一个新的胎肝发育相关因子cDNA的克隆与序列分析

目的:从胎肝cDNA文库中,分离胎肝发育相关新cDNA。方法:分离纯化胎肝组织RNA,构建cDNA文库、T-A克隆、核酸自动测序及生物信息学分析。结果:分离克隆一个新的cDNA片段,编码71个氨基酸多肽,并且与肝脏生长/分化因子9部分同源。申请加入国际基因库,登录号为:GenbankAF157027。结论:该新cDNA(GenbankAF157027)编码的多肽可能调控肝脏的发育。     

人源性肝细胞生长刺激因子cDNA克隆和序列分析

目的 :阐明人源性肝细胞生长因子 (HDSSF)的本质 ,为进一步基因克隆奠定基础。方法 :以简并PCR扩增获取目的基因片断 ;杂交筛选人胎肝cDNA文库 ;末段终止法进行HDSSF核苷酸序列分析。结果 :简并PCR扩增出接近HDSSF分子量 6 0 0bp片断 ;人胎肝cDNA文库经初筛和复筛获得含有目的基因的单克隆噬斑 ;测定了HDSSF基因序列 ,其cDNA链为 74 8bp ,含有 5 94bp的完整开放读码框架和 5′及 3′末端非编码区序列。序列分析显示HDSSF应为一含有 1 98个氨基酸残基的新的促肝细胞生长物质。结论 :本研究成功获得目的基因HDSSF克隆 ,人HDSSF克隆成功为开展人源性HDSSF的重组产品研制奠定了基础     

人源性肝细胞生长刺激因子cDNA克隆和序列分析

目的：阐明人源性肝细胞生长因子(HDSSF)的本质，为进一步基因克隆奠定基础。方法：以简并PCR扩增获取目的基因片断；杂交筛选人胎肝cDNA文库；末段终止法进行HDSSF核苷酸序列分析。结果：简并PCR扩增出接近HDSSF分子量600bp片断；人胎肝cDNA文库经初筛和复筛获得含有目的基因的单克隆噬斑；测定了HDSSF基因序列，其cDNA链为748bp，含有594bp的完整开放读码框架和5′及3′末端非编码区序列。序列分析显示HDSSF应为一含有198个氨基酸残基的新的促肝细胞生长物质。结论：本研究成功获得目的基因HDSSF克降．人HDSSF克隆成功为开展人源性HDSSF的重组产品研制奠定了基础。     

重组人蛋白激酶CK2α亚基cDNA的克隆与测序

蛋白激酶ＣＫ２曾称酪蛋白激酶２（ｃａｓｅｉｎｋｉｎａｓｅ２）是由两个催化亚基（α或α′）和两个调节亚基（β）组成的在真核细胞中普遍存在的ｃＡＭＰ非依赖性丝／苏氨酸蛋白激酶［１］。在进化过程中ＣＫ２的各亚基均表现出高度保守性,属于一种看家酶。该酶在许多...     

青蒿鲨烯合酶基因及其cDNA的克隆与测序

【目的】克隆青蒿鲨烯合酶基因,为基因工程改造青蒿打下基础。【方法】采用聚合酶链反应(PCR)扩增、逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增、扩增片段与T-载体连接和克隆片段的序列分析等方法。【结果】通过PCR扩增和RT-PCR扩增,分别获得3590bp及1257bp片段,克隆后经PCR和酶切反应进行了鉴定。初步测序结果与GenBank上已登录的青蒿鲨烯合酶基因序列同源性为99％,氨基酸序列同源性为100％。【结论】成功克隆了青蒿鲨烯合酶基因及其cDNA。     

一个新的基因转录本的克隆及序列分析

目的：筛选与精子发生和(或)睾丸发育相关的基因。方法：将不同发育阶段(胚胎和成人)的睾丸组织cDNA探针与人睾丸cDNA芯片进行杂交，通过杂交信号的比较，筛选出差异表达的基因。结果与结论：经测序发现该基因全长1316bp，包含1个1056bp的开放阅读框，编码351个氨基酸。生物信息学序列分析表明，它是p44S10基因家族的一条新的转录本基因，该基因的氨基酸序列编码一26S蛋白酶体调控亚基，在进化中高度保守，提示了该基因在生物体中的重要作用。     

人肌肉抑制素cDNA的克隆及测序分析

目的 克隆人肌生长抑制素(myostain,MSTN)基因.方法 提取人肌肉组织mRNA,逆转录成cDNA,将回收PCR产物直接和pCEM-T质粒进行连接,构建重组质粒载体pCEM-T-L4STN,将扩增后的pCEM-T-MSTN进行双酶切鉴定和测序鉴定,对测序结果进行BLAST分析.结果 经克隆得到MSTN基因片段,和人MSTN基因的同源性为100%.结论 肢带型肌营养不良症家系中患者的MSTN基因未发生突变.克隆的MSTN cDNA基因为进一步表达重组MSTN蛋白提供了基础.     

人骨形成蛋白-3成熟肽cDNA的克隆、测序及表达

目的：扩增、克隆人骨形成蛋白－３（ｈＢＭＰ－３）成熟肽ｃＤＮＡ基因，利用大肠杆菌表达ｈＢＭＰ－３成熟肽．方法：ＰＣＲ方法扩增ｈＢＭＰ－３成熟肽ｃＤＮＡ基因，双脱氧终止法测序正确后，克隆入大肠杆菌表达载体ｐＤＨ，受控于ＰＲＰＬ启动子，重组质粒ｐＤＨＢ－３ｍ以大肠杆菌ＤＨ５α为宿主菌在４２℃进行温度诱导．结果：扩增出ｈＢＭＰ－３成熟肽ｃＤＮＡ基因，序列测定完全正确；含重组质粒ｐＤＨ－Ｂ３ｍ的工程菌诱导后在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ上出现一条新生蛋白带，分子质量为１４．５ｋｕ，与预期ｈＢＭＰ－３成熟肽分子量大小一致，约占菌体总蛋白的２８％．结论：成功扩增、克隆ｈＢＭＰ－３成熟肽ｃＤＮＡ基因，并可在大肠杆菌中得到高效表达     

人Hrs cDNA的克隆与序列分析

以小鼠ＨｒｓｃＤＮＡ为探针从人胎盘ｃＤＮＡ文库中克隆出人ＨｒｓｃＤＮＡ，其全长为２９１０ｂｐ，所编码的蛋白质含７７７个氨基酸。人ＨｒｓｃＤＮＡ与小鼠ＨｒｓｃＤＮＡ间高度保守。推定的氨基酸序列含有锌指样结构域、脯氨酸丰富区及脯氨酸、谷氨酰胺丰富区。     

人血小板生成素的基因克隆及序列分析

目的为获得人血小板生成素全长cDNA克隆。方法用RT-PCR技术，以特异性寡核苷酸为上、下游引物自胎肝总RNA中扩增目的基因。结果PCR扩增产物克隆至pUCl8-T载体，获得重组质粒pUCT-TPOM。结论序列分析显示，获得的血小板生成素cDNA序列与国外文献一致。     

沙蚕丝氨酸蛋白酶家族相关基因的克隆和测序

①目的 从海洋生物双齿围沙蚕消化道上皮细胞中获得编码丝氨酸内肽酶某一功能基因的克隆。②方法 以丝氨酸内肽酶高度保守位点设计引物，引用5‘CDNA末端快速扩增（5‘RACE）和3‘RACE的方法，分别获得该保守位点前后的片段，克隆、测序。③结果 获得一条长度为512bp编码丝氨酸内肽酶相关基因的序列。④结论 RACE方法是获得功能蛋白编码序列的有效手段。     

人乳游离氨基酸的含量及动态变化

本文报道了南京城区90份不同哺乳期(1～42d)母乳中游离氨基酸的含量。结果表明:人乳中最丰富的游离氨基酸是谷氨酸,其次是牛磺酸。人乳中的必需游离氮基酸在初乳中含量最高,以后随泌乳时间的延长而下降。文中讨论了人乳游离氨基酸在婴儿早期喂养中的作用。本研究为提倡母乳喂养和配制人乳化的婴儿食品提供了科学依据。     

人降钙素基因的克隆及其序列分析

目的：克隆人降钙素基因（ｈＣＴ）并经序列分析予以确证。方法：首先自新鲜全血中用含ＴｒｉｔｏｎＸ－１００的缓冲液提取基因组ＤＮＡ，经酒精沉淀和洗涤后，作为模板，加入上下游引物，应用聚合酶链反应直接扩增出ｈＣＴ的编码序列。并将此段ＤＮＡ插入克隆载体ｐＵＣ１８的ＥｃｏＲＩ和ＳｍａＩ位点之间。最后用ＰＣＲ－双脱氧末端终止法进行序列分析。结果：成功地克隆了ｈＣＴ，证实所得ｈＣＴ基因克隆含编码人降钙素３２个氨基酸的全长ＤＮＡ序列９６ｂｐ。结论：已获得人降钙素基因克隆，为后续研究打下基础     

人可溶性TRAIL cDNA的设计、合成与克隆

目的:合成可溶性的肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(TRAIL)的cDNA,并构建其原核表达载体.方法:根据大肠杆菌密码子偏好性和表达载体多克隆位点限制性内切酶要求,设计基因拼接引物,合成TRAIL基因胞膜外段双链cDNA序列,将其连接于克隆载体pMD18-T中;将酶切、纯化的TRAIL基因与经相同处理的载体PSC相连接,转化感受态大肠杆菌JM109,筛选阳性重组子.结果:成功获得了包含TRAIL基因胞膜外段的双链cDNA序列,并成功构建了TRAIL胞膜外段原核表达载体PSC/TRAIL 111-281.结论:采用PCR的方法,实现合成寡核苷酸片段的一次性组装,方便了进一步的克隆.     

节旋藻（Arthrospira）3个样品镍铁氢化酶 hoxY基因的克隆与测序

目的：为鄂尔多斯高原碱湖节旋藻的多样性研究提供基础资料和理论依据。方法：本文对鄂尔多斯高原碱湖钝顶节旋藻（ Arthrospira platensis）、乍得湖钝顶节旋藻（ A. platensis）及极大节旋藻（ A. maxima）的镍铁氢化酶小亚基hoxY基因进行了克隆与测序,并进行同源性及亲缘关系的分析。结果：3个节旋藻样品hoxY基因部分序列长均为479 bp。鄂尔多斯高原碱湖钝顶节旋藻 hoxY基因与不同来源的钝顶节旋藻的同源性高达99.5%,与极大节旋藻的同源性达99.9%。 A. maxima与非洲乍得湖A. platensis间的亲缘关系更近,而鄂尔多斯高原碱湖钝顶节旋藻与乍得湖钝顶节旋藻的亲缘关系相对远。结论：hoxY基因保守性高,属内不同样品间序列变化很小。同种不同来源的钝顶节旋藻由于不同环境条件等因素的影响导致基因序列上碱基发生一定的差异。     

人GDNF基因的克隆

目的：克隆可表达人胶质细胞源性神经营养因子的基因。方法：从脑胶质细胞瘤患者术后的脑瘤组织中提取总ＲＮＡ，以ＲＴＰＣＲ方法扩增出了一段约５５８ｂｐ的ｃＤＮＡ片段，将这一片段克隆于ｐＵＣ１８载体中，进行全序列分析。结果：证实该研究所克隆的ｃＤＮＡ是编码正确的人ＧＤＮＦ基因。与发表于ＧｅｎｅＢａｎｋ上的序列相比，发现该研究克隆的基因有一段７８ｂｐ的核苷酸序列缺失，但不影响密码子的阅读框。结论：克隆到了编码正确的人ＧＤＮＦ的ｃＤＮＡ全序列，对帕金森病基因治疗的基础研究及临床应用具有重要意义。     

分子克隆人血小板生成素基因

目的：克隆人血小板生成素基因，方法：采用ＲＴ一ＰＣＲ的方法。结果：从人胎肝中克隆出全长的血小板生成素（ＴＰＯ）基因，并亚克隆至ＰＵＣｌｌ８载体中。该ｃＤＮＡ全长１０６２ＢＰ，编码３５３个氨基酸，经序列测定与Ｂａｒｔｌｅｙ等人报道的完全一致［１］。结论：已获得人血小板生成素基因，此项工作为基因工程生产ＴＰＯ奠定了良好基础。     

HPV16L1ORF的基因克隆及在大肠杆菌中的表达

目的获得足够量的人乳头瘤病毒16型(HPV16)L1融合蛋白及含HPV16L1ORF序列的基因重组体。方法通过PCR扩增获得HPV16L1基因片段,将此片段插入原核细胞表达载体pGEMEX-1,构建相应的重组表达质粒pGEMEX-L1,将此质粒转化大肠杆菌JMl09(DE3),得到的转化子经IPTG诱导表达后进行菌体蛋白的Western blotting免疫印迹分析。结果HPV16L1基因重组体构建成功,克隆的目的基因片段在大肠杆菌中产生的融合表达产物在Western blotting检测中具有和抗HPV16L1阳性血清反应的抗原性。结论HPV16L1基因片段可在大肠杆菌中得到有效表达,表达产物可与相应的抗血清发生阳性反应。