IFN-γ诱导胰腺癌细胞IDO表达及活性的变化

目的：观察胰腺癌细胞株Panc02在不同浓度γ干扰素（IFN-γ）作用下吲哚胺2,3-双加氧酶（IDO）表达及活性的变化。方法：分别用不同浓度的IFN-γ诱导刺激胰腺癌细胞株Panc02,检测各组Panc02中IDO表达水平的变化,高压液相测定培养液上清中犬尿氨酸的浓度来评价IDO的分子活性。结果：不同浓度IFN-γ诱导Panc02的IDO蛋白表达量分别为0.401±0.116、0.628±0.109、0.728±0.146、1.088±0.183,不同浓度组间差异有统计学意义（P〈0.05）;不同浓度IFN-γ刺激Panc02后细胞培养液上清中犬尿氨酸的浓度分别为5.609±1.123、6.279±0.717、9.152±2.920、11.866±1.596,不同浓度组间差异有统计学意义（P〈0.05）。而且Panc02中的IDO蛋白的相对表达量随着IFN-γ作用浓度的增大逐渐增高,同时活性增强。结论：胰腺癌细胞株Panc02本身表达IDO,在IFN-γ诱导下表达上调且活性增强,这可能是引起胰腺癌免疫逃逸的重要机制之一。     

哈萨克族食管癌患者外周血吲哚胺2,3双加氧酶与调节性T细胞的相关性

目的探讨外周血吲哚胺2,3双加氧酶(IDO)与调节性T细胞(Treg)的相关性及与新疆哈萨克族食管癌的关系。方法 RT-PCR法检测43例哈萨克族食管癌患者及20例健康体检者血清IDO mRNA表达水平,流式细胞术检测两组Treg比例。结果哈萨克族食管癌患者外周血中IDO、Treg的表达分别为(1.802±0.518)×103、(7.294±1.797)%,高于健康体检者[(0.147±0.020)×103、(5.732±1.147)%],差异有统计学意义(P<0.05);哈萨克族食管癌患者外周血IDO与Treg呈正相关(r=0.587,P<0.05)。结论新疆哈萨克族食管癌患者外周血中存在Treg比例升高及IDO高表达,IDO可能通过调节Treg促进食管癌的发生,针对IDO的靶向治疗有望为临床食管癌免疫治疗提供新的思路。     

IDO基因稳定转染HepG2细胞系的建立

目的建立稳定转染IDO基因的HepG2细胞系,为进一步研究IDO基因在肝癌免疫逃逸中的作用奠定基础。方法应用脂质体将真核细胞表达质粒pcDNA3.1-IDO和空载质粒pcDNA3.1转染入HepG2细胞,经G418进行筛选后,挑取单克隆进行培养,用反转录酶聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot方法验证获得的表达细胞株。结果经RT-PCR和Western blotting检测证实空质粒转染组和空白对照组HepG2细胞无IDO基因及蛋白的表达,而重组质粒组的HepG2细胞表达IDO基因和蛋白。结论 pcDNA3.1-IDO质粒体外稳定转染人肝癌细胞HepG2,可以有效地使IDO基因在RNA水平和蛋白水平均表达,成功建立了稳定转染基因IDO的HepG2细胞系,为进一步探讨该基因的功能奠定了一定基础。     

IDO和FoxP3表达与宫颈癌发生和病理进程的相关性

目的 探讨吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)和FoxP3表达与宫颈癌发生和病理进程的相关性.方法 随机选取2002-2007年在仁济医院妇产科手术治疗的患者标本,包括宫颈上皮内瘤变(CIN)I～Ⅱ级20例(CIN I～Ⅱ级组),CINⅢ级20例(CINⅢ级组),宫颈癌60例(宫颈癌组),因子宫肌瘤接受全子宫切除术且术后病理明确为子宫肌瘤的标本20例(对照组),采用免疫组织化学染色检测IDO、FoxP3在CIN及宫颈癌原发灶中的表达.随访宫颈癌组标本中IDO和FoxP3表达与临床病理学参数及患者生存状态的相关性.结果 宫颈癌组标本的IDO和FoxP3阳性表达明显高于对照组和CIN组(P＜0.01).在宫颈癌组,IDO的阳性表达与宫颈癌的FIGO分期和组织学分级均相关(P＜0.05),而FoxP3的阳性表达与FIGO分期相关(P＜0.05);IDO和FoxP3在复发与死亡组中的阳性表达率高于生存组,但两者间差异无统计学意义(P＞0.05).结论 宫颈癌局部lDO和FoxP3的表达升高与肿瘤的发生和发展关系密切,两者既可作为宫颈癌的筛查、术前疾病评估和术后随访的辅助指标,也为临床靶向干预提供了理论依据.     

IDO基因转染小鼠树突状细胞体外诱导Treg细胞增殖的研究

目的调节性T细胞(Treg)在肿瘤局部免疫耐受中发挥了重要作用,但其产生机制尚不清楚。本实验通过将吲哚胺-2,3-双加氧酶(IDO)基因转染小鼠树突状细胞(DC),体外研究对Treg细胞的诱导增殖作用,为肺癌免疫耐受产生机制研究提供新的依据。方法采用慢病毒转染技术,将含人全长IDO基因转染到小鼠DC细胞,G418筛选获得IDO-DC细胞,同时设置空白对照组(DC细胞)及空质粒转染组(EGFP-DC细胞),将3种细胞分别与小鼠T淋巴细胞混合培养,利用流式细胞技术分析3种细胞对Treg细胞的诱导增殖作用。结果 IDO基因成功转染到小鼠DC细胞,与小鼠T淋巴细胞共培养后,Treg细胞增殖明显,和EGFP-DC细胞(7.5%vs 3.6%,P<0.05)及DC细胞(7.5%vs 3.1%,P<0.05)相比差异显著。结论 IDO基因转染小鼠DC细胞在体外能明显增强Treg细胞的增殖,为肺癌局部免疫耐受机制研究提供了新的实验依据。     

鲁北地区60例大肠癌组织中IDO的表达及临床意义

目的分析大肠癌组织中吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)的表达及临床意义。方法选择2009年6月至2010年5月滨州医学院附属医院经病理科诊断为大肠癌的成套石蜡组织标本60例,通过免疫组织化学法检测IDO的表达情况,分析IDO的表达与临床病理特征间的关系。结果 IDO在大肠癌原发灶、癌旁正常组织、有淋巴结转移灶及无淋巴结转移淋巴结中的IDO高表达率分别为75.0%、18.3%、35.3%、50.0%。原发灶中IDO的表达强度与N分期、Dukes分期、p53表达有关(P<0.05)。Spearman相关性分析结果显示,大肠癌原发灶中IDO和p53表达具有显著的正相关性(rs=0.352,P=0.006)。结论 IDO在大肠癌组织中表达明显上调,与肿瘤分期密切相关,可作为判断大肠癌预后的一个指标。IDO和p53的表达关系密切,两者可能共同参与大肠癌的发生、发展。     

吲哚胺2,3-双加氧酶1抑制剂的研究进展

吲哚胺2,3-双加氧酶1(indoleamine 2,3-dioxygenase 1,IDO1)是介导色氨酸沿犬尿氨酸途径分解代谢的限速酶。IDO1在肿瘤细胞和抗原呈递细胞(antigen presenting cells,APC)中存在过度表达现象,通过色氨酸的消耗及其代谢产物的聚积抑制局部免疫应答,使肿瘤细胞逃避免疫系统的监测,这与多数肿瘤治疗的不良预后有关。因此,IDO1是肿瘤免疫疗法的重要靶点。目前有多种骨架的IDO1抑制剂正在研究当中,其中3个已经进入了临床研究阶段。本文介绍了IDO1在肿瘤免疫耐受中的作用,并按结构分类,综述了IDO1抑制剂的研究进展。     

吲哚胺-2,3-双加氧酶在非小细胞肺癌中的表达

目的 探讨吲哚胺-2,3-双加氧酶(indoleamine-2,3-dioxygenase,IDO)在非小细胞肺癌中的表达及意义.方法 收集38例非小细胞肺癌组织和10例癌旁正常肺组织.用半定量免疫组织化学方法 检测肺组织中IDO蛋白阳性率,实时荧光定量PCR检测肺组织中IDO mRNA表达水平.结果肺癌组IDO蛋白阳性率和IDO mRNA表达水平均明显高于对照组,差异均具有统计学意义(均P＜0.05);而肺癌组按不同病理分型中,腺癌组和鳞癌组比较差异无统计学意义(P＞0.05).肺癌组按不同分化程度分为高、中、低3组,经统计学分析,3组中IDO阳性表达率和IDO mRNA表达水平差异均有统计学意义(均P＜0.05).肺癌组按有和无淋巴结转移分组比较,IDO蛋白阳性率和IDO mRNA表达水平差异也均有统计学意义(均P＜0.05).结论 IDO在非小细胞肺癌中呈高表达,与分化程度及有无淋巴结转移有关,但与肺癌病理分型无关.     

IDO基因转染对裸鼠体内宫颈癌种植瘤生长的影响

 目的 通过建立裸鼠皮下肿瘤生长模型,研究吲哚胺2,3-双加氧酶（IDO）在裸鼠体内对人宫颈癌细胞的生长促进作用。方法 IDO基因表达质粒和空白质粒分别稳定转染至人宫颈癌SiHa细胞。应用Western blot检测IDO在SiHa、SiHa/Mock 和SiHa/IDO细胞中的表达情况,用MTT试剂盒检测3种肿瘤细胞体外生长速度。种植3种肿瘤细胞至裸鼠皮下,比较其在裸鼠体内的生长速度。结果 IDO蛋白在SiHa/IDO细胞中表达阳性,在SiHa和SiHa/Mock细胞中无表达。3种肿瘤细胞体外生长曲线无统计学差异（P＞0.05）。3周后接种SiHa/IDO细胞的肿瘤与接种SiHa和SiHa/Mock细胞的肿瘤相比生长迅速,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 IDO可作为宫颈癌评价预后的指标之一,也可能是宫颈癌基因治疗潜在的靶点。     

IDO与Treg在支气管哮喘小鼠中的相互作用及其意义

目的 探讨吲哚胺2,3双加氧酶(indoleamine 2,3-dioxygense,IDO)与CD4+ CD25+ Foxp3+调节性T细胞(Treg)之间的相关性及在支气管哮喘发病机制中的作用.方法 BALB/c小鼠用随机数字表法分成对照组和哮喘组,每组8只.哮喘组以鸡卵清蛋白(ovalbumin,OVA)致敏,激发小鼠建立哮喘模型,无创肺功能仪检测气道反应性,支气管肺泡灌洗液(BALF)进行细胞学分析,ELISA检测BALF中INF-y、IL-4、IL-10浓度,实时荧光定量PCR检测肺组织IDO和Foxp3 mRNA表达,免疫组织化学方法检测IDO蛋白表达,流式细胞仪检测Treg占CD4+细胞的百分率.结果 哮喘组小鼠气道反应性、BALF中细胞总数、嗜酸性粒细胞比例及IL-4浓度明显高于对照组(P＜0.01);而INF-γ与IL-10浓度、IDO和Foxp3的mRNA表达、IDO蛋白表达、Treg占CD4+细胞的百分率明显低于对照组(P＜0.01);对照组与哮喘组IDO与Foxp3的mRNA表达呈正相关(r=0.819,r=0.807,P＜0.05),对照组与哮喘组IDO蛋白表达与Treg占CD4+细胞的百分率呈正相关(r =0.783,r=0.765,P＜0.05).结论 哮喘小鼠IDO和Foxp3表达降低,Treg数量减少,且IDO蛋白表达与Treg占CD4+细胞的百分率呈正相关,表明IDO与Treg相互调节,打破免疫耐受,诱导哮喘发生.     

EBP1在新疆哈萨克族食管鳞癌中的表达及临床病理学意义

目的探讨新疆哈萨克族食管鳞癌中EBP1mRNA的表达情况及其与临床病理学特征的关系。方法利用RT-PCR技术检测37例哈萨克族食管鳞癌组织及其对应的癌旁正常食管上皮组织中EBP1mRNA的表达情况。结果 EBP1mRNA在新疆哈萨克族食管鳞癌组织和正常组织中的阳性表达率分别为67.6%(25/37)和89.2%(33/37),差异有统计学意义(P<0.05);EBP1mRNA的表达与TNM分期及淋巴结转移相关(P<0.05)。结论 EBP1mRNA表达缺失参与了哈萨克族食管鳞癌的发生及发展。     

凋亡抑制基因livin在食管癌中的表达

目的:探讨凋亡抑制蛋白livin在食管癌组织中的表达及其与食管癌临床病理的相关性。方法:采用RT-PCR结合银染技术检测食管癌组织中livin-α mRNA和livin-β mRNA的表达。结果:36例食管癌组织中livin表达阳性率为50%,其表达与癌组织浸润深度和淋巴结转移有关(P<0.05),而与癌组织分化程度无关(P>0.05)。18例癌旁正常食管组织中livin低表达,阳性率为5.6%,与食管癌组织比较差异十分显著(P<0.01)。结论:livin在食管癌组织中异常表达,有望成为食管癌诊断和基因治疗的新靶点。     

非小细胞肺癌患者外周血LUNX mRNA表达及临床意义

目的：通过检测非小细胞肺癌（NSCLC）患者化疗前后外周血中肺特异性X蛋白（LUNX）mRNA的表达,探讨其对NSCLC微转移的诊断价值。方法：采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法,对54例NSCLC患者化疗前后、非肺癌恶性肿瘤患者36例、肺良性疾病患者16例及健康志愿者15例的外周血进行LUNX mRNA检测。结果：54例NSCLC患者化疗前后外周血LUNX mRNA的阳性表达率分别是48.1%（26/54）和25.9%（14/54）,差异比较有统计学意义（P〈0.05）;非肺癌恶性肿瘤患者、肺良性疾病患者及健康志愿者外周血LUNX mRNA的阳性表达率均为0,与NSCLC组比较均有统计学意义（P〈0.01）;LUNX mRNA的阳性表达率在化疗前后均随TNM分期增加而升高（P〈0.05）,与患者年龄、性别、病理类型及分化程度无明显相关性（P〉0.05）;NSCLC外周血LUNX mRNA表达与化疗近期疗效无关（P〉0.05）。结论：LUNX mRNA是一种检测NSCLC外周血微转移较好的特异性标志物;化疗后NSCLC外周血LUNX mRNA的表达比化疗前显著降低,表明有效化疗可消灭NSCLC患者的微转移癌细胞。     

UHRF1基因在食管癌中的表达和意义

目的研究UHRF1基因在食管癌组织及癌旁正常组织中的表达及临床意义。方法对62例食管癌组织及癌旁正常组织应用半定量反转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测其中UHRF1 mRNA表达水平;应用Westemblot法检测62例食管癌组织及对应癌旁正常组织中UHRF1蛋白的表达;同时分析UHRF1的表达与患者临床病理特征之间的关系。结果食管癌组织中UHRF1 mRNA的表达水平显著高于正常组织（P〈0.01）;Westemb10t结果显示在70.9%（44/62）的食管癌组织中UHRF1蛋白表达较癌旁正常组织高（P〈0.001）;统计分析结果发现,UHRF1蛋白及mRNA的表达与食管癌患者的淋巴结转移、浸润深度等均无显著性相关（P〉0.05）,而与食管癌的分化程度呈负相关（r=-0.176,P〈0.05）,分化程度越低者UHRF1表达越高,各不同分化组间UHRF1表达差异具有统计学意义（P=0.001）,UHRF1高表达患者的五年生存率较差。结论 UHRF1在食管癌组织中的表达量显著升高,而且与食管癌分化程度和患者预后相关,可能成为判断食管癌及预后的重要分子生物标志。     

宫颈癌中白细胞介素-10mRNA的表达及其临床意义

目的检测宫颈癌组织及癌旁组织中白细胞介素10(IL-10)mRNA的表达,分析其表达与临床特征的关系。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应检测52例宫颈癌组织及癌旁组织中IL-10 mRNA的表达,分析其表达与年龄、临床分期及分化程度等临床特征的关系。结果 IL-10 mRNA在宫颈癌组织中的表达显著高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05)。IL-10 mRNA在宫颈癌中的表达与年龄、临床分期和分化程度等临床特征无相关性(P>0.05)。结论 IL-10 mRNA在宫颈癌组织中呈明显高表达,提示其与宫颈癌的发生和发展密切相关。     

miRNA-205在食管鳞状细胞癌患者组织中的表达及临床意义

目的 探讨miRNA-205在食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)患者组织中的表达情况.方法 收集56例经病理确诊的ESCC患者的手术切除组织(癌组织及其癌旁组织),采用实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测miRNA-205的表达,并分析miRNA-205在不同临床病理资料之间的差异.结果 ESCC患者组织中miRNA-205相对表达量为1.475(0.444～5.478),显著高于癌旁组织(Z=-3.067,P=0.002);miRNA-205在不同TNM分期ESCC患者组织中存在差异,TNM分期越高,miRNA-205表达量越高,差异具有统计学意义(F=36.335,P＜0.001);miRNA-205在淋巴结转移阴性/阳性组织中存在差异,淋巴结转移阳性组miRNA-205表达量显著高于淋巴结转移阴性组(Z=-3.353,P=0.001).结论 miRNA-205在ESCC患者癌组织中表达升高,并可能参与ESCC的发生与发展.     

肺癌患者外周血CK19 mRNA和CEA mRNA表达的检测及临床意义

目的探讨CK19 mRNA、CEA mRNA能否作为判断肺癌血源性微转移的参考指标.方法取67例肺癌患者及37例健康体检者外周血,应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测上述两个指标的表达.结果肺癌组外周血中CK19 mRNA阳性率(57.6%)及CEA mRNA阳性率(52.2%)均显著高于健康对照组的2.7%和5.4%(均P＜0.01),两个指标联合检测能将对肺癌微转移诊断的灵敏度提高至76.1%;CK19 mRNA的表达与临床分期相关(P＜0.01),CEA mRNA的表达与组织类型相关(P＜0.05).结论 CK19 mRNA和CEAmRNA可作为判断肺癌血源性微转移的参考指标,两者联检可提高诊断价值.     

乳腺癌组织中ADAM8 mRNA的表达及意义

目的:探讨解整合素-金属蛋白酶8(ADAM8)mRNA在乳腺癌组织及正常乳腺组织中的表达量变化及其在乳腺癌发生、发展中的作用。方法:采用荧光定量逆转录聚合酶链反应(QRT-PCR)检测39例乳腺癌及19例正常乳腺组织中ADAM8 mRNA的表达,分析ADAM8 mRNA表达量与乳腺癌临床病理因素的关系。结果:39例乳腺癌组织中的ADAM8 mRNA表达水平低于19例正常乳腺组织(P=0.015);淋巴结转移组表达水平低于无转移组,Ⅱb+Ⅲ期表达水平低于Ⅰ+Ⅱa期,但表达差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:ADAM8 mRNA在乳腺癌中表达下调,提示ADAM8基因表达抑制或缺失可能与乳腺癌的发生发展有关。     

FEZ1基因在食管鳞癌组织中的表达及其意义

目的 探讨肿瘤抑制基因FEZ1在食管鳞癌组织中的表达及其意义.方法 采用RT-PCR法检测50例食管鳞癌及及50例正常食管组织中FEZ1 mRNA的表达情况,分析其与食管鳞癌患者各临床病理指标的关系.结果 FEZ1 mRNA在食管鳞癌组织中的阳性表达率(48.0%)及表达水平(0.994±0.094)均显著低于正常食管组织(84.0%,1.071±0.181),并且其在食管鳞癌组织中的阳性表达率及表达水平与淋巴结转移密切相关(P＜0.05).结论 在食管鳞癌组织中存在FEZ1基因的失表达,并且这种表达与食管鳞癌的淋巴结转移有关.     

有、无淋巴结转移食管癌患者外周血中淋巴细胞肝素酶基因表达比较

目的 :比较有、无淋巴结转移食管癌患者手术前、后外周血中淋巴细胞肝素酶基因表达水平。方法 :采用逆转录聚合酶链反应技术对 2 1例有淋巴结转移、33例无淋巴结转移的食管癌患者手术前、后外周血及 7例正常人外周血中淋巴细胞肝素酶表达水平进行检测。结果 :2 1例淋巴结转移患者 1 9例肝素酶基因阳性表达 ,33例无淋巴结转移的食管癌患者 1 0例肝素酶基因阳性表达。 1 9例有淋巴结转移的肝素酶基因阳性食管癌患者手术前、后外周血中淋巴细胞肝素酶基因表达水平 (9.91± 2 .4 8,9.33± 2 .2 5 )高于 1 0例未发生淋巴结转移的肝素酶基因表达水平 (8.98±2 .0 1 ,8.87± 1 .97) (P <0 .0 1 ) ;而手术前后外周血中淋巴细胞肝素酶基因表达水平差异无统计学意义 (P >0 .0 5 )。 7例正常人外周血中淋巴细胞肝素酶均呈阴性表达。结论 :食管癌患者外周血中淋巴细胞肝素酶基因表达水平与食管癌淋巴结转移有关 ,对食管癌患者外周血中此基因表达水平的检测可能成为预测其转移与否的指标