重组人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体蛋白(rhTRAIL) 逆转人肺腺癌细胞A549/ CDDP耐顺铂效应的初步研究

 目的 探讨重组人可溶性肿瘤坏死因子相关诱导配体蛋白(rhTRAIL)对人肺腺癌细胞A549／CDDP耐顺铂的逆转效应。方法 以顺铂(CDDP)联合不同浓度的rhTRAIL处理A549／CDDP，以四氮唑噻蓝盐(MTT)比色法检测顺铂的半效抑制浓度IC50并计算耐药逆转倍数RI。结果 rhTRAIL体外可明显降低A549／CDDP对CDDP的IC50提高耐药逆转倍数。结论 rhTRAIL体外可较大程度逆转A549／CDDP细胞对CDDP的耐药性，有望成为抗耐药性肺癌的一种新的生物制剂。     

A549/CDDP多药耐药细胞系的建立

建立多药耐药细胞系是体外研究肿瘤多药耐药性的基础。顺铂 (cisplatin ,CDDP)是肺癌化疗的基础药物之一 ,然而 ,在临床应用中 ,多数患者经初始化疗缓解后 ,肺癌细胞对顺铂产生了耐药性 ,影响了治疗效果 ,为探讨肺癌细胞对顺铂产生耐药性的机制 ,本实验以顺铂为诱导药物 ,人肺腺癌细胞系A549为诱导对象 ,采用大剂量冲击与逐步增加剂量相结合的方法 ,诱导建立人肺腺癌多药耐药细胞系。材料和方法一　试剂　顺铂为昆明三戍贵金属药业有限公司产品 ,丝裂霉素 (mitomycin)为浙江海正药业有限股份公司产品、多柔比星 (doxorubicin)深圳万乐药业…     

P型铜转运ATP酶(ATP7B)在肺腺癌细胞株A549中的表达与顺铂耐药的关系

背景与目的 顺铂作为肺癌的基础化疗药物,顺铂耐药是导致肺癌患者化疗失败的重要原因.本实验通过检测P型铜转运ATP酶在肺腺癌细胞A549不同水平耐药株中的表达,以评估ATP7B与A549细胞顺铂耐药的关系.方法采用逐步增加顺铂剂量的方法,诱导出3株不同水平耐顺铂A549细胞株A549/DDP0.5、A549/DDP1.0、A549/DDP2.0,MTT方法检测各组别细胞对顺铂敏感性,应用RT-PCR及Western Blot方法分别检测各组别细胞的ATP7B的mRNA及蛋白表达水平,分析A549细胞顺铂敏感性与ATP7B表达水平的关系.结果相对于亲本A549细胞,3组耐药细胞的顺铂耐药指数分别达到了1.7、3.2、5.2(P＜0.001),与此相对应ATP7B的mRNA表达水平分别达到了亲本A549细胞的1.6、4.9、10.1倍(P＜0.001),同样地ATP7B的蛋白表达水平也呈现出与顺铂耐药性相平行的递增性高表达.结论肺腺癌细胞A549的顺铂耐药与细胞ATP7B高表达有关,后者的高表达有可能促成了A549细胞的获得性顺铂耐药.     

人肺腺癌A549及A549/DDP细胞株差异蛋白质组学分析

 目的 比较人肺腺癌细胞株A549和耐顺铂株A549/DDP细胞的蛋白表达谱,筛选肺癌耐药相关蛋白,为 阐明肿瘤细胞的耐药提供新线索。 方法 对两种细胞株进行比较蛋白质组学研究,利用双向凝胶电泳技术（2-DE）分离细胞总蛋白,经 图像分析软件分析、基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）鉴定差异蛋白质点 ,并用免疫细胞化学（ICC）对部分差异蛋白进行验证。 结果 获得分辨率高、重复性好 的A549、A549/DDP总蛋白图谱,初步筛选出差异蛋白质点,经质谱分析及数据库检索,鉴定出 13种差异表达蛋白质,这些蛋白与细胞代谢、结构、解毒和DAN修复、以及信号转导等相关。 结论 A549、A549/DDP细胞株存在差异表达蛋白质点,提示这些蛋白可能与A549细胞耐顺铂相关,为 研究肺癌耐药提供依据。     

RNA干扰GRP75表达改善人肺腺癌细胞对顺铂耐药性

背景与目的 GRP75(glucose regulated protein75)属于热休克蛋白(hot shock protein,HSP)家族,是一种主要位于线粒体的分子伴侣,在某些耐药的肿瘤细胞中高表达。本研究通过慢病毒介导的RNA干扰技术沉默GRP75基因的表达,观察下调GRP75的表达对肿瘤细胞耐药性的影响并探讨GRP75在肿瘤细胞耐药机制中的作用。方法以顺铂为诱导药物,人肺腺癌细胞系A549为诱导对象,采用逐步增加剂量与大剂量冲击相结合的方法,诱导建立耐顺铂细胞株A549/CDDP。分别将包裹GRP75-shRNA和不含干扰序列的慢病毒转染A549和A549/CDDP细胞,在荧光显微镜下观察各组细胞转染率,应用M比色法检测干扰前后各组细胞对顺铂的敏感性,应用Western blot检测干扰前后各组细胞GRP75、p53、bcl-2的表达。结果各组细胞感染效率均在90%以上,转染后A549/CDDP和A549细胞中GRP75的表达均明显下调(P<0.05)。转染前后A549/CDDP细胞对顺铂的耐药指数分别为21.52和4.14。转染后A549/CDDP细胞内p53的表达上调(P<0.05),bcl-2表达下调(P<0.05)。结论 GRP75是A549细胞对顺铂耐药机制的相关蛋白之一,其在耐药机制中的作用与其对p53和bcl-2的调控有关。     

SOX4对非小细胞肺癌细胞A549的顺铂耐药作用的影响

背景与目的 肺癌是最严重的恶性肿瘤之一,其中非小细胞肺癌发病率在肺癌中居首位.部分患者对顺铂耐受是导致化疗失败的主要原因.SOX4是转录调节因子,在多种肿瘤的发生发展过程中发挥着重要的作用,通过调控β-catenin的表达对Wnt信号通路进行调控.本研究旨在探讨SOX4对非小细胞肺癌细胞A549的顺铂耐药作用的影响.方法 体外诱导法建立顺铂耐药的肺癌细胞株A549/DDP,CCK8法检测A549及A549/DDP细胞对顺铂的耐药性.绘制A549与A549/DDP细胞生长曲线.Western blot检测耐药细胞株中SOX4的蛋白表达水平.CCK8法检测敲减SOX4后耐药细胞株A549/DDP对顺铂耐药性.实时定量PCR和免疫印迹法检测敲减SOX4后A549/DPP细胞中β-catenin和Survivin蛋白的表达.结果 成功构建非小细胞肺癌顺铂耐药细胞株A549/DDP,其耐药性是亲本细胞的13.7倍,差异有统计学意义(P<0.001).生长曲线显示耐药细胞株与亲本细胞增殖速度没有统计学差异(P<0.05);与A549细胞相比,耐药细胞A549/DDP细胞中SOX4的表达显著增高(P<0.001).敲减SOX4后,A549/DDP细胞的耐药性显著降低;敲减SOX4后,A549/DDP细胞中β-catenin和Survivin的mRNA和蛋白表达水平显著降低.结论 SOX4的表达水平影响非小细胞肺癌细胞A549对顺铂的耐药性.     

双氢青蒿素和顺铂诱导人肺腺癌A549/CDDP 细胞凋亡

目的:观察双氢青蒿素和顺铂在体外对A549/CDDP细胞的作用,分析双氢青蒿素逆转耐药效果,从诱导细胞凋亡角度分析可能的作用机理。方法:A549/CDDP细胞分为双氢青蒿素作用组和顺铂对照组,顺铂对细胞增殖抑制实验采用MTT检测法,用annexin-V和PI双标记进行流式细胞检测分析细胞凋亡率。双氢青蒿素对细胞Bcl-2,Bax等蛋白的影响采用免疫组织化学法结合图像分析。结果:对人肺腺癌A549/CDDP细胞双氢青蒿素作用组和顺铂对照组IC50值分别为1.30μg/ml和5.58μg/ml,两组比较差异显著(P<0.01),逆转倍数4.29。对A549/CDDP细胞,双氢青蒿素作用组和对照组凋亡率分别为17.6%和1.6%两组比较差异显著(P<0.01)。双氢青蒿素作用于A549/CDDP细胞后,Bcl-2蛋白表达下降,Bax蛋白表达上升。结论:A549/CDDP细胞耐药作用与凋亡耐受有关,双氢青蒿素可使A549/CDDP细胞恢复对顺铂的敏感性,通过解除凋亡抑制从而逆转耐药。     

双氢青蒿素和顺铂诱导人肺腺癌A549/CDDP细胞凋亡

目的：观察双氢青蒿素和顺铂在体外对A549/CDDP细胞的作用,分析双氢青蒿素逆转耐药效果,从诱导细胞凋亡角度分析可能的作用机理。方法：A549/CDDP细胞分为双氢青蒿素作用组和顺铂对照组,顺铂对细胞增殖抑制实验采用MTT检测法,用annexin-V和PI双标记进行流式细胞检测分析细胞凋亡率。双氢青蒿素对细胞Bcl-2,Bax等蛋白的影响采用免疫组织化学法结合图像分析。结果：对人肺腺癌A549/CDDP细胞双氢青蒿素作用组和顺铂对照组IC50值分别为1.30μg/ml和5.58μg/ml,两组比较差异显著（P〈0.01）,逆转倍数4.29。对A549/CDDP细胞,双氢青蒿素作用组和对照组凋亡率分别为17.6%和1.6%两组比较差异显著（P〈0.01）。双氢青蒿素作用于A549/CDDP细胞后,Bcl-2蛋白表达下降,Bax蛋白表达上升。结论：A549/CDDP细胞耐药作用与凋亡耐受有关,双氢青蒿素可使A549/CDDP细胞恢复对顺铂的敏感性,通过解除凋亡抑制从而逆转耐药。     

不同温度热疗逆转人肺癌细胞A549/CDDP耐药性的研究

目的 探讨不同温度的热疗对人肺腺癌细胞A549/CDDP耐药逆转作用及可能机制.方法 采用体外细胞培养技术,培养人肺腺癌细胞系A549及其耐药株A549/CDDP.设计不同温度(37、40、41、42、43℃)热疗2 h,联合2μg/mL CDDP处理A549/CDDP细胞,检测其对化疗药物CDDP的敏感性,流式细胞仪间接免疫荧光法检测CDDP、热疗处理前后细胞中P-糖蛋白(P-gp)的表达及细胞内荧光药物CDDP的聚集量.结果 A549/CDDP细胞抑制率在39-42℃范围内随热疗的温度升高而升高,42℃时最高(P<0.05).热疗合用顺铂时,A549/CDDP细胞P-gP表达下降,胞浆内CDDP荧光强度增强.结论 热疗能部分逆转人肺腺癌细胞A549/CDDP的耐药效应,其机制可能与抑制P-gP表达,增加细胞内化疗药物积聚有关.     

GRP78在肺腺癌细胞顺铂耐药中的作用

背景与目的糖调节蛋白78(GRP78)在肺癌细胞中表达增高并与其对化疗药物VP-16的耐药性有关,而GRP78的表达与其对化疗药物顺铂的耐药性是否相关,研究较少。本研究旨在通过检测GRP78在人肺腺癌细胞SPCA-1中的表达及顺铂作用后的细胞生存率,研究GRP78在肺腺癌细胞顺铂耐药中的作用。方法依据是否应用诱导剂A23187将细胞分为实验组和对照组,采用RT-PCR、Western blot方法检测各组细胞中GRP78在核酸和蛋白水平的表达,利用MTT法测定细胞在顺铂作用下的生存率,分析GRP78在SPCA-1细胞顺铂耐药中的作用。结果A23187可以明显诱导SPCA-1细胞中GRP78在核酸和蛋白水平的表达,且其表达水平与A23187具有一定的浓度依赖性,MTT检测显示:实验组细胞生存率明显低于对照组,亦呈一定的A23187浓度依赖性。结论在人肺腺癌细胞SPCA-1中,诱导剂A23187可以诱导GRP78核酸和蛋白水平的表达,其表达与肺癌细胞在顺铂作用下的生存率呈负相关,表明GRP78可提高SPCA-1细胞对顺铂的敏感性,与肺癌细胞化疗耐药有一定的相关性。