18S rDNA的PCR扩增技术在棘阿米巴角膜炎临床诊断中的应用

目的:探讨利用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)技术扩增棘阿米巴18S rDNA在角膜炎早期临床诊断应用中的可行性。方法:以18S rDNA为模板,利用特异性引物JDP1-JDP2配合PCR技术来检测临床标本中的棘阿米巴原虫。结果:在临床拟诊为棘阿米巴角膜炎的16例(16眼)中,通过PCR检测法有12眼证实为棘阿米巴原虫感染,同时100g/L KOH角膜刮片后镜检有5例发现了棘阿米巴包囊。两种诊断方法用Fisher确切概率法统计,P<0.05。结论:18S rDNA PCR技术对正确诊断早期棘阿米巴角膜炎有重要的临床应用价值。     

聚合酶链反应快速诊断棘阿米巴角膜炎的研究

目的:探讨聚合酶链反应(PCR)技术快速诊断棘阿米巴角膜炎的价值。方法:建立棘阿米巴标准虫株的PCR检测方法,并应用于临床检测24例角膜刮片标本,结果与原虫培养及100g/L氢氧化钾湿封片镜检做比较。结果:PCR5h可检测出标本中微量棘阿米巴原虫,对照细菌、真菌、I型单纯疱疹病毒、正常人角膜均为阴性。临床标本PCR敏感性为46%,明显高于原虫培养与100g/L氢氧化钾湿封片镜检(P<0.05)。结论:PCR速度快、敏感性和特异性高,有助于棘阿米巴角膜炎的快速明确诊断。     

棘阿米巴角膜炎的实验室检查和临床诊断

目的：为了解棘阿米巴角膜炎的临床病程特征,采用简便实用的实验室检查方法对棘阿米巴角膜炎进行病因诊断。方法：对棘阿米巴角膜炎患者13例（13只眼）各病程阶段的特征性眼表现,通过角膜刮片材料镜检,阿米巴分离培养及角膜病理确诊。结果：与戴角膜接触镜有关者4例,非角膜接触镜配戴者9例,10％KOH湿封片镜检诊断阳性率81．25％,棘阿米巴培养阳性率56．25％,角膜病检阿米巴阳性率68．75％,结论：本病并非罕见,除载接触镜外,许多因素可接触感染,10％KOH湿封片可对棘阿米巴角膜炎作初步诊断,最后诊断须经原虫培养获得,角膜病理切片可进一步证实原虫培养的结果。     

棘阿米巴性角膜炎的临床特点及诊断

目的 分析、总结棘阿米巴性角膜炎的临床特点及各种病原学检查阳性率比较.方法 回顾分析2002年至2011年因棘阿米巴性角膜炎在山东省眼科研究所收集患者的临床资料.结果 10 a间因棘阿米巴性角膜炎在山东省眼科研究所治疗的患者共30例(30眼),均为单眼患病;其中男20眼,女10眼.所有患者(30眼)均因眼红、痛、视力下降就诊;其中28眼(93.3％)首次就诊我院时即诊为棘阿米巴性角膜炎,2眼(6.7％)误诊为病毒性角膜炎,1周后因治疗效果不佳,再次查找病原学病因才确诊为棘阿米巴角膜炎.所有患眼中,23眼(76.7％)有角膜环形基质浸润,5眼(16.7％)伴剧烈疼痛,4眼(13.3％)伴放射状角膜神经炎.所有患者均通过病原学诊断确诊为棘阿米巴性角膜炎,其中27眼(90.0％)经角膜刮片生理盐水湿片检查查见棘阿米巴包囊;17眼(56.7％)经角膜刮片棘阿米巴原虫培养阳性;行共焦显微镜检查的25眼中,22眼(88.0％)共焦显微镜下查见棘阿米巴包囊.结论 角膜环形基质浸润是棘阿米巴性角膜炎的特征性体征.根据病史、体征及相关病原学检查,绝大多数棘阿米巴性角膜炎患者能够及时确诊.相关病原学检查中,角膜溃疡灶刮片生理盐水湿片检查、共焦显微镜检查较棘阿米巴原虫培养阳性率高.     

棘阿米巴角膜炎的实验室检查和原虫的鉴定

目的应用简便的方法对棘阿米巴角膜炎进行诊断，并对棘阿米巴原虫进行鉴定。方法角膜刮片或培养的原虫材料经１０％氢氧化钾液湿封片镜检；角膜材料经原虫培养；应用倒置显微镜对棘阿米巴属进行观察和鉴定；角膜病理切片经ＨＥ和ＰＡＳ染色。结果１０％ＫＯＨ湿封片镜检，５例角膜刮片中有２例及培养阳性的原虫材料均呈现棘阿米巴原虫的包囊。同一病例，４例中有３例培养出棘阿米巴原虫。在倒置显微镜下可见棘阿米巴原虫的包囊和滋养体以及滋养体上的棘状伪足。病理切片经ＨＥ和ＰＡＳ染色均显示原虫的包囊。结论１０％ＫＯＨ湿封片可对棘阿米巴角膜炎作初步诊断，最后诊断需经原虫培养获得，应用倒置显微镜可对棘阿米巴原虫进行观察和鉴定。角膜病理切片上看到原虫可进一步印证原虫培养的结果。     

共焦显微镜在棘阿米巴性角膜炎临床诊断中的应用

目的 :评价共焦显微镜 (confocalmicroscopy)在棘阿米巴性角膜炎 (acanthamoebakeratitis)临床诊断 ,尤其是早期诊断中的应用价值。方法 :对临床拟诊为棘阿米巴性角膜炎患者 2 3例进行共焦显微镜检查 ,并同时行角膜涂片及棘阿米巴原虫培养检查 ,对两种检查方法的结果进行比较。结果 :2 3例患者中 ,13例共焦显微镜检查可见棘阿米巴包囊和 /或神经炎表现 ,综合各项检查结果及临床表现 ,18例确诊为棘阿米巴性角膜炎 ,共焦显微镜的阳性率为 5 6 5 %。在 5例表现为上皮性及浅基质病变的早期角膜炎患者 ,共焦显微镜检查 3例 (6 0 % )为阳性 ,刮片、培养各 1例 (2 0 % )为阳性。结论 :共焦显微镜检查是一种无创、快速和有效的活体检查手段 ,在棘阿米巴性角膜炎的诊断中 ,如同时结合实验室刮片及培养和患者临床情况可起到重要的辅助诊断作用 ,尤其是在棘阿米巴角膜炎的早期诊断中 ,可以起到更重要的作用     

直接PCR法对感染性棘阿米巴角膜炎的诊断价值

背景棘阿米巴角膜炎的致盲率极高,发病初期易误诊为真菌性角膜炎或病毒性角膜炎,常规的临床诊断方法费时较长,特异性差,极易错过治疗的“时间窗”。常规PCR法检测简单、特异、有效,但由于病变标本取材量少,不易提取组织DNA,限制了其临床应用。目的探讨非提取组织DNA的直接PCR法扩增棘阿米巴虫株18SrRNA保守序列在棘阿米巴角膜炎快速诊断中的可行性。方法从山东省眼科研究所暨青岛眼科医院诊治的10例棘阿米巴角膜炎患者的病变角膜中分离10株棘阿米巴虫株,经鉴定均为T4基因型虫株。用直接PCR法分别扩增棘阿米巴原虫、白念珠菌、绿脓杆菌、I型单纯疱疹病毒以及正常人角膜上皮细胞以确定该方法的特异性。将棘阿米巴原虫稀释至不同的浓度以确定直接PCR法的敏感性。采用SPF级6周龄健康雌性BALB／c小鼠构建棘阿米巴角膜炎动物模型,于感染后第1、3、5、7、10、15天获取角膜组织,分别进行直接PCR、实时定量PCR（real—timePCR）、K0H封片镜检和原虫培养鉴定,比较各种方法的有效性和可行性。结果直接PCR法仅能扩增棘阿米巴DNA,其他病原体DNA均未扩增出;在每个获取的棘阿米巴角膜炎样本中最少可检测到10个棘阿米巴原虫。在棘阿米巴角膜炎小鼠模型中,直接PCR法在感染后第1、3、5、7、10、15天的阳性检出率分别为80．0％、90．0％、80．0％、70．0％、70．0％和50．0％,总阳性率为73．3％,高于原虫培养法的31．7％,差异有统计学意义（P=0．005）;K0H封片镜检的总阳性率为56．7％,real—timePCR法检测的总阳性率为61．7％,均略低于直接PCR法,差异均无统计学意义（P=0．056、0．172）。结论直接PCR法操作简单,在上述4种方法中对棘阿米巴原虫检测的特异性和敏感性最高,能够快速诊断棘阿米巴角膜炎,尤其对于待检标本少而无法提取DNA的患者可首选。     

棘阿米巴角膜炎

棘阿米巴角膜炎系棘阿米巴属原虫感染引起的顽固性、进行性角膜炎，它常与戴角膜接触镜有关，近年来国外不断有所报道，我国近几年戴角膜接触镜的人数逐年增多，并发现由于戴角膜接触镜而引发的棘阿米巴角膜炎，因此引起眼科学界的广泛重视。本就棘阿米巴角膜炎的流行病学、临床表现、诊断、鉴别诊断、治疗、预后及预防作一综述。     

棘阿米巴角膜炎的诊断和治疗进展

棘阿米巴角膜炎是由棘阿米巴原虫感染引起的一种严重的角膜疾患，近年来其发病率呈逐年上升的趋势，临床特点为眼球剧烈疼痛和眼角膜环形基质浸润。实验室诊断主要包括角膜刮片１０％氢氧化钾湿封片检查、原虫培养和鉴定、角膜病理检查以及应用免疫荧光染色对棘阿米巴原虫进行种的鉴定，并可通过同焦显微镜直接进行诊断。对棘阿米巴角膜炎的治疗药物较多，早期诊断和广泛角膜上皮清创术是药物治疗成功的关键。推荐的治疗方案是局部彻底清创后用洗必泰或ＰＨＭＢ与苯咪丙醚联合治疗，棘阿米巴角膜炎必须先用药物治疗才能行角膜移植手术。     

棘阿米巴角膜炎的诊断和治疗探讨

目的 探讨棘阿米巴角膜炎的临床与实验室诊断方法,寻找有效滴眼液用以治疗。方法 观察分析２５例棘阿米巴角为感染各阶段的临床表现,通过角膜细胞学检查、阿米巴分离培养、角膜活检及组织病理学检查确诊,检测药物对棘阿米巴的抗原虫作用及临床疗效。结果感染自角膜上皮层开始,进行性侵入基质致盲。细胞泞凶世囊和／或滚养体（８８．９％）。棘阿米巴培养阳性率５７．９％。洗必泰、甲硝唑滴眼液治疗棘阿米巴角膜炎有良效。抗     

Akanthamöbenkeratitis

The typical clinical appearance of acanthamoeba keratitis includes pseudodendritic epitheliopathy, perineuritis, ring infiltrates or multifocal stromal infiltrates and in some cases limbitis with infiltration of the conjunctiva and/or sterile anterior uveitis. In 83–93?% of cases of acanthamoeba keratitis the patients were contact lens wearers. Acanthamoeba keratitis is diagnosed by polymerase chain reaction (PCR), confocal biomicroscopy, in vitro cultivation and histopathological examination. Information on reliability and efficacy of conservative and surgical therapy of acanthamoeba keratitis has only been published in case series but not yet verified through randomized controlled clinical studies. After early diagnosis acanthamoeba keratitis can often be successfully treated using triple topical therapy with polyhexamide, propamidine isethionate and neomycin. Topical therapy should be continued for up to 1 year. In therapy-resistant cases cryotherapy, amniotic membrane transplantation, crosslinking therapy and therapeutic keratoplasty can be performed. The prognosis of keratoplasty following acanthamoeba keratitis is more favorable if there were no signs of infection at least 3 months before surgery.     

穿透性角膜移植治疗棘阿米巴角膜炎的临床研究

目的　探讨术前诊断和围手术期药物治疗等因素对穿透性角膜移植治疗严重棘阿米巴角膜炎术后复发的影响。方法　对 1996～ 2 0 0 2年诊治的 18例棘阿米巴角膜炎患者进行临床分析 ,术前确诊 12例 ,误诊 6例 ,角膜感染直径均大于 7mm。治疗过程中 18例患者均因病情加重而行穿透性角膜移植术 (PKP)。术后依据术前诊断 ,确诊者继续给予抗阿米巴药物治疗 ,而误诊者继续术前的抗病毒、真菌及细菌治疗。 7例患者 (确诊 2例 ,误诊为病毒性角膜炎 3例 ,细菌性角膜炎 2例 )在术后早期接受全身和局部的糖皮质类激素药物治疗。对诊断的准确性和术后早期持续使用 (>7d)糖皮质激素两个因素与术后复发情况进行病例 对照研究 ,计算其比数比。结果　随访时间平均 10个月 ,13例 (72 % )患者未见复发 ,其中术前确诊 11例 ,误诊 2例 ;5例 (2 8% )患者术后复发。 7例患者术后接受了持续糖皮质激素治疗 ,其中 4例复发。计算误诊和术后早期持续使用糖皮质激素两种影响因素对复发的影响的比数比分别为 2 2 (P =0 0 2 1)和 13(P =0 0 4 7)。结论　PKP是治疗药物不能控制的严重棘阿米巴角膜炎的有效方法。术前明确诊断、围手术期抗阿米巴治疗及早期避免持续使用糖皮质激素可降低棘阿米巴角膜炎术后的复发率。 (中华眼科杂志 ,2 0     

Acanthamoeba keratitis--a rare and often late diagnosed disease

In 83-93% of the cases of acanthamoeba keratitis the patients are contact lens wearers. Acanthamoeba keratitis is diagnosed--with descending order of sensitivity and specificity--through polymerase chain reaction (PCR), confocal biomicroscopy, in-vitro cultivation and histopathological examination. The typical clinical appearance of acanthamoeba keratitis includes pseudodendritic epitheliopathy, perineuritis, ring infiltrate or multifocal stromal infiltrates and in some cases limbitis with infiltration of the conjunctiva and/or sterile anterior uveitis. Information on reliability and efficacy of the medical/surgical therapy for acanthamoeba keratitis has only been published for case series and It has not been verified through randomised controlled clinical studies so far. By early diagnosis, using triple-topical therapy (polyhexamid, propamidinisoethionat, neomycin) acanthamoeba keratitis often heals appropriately. However, even if diagnosed early, topical therapy should be continued for 1 year. In therapy-resistant cases cryotherapy, amniotic membrane transplantation, cross-linking therapy, and therapeutic keratoplasty are performed. The prognosis of keratoplasty following acanthamoeba keratitis is more favourable when there were no signs of infection at least during the preceding 3 months.     

兔棘阿米巴角膜炎IL-1β和MIP-1的表达

目的建立一种模拟临床人角膜棘阿米巴感染的动物模型,探讨角膜棘阿米巴原虫感染后角膜炎症细胞因子巨噬细胞炎性蛋白-1(macrophage inflammatory protein-1,MIP-1)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)的表达。方法 20只新西兰白兔应用角膜表层镜片法,即刮除角膜上皮,覆盖角膜植片,右眼在层间注入棘阿米巴滋养体混悬液,左眼注入生理盐水,缝合眼睑24h,建立棘阿米巴角膜炎模型,观察角膜溃疡形态,并行角膜HE染色或PAS染色组织病理切片检查,应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测不同病程角膜组织中的IL-1β、MIP-1的表达。结果 20只兔右眼均感染棘阿米巴性角膜炎,病变角膜组织中IL-1β含量与MIP-1含量于术后第1天、3天、5天、7天、9天均明显升高(均为P<0.01),分别于术后第5天(53.360±1.083)与术后第3天(34.445±1.072)达最高值,差异均有显著统计学意义(均为P<0.01),以后逐渐下降。结论 IL-1β是反映兔棘阿米巴感染角膜局部炎症反应程度的敏感指标;而MIP-1的表达则是兔棘阿米巴角膜炎中机体重要的防御和保护性因素。     

应用PCR技术诊断单疱病毒性角膜炎

目的 探讨ＰＣＲ对ＨＳＫ的诊断价值。方法 应用ＰＣＲ技术对临床诊断活动期ＨＳＫ８８眼匐行性角膜溃疡５眼,原因不明角膜炎５眼进行ＨＳＶ－１ＤＮＡ检测。结果 活动期ＨＳＫ具有上皮病变者３０眼中２４眼检出ＨＳＶ－１ＤＮＡ,５眼匐形性角膜溃疡全部未检出ＨＳＶ－１ＤＮＡ;５眼原因不明角膜炎中１眼检出ＨＳＶ－１ＤＮＡ。结论 ＰＣＲ是一种快速、灵敏、特异性强的方法,对胸膜炎的早期诊断及鉴别诊断具有重要意义,具有     

Detection of herpes simplex virus DNA in atypical epithelial keratitis using polymerase chain reaction

AIM: To study herpes simplex virus (HSV) DNA in tears from patients with atypical epithelial keratitis of unknown aetiology. METHODS: Tear samples were collected from 17 affected eyes of 17 consecutive patients suffering from epithelial keratitis in whom HSV keratitis was suspected but whose diagnosis was difficult on the basis of clinical manifestations alone. Using reduced sensitivity polymerase chain reaction (PCR), tear samples were tested for HSV DNA. Tears from the unaffected eyes of the 17 patients were also examined, along with 38 tear samples from 19 normal volunteers. Southern blot analysis was performed to confirm that amplified DNA bands were specific for HSV. Clinical correlation with photographs of corneal lesions was also investigated. RESULTS: HSV DNA was detected in tears from the affected eyes of eight of the 17 patients with suspected HSV keratitis. Tears from the affected eyes of the other patients were PCR negative, as were tears from the unaffected eyes of all 17 patients, and from the 38 normal eyes. There was no correlation between PCR results and clinical manifestation of keratitis. CONCLUSIONS: Based on the sensitivity of the PCR system, eight of 17 suspected HSV keratitis patients were confirmed as suffering from HSV keratitis. HSV keratitis should therefore be considered as a possible diagnosis in atypical epithelial keratitis.     

棘阿米巴角膜炎的研究进展

棘阿米巴角膜炎是由棘阿米巴原虫感染引起的顽固性、进行性角膜炎,致盲率极高,它常与配戴角膜接触镜、接触污染的水源和角膜外伤等有关。近几年随着角膜接触镜的广泛应用,有关本病感染人数在世界各国逐渐增多,因此引起了眼科学界的广泛重视。我们现就棘阿米巴角膜炎的研究进展加以综述。