槲皮素拮抗酒精性肝损伤中胆红素的介导效应

目的探讨槲皮素诱导Ⅰ型血红素氧合酶(heme Oxygenase-1,HO-1)及其代谢产物胆红素对肝细胞酒精性氧化损伤的保护效应。方法二步胶原酶灌注技术分离培养SD大鼠原代肝细胞,在孵以200 mmol乙醇建立酒精性肝细胞氧化损伤模型的同时,加入槲皮素(100μmol)、hemin(20μmol)等及不同剂量(2-100μmol)的胆红素干预24 h后,检测细胞内超氧化物歧化酶(SOD)活力及谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)及氧自由基(ROS)水平及培养基中总胆红素水平。结果槲皮素明显抑制了乙醇孵育后细胞MDA和ROS水平的升高,有效维持了细胞内GSH水平和SOD活力;加入外源性胆红素也显示出相同的保护效应,且具有一定的剂量依赖性;锌原卟啉IX(ZnPP-IX)则明显抑制了上述槲皮素的保护效应。结论槲皮素诱导HO-1对酒精所致大鼠原代肝细胞氧化损伤具有保护作用,其机制与HO-1的代谢产物之一胆红素有关。     

槲皮素对大鼠原代肝细胞酒精性氧化损伤的防护作用

目的:观察槲皮素(quercetin)对大鼠原代肝细胞酒精性氧化损伤的防护作用。方法:经二步胶原酶技术分离培养大鼠原代肝细胞,用100mmol/L无水乙醇染毒细胞8h,作为酒精损伤模型。乙醇染毒前经不同剂量槲皮素(25～200μmol/L)预作用不同时间(0～8h),观察槲皮素干预对细胞培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)、谷草转氨酶(AST)活性,丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)水平和超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性的影响。结果:大鼠原代肝细胞经100mmol/L酒精暴露8h后,LDH、AST活性,MDA、GSH含量和SOD、CAT活性与对照组相比,均有非常显著性差异;酒精暴露前1～4h经50～75μmol/L槲皮素干预效果最明显,LDH、AST、MDA和GSH、SOD、CAT水平分别较酒精组非常显著性降低和升高。结论:槲皮素可能通过减少GSH耗竭,提高抗氧化酶活性,抑制脂质过氧化来保护大鼠原代肝细胞抗酒精性氧化损伤,保护作用呈剂量与时间效应关系。     

槲皮素对大鼠原代肝细胞HO-1蛋白表达及活性的影响

目的研究槲皮素对大鼠原代肝细胞中I型血红素氧化酶(HO-1)蛋白表达及酶活性的影响。方法二步胶原酶技术分离培养大鼠原代肝细胞。用不同剂量(25、50、100、200 mol/L)槲皮素作用大鼠原代肝细胞12 h,或用50 mol/L槲皮素作用肝细胞不同时间(2～12 h)后,提取肝细胞微粒体,检测HO-1酶活性变化,并用WesternBlot方法检测HO-1蛋白表达水平的变化。结果大鼠原代肝细胞经50～200 mol/L槲皮素处理12 h,或用50 mol/L槲皮素处理4～12 h后,HO-1蛋白表达水平和酶活性与对照组比较明显升高(P<0.05)。结论槲皮素能够诱导大鼠原代肝细胞的HO-1蛋白表达,提高肝细胞内HO-1的酶活性。     

槲皮素通过促进Nrf2转位拮抗人肝细胞酒精性氧化损伤

目的探讨槲皮素诱导Ⅰ型血红素氧化酶(HO-1)对肝细胞酒精性氧化损伤的保护效应及相关信号通路。方法乙醇(100 mmol/L)孵育的人原代肝细胞经槲皮素(100μmol/L)处理24h后,测定细胞HO-1活性、Nrf2转位表达及细胞相应的氧化损伤程度;在此基础上,联合应用HO-1及各(MAPK)通路抑制剂,观察上述指标的变化。结果槲皮素处理使HO-1进一步升高,并明显减轻乙醇孵育所导致的细胞GSH耗竭、MDA升高及胞内门冬氨酸转氨酶(AST)与乳酸脱氢酶(LDH)的释放;HO-1诱导剂血红素也具有类似的效应,而HO-1抑制剂锌原卟啉Ⅸ及p38与细胞外信号调节激酶(extracellular regulated protein kinase,ERK)抑制剂(SB203580与PD98059)则明显抑制了Nrf2的转位活化及槲皮素的保护效应。结论槲皮素通过诱导HO-1保护肝细胞免受酒精性氧化损伤,其信号通路与p38及ERK活化促使Nrf2转位入核启动HO-1表达有关。     

白藜芦醇诱导HO-1对酒精性肝细胞的保护作用

目的白藜芦醇(resveratrol)是非黄酮类的多酚化合物,具有多种有益的生物学效应。本研究目的观察白藜芦醇对酒精导致的人原代肝细胞损伤的保护作用及机制。方法经体外灌流、分离培养人原代肝细胞。测定白藜芦醇20μmol/L对酒精致肝细胞LDH释放率的影响。人原代肝细胞给予不同受试物(100 mmol/L酒精,20μmol/L白藜芦醇,25μmol/L Znpp9(锌原卟啉Ⅸ:zinc protoporphyrin-IX))24h,观察HO-1酶活性变化,孵育上清液AST,LDH释放水平,肝细胞内MDA,GSH含量变化。结果白藜芦醇可显著升高酒精致肝细胞LDH释放率的EC50(从700 mmol/L上升至1050 mmol/L);白藜芦醇可使肝细胞HO-1酶活性明显增加,并可显著抑制酒精导致的肝细胞AST,LDH释放,降低肝细胞内MDA水平,提高GSH含量。但是HO-1抑制剂Znpp9却明显降低了白藜芦醇对酒精导致的肝细胞损伤的保护作用。结论白藜芦醇对酒精导致的人肝细胞损伤具有保护作用,这种保护作用与其诱导的HO-1酶活性升高有关。     

急性乙醇暴露对人原代肝细胞血红素氧化酶的影响

目的　研究急性乙醇暴露对人原代肝细胞血红素氧化酶活力及蛋白水平的影响。方法　经体外灌流、分离培养人原代肝细胞 ,观察乙醇对人原代肝细胞上清液中天冬氨酸氨基转移酶 (AST)的释放及谷胱甘肽 (GSH)含量的变化 ,用westernblot方法检测乙醇对人原代肝细胞血红素氧化酶活力及蛋白水平的影响。结果　急性乙醇暴露导致人原代肝细胞上清液中释放的AST增加 ,并呈明显的剂量效应和时间效应关系 ;此外 ,在 10 0mmol L乙醇 2 4h暴露下 ,肝细胞中的GSH明显降低 ,而HO 1酶活力在 0 5～ 12h之间明显升高 ,随后开始降低 ,且HO 1蛋白水平变化趋势与此一致。结论　HO 1酶活力的升高可能与乙醇暴露下人原代肝细胞氧化损伤的保护有关     

血红素氧化酶1与糖尿病的关联研究

目的 探讨血红素氧化酶1(HO-1)与2型糖尿病(T2DM)及其前期的关联性.方法 收集2010年6月至2012年6月行口服糖耐量试验可疑的T2DM患者384例,其中T2DM患者216例(T2DM组),糖尿病前期(HDM)患者168例(HDM组),T2DM患者分为单支病变组(122例)、双支病变组(54例)和多支病变组(40例).另选取健康体检者60例作为对照组.彩色多普勒超声诊断仪检测颈动脉内膜-中层厚度(IMT),酶联免疫吸附试验法检测血清HO-1表达水平.结果 对照组、HDM组和T2DM组血清HO-1表达水平分别为(1.24±0.53)、(2.12±0.84)、(3.46±1.23) μg/L,其中T2DM组显著高于HDM组和对照组(P＜0.05),HDM组又显著高于对照组(P＜0.05).单支病变组、双支病变组和多支病变组血清HO-1表达水平和颈动脉IMT比较差异有统计学意义[(2.94±1.14)、(3.72±1.36)、(4.64±1.58)μg/L和(1.21±0.16)、(1.44±0.20)、(1.62±0.27) mm](P＜ 0.05),其中双支病变组显著高于单支病变组(P＜0.05),多支病变组显著高于双支病变组和单支病变组(P＜0.05或＜0.01).相关性分析显示血清HO-1表达水平与颈动脉IMT呈显著正相关(r=0.512,P＜0.01).结论 HDM和T2DM患者中存在血清HO-1高表达,监测血清HO-1水平有利于T2DM的早期诊断.     

急性酒精性肝损伤与肝细胞凋亡的研究

目的研究急性酒精性肝损伤肝细胞凋亡,探讨其发病机制。方法将30只大鼠随机分成酒精组(20只),对照组(10只)。给酒精组大鼠按体重15 g/kg 47.5%酒精一次性灌胃,给对照组大鼠按体重15 g/kg生理盐水一次性灌胃。灌胃后48 h处死大鼠,用光镜、TUNEL、电镜检查肝组织。结果酒精组肝损伤、肝细胞凋亡检出率均为100%,凋亡肝细胞核数占肝细胞核总数的46.8%。生理盐水组未发现肝损伤病变,仅3例个别视野近肝小叶中央静脉处见单个凋亡细胞。结论肝细胞凋亡与急性酒精性肝损伤有一定的关系。     

氯血红素诱导人脐静脉内皮细胞血红素氧合酶表达及其对血管保护作用

目的观察氯血红素对血管内皮细胞血红素氧合酶(HO)表达和内源性一氧化碳(CO)的影响。方法体外培养人脐静脉内皮细胞,用氯血红素和原卟啉锌,以诱导和阻断HO-1的表达。通过逆转录聚合酶链式反应和免疫细胞化学法检测HO-1、HO-2 mRNA和蛋白的表达,酶联免疫法检测培养上清液中碳氧血红蛋白(COHb)含量,四唑氮比色法检测细胞增殖。结果HO蛋白主要定位于在内皮细胞胞浆,HO-2的表达高于HO-1;氯血红素显著增加血管内皮细胞HO-1 mRNA、蛋白质的表达及培养上清液中COHb含量,同时促进细胞增殖。结论HO-1表达和内源性CO增加是保护内皮细胞的分子生物学基础,提示HO/CO信号系统在心血管病的发生和发展中具有重要作用。     

银杏叶提取物对酒精所致大鼠睾丸氧化损伤的保护作用的研究

目的研究银杏叶提取物(EGB)对酒精所致大鼠睾丸氧化损伤的预防保护作用。方法雄性SD大鼠30%酒精灌胃(2.37g/kgbw)前,EGB采用分组(低剂量组48μg/gbw和高剂量组96μg/gbw)预防性给药的方法。于实验90d检测大鼠睾丸组织中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽转移酶(GST)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)、和谷胱甘肽(GSH)、活性氧(ROS)以及丙二醛(MDA)的含量。通过亚细胞分离方法提取大鼠睾丸微粒体,测定微粒体血红素氧化酶-1(HO-1)活性。采用RT-PCR检测睾丸组织中血红素氧化酶-1(HO-1)mRNA表达水平。结果慢性酒精摄入90d后,EGB组睾丸匀浆ROS、MDA较酒精组有明显降低(P<0.05);相反,GST、G-Px、CAT、SOD、HO-1活性以及GSH均有显著性升高(P<0.05);EGB诱导HO-1高表达。结论长期慢性酒精摄入引起大鼠睾丸氧化损伤。EGB可作为一种预防性的抗氧化剂减轻这种氧化损伤;其机制可能与诱导HO-1高表达,清除自由基,抑制脂质过氧化反应有关。     

硒对氧化损伤大鼠肝细胞凋亡的影响

目的研究硒对于H2O2诱导大鼠肝细胞(BRL)凋亡的影响并探讨其作用机制。方法采用0.1mmol/L的H2O2建立氧化损伤的细胞模型,并施加不同剂量的补硒干预。通过测定细胞活力(MTT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPH-Px)活力、丙二醛(MDA)含量和细胞凋亡率,研究硒对氧化损伤肝细胞的保护作用,采用实时定量PCR技术检测细胞GPH-Px和凋亡信号调节激酶1(ASK1)的mRNA表达水平,并通过Western blot技术检测ASK1的蛋白表达水平。结果补硒组细胞MTT(OD)值和GSH-Px活力高于损伤组,MDA的含量和细胞凋亡率低于损伤组,差别有统计学意义(P<0.05)。补硒组GPH-Px的mRNA表达水平高于损伤组,差别有统计学意义(P<0.05),补硒组ASK1的mRNA和蛋白表达水平低于损伤组,差别有统计学意义(P<0.05)。结论硒可能通过增加细胞GSH-Px的mRNA表达和酶活性、下调ASK1 mRNA和蛋白的表达、降低细胞中MDA含量等作用,对氧化损伤所致的肝细胞凋亡起到一定的保护作用。[营养学报,2010,32(5):466-469]     

槲皮素对氧化应激大鼠肝细胞代谢组的影响

目的探讨槲皮素对氧化应激大鼠肝细胞代谢的影响。方法用无血清培养液原代培养大鼠肝细胞,以H2O2诱导氧化应激。培养细胞分为空白对照组(仅用培养液培养)、槲皮素组(以20μmol/L槲皮素处理肝细胞24h)、H2O2组(以8.8mmol/LH2O2作用6h诱导细胞产生氧化应激)、槲皮素+H2O2组(先用20μmol/L槲皮素预处理24h后,再用8.8mmol/LH2O2诱导氧化应激)4组。实验结束后,收集各组培养液,离心,以核磁共振谱仪检测培养液中代谢物的变化情况。结果与空白对照组比较,最显著的变化包括:(1)槲皮素和槲皮素+H2O2组二甲胺含量增加;(2)H2O2、槲皮素和槲皮素+H2O2组乙酸含量增加,丙酮酸含量减少。其次的变化包括:(1)槲皮素组乳酸减少,谷胺酰胺增加;(2)H2O2组乳酸、牛磺酸增加,组氨酸减少;(3)槲皮素+H2O2组乳酸、牛磺酸和谷胺酰胺增加,组氨酸减少。结论槲皮素可通过加速糖酵解、促进脂肪酸氧化供能发挥抗氧化应激作用,对某些含氮化合物的代谢也具有调节作用。     

槲皮素对小鼠腹腔巨噬细胞氧化应激反应与功能的影响

目的探讨槲皮素对巨噬细胞氧化应激反应与功能的调节作用。方法采用原代培养小鼠腹腔巨噬细胞和LPS诱导氧化应激,以20~80μmol.L-1槲皮素处理48 h,测定细胞培养上清液抗氧化力、一氧化氮(NO)浓度、乳酸脱氢酶(LDH)活性、细胞活性氧含量(ROS)、MDA水平以及吞噬功能的变化。结果LPS对照组细胞培养上清液抗氧化力、NO浓度及LDH活性分别高于正常对照组20.6%、706.6%、27.6%;同时细胞ROS含量、NOS活性、MDA水平也分别高于正常对照组72.9%、331.3%、131.5%,细胞培养上清墨汁潴留也显著增加(A430由4.7±0.6增加到5.5±0.3,P<0.01)。施加20~80μmol.L-1的槲皮素后,与LPS对照组比较,上清抗氧化力升高31.0%~50.6%,上清NO浓度下降18.0%~87.0%,细胞ROS含量、NOS活性及MDA水平分别下降37.4%~72.1%、10.1%~25.4%、15.5%~74.8%。上清LDH活性在20~50μmol.L-1槲皮素组下降21.9%~24.3%,在80μmol.L-1槲皮素组则升高19.6%。细胞培养上清墨汁潴留减少,与正常对照组比较差异无显著性。结论一定浓度的槲皮素可增强小鼠巨噬细胞的抗氧化能力和吞噬能力,并降低氧化应激反应。     

茶多酚对二恶英所致肝损的作用及机理研究

[目的]研究茶多酚(TP)对二恶英(TCDD)所致肝损毒作用的保护作用及可能机理.[方法]实验分为5组:对照组;TCDD组(终浓度20nmol/L);TP低、中、高剂量组.TP组(20nmol/L TCDD 终浓度分别为5、10、25mg/L的茶多酚).分别给药处理后,测定超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性.[结果]与TCDD组相比,5mg/L和10mg/L TP使细胞的生存率由59.74%上升到65.5%和80.0%,给予TCDD后SOD、 GSH-Px活性降低与对照组比较差异有统计学意义;TCDD 低、中剂量TP组SOD及GSH-Px值高于TCDD组(P<0.05),而MDA的含量降低;但TP剂量(25mg/L)再增加时其拮抗作用不明显.[结论]Tp在一定程度上缓解TCDD所致的肝损伤,其可能机制可能与抗氧化功能有关.     

茶多酚对乙醇所致原代肝细胞损伤的保护作用研究

目的研究乙醇对原代肝细胞的氧化损伤作用,同时探讨茶多酚对乙醇所致的原代肝细胞损伤模型的保护作用。方法分离小鼠原代肝细胞,直接以不同浓度乙醇作用于肝细胞,或以茶多酚预处理后再用乙醇作用于肝细胞,测定各组细胞存活率、抗氧化酶及丙氨酸氨基转移酶(ALT)活性的变化。结果随着乙醇浓度的增加,小鼠原代肝细胞存活率逐渐下降,抗氧化酶活性降低,转氨酶升高;而茶多酚的预处理对于乙醇所致的小鼠原代肝细胞损伤具有明显的保护作用,表现为相同乙醇浓度作用下,随茶多酚浓度的升高,细胞存活率逐渐升高,抗氧化酶活性增加,转氨酶下降,且差异有统计学意义(P<0.05)。结论乙醇可以诱导小鼠原代肝细胞的氧化损伤,而茶多酚对其氧化损伤具有明显的保护作用。     

茶多酚对D-半乳糖诱导致大鼠肾脏损害的保护作用及其机制

目的探讨茶多酚(teapolyphenols,TP)对D-半乳糖诱导致大鼠肾脏损害的保护作用及其作用机制。方法D-半乳糖(150mg/kgbw)连续腹腔注射(ip)8w,诱导大鼠糖基化肾脏损伤,并于第3w开始灌胃给予茶多酚高、中、低(150,75,37.5mg/kgbw)剂量处理6w,阳性对照药物给与维生素E(250mg/kgbw)和氨基胍(150mg/kgbw)。测定大鼠血糖,糖化血红蛋白,血清果糖胺;测定血红细胞醛糖还原酶活性和晚期糖基化终末产物(AGEs)含量;测定肾脏组织中AGEs、MDA含量,SOD和GSH-Px活性;测定尿蛋白含量,血尿素氮和血肌酐含量;流式细胞仪检测肾脏细胞凋亡情况。结果D-半乳糖处理8w后,模型大鼠2h血糖和血红细胞醛糖还原酶活性明显升高,糖化产物形成增多;肾组织中AGEs和MDA含量明显升高,SOD及GSH-Px活性下降,尿蛋白、血尿素氮和血肌酐量明显增加,肾细胞凋亡率明显增加。茶多酚处理6w后,高、中剂量可以明显抑制D-半乳糖引起的全身和肾脏糖基化反应,降低肾组织中AGEs和MDA含量,并提高肾脏组织抗氧化能力,降低尿蛋白、血尿素氮和血肌酐含量及肾细胞的凋亡率。结论茶多酚通过抑制糖基化反应和提高肾脏组织抗氧化能力,对D-半乳糖诱导的肾脏损伤具有保护作用。