姜黄素对乙醇诱导的大鼠原代肝细胞损伤的防护作用

目的 研究姜黄素对乙醇诱导的大鼠原代肝细胞氧化损伤的防护作用.方法 以二步胶原酶技术分离的SD大鼠原代肝细胞经不同剂量(0～200mmol/L)和不同时间(0～24 h)暴露于乙醇,确定乙醇对肝细胞损伤的敏感的暴露时间与剂量.乙醇暴露前用姜黄素进行不同暴露剂量(0～50 μmol/L)和暴露时间(0～5 h)的预暴露.检测细胞培养上清液中天门冬氨酸氨基转移酶(AST)和乳酸脱氢酶(LDH)活力及肝细胞的氧化抗氧化指标[谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)]来观察姜黄素对肝细胞免受乙醇氧化损伤的保护效应.结果 与对照组相比,乙醇暴露组随着乙醇暴露浓度的增加和时间的增长,肝细胞培养液上清液中的LDH、AST活力和MDA水平升高,GSH含量和SOD活力下降.以100mmol/L暴露8 h最为明显.与乙醇100mmol/L暴露8 h组相比,姜黄素预暴露组(0～50μmol/L)随姜黄素剂量的增加,LDH、AST活力下降(P＜0.05),姜黄素预暴露剂量为15和30 μmol/L时接近对照组水平;MDA生成明显减少(P＜0.05);但SOD、GSH水平明显升高(P＜0.05),姜黄素预暴露剂量为15和30 μmol/L时,SOD基本回复到对照组水平.15 μmol/L姜黄素预暴露1和5 h,各个指标与乙醇组相比,差异均有统计学意义,1 b干预效果优于5 h.结论 姜黄素可能通过降低GSH消耗,提高抗氧化酶活力,抑制脂质过氧化来保护大鼠原代肝细胞的酒精性氧化损伤,保护作用与姜黄素剂量及暴露时间有关.     

急性乙醇暴露对人原代肝细胞血红素氧化酶的影响

目的　研究急性乙醇暴露对人原代肝细胞血红素氧化酶活力及蛋白水平的影响。方法　经体外灌流、分离培养人原代肝细胞 ,观察乙醇对人原代肝细胞上清液中天冬氨酸氨基转移酶 (AST)的释放及谷胱甘肽 (GSH)含量的变化 ,用westernblot方法检测乙醇对人原代肝细胞血红素氧化酶活力及蛋白水平的影响。结果　急性乙醇暴露导致人原代肝细胞上清液中释放的AST增加 ,并呈明显的剂量效应和时间效应关系 ;此外 ,在 10 0mmol L乙醇 2 4h暴露下 ,肝细胞中的GSH明显降低 ,而HO 1酶活力在 0 5～ 12h之间明显升高 ,随后开始降低 ,且HO 1蛋白水平变化趋势与此一致。结论　HO 1酶活力的升高可能与乙醇暴露下人原代肝细胞氧化损伤的保护有关     

氟化钠对原代培养大鼠肝细胞的毒性作用

目的　探讨氟化钠 (NaF)对原代培养大鼠肝细胞的毒性作用。方法　采用原代培养的方法 ,观察氟化钠对原代培养大鼠肝细胞存活率和肝细胞培养液中谷草转氨酶 (AST)和谷丙转氨酶 (ALT)活性的影响。结果　氟化钠可使原代培养大鼠肝细胞存活率下降 ,且呈现明显的剂量 -效应关系 ,其IC50 为 3 5 8mmol/L ;肝细胞培养液中ALT和AST的活性随染毒剂量的增加而逐渐升高 ,2和 4mmol/L染氟组肝细胞培养液中ALT和AST的活性与对照组相比显著升高 (P <0 0 5 )。结论　氟化钠对原代培养大鼠肝细胞有明显的毒作用。     

槲皮素对大鼠原代肝细胞酒精性氧化损伤的防护作用

目的:观察槲皮素(quercetin)对大鼠原代肝细胞酒精性氧化损伤的防护作用。方法:经二步胶原酶技术分离培养大鼠原代肝细胞,用100mmol/L无水乙醇染毒细胞8h,作为酒精损伤模型。乙醇染毒前经不同剂量槲皮素(25～200μmol/L)预作用不同时间(0～8h),观察槲皮素干预对细胞培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)、谷草转氨酶(AST)活性,丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)水平和超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性的影响。结果:大鼠原代肝细胞经100mmol/L酒精暴露8h后,LDH、AST活性,MDA、GSH含量和SOD、CAT活性与对照组相比,均有非常显著性差异;酒精暴露前1～4h经50～75μmol/L槲皮素干预效果最明显,LDH、AST、MDA和GSH、SOD、CAT水平分别较酒精组非常显著性降低和升高。结论:槲皮素可能通过减少GSH耗竭,提高抗氧化酶活性,抑制脂质过氧化来保护大鼠原代肝细胞抗酒精性氧化损伤,保护作用呈剂量与时间效应关系。     

白藜芦醇诱导HO-1对酒精性肝细胞的保护作用

目的白藜芦醇(resveratrol)是非黄酮类的多酚化合物,具有多种有益的生物学效应。本研究目的观察白藜芦醇对酒精导致的人原代肝细胞损伤的保护作用及机制。方法经体外灌流、分离培养人原代肝细胞。测定白藜芦醇20μmol/L对酒精致肝细胞LDH释放率的影响。人原代肝细胞给予不同受试物(100 mmol/L酒精,20μmol/L白藜芦醇,25μmol/L Znpp9(锌原卟啉Ⅸ:zinc protoporphyrin-IX))24h,观察HO-1酶活性变化,孵育上清液AST,LDH释放水平,肝细胞内MDA,GSH含量变化。结果白藜芦醇可显著升高酒精致肝细胞LDH释放率的EC50(从700 mmol/L上升至1050 mmol/L);白藜芦醇可使肝细胞HO-1酶活性明显增加,并可显著抑制酒精导致的肝细胞AST,LDH释放,降低肝细胞内MDA水平,提高GSH含量。但是HO-1抑制剂Znpp9却明显降低了白藜芦醇对酒精导致的肝细胞损伤的保护作用。结论白藜芦醇对酒精导致的人肝细胞损伤具有保护作用,这种保护作用与其诱导的HO-1酶活性升高有关。     

茶多酚对顺铂所致机体损伤的保护作用

目的：探讨茶多酚对顺铂毒副作用的影响。方法：小白鼠随机分为随性对照组，阳性对照组，高剂量顺铂组，低剂量顺铂组，高剂量顺铂＋茶多酚组，低剂量顺铂＋茶多酚组，分别处理３５天，测定精子畸形率。结果：高顺＋茶组的精子畸形率低于高顺组，显著低于低顺组（Ｐ〈０．０５），肾病理组织学检查结果表明，加茶多酚组较单用顺铂组肾损害有所减轻。结论：茶多酚能在一定程度上缓解顺铂的致突变性和肾毒性。     

三叶青提取物对肝癌细胞HepG2及原代大鼠肝细胞的体外毒作用研究

目的探讨三叶青提取物对肝癌细胞Hep G2及原代大鼠肝细胞的体外毒作用.方法采用体外细胞培养技术,以细胞活性、细胞乳酸脱氢酶(LDH)活力的改变为指标,观察三叶青提取物对肝癌细胞Hep G2,体外毒作用的时效、量效关系,共观察其对正常原代培养大鼠肝细胞的影响.结果三叶青提取物以1×10-4g/L的浓度与Hep G2共同培养,在24h较空白对照组的细胞活性有显著降低;不同浓度的提取物和Hep G2共同培养,乙酸乙酯提取部位对细胞活性及酶学改变有显著性影响;对原代培养大鼠肝细胞活性及LDH也有一定的影响.结论三叶青提取物对Hep G2细胞具有明显的体外细胞毒作用,其毒性作用与药物的浓度和作用时间呈明显正相关,但对正常原代大鼠细胞毒性较小.     

培养基中的化学成分对原代培养肝细胞的影响

利用体外培养的肝细胞作为试验和研究手段，用于药理学、毒理学及生物型人工肝的研究进展较为迅速，其重点在于如何保持体外肝细胞的增殖能力和分化特性，以获得高密度生长的肝细胞。文中对近年来培养基中的化学成分对原代培养肝细胞的影响予以探讨。     

培养基中的化学成分对原代培养肝细胞的影响

利用体外培养的肝细胞作为试验和研究手段,用于药理学、毒理学及生物型人工肝的研究进展较为迅速,其重点在于如何保持体外肝细胞的增殖能力和分化特性,以获得高密度生长的肝细胞。文中对近年来培养基中的化学成分对原代培养肝细胞的影响予以探讨。     

肝细胞原代培养的常用添加物

随着肝细胞在生化研究、药代动力学研究、毒理学研究、人工肝支持系统及肝细胞移植方面越来越广泛的应用,如何获得完好无损的肝细胞及长期、稳定地培养活力和功能均良好的肝细胞,是首先要解决的问题。本文就肝细胞原代培养的常用添加物作了综述。     

急性酒精暴露对人原代肝细胞HO-1 mRNA表达的影响

目的 :　研究急性酒精暴露对人原代肝细胞 HO- 1 m RNA表达的影响。方法 :　经体外灌流、分离培养人原代肝细胞 ,观察酒精对人原代肝细胞上清液中天冬氨酸氨基转移酶(AST)的释放及 GSH含量的变化 ,用 RT- PCR方法检测酒精对人原代肝细胞 HO- 1 m RNA的表达。结果 :　急性酒精暴露导致人原代肝细胞上清液中释放的 AST增加 ,并呈明显的剂量效应和时间效应关系 ;此外 ,在 1 0 0 mmol/L乙醇 2 4 h暴露下 ,肝细胞中的 GSH明显降低 ,HO- 1 m RNA表达开始明显增加 ,3～ 9h之间达到最高峰 ,随后开始降低。结论 :　在 2 5～ 1 0 0 mmol/L范围内 ,急性酒精暴露导致人原代肝细胞明显的氧化损伤 ,且影响 HO- 1 m RNA表达。     

赤豆荚果总黄酮提取物对原代培养大鼠肝细胞氧化损伤的保护作用

目的:探讨赤豆荚果总黄酮提取物抗氧化作用以及对培养大鼠原代肝细胞氧化损伤的保护作用。方法:采用Photochem抗氧化测定仪对赤豆荚果总黄酮提取物体外抗氧化作用进行评价,同时评价其对培养大鼠原代肝细胞Fe2+氧化损伤保护作用的量效、时效关系。结果:赤豆荚果总黄酮提取物具有较强的抗氧化作用,在40,80,120ng剂量下,抗氧化作用大于芹菜素(P<0.05)。培养的原代肝细胞中加入100 μmol/L Fe2+后肝细胞活性减弱,培养液中ALT活力升高(P<0.05),脱落明显。加入提取物后,可有效抑制上述损伤作用。论:赤豆荚果总黄酮提取物具有较强的体外抗氧化作用,对Fe2+导致的大鼠原代肝细胞氧化损伤具有保护作用。     

茶多酚对阻塞性黄疸肝脏过氧化损伤的保护作用

目的　利用茶多酚的抗氧化性能对阻塞性黄疸大白兔进行治疗 ,以观察其对肝脏的保护作用方法　实验动物 2 7只 ,分三组 :模型组、茶多酚治疗组和正常对照组。实验期 2周。阻塞性黄疸 (阻黄 )系采用胆总管结扎形成。茶多酚经胃管给予 ,1 0 0 mg/(kg·d)。结果　胆总管结扎后机体内存在严重的氧化应激 ,表现为丙二醛 (MDA)明显增加 ,与实验前相比 P<0 .0 1。超氧化歧化酶 (SOD)活性和抗氧化维生素 (VE和 VC)均减少。肝脏存在着过氧化损伤 ,表现为肝功能的损伤和肝脏病理学的变化。茶多酚治疗组 MDA与实验前相比无显著性增加 (P>0 .0 5)。血清中SOD与 VE和 VC无显著变化 ,肝功能损伤和肝脏病理变化较小。结论　茶多酚可能对阻黄肝脏有保护作用     

茶多酚对草甘膦致小鼠睾丸支持细胞损伤的拮抗作用

目的探讨茶多酚(TP)对草甘膦致小鼠睾丸支持细胞(SC)损伤的拮抗作用。方法原代培养小鼠睾丸支持细胞,采用FasL免疫细胞化学法鉴定支持细胞。建立草甘膦诱导支持细胞损伤模型,将细胞随机分为正常对照组、草甘膦损伤组(90 g/ml)、TP拮抗组(经10、20、40、80、160 g/ml TP预处理12h后,再用草甘膦作用细胞24h)。四噻唑蓝(MTT)法检测细胞存活率,倒置相差显微镜观察细胞形态学改变,原位末端标记(TUNEL)法原位检测细胞凋亡,Hoechst33342荧光染色法观察细胞核形态改变,并检测细胞氧化损伤指标超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)的变化。结果 10~80 g/ml TP可拮抗草甘膦诱导的支持细胞损伤,提高支持细胞活力及SOD、GSH-Px活性,降低细胞凋亡指数及MDA含量,改善细胞萎缩变形、染色质浓集现象;160 g/ml时不能减轻草甘膦造成的细胞损伤。结论 TP在一定浓度范围内对草甘膦诱导的支持细胞损伤具有拮抗作用。     

莲房原花青素对乙醇诱导肝细胞损伤的拮抗作用

目的:研究莲房原花青素(LSPC)对乙醇诱导的人胚肝细胞株L-02损伤的拮抗作用。方法:观察5、10、25mg/L的LSPC与200mmol/L乙醇共同作用于肝细胞L-0224h后,对细胞的生存率,超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)、过氧化氢酶(CAT)、丙二醛(MDA)含量、凋亡率以及DNA损伤等指标的影响。结果:与乙醇组相比,5mg/L和10mg/LLSPC使细胞的生存率由73.14%上升到84.79%和90.52%,提高了细胞SOD、CAT、GSH的含量(P<0.01),降低MDA的生成;有效降低细胞的凋亡率,降低细胞p53和生长抑制DNA损伤基因(GADD)34、45β、153的表达,但高剂量组(25mg/L)对乙醇的拮抗作用不明显。结论:适量浓度的莲房原花青素对乙醇诱导的肝细胞L-02的损伤有拮抗作用。     

营养素防护同型半胱氨酸致ECV304细胞损伤和凋亡

目的: 探讨叶酸、维生素E(VE)和硒(Se)对同型半胱氨酸(homocysteine, Hcy)诱导ECV304细胞损伤和凋亡的防护作用及其机制。方法: 采用倒置显微镜观察和MTT实验检测各种营养素对Hcy细胞损伤作用的防护,采用琼脂糖凝胶DNA电泳和流式细胞仪检测各种营养素对Hcy诱导细胞凋亡作用的防护。并通过测定细胞内脂质过氧化水平、细胞内抗氧化酶活力及对细胞内活性氧产生的改变研究其保护机制。结果: 叶酸、VE和Se都可防护Hcy的细胞增殖抑制和诱导细胞凋亡作用,并都可明显减少细胞内MDA含量。叶酸可以明显增加细胞内SOD活力,叶酸和Se可以明显增加细胞内GSH-Px活力。VE对Hcy诱导的细胞内活性氧产生具有明显抑制作用,而Se和叶酸抑制作用不明显。结论: 叶酸、VE和Se都可以防护Hcy导致的细胞增殖抑制,并可以抑制Hcy诱导的细胞凋亡,但其作用机制不同。     

绿茶及绿茶多酚抗羟自由基诱导的大鼠肝脂质过氧化作用

本研究采用Ｆｅ２＋，Ｈ２Ｏ２反应生成ＯＨ·诱导大鼠离体肝脏脂质过氧化反应体系，用ＧＴ和ＧＴＰ作为抗氧化剂观察对肝脂质过氧化的阻抑作用。随ＧＴ和ＧＴＰ浓度的升高对ＭＤＡ的抑制率分别为０．７７４～０．８９２，０．８１４～０．９７６，浓度与ＭＤＡ之间存在剂量效应关系。     

维生素B_1对乙醇发育毒性的拮抗作用

目的:探讨维生素B1(VB1)对乙醇发育毒性的拮抗效果及可能机制。方法:以器官发生期小鼠体外全胚胎培养模型为基础,以4.0mg/ml乙醇诱导胚胎致畸模型,以0.25,0.5,1.0μg/mlVB1进行干预,通过对胚胎整体生长和各个器官发育指标的测量,评价VB1对乙醇发育毒性的拮抗效果。分离培养后的胚胎中脑细胞,检测细胞焦磷酸硫胺素(thiamine pyrophosphate,TPP)和硫胺素焦磷酸激酶(thiamine pyrophosphokinase,TPK)活性,分析VB1拮抗乙醇发育毒性的可能机制。结果:VB1对乙醇的发育毒性具有一定的拮抗作用,主要表现为卵黄囊、中枢神经系统和下颌突的发育改善。4.0mg/ml乙醇暴露能显著降低胚胎中脑组织TPP含量,而补充VB1能够逆转TPP含量的降低。在本次实验的剂量范围内,补充VB1对胚胎中脑组织TPK活性没有显著影响。结论:一定剂量的VB1在体外能够拮抗乙醇的发育毒性,增加细胞内TPP含量可能是其机制之一。     

茶多酚影响同型半胱氨酸对内皮细胞的作用

目的:探讨茶多酚能否减弱同型半胱氨酸(HCY)对内皮细胞(EC)的损伤作用。方法:体外培养牛主动脉内皮细胞,随机分为5组,正常对照组,用含20%小牛血清DMEM培养液培养;0.25 mmol/L HCY组,培养液中加入HCY使其终浓度为0.25 mmol/L;1 mg/L茶多酚 +0.25 mmol/L HCY组;2 mg/L茶多酚 +0.25 mmol/L HCY组;4 mg/L茶多酚 +0.25 mmol/L HCY组。培养72h后,用流式细胞仪检测细胞周期,观察细胞生长情况,同时检测培养液中的一氧化氮(NO)、 一氧化氮合酶(NOS)、内皮素(ET)、谷胱甘肽过氧化酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)浓度或活性。结果:浓度为1、2、4、8 mg/L茶多酚组与HCY组相比,(1)细胞形态规则性增强,立体感增加,细胞内颗粒减少;(2)细胞周期检测提示茶多酚组细胞S期比例增多;(3)功能实验提示,茶多酚组EC释放的血管舒张因子NO浓度较HCY组高;而血管收缩因子ET低;(4)MDA含量和GS H-Px活性无明显改变。结论:茶多酚有抑制HCY对EC的损伤作用。