结核分枝杆菌肝素结合血凝素与纯蛋白衍化物的细胞免疫作用比较

目的 通过结核分枝杆菌肝素结合血凝素(HBHA)与纯蛋白衍化物(PPD)的免疫作用比较,探讨HBHA的免疫保护作用及诊断应用价值.方法 选取阴性对照者、潜伏感染者、肺结核患者,分离入选者的外周血单个核细胞,分为无刺激、HBHA、PPD刺激组,培养4 d后收集细胞培养上清,ELISA方法检测上清中的γ-干扰素(IFN-γ)和白介素4.结果 HBHA刺激后3组产生的IFN-γ中位数分别为49.5 ng/L、781.9 ng/L、341.8 ng/L,潜伏感染者产生的IFN-γ水平远高于阴性对照者,略高于肺结核患者.HBHA特异的IFN-γ在不同治疗时间肺结核之间有显著差异.结论 HBHA有较好的免疫原性,可以刺激潜伏感染者产生高水平的IFN-γ,潜伏感染者未发展为活动性结核病可能与HBHA的免疫保护作用有关.HBHA特异的IFN-γ释放反应有利于鉴别潜伏感染者.     

结核分枝杆菌肝素结合血凝素与纯蛋白衍化物的细胞免疫作用比较

目的通过结核分枝杆菌肝素结合血凝素（HBHA）与纯蛋白衍化物（PPD）的免疫作用比较,探讨HBHA的免疫保护作用及诊断应用价值。方法选取阴性对照者、潜伏感染者、肺结核患者,分离入选者的外周血单个核细胞,分为无刺激、HBHA、PPD刺激组,培养4d后收集细胞培养上清,ELISA方法检测上清中的γ-干扰素（IFN-γ）和白介素4（IL-4）。结果HBHA刺激后3组产生的IFN—γ中位数分别为：49．5ng／ml、781．9ng／ml、341．8ng/ml,潜伏感染者产生的IFN-γ水平远高于阴性对照组,略高于肺结核组,HBHA特异的IFN-γ在不同治疗时间肺结核之间有显著差异。结论HBHA有较好的免疫原性,可以刺激潜伏感染者产生高水平的IFN-γ,潜伏感染者未发展为活动性结核病可能与HBHA的免疫保护作用有关,HBHA特异的IFN-γ释放反应有利于鉴别潜伏感染者。     

结核分枝杆菌肝素结合血凝素在结核病免疫应答中的研究

目的探讨结核分枝杆菌肝素结合血凝素的免疫应答作用及其在结核病诊断中的应用价值。方法选取PPD（-）的健康对照、PPD（＋）的潜伏感染者、肺结核患者,分离入选者的外周血单个核细胞,用天然HBHA刺激,培养4天后收集细胞培养上清,ELISA方法检测上清中的γ-干扰素（IFN-γ）。同时用ELISA方法检测各组血清中的HBHA特异的IgG型抗体。结果HBFIA刺激后三组产生的IFN—γ中位数分别为：49．5pg／ml、781．9pg／ml、341．8pg／ml,潜伏感染者产生的IFN-γ水平远高于健康对照,略高于肺结核。三组血清IgG抗体浓度吸光度的均值分别为0．212±0．066,0．224±0．076,0．285±0．078。肺结核患者的HBHA特异的IgG抗体远高于健康对照及潜伏感染者。结论HBHA有较好的免疫原性,HBHA特异的IFN—γ释放反应有利于鉴别潜伏感染者。HBHA的抗体水平在结核病的诊断中有一定的辅助应用价值。     

结核分枝杆菌黏附素HBHA在结核病免疫学诊断中的应用

目的 探讨结核分枝杆菌肝素结合血凝黏附素(Heparin-binding haemagglutinin adhesin,HBHA)在结核病免疫诊断方面的应用价值.方法 将在苏通培养基中培养至稳定期的卡介苗菌株(BCG)菌体超声裂解,离心后取上清并通过CL-6B层析柱,利用含0～500 mmol/L氯化钠的磷酸盐缓冲溶液(PBS)进行梯度洗脱后获得天然HBHA.以BCG基因组为模板PCR扩增结核分枝杆菌hbha基因片段,质粒pET-32a为载体,大肠杆菌作为宿主菌制备原核表达的HBHA重组蛋白.以纯化的天然HBHA蛋白和原核表达的HBHA蛋白为包被抗原,分别对肺结核组、肺外结核组、PPD阳性和PPD阴性健康对照组各47例血清通过ELISA方法检测抗HBHA的抗体水平.应用SPSS 11.5统计软件对各研究组数据进行方差齐性检验,然后进行t检验,并计算各研究组的敏感度和特异度.结果 含有375 mmol/L氯化钠的PBS洗脱液可以洗脱获得较纯的天然HBHA蛋白.利用重组HBHA所带的组氨酸标签进行特异分离、纯化.ELISA检测结果表明天然HBHA蛋白和重组HBHA蛋白、PPD阳性和PPD阴性健康对照组之间血清抗体水平差异不明显.肺结核组与肺外结核组的血清抗体ELISA检测的吸光度值在散点图中分布有明显差异,肺结核组吸光度值集中分布在0.30～0.40之间,肺外结核组吸光度值分布在0.35～0.45之间,经统计学检验结果差异具有统计学意义(t=12.224,P＜0.05).结核组(肺结核和肺外结核)与对照组(PPD阴性,PPD阳性)吸光度值分布具有显著不同,对照组全部小于0.30,结核组吸光度值则集中分布于0.30～0.45之间.经统计学检验(t=25.909,P＜0.05)血清抗体水平具有显著性差异.结论 结核分枝杆菌黏附素HBHA在结核病免疫学诊断的应用中具有较好的特异度和敏感度,有望用于结核病、尤其是肺外结核病的实验室辅助诊断.     

结核分枝杆菌天然黏附素HBHA的制备及其检测应用

目的探讨HBHA在ELISA检测结核病方面的应用。方法将BCG培养至稳定生长期将其苏通培养基上清通过CL-6B层折柱．利用含NaCL的PBS溶液梯度洗脱得到天然HBHA．然后以纯化的天然HBHA蛋白和原核表达的HBHA蛋白为包被抗原分别对肺结核组、肺外结核组、PPD阳性和PPD阴性健康对照组血清各47例进行ELISA检测抗HBHA抗体水平。结果在进行梯度洗脱时含有375mMNaCL的PBS洗脱液可以获得较纯的天然HBHA蛋白。ELISA检测结果表明肺结核组和肺外结核组的血清抗体水平高于PPD阳性和PPD阴性健康对照组（x^2=36．48，P〈0．01），肺结核组和肺外结核组之间（x^2=0.27。P〉0．05）、PPD阳性和PPD阴性健康对照组之间（x^2=0．30，P〉0.05）血清抗体水平没有显著差异。结论利用天然HBHA蛋白和重组HBHA蛋白进行ELISA结核病诊断都具有较高的特异性和敏感性，可以较好地用于结核病的诊断。以天然HBHA为基础的血清学诊断方法具有更好的敏感性和特异性。     

结核潜伏感染者全血miR-144-3p、miR-146a-5p的表达

目的探讨结核潜伏感染者全血miR-144-3p、miR-146a-5p的表达及其与活动性肺结核患者的差异。方法收集结核潜伏感染者30例,活动性肺结核患者30例。收集全血,提取总RNA,利用反转录-荧光定量PCR方法检测miR-144-3p、miR-146a-5p的表达。两组间比较采用t检验。结果结核潜伏感染者全血中miRNA144-3p的表达(2.014±1.48)比活动性肺结核患者(1.056±0.746)明显提高,差异有统计学意义(P<0.05),而结核潜伏感染者全血中miR-146a-5p的表达(1.937±1.109)与活动性肺结核患者(1.469±0.693)相似,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 miR-144-3p可能成为诊断结核潜伏感染者的标志物。     

MTB分泌蛋白抗原85B-早期分泌靶抗原6融合蛋白对结核性胸膜炎的辅助诊断价值

目的 研究MTB分泌蛋白抗原85B(Ag85B)-早期分泌靶抗原6(ESAT6)融合蛋白在结核性胸膜炎辅助诊断中的价值。方法 研究对象为2014年1月至2015年1月于河北省胸科医院住院的结核性胸膜炎(结核组)患者45例,非结核性胸膜炎(非结核组)患者26例,以及体检健康人群(健康组)25名。应用流式细胞仪分别检测结核分枝杆菌Ag85B-ESAT6融合蛋白刺激前后结核组、非结核组外周血、胸腔积液及健康组外周血中γ干扰素(IFN-γ)的含量,采用免疫组织化学染色法检测结核组与非结核组患者组织(通过手术或穿刺活检获得的胸膜组织)中CD4 ⁺和CD8 ⁺细胞的表达水平。采用SPSS 13.0软件进行统计学处理,数据符合正态分布的组间比较采用t检验,以P<0.05为差异有统计学意义。 结果 MTB Ag85B-ESAT6融合蛋白刺激前后,结核组外周血中IFN-γ的含量分别为(42.63±10.51)pg/ml和(401.90±72.54)pg/ml;非结核组分别为(38.97±7.08)pg/ml和(40.04±6.80)pg/ml;健康组分别为(39.61±7.28)pg/ml和(39.86±6.97)pg/ml。结核组胸腔积液中IFN-γ的含量分别为(411.91±41.56)pg/ml和(1342.67±167.96)pg/ml;非结核组分别为(47.99±11.49)pg/ml和(48.76±11.25)pg/ml。刺激前结核组胸腔积液中IFN-γ的含量明显高于非结核组,两组比较差异有统计学意义(t=55.194,P=0.000);刺激后结核组外周血单个核细胞产生的IFN-γ含量相对于刺激前及刺激后的其他两组比较,差异均有统计学意义(t=32.879、33.211和33.204,P值均为0.000);刺激后结核组与刺激前及非结核组刺激前后胸腔积液中IFN-γ的含量比较,差异均具有统计学意义(t=36.085、51.478和51.499,P值均为0.000)。免疫组织化学染色结果显示结核组与非结核组患者胸膜组织中的CD4 ⁺和CD8 ⁺积累光密度值(结核组:16349.91±2376.36和10525.77±1164.86;非结核组:1853.64±670.40和1327.15±175.55)差异均具有统计学意义(t=14.381和19.127,P值均为0.000)。 结论 结核分枝杆菌Ag85B-ESAT6融合蛋白刺激外周血和胸腔积液后均明显提高结核特异性IFN-γ的含量,对结核性胸膜炎的辅助诊断有较高的临床应用价值。     

卡介苗对结核分枝杆菌IFN-γ酶联免疫斑点检测法的影响

目的探讨卡介苗（BCG）对结核分枝杆菌IFN-γ酶联免疫斑点（简称Elispot）检测影响,评价Elispot检测在诊断结核分枝杆菌潜伏感染的价值。方法对98例某高校学生同时进行Elispot检测和PPD皮试,其中27例PPD皮试结果和Elis-pot检测均为阴性的受试者进行卡介苗接种。结果 98例受试者中,48例PPD皮试阳性,13例Elispot检测阳性,两种检测结果比较差异有统计学意义。对上述27例受试者接种BCG后PPD皮试结果全转为阳性,Elispot检测仍为阴性。在BCG接种前后,ESAT-6和PoolA作用下IFN-γ分泌水平均无差异;但在BCG作用下,BCG接种后IFN-γ分泌水平显著高于接种前。结论 Elis-pot检测体外IFN-γ应答反应不受卡介苗接种影响,在诊断结核分枝杆菌潜伏感染的价值优于PPD皮试。     

肺结核及肺外结核患者外周血T淋巴细胞亚群的变化及其临床意义

目的 探讨肺外结核患者外周血CD3 ⁺、CD4 ⁺、CD8 ⁺T淋巴细胞亚群及CD4 ⁺/CD8 ⁺比值的变化及其临床意义方法 搜集2017年11月至2019年1月在成都市公共卫生临床医疗中心结核病区住院的147例患者(包括63例单纯肺结核、60例肺结核并发肺外结核和24例单纯肺外结核患者,分别为肺结核组、肺结核并发肺外结核组和肺外结核组)作为研究对象。采用流式细胞仪及四色淋巴细胞亚群检测试剂盒检测纳入的各组患者外周血CD3 ⁺、CD4 ⁺、CD8 ⁺T淋巴细胞的绝对计数及CD4 ⁺/CD8 ⁺比值,分析上述各组患者外周血T淋巴细胞亚群的差异。结果 肺结核并发肺外结核患者外周血CD3 ⁺和CD4 ⁺T淋巴细胞计数分别为596.000(377.500,823.250)个/μl和347.500(214.000,479.250)个/μl,均低于单纯肺结核患者的698.000(572.000,904.000)个/μl和409.000(311.000,545.000)个/μl,差异均有统计学意义(Z=-2.507,P=0.012;Z=-2.431,P=0.015)。肺结核并发肺外结核患者的CD8 ⁺T淋巴细胞计数与CD4 ⁺/CD8 ⁺比值分别为195.500(137.250,278.750)个/μl和1.670(1.258,2.273),较肺结核患者的244.000(154.000,317.000)个/μl和1.770(1.290,2.350)降低,但差异均无统计学意义(Z=-1.892,P=0.058;Z=-0.546,P=0.585)。单纯肺外结核患者外周血CD3 ⁺和CD4 ⁺ T淋巴细胞计数分别为551.500(283.750,949.000)个/μl和295.500(134.250,461.750)个/μl,低于单纯肺结核患者的698.000(572.000,904.000)个/μl和409.000(311.000,545.000)个/μl,差异均有统计学意义(Z=-2.089,P=0.037;Z=-2.460,P=0.014);单纯肺外结核患者外周血的CD8 ⁺T淋巴细胞计数[185.000(92.000,366.250)个/μl]及CD4 ⁺/CD8 ⁺比值[1.455(1.018,2.128)]与单纯肺结核患者[分别为244.000(154.000,317.000)个/μl和1.770(1.290,2.350)]相比,差异均无统计学意义(Z=-1.315,P=0.188;Z=-1.429,P=0.153)。结论 随着肺结核患者外周血CD3 ⁺、CD4 ⁺ T淋巴细胞计数的逐步降低,结核分枝杆菌可能更易播散至肺外;外周血CD8 ⁺T淋巴细胞计数及CD4 ⁺/CD8 ⁺比值在肺外结核发生机制中的作用尚需进一步探讨。     

人类免疫缺陷病毒合并结核感染患者外周血Vγ2Vδ2+T淋巴细胞的数量与功能变化

目的 探讨外周血Vγ2Vδ2+T淋巴细胞数与功能变化对HIV合并结核感染状态的影响.方法 将76例HIV/AIDS合并结核感染患者分为活动性结核感染组(HIV+TB组)和潜伏结核感染组(HIV+LTB组).流式细胞仪测定外周血淋巴细胞分类情况.酶联斑点免疫法(ELISPOT)和胞内细胞因子染色(ICS)方法 检测在PPD和磷酸化抗原(HMBPP)的刺激下T淋巴细胞亚群分泌IFN-γ功能的情况.统计学处理采用t检验.结果 HIV+TB组CD3+T淋巴细胞绝对计数(t=-3.67,P<0.01)和Vγ2Vδ2+T淋巴细胞所占CD3+T淋巴细胞比例(t=-2.06,P<0.05)均显著低于HIV+LTB组.PPD刺激时,HIV+LTB组分泌特异性IFN-γ的T淋巴细胞和参与分泌IFN-γ的CD4+T淋巴细胞所占CD3+T淋巴细胞比例,与HIV+TB组比较差异均无统计学意义.HMBPP刺激时,HIV+LTB组与HIV+TB组比较,分泌IFN-γ的特异性T淋巴细胞计数(t=2.71,P<0.01)和产生IFN-7的特异性Vy2'T淋巴细胞比例(t=3.003,P<0.01)均显著增加.结论 Vγ2Vδ2+T淋巴细胞在HIV/AIDS合并活动性结核患者中的数量和功能都有受损,提示该类细胞在CD4+T淋巴细胞受到抑制的情况下可能是人体内抵御结核感染的重要免疫细胞.     

肺结核患者全血γ干扰素释放试验影响因素的探讨

目的 探讨菌量负荷、疾病活动性、影像学累及范围、外周血淋巴细胞计数等因素对全血γ干扰素释放试验结果的影响。 方法 选取肺结核患者106例（包括44例菌阳肺结核患者、47例菌阴肺结核患者和15例陈旧性肺结核患者）和健康对照组35名,所有患者（健康对照者）抽取外周血并以肝素抗凝分别与结核分枝杆菌特异抗原分泌抗原靶-6(ESAT-6)、ESAT-6/培养滤过蛋白-10(CFP-10)融合抗原、PPD共同孵育,并用ELISA的方法检测血浆中IFN-γ的含量,各组间差异的比较应用Mann-Whitney U检验,P<0.05为差异有统计学意义。 结果 抗原刺激后分泌IFN-γ量的中位数在菌阳组和菌阴组之间差异无统计学意义［ESAT-6（114.7 pg/ml vs 82 pg/ml, Z=－0.500, P>0.05）, ESAT-6/CFP-10（3488 pg/ml vs 2350 pg/ml, Z=－0.949, P>0.05）,PPD（4514 pg/ml vs 4326 pg/ml, Z=－0.822, P>0.05）］;ESAT-6和ESAT-6/CFP-10抗原刺激后分泌IFN-γ量的中位数在菌阴组和陈旧性肺结核组之间差异无统计学意义［ESAT-6（82 pg/ml vs 137 pg/ml, Z=－0.781, P>0.05）, ESAT-6/CFP-10（2350 pg/ml vs 1784 pg/ml, Z=－1.685, P>0.05）］,ESAT-6抗原刺激后分泌IFN-γ量的中位数在菌阳组和陈旧性肺结核组之间差异无统计学意义（114.7 pg/ml vs 137 pg/ml, Z=－0.757, P>0.05）,但ESAT-6/CFP-10融合抗原刺激后分泌IFN-γ量的中位数在菌阳组和陈旧性肺结核组之间差异有统计学意义（3488 pg/ml vs 1784 pg/ml, Z=－0.242, P<0.05）;ESAT-6、ESAT-6/CFP-10融合抗原刺激后分泌IFN-γ量的中位数在肺部病变累及少和肺部病变累及多之间差异有统计学意义［ESAT-6（117 pg/ml vs 42 pg/ml, Z=－2.341, P<0.05）, ESAT-6/CFP-10（3055 pg/ml vs 1562.5 pg/ml, Z=－2.850, P<0.05）］;ESAT-6、ESAT-6/CFP-10融合抗原、PPD抗原刺激后分泌IFN-γ量的中位数在外周血淋巴细胞≥1.0×10⁹/L和＜1.0×10⁹/L之间差异有统计学意义［ESAT-6（97.5 pg/ml vs 48 pg/ml, Z=－2.745, P<0.05）, ESAT-6/CFP-10（3082 pg/ml vs 1190 pg/ml, Z=－2.911, P<0.05）,PPD（4322 pg/ml vs 3200 pg/ml,Z=－2.216, P<0.05）］。 结论 基于RD1区的抗原刺激后外周血分泌IFN-γ的量不受菌量负荷的影响,但可能受到外周血淋巴细胞绝对值和病变累及范围的影响。     

血清CXC趋化因子受体3配体检测在活动性肺结核诊断中的价值

目的 评估CXC趋化因子受体3(CXCR3)配体在活动性肺结核诊断中的应用价值。方法 搜集2018年3—12月就诊于河北省胸科医院的活动性肺结核(PTB组)患者106例(其中痰涂片抗酸染色阴性组 31例,痰涂片抗酸染色+~++组 39例,痰涂片抗酸染色+++~++++组 36例),肺部恶性肿瘤(PMT组)患者89例(其中小细胞肺癌12例,腺癌37例,鳞癌35例,大细胞癌3例,神经内分泌癌2例),其他肺部良性疾病(PBD组)患者82例(支气管扩张继发感染36例,肺脓肿13例,真菌感染15例,支原体感染12例,错构瘤6例),健康对照(HC)组90例作为研究对象。采用酶联免疫吸附试验测定各组血清γ干扰素(interferon-γ,IFN-γ)和CXCR3配体[IFN-γ诱导的单核因子(CXCL9),γ干扰素诱导蛋白10(CXCL10),干扰素诱导的T细胞α趋化剂(CXCL11)]水平。结果 PTB组CXCL9、CXCL10、CXCL11的含量[650.28(220.00,881.21)pg/ml;390.00(200.05,500.29)pg/ml;150.33(80.12,320.00)pg/ml]分别与PMT组[120.21(33.50,244.28)pg/ml;58.00(30.25,85.56)pg/ml;35.52(20.27,44.50)pg/ml]比较,差异均有统计学意义(χ ²值分别为124.21,155.03,118.68;P值均为0.000);与PBD组[45.52(15.25,86.55)pg/ml;55.56(26.75,86.28)pg/ml;31.53(20.50,45.25)pg/ml]比较,差异均有统计学意义(χ ²值分别为194.93,159.84,124.71;P值均为0.000);与HC组[50.11(28.32,81.22)pg/ml;50.28(32.27,70.62)pg/ml;11.46(5.28,30.39)pg/ml]比较,差异均有统计学意义(χ ²值分别为184.68,183.53,208.18;P值均为0.000)。PTB组IFN-γ[13.00(8.50,18.25)pg/ml]与PMT组[15.11(8.50,18.00)pg/ml]比较,差异无统计学意义(χ ²=10.05,P=0.509);与PBD组[13.02(9.90,18.28)pg/ml]相比,差异无统计学意义(χ ²=1.17,P=0.940);与HC组[10.86(7.01,12.00)pg/ml]相比,差异有统计学意义(χ ²=80.19,P=0.000)。PTB组血清CXCL9、CXCL10、CXCL11曲线下面积(AUC)分别为0.700,0.680,0.778。 结论 血清CXCR3配体可能有助于活动性肺结核的诊断,其中CXCL11和CXCL9较CXCL10评价作用更为突出。     

不同抗原全血ELISA检测技术对活动性肺结核的辅助诊断价值研究

目的 探讨克隆表达的抗原PPD、早期分泌抗原靶6（ESAT-6）/培养滤液蛋白10（CFP-10）融合蛋白（简写为E/C）和ESAT-6的全血干扰素释放试验对活动性肺结核的辅助诊断价值。 方法 选取活动性结核组96例和对照组91例共计187例,抽取清晨空腹肝素钠抗凝外周静脉血5 ml,分别给以抗原PPD、E/C和EAST-6刺激,通过ELISA的方法检测抗原刺激后血浆中IFN-γ的数值。 结果 在活动性肺结核组中3种抗原刺激后IFN-γ含量的中位数分别为ESAT-6［96（41～379）pg/ml］、E/C［3180（1192～7231）pg/ml］、PPD［4348（1230～9026）pg/ml］;明显高于对照组中IFN-γ含量ESAT-6［10（4～52）］、E/C［210（49～523）］、PPD［1800（70～3021）pg/ml］,U值分别为1190.5、2405和1309.5,P值均<0.01;ESAT-6、E/C和PPD的全血ELISA敏感度分别为78.1%(75/96)、87.5%(84/96) 和85.4%(82/96),特异度分别为76.9%(70/91)、83.5%(76/91)和65.9%(60/91)。 结论 融合蛋白ESAT-6/CFP-10对活动性结核病具有一定的辅助诊断价值。     

肺结核患者痰和血浆IFN-γ含量检测的临床意义探讨

目的探讨肺结核患者痰和血浆中γ-干扰素（interferon-gamma,IFN-γ）水平在结核病诊断、鉴别诊断中的意义。方法用酶联免疫吸附剂测定法（ELISA）分别检测44例活动性肺结核患者（PTB）、36例正常对照者、18例肺癌患者痰和血浆中IFN-γ含量。结果结核分枝杆菌潜伏感染者（LTBI）痰和血浆IFN-γ含量与健康人相接近（P〉0.05）;肺结核患者血浆IFN-γ含量显著高于正常对照及肺癌患者（P值均〈0.05）,肺结核患者痰中IFN-γ含量显著低于正常对照及肺癌患者（P值均〈0.01）;肺结核患者痰IFN-γ含量低于血浆IFN-γ含量;痰及血浆中IFN-γ的ROC曲线下面积（AUC）分别为0.90和0.91,当痰中IFN-γ诊断临界值为21.40 pg/ml时,敏感度85.71%、特异性82.35%;当血浆IFN-γ诊断临界值为27.91 pg/ml时,敏感度71.43%、特异性94.12%。结论痰和/或血浆中IFN-γ可以作为肺结核诊断（尤其是菌阴肺结核）、鉴别诊断的重要辅助指标之一。     

结核分枝杆菌与艾滋病病毒双重感染患者抗结核治疗期间死亡的影响因素分析

目的 了解Mtb与HIV双重感染患者抗结核治疗期间死亡相关影响因素。 方法 对2007-2008年期间,广西、四川、湖南三省（自治区）共6个县诊治Mtb与HIV双重感染患者抗结核治疗期间死亡情况进行分析。共观察330例患者,抗结核治疗期间死亡33例。使用SAS 9.2软件,分析患者体质量、CD4⁺ T淋巴细胞水平、接受抗病毒治疗时间、HIV感染途径、HIV感染年限、结核病类型、机会感染等因素对Mtb与HIV双重感染患者抗结核治疗期间死亡状况的影响,P<0.05为差异有统计学意义。 结果 Mtb与HIV双重感染患者抗结核治疗期间病死率为10.0%（33/330）。对死亡相关影响因素分析发现：运用logistic回归进行统计学分析,CD4⁺ T淋巴细胞水平未对患者的病死率产生影响（Wald χ²=0.5774,P=0.4473,OR值0.858,95%CI值0.578～1.274）;未接受抗病毒治疗的患者的病死率是接受抗病毒治疗的患者的病死率的7.612倍（Wald χ²=14.8539,P<0.001,OR值7.612,95%CI值2.712～21.369）,是否接受抗病毒治疗是患者病死率的影响因素;性传播组病死率（6.7%,14/210）与静脉吸毒组病死率（16.1%,19/118）比较,静脉吸毒组病死率较高,采用Fisher确切概率法进行统计学分析,P<0.05;涂阳肺结核组、涂阴肺结核组、肺结核组、肺结核合并肺外结核组、单纯肺外结核组病死率（分别为：20.9%,18/86;8.0%,14/174;11.7%,27/230;16.7%,5/30;1.4%,1/70）比较,涂阳肺结核及肺结核合并肺外结核组病死率较高,χ²值分别为17.8685和7.9687,P值均<0.05。 结论 结核病变程度、患者机能状况是影响Mtb与HIV双重感染患者病死状况的主要因素。     

γ干扰素和转化生长因子β水平与支气管结核治疗效果的关联性研究

目的 探讨血清和支气管灌洗液中γ干扰素(IFN-γ)和转化生长因子β(TGF-β)水平与支气管结核（EBTB）治疗效果之间的关联性。 方法 采用酶联免疫吸附（ELISA）方法测定78例EBTB患者支气管镜下介入治疗前后血清和支气管灌洗液中IFN-γ和TGF-β的水平,以及50名健康对照血清中IFN-γ和TGF-β的水平。EBTB患者被分成2组:一组治疗后表现为支气管狭窄,另一组治疗后未表现为支气管狭窄。 结果 研究显示：（1）与对照组相比,EBTB患者组支气管灌洗液中IFN-γ和TGF-β水平升高。（2）78例EBTB患者治疗后,27例患者显示有支气管的纤维狭窄,51例患者没有支气管狭窄。支气管狭窄组治疗前血清TGF-β水平［（783.21±478.67）pg/ml］比无支气管狭窄组［（1258.60±573.29）pg/ml］低（U=3.8905,P＜0.01）,而支气管灌洗液中TGF-β ［（1219.54±439.27）pg/ml］和IFN-γ ［（2152±1594.33）pg/ml］水平明显高于无狭窄组［（779.24±395.91）pg/ml,（1006.30±752.57）pg/ml］（U值分别为4.3553和3.5315,P值均＜0.01）。 结论 （1）EBTB患者支气管灌洗液中IFN-γ和TGF-β水平升高可能与支气管结核发病机制有关。（2）初始血清TGF-β低水平和支气管灌洗液IFN-γ和TGF-β高水平与治疗后支气管纤维狭窄有关。     

慢性阻塞性肺疾病合并肺结核患者部分细胞因子水平的表达及其意义

目的 探讨慢性阻塞性肺疾病（chronic obstructive pulmonary disease,COPD）合并肺结核患者部分细胞因子水平的表达及其意义。 方法 对2012年7月至2013年6月间住院诊治的50例COPD合并肺结核患者（研究组）、50例肺结核患者（肺结核对照组）、50例COPD患者（COPD对照组）,以及50名健康志愿者（健康对照组）的细胞免疫功能进行检测。采用流式细胞仪抗体双标法检测各组人员的外周血自然杀伤细胞（natural killer cell,NK细胞）、T淋巴细胞亚群（CD4＋、CD8＋、CD4＋/CD8＋）的表达率,采用ELISA法测定患者血清中白细胞介素（IL）-1、可溶性白细胞介素-2受体（sIL-2R）、IL-6、γ干扰素（IFN-γ）及肿瘤坏死因子α（TNF-α）的表达水平。多组间比较采用单因素方差分析,两组间比较采用t检验。 结果 COPD对照组的NK细胞比率［（15.34±8.11）%］高于研究组［（12.37±6.96）%］和肺结核对照组［（12.53±7.14）%］（t值分别为2.20和2.08,P值均＜0.05）,研究组CD4＋ T淋巴细胞比率［（30.09±11.09）%］低于肺结核对照组［（39.80±9.42）%］（t=2.80,P〈0.01）。研究组的IL-1表达水平［（30.14±20.84）ng/L］高于COPD对照组［（23.54±9.94）ng/L］（t=2.00,P〈0.05）;COPD对照组的sIL-2R的表达水平［（114.70±49.32）pmol/L］低于研究组［（168.78±94.92）pmol/L］与肺结核对照组［（182.68±74.91）pmol/L］（t=4.07和5.12,P值均＜0.01）;在IL-6的表达上,肺结核对照组［（75.62±75.97）ng/L］高于研究组［（51.46±35.86）ng/L］与COPD对照组［（48.90±30.04）ng/L］（t值分别为2.68和2.97,P值均＜0.01）;研究组［（28.82±32.40）ng/L］与肺结核对照组［（29.90±23.79）ng/L］的IFN-γ表达均高于COPD对照组［（16.60±9.27）ng/L］（t值分别为2.89和3.15,P值均＜0.01）。 结论 与对照组相比,研究组患者存在以NK细胞、CD4＋ T淋巴细胞为主的细胞免疫功能低下,同时还存在IL-1、sIL-2R、IL-6、IFN-γ等细胞因子表达异常。     

不同剂量结核病DNA疫苗的电转染免疫原性研究

目的 研究不同剂量结核病DNA疫苗电转染后的免疫原性.方法 40只BALB/c小鼠通过随机数字表法分为8组,每组5只.其中4组分别用100 μl生理盐水和10 μg、50 μg、100 μg结核分枝杆菌Ag85A DNA肌内注射免疫小鼠;另4组用100 μl生理盐水和10 μg、50 μg、100 μgAg85ADNA肌内注射加电转染免疫小鼠.每2周免疫1次,共3次.最后1次免疫后2周杀死小鼠.用ELISA方法检测小鼠脾细胞培养上清液中γ干扰素（IFN-γ）和白细胞介素4（interleukin 4,IL-4）水平;用流式细胞术检测小鼠外周血单个核细胞（PBMC）分泌IFN-γ的辅助性T细胞（helper T cell,Th）1细胞百分比、分泌IL-4的Th2细胞百分比,以及Th1与Th2的细胞比值.用SAS 9.2软件处理数据,实验数据以“-x±s”表示,对有关数据进行两因素析因设计的方差分析,两两比较采用t检验,P＜0.05为差异有统计学意义.结果 免疫结束后2周,小鼠脾淋巴细胞分泌IFN-γ水平,50 μg[（646.05±342.53） pg/ml]和100 μgAg85ADNA肌内注射组[（738.61±372.68） pg/ml]显著高于生理盐水组[（1.73±3.88）pg/ml]（f值分别为4.065、4.647,P值均＜0.05）和10 μg Ag85A DNA组[（87.83±120.82）pg/ml]（t值分别为3.513、4.094,P值均＜0.05）;10 μg Ag85A DNA电转染组[（357.06±105.18） pg/ml]显著高于生理盐水组（t=2.247,P＜0.05）,高于100 μg Ag85ADNA电转染组[（86.08±135.73） pg/ml],但差异无统计学意义（t=1.706,P＞0.05）;50 μg Ag85ADNA电转染组[（648.60±439.41）pg/ml]显著高于生理盐水组（t=4.081,P＜0.05）和100 μg Ag85A DNA电转染组（t=3.539,P＜0.05）.与直接肌内注射组IFN-γ水平[（87.83±120.82） pg/ml]比较,10 μg Ag85A DNA电转染组增高3倍[（357.06 pg/ml）/（87.83 pg/ml）]; 50 μg Ag85A DNA肌内注射组[（646.05±342.53） pg/ml]与电转染组[（648.60±439.41）pg/ml]比较,差异无统计学意义（t=-0.016,P＞0.05）;100 μg Ag85A DNA电转染组[（86.08±135.73）pg/ml]较肌内注射组[（738.61±372.68） pg/ml]降低88.35％（t=4.105,P＜0.05）.小鼠PBMC分泌IFN-γ的Th1细胞百分比,不同剂量Ag85A DNA肌内注射组[10 μg Ag85A DNA：（1.39±0.84）％;50 μg Ag85A DNA：（1.55±0.33）％;100 μg Ag85A DNA：（2.13±0.47）％]和DNA电转染组[10 μg Ag85A DNA：（1.42±0.47）％; 50 μg Ag85A DNA：（1.88±0.51）％; 100 μg Ag85ADNA：（1.43±0.68）％]均高于生理盐水组[（0.65±0.31）％]（t值分别为2.002、2.431、4.015、2.084、3.332和2.105,P值均＜0.05）,但不同剂量Ag85A DNA电转染组与肌内注射组之间差异均无统计学意义（t值分别为0.081、0.901和-1.91,P值均＞0.05）.小鼠PBMC分泌IL-4的Th2细胞百分比,不同剂量Ag85A DNA肌内注射组[10 μg Ag85A DNA：（1.42±1.18）％; 50 μg Ag85A DNA：（1.14±0.78）％; 100 μg Ag85A DNA：（1.24±0.76）％]和DNA电转染组[10 μg Ag85A DNA：（1.19±1.09）％; 50 μg Ag85A DNA：（2.06±0.96）％;100 μgAg85A DNA：（1.47±0.65）％]均显著低于生理盐水电转染组[（4.14±2.55）％]（t值分别为-3.392、-3.738、-3.616、-3.676、-2.599和-3.325,P值均＜0.05）,但不同剂量DNA肌内注射组与DNA电转染组之间差异无统计学意义（t值分别为0.284、-1.139和-0.292,P值均＞0.05）.结论 DNA电转染免疫可以增强低剂量DNA疫苗的免疫应答,使用少量的DNA疫苗就可以产生较好的免疫效果.     

重组人γ-干扰素雾化吸入辅助治疗耐多药结核病的近期疗效观察

目的观察和评价重组人γ-干扰素(IFN-γ)辅助治疗耐多药结核病（MDR-TB）的疗效。方法将60例MDR-TB患者采用计算机随机分组方法分为治疗组、对照组各30例。采用3SpPaZETH/9SPPE方案治疗（Sp：司帕沙星,Pa：力克菲蒺,Z：吡嗪酰胺,E：乙胺丁醇,TH：丙硫异烟胺）,治疗组在加强期加用IFN-γ雾化吸入2个月。结果共有57例患者完成疗程。治疗组28例,痰菌阴转率82.1%,对照组29例, 痰菌阴转率58.6%(P<0.05),治疗组病灶显效率92.9%,优于对照组(P<0.01)。治疗组治疗3个月时CD4、CD4/CD8较对照组提高(P<0.05)。IFN-γ雾化吸入无严重不良反应。结论重组人γ-干扰素可辅助治疗耐多药结核病,是一种安全、可靠的生物制剂。