良神经功能缺损评分（modified neurological severity score,mNSS）测量大鼠的神经行为改变,采用试剂盒检测其肝、肾损伤的指标,酪氨酸羟化酶免疫染色观察中脑黑质多巴胺能神经元的数目,比色法测定纹状体多巴胺的含量。结果：与正常对照组比较,鱼藤酮模型组肝、肾损伤的指标明显上升（P〈0.05）,mNSS升高（P〈0.01）,黑质多巴胺能神经元数目显著减少（P〈0.05）,纹状体多巴胺含量降低（P〈0.05）;与模型组相比,松果菊苷低、中、高剂量组肝、肾功能没有显著改善（P〉0.05）,但mNSS显著降低（P〈0.05）,黑质多巴胺能神经元数增加（P〈0.05）,纹状体多巴胺含量也增加（P〈0.05）,以上保护效应呈现剂量依赖性。结论：鱼藤酮能引起大鼠严重的黑质-纹状体多巴胺能神经系统以及肝、肾等组织的损伤,松果菊苷可以选择性地改善其神经损伤。     

平帕汤对PD模型小鼠多巴胺能神经元保护作用的研究

目的:探讨平帕汤对帕金森病(PD)模型小鼠多巴胺能神经元的保护作用。方法:在1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)诱导的PD小鼠模型基础上,随机分为正常组,模型组和平帕汤组,采用爬杆测试法观察平帕汤对PD小鼠行为特征的影响;采用高效液相电化学法(HPLC-ECD)检测各组小鼠纹状体内多巴胺(DA)、3,4-二羟基苯乙酸(DOPAC)和高香草酸(HVA)的含量;采用免疫组化染色法观察各组小鼠黑质酪氨酸羟化酶(TH)阳性细胞表达的变化。结果:末次注射MPTP后,与正常组相比,模型组爬杆时间和评分明显增加(P0.05),平帕汤组显著增加(P0.01);与模型组相比,平帕汤组DA、DOPAC值有上升趋势,DA/HVA值则明显增加(P0.01,P0.05);平帕汤组黑质TH阳性细胞的表达程度明显提高(P0.05或P0.01)。结论:平帕汤能保护帕金森病模型小鼠脑黑质多巴胺能神经元,挖掘其功能潜力,振奋其分泌能力,从而提高脑内黑质纹状体系统多巴胺的浓度,最终达到防治PD的作用。     

姜黄素对鱼藤酮诱导的黑质多巴胺能神经元损伤的保护作用

目的 观察姜黄素对由鱼藤酮诱导的慢性帕金森病大鼠模型黑质多巴胺能神经元损伤的保护作用并探讨其可能机制。方法 2014年12月-2015年5月,选取清洁级雄性SD大鼠80只按随机区组法分为溶剂对照组、姜黄素组、鱼藤酮组、治疗组,每组20只。采用脑切片免疫组化染色法检测大鼠脑黑质区酪氨酸羟化酶（TH）阳性细胞数,Western blotting法检测大鼠脑黑质区沉默信息调节因子3（SIRT3）、P47phox表达水平,流式细胞仪检测大鼠脑黑质区活性氧（ROS）水平。结果 4组大鼠脑黑质区TH阳性细胞数比较,差异有统计学意义（P＜0.05）。鱼藤酮组大鼠脑黑质区TH阳性细胞数低于溶剂对照组、姜黄素组（P＜0.05）;治疗组大鼠脑黑质区TH阳性细胞数低于溶剂对照组、姜黄素组,高于鱼藤酮组（P＜0.05）。4组大鼠脑黑质区SIRT3、P47phox表达水平比较,差异均有统计学意义（P＜0.05）。鱼藤酮组脑黑质区SIRT3表达水平低于溶剂对照组、姜黄素组（P＜0.05）;治疗组脑黑质区SIRT3表达水平低于溶剂对照组、姜黄素组,高于鱼藤酮组（P＜0.05）。鱼藤酮组脑黑质区P47phox表达水平高于溶剂对照组、姜黄素组（P＜0.05）;治疗组脑黑质区P47phox表达水平高于溶剂对照组、姜黄素组,低于鱼藤酮组（P＜0.05）。4组大鼠脑黑质区ROS水平比较,差异有统计学意义（P＜0.05）。鱼藤酮组大鼠脑黑质区ROS水平高于溶剂对照组、姜黄素组（P＜0.05）;治疗组大鼠脑黑质区ROS水平高于溶剂对照组、姜黄素组,低于鱼藤酮组（P＜0.05）。结论 姜黄素可有效拮抗鱼藤酮诱导的慢性帕金森病大鼠多巴胺能神经元损伤,其机制可能与姜黄素通过促进SIRT3的表达清除小胶质细胞源性ROS有关。     

牡丹皮乙醇提取物对帕金森病模型小鼠多巴胺能神经元功能障碍的保护作用

[目的]探讨牡丹皮乙醇提取物(MCE)对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)诱导的帕金森病模型小鼠多巴胺能神经元损伤的调控作用.[方法]将C57/BL6小鼠随机分为对照组、模型组和MCE干预组,其中MCE低、中、高剂量组分别灌胃给予25、50、100 mg/kg MCE.运用神经行为学、免疫组织化学...     

塞来昔布对脂多糖所致PD大鼠黑质多巴胺能神经元损伤的保护作用

目的 观察塞来昔布(CB)对脂多糖(LPS)所致大鼠黑质多巴胺能(DA)神经元损伤的保护作用.方法 黑质内注射LPS制作帕金森病(PD)大鼠模型.应用CB对实验动物进行处理.采用行为学、酪氨酸羟化酶(TH)、环氧化酶-2(COX-2)等免疫组化及免疫印迹技术观察CB的神经保护作用.结果 对照组大鼠无行为变化,PD组大鼠平均旋转圈数为196.90±9.52,CB组为109.30±9.38,差异非常显著(P＜0.01).TH免疫组化表明,对照组TH阳性神经元数量较多,胞体较大,突起明显;PD组神经元数量明显减少或消失(P＜0.01),神经元胞体萎缩,突起不清晰;CB组TH阳性神经元数与PD组相比明显增加(P＜0.01),神经元形态变化亦不明显.COX-2免疫组化表明,对照纽黑质偶见COX-2阳性细胞,PD组见大量COX-2阳性细胞;CB组COX-2阳性细胞数与PD组相比明显减少(P＜0.01).小胶质细胞特异性抗体(OX-42)免疫组化表明,对照组小胶质细胞多呈静止的"分枝样"状态;PD组多为激活状态,呈典型的"阿米巴样";CB组激活状态的小胶质细胞与PD组相比明显减少,形态为高度分枝状态.Western blotting分析结果相同.结论 CB可防护LPS所致黑质DA能神经元损伤,具有神经保护作用.     

百草枯和氧桥氯甲桥萘对离体大鼠中脑多巴胺神经元的损害

目的建立大鼠中脑多巴胺神经元的培养体系,判断百草枯(Paraquat)和氧桥氯甲桥萘(Dieldrin)能否对培养的大鼠中脑多巴胺神经元产生选择性损害。方法将0.001～100μmol/L浓度的Paraquat、Dieldrin加入到原代培养的大鼠中脑多巴胺神经元中,计数存活的多巴胺神经元和非多巴胺神经元。结果Paraquat对大鼠中脑多巴胺神经元无选择性损害。1μmol/LDieldrin能选择性损害大鼠中脑多巴胺神经元。结论Dieldrin可能是致帕金森病(PD)的神经毒物,它与PD病因之间的联系值得进一步研究。     

LPS0induced Degeneration of Dopaminergic Neurons of Substantia Nigra in Rats

Parkinson’sdisease (PD)isaneurodegenerativedisordercharacterizedbytheprogressivedegenerationofdopaminergicneuronsinthesubstantianigra (SN )andthepresenceofLewybodyinclusionsinresidualneurons.Thusfar,themosteffectivetreatmentforPDremainstheadministrationo…     

神经营养因子对体外培养多巴胺能神经元营养作用比较研究

目的：比较5种神经营养因子对体外培养多巴胺能（DA）神经元营养作用差别。方法：在培养孕14－16d大鼠胚胎黑质神经元中加入5种神经营养因子（NTF）。采用免疫组化染色及计算机图像的分析系统对培养细胞进行观察。结果：脑源性神经营养因子（BDNF）、血小板源性生长因子（PDGF）及碱性成纤维细胞生长因子（bFGF)能促进中脑DA神经元发育,提高神经元及长突起神经元存活率。BDNF在整个培养期都有较强营养作用,PDGF在早期、bFGF在中期有轻度作用,神经生长因子（NGF）和白细胞介素－6（IL－6）则无作用。结论：体外DA神经元培养过程中,BDNF有较强的神经营养作用,PDGF和bFGF次之,NGF和IL－6无作用。     

烟碱拮抗秋水仙碱诱导大鼠大脑皮质神经元凋亡的作用

[目的]研究烟碱对皮质神经元的保护作用.[方法]在培养至第6天的皮质神经元中以不同浓度(1μmol/L,10 μmol/L,100 μmol/L)烟碱预孵2 h,再加入0.1 μmol/L秋水仙碱作用24 h.通过相差显微镜形态学观察,Hoechst33258核荧光染色进行凋亡率计数和测定乳酸脱氢酶相对释放量(LDH)的实验,再测试10 μmol/L预孵不同时间(0.5,2,8)h的烟碱对秋水仙碱诱导大鼠大脑皮质神经元凋亡的作用.[结果]秋水仙碱可诱导皮质神经元调亡,烟碱可拮抗秋水仙碱的此种作用.其中10 μmol/L烟碱预孵2 h保护作用最强.[结论]烟碱可拮抗秋水仙碱诱导大鼠大脑皮质神经元凋亡的作用.     

百草枯增加小鼠黑质细胞caspase-3mRNA的表达及其酶活性

目的 探讨百草枯对C57b1／6小鼠黑质细胞caspase-3 mRNA的表达及其活性的影响。方法 应用RT-PCR技术检测C57b1／6小鼠暴露于百草枯不同时间后黑质细胞中caspase-3 mRNA表达的变化,并采用比色法测定相应时间点黑质细胞的caspase-3酶的活性。结果 C57b1／6小鼠暴露于百草枯后黑质细胞中caspmse-3 mRNA的表达明显增加,caspase-3酶的活性也相应地增加,这种增加与黑质细胞的凋亡相一致。结论 百草枯可诱导C57b1／6小鼠黑质细胞表达caspase-3 mRNA,增加caspase-3酶的活性,促进黑质细胞的凋亡。     

脑源性神经营养因子在脑室注射脂多糖大鼠黑质多巴胺能神经元变性中的作用

目的观察脑室内注射脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)对大鼠黑质多巴胺能神经元的长时程毒性作用,探讨脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)在黑质多巴胺能神经元慢性变性过程中的作用。方法健康雄性SD大鼠48只,采用抽签法将大鼠随机分为LPS实验组和0.9%氯化钠注射液(NS)对照组,经大鼠右侧脑室一次性注射LPS20μL(1.25g/L)或0.9%氯化钠注射液20μL。给药后2周、4周、12周、24周用酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)免疫组织化学染色观察黑质多巴胺能神经元的变化,免疫组化及酶联免疫吸附实验(enzyme immunoassay system,ELISA)检测黑质纹状体系统BDNF表达的变化。结果①TH免疫组织化学染色结果显示,大鼠黑质多巴胺能神经元数目在LPS给药后期减少,24周时LPS实验组大鼠黑质TH阳性神经元数量为NS对照组的75.4%(P<0.01);②BDNF免疫组化结果显示,LPS实验组大鼠4周时黑质部位BDNF阳性细胞的表达较NS对照组高,而到12周和24周时其表达比NS对照组明显下降。ELISA检测结果显示,LPS实验组大鼠4周时黑质纹状体内BDNF表达是NS对照组的186.3%(P<0.01),而12周和24周时分别是NS对照组的42.3%(P<0.01)和61.0%(P<0.05)。结论脑室内注射LPS可导致大鼠黑质多巴胺能神经元变性,这一病变过程呈慢性迟发性。该模型大鼠黑质TH阳性神经元变性丢失前即出现黑质纹状体系统BDNF表达减少,提示BDNF表达减少可能是黑质多巴胺能神经元变性丢失的原因之一。     

小胶质细胞激活在多巴胺神经元变性损伤中的作用

帕金森病（Parkinson’s disease,PD）的主要病理特征是黑质纹状体通路的多巴胺（dopamine,DA）神经元退行性变性和缺失。研究表明,小胶质细胞（microglia）激活在DA神经元变性损伤中起关键作用。在受到各种病理因素刺激时,小胶质细胞大量激活,产生前炎性细胞因子和神经毒性因子,启动或加重神经元损伤,导致DA神经元进行性变性死亡。文章综述了近年来关于小胶质细胞激活对DA神经元损伤作用的研究进展,以期对PD发病机制及治疗药物研究提供参考。     

一氧化氮在缺氧复氧所致神经细胞凋亡中的作用及银杏叶提取物的保护效应

为探讨银杏叶提取物对缺氧复氧神经细胞凋亡中一氧化氮 (NO)动态表达的作用 ,对大鼠大脑皮质神经细胞原代分离培养 ,用原位末端标记法 (TUNEL)及流式细胞术检测细胞凋亡 ,用荧光分光光度法检测细胞培养上清液中亚硝酸根含量的变化。结果 :缺氧复氧致胎鼠大脑皮质神经细胞凋亡中NO含量呈双时相增高 (单纯缺氧 2h及缺氧 18h复氧 18h) ,银杏叶提取物 (EGB)对此双时相的NO升高有抑制作用 ,氨基胍 (AG)可抑制缺氧 8h复氧 18h组的NO升高 ,对缺氧 2h组的NO升高无抑制作用。提示 :NO参与了缺氧复氧过程中神经细胞凋亡 ,银杏叶提取物对缺氧复氧神经细胞凋亡有保护作用 ,其作用可能是通过抑制NO而实现的。