应用结核病DNA疫苗治疗小鼠耐多药结核病的研究

目的 研究结核分枝杆菌Ag85A质粒DNA疫苗单独或联合药物治疗小鼠耐多药结核病的效果,为建立耐多药结核病的免疫治疗新策略和新方案奠定基础.方法 用结核分枝杆菌高耐利福平、低耐异烟肼临床分离株HB361尾静脉注射17～19 g的6～8周龄雌性BALB/C小鼠后,将小鼠随机分为6组,每组10只.感染后第2天开始,分别用pVAX1载体(A组)、利福平(B组)、吡嗪酰胺(C组)、Ag85A质粒DNA疫苗(D组)、Ag85A质粒DNA疫苗联合利福平(E组)、Ag85A质粒DNA疫苗联合吡嗪酰胺(F组)治疗60 d.治疗结束后4周,分别取肺、肝和脾观察病理改变,称取重量,做菌落计数.结果 小鼠感染4周后,肺内菌量达到1.5×107 CFU,脾内菌量达到1.1×106 CFU.A、B组小鼠死亡率均为10%,其余各组小鼠均存活.治疗结束后4周,肺组织病理显示,各治疗组肺组织病变均有不同程度减轻,病变局限,可见正常的肺泡结构,肺泡轮廓相对清晰.与A组比较,C、D、E、F组肺组织菌落数分别减少了1.18、1.35、1.38、1.08 logs,脾脏菌落数分别减少了0.91、1.00、1.26、1.03 logs(P＜0.01).结论 结核分枝杆菌Ag85A质粒DNA疫苗单独或联合药物治疗小鼠耐多药结核病均有显著疗效.Ag85A质粒DNA疫苗与抗结核药物联合治疗是治疗耐多药结核病的最有前途的免疫策略.     

应用结核病DNA疫苗治疗小鼠耐多药结核病的研究

Objective To establish foundation for new strategy and program on immune therapy of multi-drug resistant tuberculosis (MDR-TB) by studying the therapeutic effects of Mycobacterium tuberculosis Ag85A plasmid DNA vaccine alone or combined with drugs on MDR-TB mice. Methods Sixty 6-8 weeks old female BALB/C mice were injected via tail vein with clinical isolate Mycobacterium tuberculosis HB361 which was highly resistant to rifampin (RFP) and lowly resistant to isoniazid. The mice were randomly divided into six groups, ten mice in each group. From the second day after infection,the mice respectively received pVAX1 vector (group A), RFP (group B), pyrazinamide (PZA) (group C),Ag85A plasmid DNA vaccine (group D), Ag85A plasmid DNA vaccine combined with RFP (group E),Ag85A plasmid DNA vaccine combined with PZA (group F) for sixty days. Four weeks after the end of treatment,the lung, liver and spleen of the mice were taken and their pathological changes, weight and colony count were examined. Results Four weeks after infection, the numbers of bacteria in lung and spleen of the mice reached up to 1.5×107 CFU and 1.1 × 106 CFU,respectively. The death rates of mice in group A and group B were both 10% ,and the mice in other groups were alive. Four weeks after the end of treatment,lung pathology in the treated groups showed that the lung lesions were slight and limited,normal alveolar structure were seen, and the profile of the alveoli was relatively clear. Compared with group A, group C, D, E, F reduced by 1.18,1.35,1.38,1.08 logs on the colony count of lung, and reduced by 0.91,1.00,1.26 and 1.03 logs on the colony count of spleen (P＜0.01), respectively. Conclusions Mycobacterium tuberculosis Ag85A plasmid DNA vaccine alone or combined with drugs has significant therapeutic effects on MDR-TB mice. Ag85A plasmid DNA vaccine combined with anti-tuberculosis drugs is the most promising immunization strategy for treatment of MDR-TB.     

应用结核病DNA疫苗治疗小鼠耐多药结核病的研究

Objective To establish foundation for new strategy and program on immune therapy of multi-drug resistant tuberculosis (MDR-TB) by studying the therapeutic effects of Mycobacterium tuberculosis Ag85A plasmid DNA vaccine alone or combined with drugs on MDR-TB mice. Methods Sixty 6-8 weeks old female BALB/C mice were injected via tail vein with clinical isolate Mycobacterium tuberculosis HB361 which was highly resistant to rifampin (RFP) and lowly resistant to isoniazid. The mice were randomly divided into six groups, ten mice in each group. From the second day after infection,the mice respectively received pVAX1 vector (group A), RFP (group B), pyrazinamide (PZA) (group C),Ag85A plasmid DNA vaccine (group D), Ag85A plasmid DNA vaccine combined with RFP (group E),Ag85A plasmid DNA vaccine combined with PZA (group F) for sixty days. Four weeks after the end of treatment,the lung, liver and spleen of the mice were taken and their pathological changes, weight and colony count were examined. Results Four weeks after infection, the numbers of bacteria in lung and spleen of the mice reached up to 1.5×107 CFU and 1.1 × 106 CFU,respectively. The death rates of mice in group A and group B were both 10% ,and the mice in other groups were alive. Four weeks after the end of treatment,lung pathology in the treated groups showed that the lung lesions were slight and limited,normal alveolar structure were seen, and the profile of the alveoli was relatively clear. Compared with group A, group C, D, E, F reduced by 1.18,1.35,1.38,1.08 logs on the colony count of lung, and reduced by 0.91,1.00,1.26 and 1.03 logs on the colony count of spleen (P＜0.01), respectively. Conclusions Mycobacterium tuberculosis Ag85A plasmid DNA vaccine alone or combined with drugs has significant therapeutic effects on MDR-TB mice. Ag85A plasmid DNA vaccine combined with anti-tuberculosis drugs is the most promising immunization strategy for treatment of MDR-TB.     

化疗加免疫长疗程方案治疗耐多药结核病的随机对照研究

目的评价化疗加免疫长疗程方案治疗耐多药肺结核的疗效和安全性。方法对203例耐多药肺结核患者,采用1∶1随机、平行对照的方法,分为治疗组和对照组,2组患者除采用对氨基水杨酸异烟肼、利福喷汀、左旋氧氟沙星、丙硫异烟胺（Pt）、克拉霉素和阿米卡星治疗外,治疗组患者加用免疫调节剂母牛分枝杆菌菌苗（M.vaccae,微卡）,对照组患者不加用母牛分枝杆菌菌苗,疗程共18个月。结果治疗结束时（18个月）治疗组和对照组痰抗酸菌涂片阴性同时痰结核分枝杆菌培养阴性（涂阴培阴）分别为74.5%（73/98）和72.5%（66/91）,（χ²=0.09,P=0.7599）。2组比较差异无统计学意义。X线影像结果表明,2组的病灶显效率分别为72.4%（71/98）和47.3%（43/91）,差异有统计学意义（χ²＝12.52,P=0.0004,P>0.05）;有效率分别为90.8%（89/98）和82.4%（75/91）,差异无统计学意义（χ²＝2.90,P=0.0886,P>0.05）;空洞闭合率分别为33.3%（27/81）和22.1%（17/77）,差异无统计学意义（秩和检验F=1.52,P=0.1294,P>0.05）。免疫学指标CD8阳性原细胞在治疗6个月时治疗组高于对照组,CD3阳性原细胞治疗后与治疗前免疫指标差值在3和9个月差异有统计学意义外,其余CD4, CD4/CD8,NK细胞,IL-2R等免疫学指标在各治疗阶段,治疗组与对照组近似,差异无统计学意义。临床症状咳嗽、咳痰、胸痛,呼吸困难,乏力等症状有改善;治疗组改善程度均大于对照组。结论本研究所设计的方案对耐多药肺结核病均有明确的疗效,具有有效的杀菌、抑菌作用,加用免疫调节剂在促进病灶吸收,症状改善方面有一定的作用。     

微卡辅助治疗耐多药肺结核的临床研究

目的　探讨评价微卡(母牛分枝杆菌菌苗)治疗耐多药肺结核的疗效。方法 60例耐多药肺结核患者按入院先后顺序分为微卡加化疗组即治疗组,与单纯化疗组即对照组。化疗方案均为3PaL₂AKZThV/15PaL₂ZThV。治疗组为病人头3个月每15d肌注微卡(22.5μg),随后的3个月每月肌注1次微卡。观察2组治疗后肺部病灶吸收情况、痰菌阴转情况、症状改善情况、免疫功能变化情况。结果 治疗组与对照组3个月时痰菌阴转率分别为56.6%和26.6%,18个月时为93.3%和73.3%有显著差异(P<0.05);X线吸收率及空洞缩小、闭合率均有明显差异P<0.05;CD4⁺、CD4⁺/CD₈⁺9个月时治疗组与同组治疗前及对照组均有显著差异P<0.05。结论 微卡能调节免疫功能,提高痰菌阴转率,有助于病灶吸收空洞闭合,可作为耐多药肺结核化疗的辅助治疗。     

地市级结核病定点医院耐多药肺结核诊断和治疗现状分析

目的 了解调查地区地（市）级结核病定点医院耐多药肺结核诊断和治疗现状,分析其在耐多药肺结核诊断和治疗方面存在的问题。 方法 采用访谈、问卷调查和病历调查相结合的方式,通过调查医院和访谈结核病控制关键人物了解地（市）级结核病定点医院耐多药肺结核服务提供情况;通过调查耐多药和疑似耐多药肺结核患者的住院病历了解患者住院期间接受的诊断和治疗服务情况,分析地（市）级结核病定点医院耐多药肺结核诊断和治疗过程中存在的问题。 结果 政府对5家医院的财政投入占医院总收入的比例在5.0%～30.2%不等,能开展药敏试验的医院所占比例仅为1/5。住院期间耐多药肺结核患者化疗方案规范率仅为13.3%,住院天数中位数为26 d,住院总费用10 893元,日均住院费用362.2元,住院费用自付费用比例59.0%,出院后转诊到结防机构的比例仅为6.6%。 结论 目前,政府对医院的财政投入较低,医院实验室耐多药肺结核的诊断能力较低。住院期间耐多药肺结核患者的化疗方案规范率较低,住院费用过高但医保报销比例低。出院后患者绝大部分没有及时转诊到当地结防机构,处于无人管理的自服药状态。     

不同类型治疗方案治疗耐多药结核病效果文献分析

目的比较分析近10年其他国家和地区不同类型治疗方案治疗耐多药结核病的转归情况及相关影响因素,为制定适合中国大陆地区的耐多药结核病治疗策略提供参考。方法检索"Medline"数据库中1996—2010年发表的耐多药结核病治疗相关文章,根据摘要内容筛检后继续查找全文。根据纳入、排除标准确定最终入选的文章。结果查找到1286篇英文摘要,最终有28篇文章符合分析标准。2篇文章采用了标准方案,1篇采用经验方案,2篇采用国家规划标准短程化疗方案,23篇采用基于药敏结果的个体化治疗方案。个体化治疗方案的治疗成功率为61.2%,标准方案为52.0%和短程化疗方案为39.2%,差异有统计学意义(P0.05)。经验治疗方案(治疗成功率64.7%)和个体化方案的治疗效果无统计学差异(P0.05)。结论在有条件的地区应采取个体化方案治疗耐多药结核病,国家目前的标准短程化疗方案对耐多药结核病的治疗效果是不够的。     

耐多药结核病诊断方法研究进展

耐多药结核病的防治对于结核病的防控具有重要意义,已成为结核病防治的难点和热点问题。早期对结核病患者进行耐多药检测能够提高耐多药结核病患者的治疗成功率。耐多药结核病的诊断方法包括传统的培养方法及新型分子生物学诊断方法。作者对耐多药结核病的诊断方法进行综述,以期为耐多药结核病防治提供科学依据。     

中药治疗耐多药结核病的研究进展

耐多药结核病是由耐多药结核分枝杆菌原发感染或抗结核药物用药不当产生继发耐药所致,已成为世界卫生组织2035年终止结核病流行策略的一大阻碍,目前治愈率不理想。因此,迫切需要开发新的抗结核药物或治疗方法。中医药在减轻结核病症状、联合西药治疗耐多药结核病,以及提高患者针对结核分枝杆菌的免疫水平方面已有很多研究。作者对中药抗结核治疗的体外及人体试验研究进展进行综述,以期为临床医生提供更多的有关中西医结合治疗结核病的思路和策略。     

儿童结核病耐药特点及耐多药相关因素分析

目的了解儿童结核病的耐药现况,发现儿童耐多药相关的危险因素。方法收集沈阳市第十人民医院2017年1月31日至2019年12月31日收治的<18岁的结核病患者314例,男178例,女136例,年龄1～18岁,中位年龄(四分位数)[M(Q₁,Q₃)]为17(15,18)岁,初治253例,复治61例。分析314例患者培养阳性且菌种鉴定为结核分枝杆菌(MTB)的临床分离株的药物敏感性试验结果。采用多因素非条件logistic回归分析儿童耐药结核病的危险因素。结果 314例患者的MTB临床分离株总耐药率、初治耐药率和复治耐药率分别为27.1%(85/314)、20.9%(53/253)和52.5%(32/61),复治耐药率明显高于初治耐药率(χ²=24.771,P=0.000);总耐多药率、初治耐多药率和复治耐多药率分别为10.8%(34/314)、6.3%(16/253)和29.5%(18/61),复治耐多药率明显高于初治耐多药率(χ²=27.360,P=0.000)。logistic多因素回归分析表...     

结核分枝杆菌Ag85A/ESAT-6嵌合型质粒DNA疫苗和抗结核药物联合治疗小鼠耐药结核病的效果研究

目的研究结核分枝杆菌Ag85A/ESAT-6嵌合型质粒DNA疫苗和抗结核药物联合治疗小鼠耐药结核病的效果。方法用结核分枝杆菌高耐利福平低耐异烟肼临床分离株HB240尾静脉注射BALB/c小鼠1个月后,将小鼠随机分成2组,第1组用利福平(RFP)、异烟肼(INH)治疗12周,第2组用RFP、INH和结核分枝杆菌Ag85A/ESAT-6嵌合型质粒DNA疫苗(免疫5次)联合治疗12周;治疗结束后4和8周,分别取肺、肝和脾观察病理改变、称取质量、作菌落计数。结果治疗结束后4和8周,第2组小鼠体质量均超过第1组,但无显著性差异(P>0.05)。治疗结束后4周,第2组肺、脾脏指数(0.017,0.011)均略低于第1组(0.020,0.012)(P>0.05);治疗结束后8周,第2组肺、肝脏指数(0.021,0.047)均略低于第1组(0.022,0.048)(P>0.05);而第2组脾脏指数(0.008)显著低于第1组(0.012)(P<0.05)。治疗结束后4周,第2组有4例脾脏未见明显病变,第1组仅1例脾脏未见明显病变;治疗结束后8周,第2组有1例肺门淋巴结肿大,而第1组有3例;第2组有5例脾脏未见明显病变,第1组仅2例脾脏未见明显病变。治疗结束后4周,第2组肺菌落计数和脾菌落计数比第1组显著减少,分别减少70%和80%。结论DNA疫苗和抗结核药物联合治疗小鼠耐药结核病疗效高于单纯化疗。     

结核分枝杆菌Ag85A／ESAT-6嵌合型质粒DNA疫苗和抗结核药物联合治疗小鼠耐药结核病的效果研究

目的研究结核分枝杆菌Ag85A／ESAT-6嵌合型质粒DNA疫苗和抗结核药物联合治疗小鼠耐药结核病的效果。方法用结核分枝杆菌高耐利福平低耐异烟肼临床分离株HB240尾静脉注射BALB／c小鼠1个月后，将小鼠随机分成2组，第1组用利福平（RFP）、异烟肼（INH）治疗12周，第2组用RFP、INH和结核分枝杆菌Ag85A／ESAT-6嵌合型质粒DNA疫苗（免疫5次）联合治疗12周；治疗结束后4和8周，分别取肺、肝和脾观察病理改变、称取质量、作菌落计数。结果治疗结束后4和8周，第2组小鼠体质量均超过第1组，但无显著性差异（P〉0．05）。治疗结束后4周，第2组肺、脾脏指数（0．017，0．011）均略低于第1组（0，020，0，012）（P〉0．05）；治疗结束后8周，第2组肺、肝脏指数（O．021，0．047）均略低于第1组（0．022，0．048）（P〉0．05）；而第2组脾脏指数（0．008）显著低于第1组（0．012）（P〈0．05）。治疗结束后4周，第2组有4例脾脏未见明显病变，第1组仅1例脾脏未见明显病变；治疗结束后8周，第2组有1例肺门淋巴结肿大，而第1组有3例；第2组有5例脾脏未见明显病变，第1组仅2例脾脏未见明显病变。治疗结束后4周，第2组肺菌落计数和脾菌落计数比第1组显著减少，分别减少70％和80％。结论DNA疫苗和抗结核药物联合治疗小鼠耐药结核病疗效高于单纯化疗。     

结核分枝杆菌DNA疫苗对小鼠结核病免疫治疗作用的实验研究

目的探讨结核分枝杆菌DNA疫苗pcD85B、pcDMPT64以及小鼠白细胞介素12(IL-12)真核表达质粒psIL12对结核分枝杆菌感染的疗效与机制。方法将结核分枝杆菌H37Rv感染的C57BL/J6小鼠100只随机分成生理盐水对照组、pcDNA3.1对照组,psIL12治疗组,pcD85B、pcDMPT64、pcD85B+pcDMPT64、pcD85B+psIL12DNA疫苗治疗组。感染4周后分别给予生理盐水、空质粒、psIL-12及DNA疫苗,第1次治疗后2个月处死小鼠,检测器官荷菌量、脾淋巴细胞特异性γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素4(IL4)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的分泌水平,并于第1次治疗后2个月、5个月观察小鼠肺、脾组织病理改变情况。结果pcD85B治疗组肺组织荷菌量(lg-1CFU/g)为6.99±0.40,比生理盐水对照组(8.15±0.37)、pCDNA3.1对照组(8.19±0.29)显著降低(P<0.01);脾组织荷菌量(lg-1CFU/g,x±s)为5.17±0.33,比生理盐水对照组(5.76±0.16)及空质粒对照组(5.88±0.21)显著降低(P<0.05)。psIL12治疗组的肺(7.41±0.50)、脾(5.31±0.21)荷菌量比对照组显著降低(P<0.05);pcD85B+psIL12治疗组肺、脾荷菌量与pcD85B组比较差别无统计学意义。pcD85B组脾淋巴细胞IFN-γ、TNFα水平比对照组显著升高(P<0.05),各组间IL4水平差异无统计学意义。生理盐水对照组、pCDNA3.1对照组肺组织     

Ag85A/B嵌合DNA疫苗治疗小鼠敏感结核病疗效的实验研究

目的研究结核分枝杆菌Ag85A/B嵌合DNA疫苗治疗小鼠敏感结核病的效果。方法用结核分枝杆菌标准株H37Rv尾静脉注射50只雌性BALB/c小鼠后,将小鼠随机均匀地分为5组,感染后第3 d开始,分别用生理盐水(A组)、pVAX1载体(B组)、利福平(C组)、草分枝杆菌F.U.36注射液(D组)、Ag85A/B嵌合DNA疫苗(E组)治疗,每2周肌肉注射1次DNA疫苗,共3次。在治疗结束后2周,杀鼠,取小鼠肺和脾观察病理改变、称取重量、做菌落计数。结果与A组比较,D组、E组肺脏病变有不同程度减轻,病变局限,3/5区域肺泡结构完整,清晰,细胞分布均匀。与A组相比,C、D、E组肺脏菌落数依次减少2.11 log、0.76 log、0.81 log;肝脏菌落数依次减少2.11 log、0.74 log、1.11 logs(P0.01)。结论 Ag85A/B嵌合DNA对小鼠敏感结核病具有较好的治疗效果。     

经纤支镜灌注治疗耐多药肺结核

目的 探讨经纤支镜灌注治疗耐多药肺结核的治疗价值。方法 将26例耐多药肺结核病患随机分为治疗组和对照组。治疗组强化期采用纤支镜灌注治疗加全身化疗，对照组只进行全身化疗。结果 强化期结束时，经纤支镜灌注治疗组症状明显改善92.86%，痰菌阴转率85.71%，病灶显吸收率78.58%，明显高于单纯化疗组58.33％、50％、33.33%（P＜0.01-0.05）。结论 经纤支镜灌注治疗耐多药肺结核疗效显，且无并发症及明显副反应，值得进一步推广使用。     

母牛分枝杆菌菌苗对复治性肺结核的辅助治疗作用

目的观察母牛分枝杆菌菌苗（微卡）在复治性肺结核治疗中的疗效。方法将146例痰抗酸杆菌（AFB）阳性复治肺结核患者分成微卡治疗组（n：90）和对照组（n=56）疗程各6个月,前者采用复治化疗方案加用微卡治疗,后者仪用复治方案治疗。结果疗程结束时微卡治疗组和对照组痰阴转率分别为85．56％（77／90）、67．86％（38／56）,差异有显著性（P〈0．05）。微卡治疗组和对照组有效率分别为81．11％（73／90）、44．64％（25／56）,两组比较差异有显著性（P〈0．001）。结论微卡能改善难治性肺结核患者的细胞免疫功能,有助于痰菌阴转和病灶吸收,可作为复治性肺结核化疗的辅助药物。     

五药联合方案治疗耐多药结核病的疗效分析

目的　评价异烟肼 (H)、对氨基水杨酸钠 (P)、卷曲霉素 (C)、氧氟沙星 (O)或左氧氟沙星 (L V)和丙硫异烟胺 (Th)方案治疗耐多药结核病 (MDR- TB)的疗效。方法　将 85例 MDR- TB随机分为两组 :治疗组 (4 5例 )应用 H、P、C、O或 L V、Th;对照组 (4 0例 )应用 H、丁胺卡那霉素、利福喷丁、吡嗪酰胺和乙胺丁醇。结果　痰菌阴转率 :治疗组 86 .7% ,对照组 5 5 % ,有高度显著性差异 (P<0 .0 1) ;病灶吸收好转率治疗组 6 4 .4 ,对照组 4 0 ,有显著性差异 (P<0 .0 5 ) ;空洞闭合率 :治疗组 6 8.9 ,对照组 4 0 ,有高度显著性差异 (P<0 .0 1)。随访 2年 ,治疗组和对照组总治愈率分别为 84 .4和 5 0 ,有高度显著性差异 (P<0 .0 1)。结论　 H、P、C、O或 L V、Th方案治疗 MDR- TB疗效满意 ,可作为首选方案