自体纯化CD34+细胞移植治疗严重自身免疫性疾病的初步研究

目的探讨自体外周血CD34+细胞移植治疗严重自身免疫性疾病的干细胞动员、细胞采集和分选、预处理和并发症处理等问题.方法 10例重度自身免疫性疾病患者接受自体外周血CD34+细胞移植治疗.采用环磷酰胺(CTX)+rhG-CSF方案动员外周血干细胞,并以CliniMACS细胞分选仪分选CD34+细胞,适时用CTX+抗胸腺细胞球蛋白(7例)或CTX+全身照射(3例)两种预处理方案后,进行CD34+细胞回输的方法治疗.结果经CTX+rhG-CSF方案动员并以CliniMACS细胞分选仪分选后,可获得(1.98±0.95)×108的CD34+细胞,其纯度为(91.4±10.6)%,回收率为(60.5±19.8)%.在回输(2.14±1.05)×106/kg的CD34+细胞后,ANC ≥0.5×109/L的时间为(8.6±2.5)d,血小板升至20×109/L的时间为(9.0±5.2)d.在造血恢复后,所有CD3+细胞、CD19+细胞和CD16+CD56+细胞均未恢复至移植前状态.在造血和免疫抑制时,巨细胞病毒感染的发生率较高.2例患者死于移植相关并发症.所有患者近期疗效满意,6例系统性红斑狼疮患者DAI评分由移植前的平均17分降为移植后的4分;类风湿关节炎患者DAS28评分由6.4分降至1.8分;干燥综合征患者的症状和体征均明显缓解.结论对常规治疗无效的严重自身免疫性疾病,自体外周血CD34+细胞移植是可选择的治疗方法之一.     

人脐血间充质干细胞促进脐血CD34+细胞在NOD/SCID小鼠体内植入的实验研究

目的探讨人脐血间充质干细胞(MSC)联合人脐血CD34+细胞移植,能否促进CD34+细胞在NOD/SCID小鼠体内植入及加速其造血恢复.方法NOD/SCID小鼠于60Co 2.5 Gy照射后24h内由尾静脉输注胎儿脐血CD34+细胞1×105/只(低细胞量移植组)或1×106/只(高细胞量移植组),联合移植组同时输注脐血MSC 1×106/只.动态观察移植后小鼠外周血白细胞、血红蛋白和血小板恢复情况,于移植后第8周用流式细胞术检测存活小鼠骨髓中人CD45+、CD45+CD3+、CD45+CD19+和CD45+CD33+细胞的含量.结果①低细胞量移植时,联合移植组的植入率明显高于单纯移植组,分别为26.02%和16.52%(P＜0.05);高细胞量移植时,联合移植组和单纯移植组的植入率相近,分别为43.71%和39.23%(P＞0.05).②高细胞量联合移植组和单纯移植组的存活率分别为80%和70%;低细胞量联合移植组和单纯移植组的存活率分别为70%和50%.③无论高细胞量还是低细胞量组,联合移植小鼠白细胞、血红蛋白和血小板的恢复明显早于单纯移植组.④移植8周后,小鼠骨髓中人CD45+CD19+、CD45+CD33+细胞含量在低细胞量移植时,联合移植组高于单纯移植组;但在高细胞量移植时,两组之间差异无统计学意义.CD45+CD41a+细胞的含量无论在低细胞量和高细胞量移植时,联合移植组均高于单纯移植组.各组小鼠骨髓中CD45+CD3+细胞的含量均较少,且各组之间差异无统计学意义.结论①低细胞量移植时,人脐血MSC联合移植可提高人脐血CD34+细胞在小鼠体内的植入率.②人脐血MSC与人脐血CD34+细胞联合移植,加速NOD/SCID小鼠各系造血恢复,提高移植小鼠存活率.③MSC联合移植可促进人脐血CD34+细胞在NOD/SCID小鼠体内向粒系、B淋巴系和巨核系定向分化.     

造血干细胞移植中CD34+细胞最佳分选的应用效果评价

目的探讨联合化疗加细胞因子动员自体外周血CD34+细胞的采集及临床级磁性分选仪(CliniMACS)分选的最佳方法,评价分选后CD34+细胞在造血干细胞移植中的应用效果.方法2001-03/2002-01在南京市鼓楼医院血液科病房收治自身免疫性疾病患者9例.符合纳入标准患者9例,男3例,女6例.采用环磷酰胺[2～4 g/(m2·d)]+粒细胞集落刺激因子(G-CSF)[5～10 μg/(kg·d)]作为动员剂,CS-3000Plus血细胞分离机采集外周血单个核样细胞,CliniMACS作CD34+细胞分选,观察分选前后的细胞计数、纯度、细胞活力,流式细胞术进行细胞表型检测及粒巨细胞集落形成单位(CFU-GM)培养.计算CD34+细胞的采集得率和分选回收率.观察CD34+细胞移植后造血功能恢复的情况.结果经环磷酰胺加G-CSF动员后,采集时机多以一次采集能够获得足够数量的CD34+细胞(CliniMACS分选和冷冻保存的耗损计算在内)为原则,外周血白细胞总数＞6×109 L-1或CD34+细胞＞0.4%时开始采集,其中8例采集1次,1例采集2次.每例患者可获单个核样细胞(MNC)总数(0.924～5.360)×1010,MNC(2.6～19.5)×108/kg,CD34+细胞(2.4～37.2)×106/kg,经CliniMACS系统分选后,CD34+细胞回收率为51%～93%,平均回收率为87%,CFU-GM回收率为35%～62%.CD34+细胞纯度为94.3%～98.4%,平均96.71%.CD3+,CD19+,CD56+,CD14+细胞去除2～4个对数级.经冰冻保存后的CD34+细胞的回收率为78%～99%,CFU-GM回收率为82%～99%,实际回输CD34+细胞为(2.0～8.3)×106/kg,移植后均获造血重建.结论掌握最佳动员、采集及分选方法,CD34+细胞可获较高产率,移植后造血功能恢复较快.     

重组人血小板生成素对多发性骨髓瘤患者自体外周血造血干细胞移植术后血小板重建影响的研究

目的：分析重组人血小板生成素(rh TPO)对多发性骨髓瘤(MM)患者自体外周血造血干细胞移植术(APBSCT)后血小板(PLT)重建的影响。方法：回顾性分析在苏州大学附属第一医院一线行APBSCT治疗的147例MM患者的临床资料,根据APBSCT期间是否使用rh TPO分为rh TPO组80例和对照组67例,比较两组患者在PLT植入时间、血制品输注需求量、移植后+14和+100 d PLT恢复至≥50×10⁹/L和≥100×109/L的患者比例以及出血发生率等方面的差异。结果：两组患者在性别、年龄、M蛋白类型、初诊时PLT数、APBSCT前诱导治疗中位疗程数、回输的CD34⁺细胞数方面均无统计学差异(均P>0.05)。rh TPO组患者PLT植入中位时间为10(6-14)d,较对照组11(8-23)d显著缩短(P<0.001)。rh TPO组患者在APBSCT期间的中位PLT输注需求量为15(0-50)U,较对照组20(0-80)U更少(P=0.001)。移植后+14 d时rh TPO组和对照组PLT≥50×10⁹     

自体纯化CD_(34)~+细胞移植治疗严重自身免疫性疾病的初步研究

目的　探讨自体外周血CD34+ 细胞移植治疗严重自身免疫性疾病的干细胞动员、细胞采集和分选、预处理和并发症处理等问题。方法　 10例重度自身免疫性疾病患者接受自体外周血CD34+细胞移植治疗。采用环磷酰胺 (CTX) +rhG CSF方案动员外周血干细胞 ,并以CliniMACS细胞分选仪分选CD34+ 细胞 ,适时用CTX +抗胸腺细胞球蛋白 (7例 )或CTX +全身照射 (3例 )两种预处理方案后 ,进行CD34+ 细胞回输的方法治疗。结果　经CTX +rhG CSF方案动员并以CliniMACS细胞分选仪分选后 ,可获得 (1.98± 0 .95 )× 10 8的CD34+ 细胞 ,其纯度为 (91.4± 10 .6 ) % ,回收率为 (6 0 .5± 19.8) %。在回输(2 .14± 1.0 5 )× 10 6 kg的CD34+ 细胞后 ,ANC≥ 0 .5× 10 9 L的时间为 (8.6± 2 .5 )d ,血小板升至 2 0× 10 9 L的时间为 (9.0± 5 .2 )d。在造血恢复后 ,所有CD3+ 细胞、CD1 9+ 细胞和CD1 6+ CD56+ 细胞均未恢复至移植前状态。在造血和免疫抑制时 ,巨细胞病毒感染的发生率较高。 2例患者死于移植相关并发症。所有患者近期疗效满意 ,6例系统性红斑狼疮患者DAI评分由移植前的平均 17分降为移植后的 4分 ;类风湿关节炎患者DAS2 8评分由 6 .4分降至 1.8分 ;干燥综合征患者的症状和体征均明显缓解。结论　对常规治疗无效的严     

重组人白细胞介素11联合重组人粒细胞集落刺激因子动员自体外周血干细胞移植治疗急性白血病

目的:观察重组人白细胞介素11(rhIL-11)联合重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)动员自体外周血干细胞治疗急性白血病的效果及不良反应。方法:急性白血病患者14例,其中治疗组6例(实验组)在化疗后外周血白细胞计数降至最低时,皮下注射rhIL-113μg/d及rhG-CSF250μg/d,连用至外周血白细胞升高至10×109/L左右时(采集干细胞时)停药。单用rhG-CSF组为对照组。结果:采集前外周血血小板、CD34+细胞数实验组高于对照组(P<0.05),采集产品的CD34+、CD34+/CD38-、CD34+/CD41a+、CD34+/CD42b+细胞数实验组均高于对照组(P<0.05);移植后实验组血小板>20×109/L平均时间为14.5d,对照组为20.2d(P=0.06)。不良反应主要是肌肉关节疼痛及水肿,均为Ⅰ～Ⅱ级。结论:rhIL-11与rhG-CSF动员外周血干细胞治疗急性白血病安全有效。     

荷载自体白血病抗原的DC-CIK细胞预防急性髓细胞性白血病自体造血干细胞移植后复发的临床研究

目的探讨荷载自体白血病抗原的树突状细胞-细胞因子诱导的杀伤细胞(DC-CIK)细胞对于预防急性髓细胞性白血病(AML)自体造血干细胞移植后复发的作用。方法实验组:选取初治AML CR1期、自愿接受自体造血干细胞移植联合荷载自体白血病抗原的DC-CIK细胞治疗的患者32名,采用常规预处理方案,于移植+5—+10 d将荷载自体白血病抗原的DC-CIK细胞回输患者,采用流式细胞术、ELISA等方法测定DC-CIK细胞各指标情况;对照组:选取同期未采用DC-CIK细胞治疗的AML CR1期移植患者21名;观察、比较2组患者造血恢复情况、移植相关不良反应,评估3年总生存率。结果实验组患者CIK经荷载自体白血病抗原的DC致敏后,CD3+CD8+和CD3+CD56+细胞比例分别为(80.1±3.3)%和(37.1±4.5)%,较对照组[(56.1±3.8)%和(18.1±3.1)%]均有所上调(P<0.05),分泌IFN-γ的水平为(3 985.4±223.1)pg/ml,较对照组[(1 688.5±162.1)pg/ml]明显升高(P<0.05),除一过性发热、寒颤外,无其他不良反应。造血恢复情况、移植相关不良反应2组差异无统计学意义,自体造血干细胞移植后经DC-CIK细胞输注,3年的总生存率为75.0%(24/32),较同期未使用荷载白血病抗原DC-CIK细胞的自体造血干细胞移植患者的生存率明显提高。结论荷载自体白血病抗原的DC-CIK细胞用于预防AML自体造血干细胞移植后复发是安全和有效的。     

不同细胞因子组合对脐血造血干细胞体外扩增效果分析

目的观察不同细胞因子组合对脐血干细胞体外扩增效果的影响。方法用含15%胎牛血清的改良细胞培养液,按加入的不同细胞因子组合分成7个实验组(A—G)进行细胞培养。分别于培养0d、3d、7d、14d取培养液,台盼蓝染色计数单个核细胞的总数、流式细胞仪分析CD34+细胞含量。结果与对照组相比,含细胞因子的7个实验组单个核细胞的数量均显著增加,除F组在培养d14时扩增达到峰值(15.60±10.90)×109/L外,其它各实验组在扩增d7时,均达到了扩增峰值并以E组为最高(17.11±6.12)×109/L,培养延续到d14时,各组均有不同程度的下降。所有实验组CD34+细胞的百分比也显著提高,A、D、E、F、G组均在d7达到了峰值,B、C组则在第14d达到峰值。经计算,扩增7d时CD34+细胞单位体积含量范围在(34.7±10.4)×107/L(A组)—(168.6±43.5)×107/L(这种表述似乎不太合适),对应的扩增达10—50倍。结论不同细胞因子组合可以提高脐血单个核细胞和CD34+细胞的扩增效率,SCF+IL-3,-6,-2,-4的组合在d7时达到了最佳的扩增。     

FN-TPO基因修饰的骨髓间充质干细胞支持脐血造血干细胞植入的实验研究

目的观察纤维连接蛋白-血小板生成素(FN-TPO)基因修饰的人骨髓间充质干细胞(mesenchymal stemcells,MSCs)支持脐血造血干细胞植入的能力。方法将20只严重联合免疫缺陷(SCID)小鼠经亚致死剂量射线辐射后随机分为实验组(n=5):FN-TPO基因修饰的骨髓MSCs联合脐血单个核细胞(CB-MNC)组共移植;对照组:包括单纯CB-MNC移植组(n=5)、CB-MNC联合未修饰骨髓MSCs共移植组(n=5)和仅输入不含血清的IMDM培养基的空白对照组。细胞移植后,持续观察各组小鼠4周,记录一般情况及生存率;通过检测不同时间点(辐射前,辐射后细胞移植前,细胞移植后2 d及1、2、3、4周)的小鼠外周血常规来反映小鼠造血系统恢复情况;4周后以流式细胞术和PCR等检测移植后小鼠体内的人源细胞的整合情况。结果辐射前、辐射后细胞移植前、移植后2 d及移植2周后各组动物外周血白细胞、红细胞、血红蛋白和血小板数均无明显差别;细胞移植1周,实验组小鼠外周血WBC、RBC、Hb和Plt分别为(0.83±0.15)×109/L、(9.84±0.36)×1012/L、147.50±4.80 g/L和(198.75±71.14)×109/L,均较对照组为高,差别均有统计学意义(P<0.05),且实验组小鼠外周血常规变化比较平稳。移植4周各组动物生存率,基因修饰和未修饰MSCs联合CB-MNC共移植组较单纯CB-MNC移植组明显为高(80%VS40%);存活下来的细胞移植小鼠骨髓和外周血中均检测到人源性CD45+细胞,实验组小鼠骨髓和外周血中人CD45+细胞比例(%)分别为:8.15±1.72和2.28±0.57,与单纯CB-MNC移植组的3.93±1.28和0.82±0.06相比差别均具有统计学意义(P<0.05);PCR检测移植后4周存活小鼠体内人beta-actin基因表达情况显示:小鼠外周血、骨髓及心、肝、脾、脑、肺等重要脏器基因组DNA中有人beta-actin基因存在。结论FN-TPO基因修饰的骨髓MSCs能够更有效的支持脐血造血干细胞植入。     

甘露醇促进人脐血CD34+细胞通过血脑屏障静脉迁移至高血压脑梗死大鼠脑组织

背景:单纯脐血细胞经静脉移植治疗脑梗死疗效有限,移植细胞经血脑屏障迁入脑内数量不足为重要原因之一.目的:观察血脑屏障开放剂甘露醇对人脐血CD34+细胞经静脉移植治疗高血压大鼠脑梗死疗效的影响.方法:分离人脐血CD34+细胞,脂质体方法转染pEGFPF 质粒,制备pEGFP-CD34+细胞;45 只雄性SD大鼠经线栓法建立大脑中动脉栓塞模型,造模后24 h 随机分为3 组:实验组注射1×106 GFP-CD34+细胞,继之注射20%甘露醇2 g/kg;阳性对照组注射1×106 GFP-CD34+细胞;空白对照组注射等量生理盐水.结果与结论:①荧光显微镜下实验组每张切片脑组织GFP 标记阳性的绿色荧光细胞计数平均值显著多于阳性对照组.②移植后第7 天治疗组与其他各组神经功能损害评分差异无显著性意义;移植后28 d,各组神经功能均有不同程度恢复,实验组神经功能恢复明显优于阳性对照组和空白对照组(P < 0.05).③实验组与其他两组相比,大鼠脑梗死体积均显著减少.④实验组脑组织匀浆胶质细胞源性神经营养因子水平较阳性对照组、空白对照组明显增高.提示血脑屏障开放剂甘露醇促进静脉移植CD34+细胞通过血脑屏障迁入至脑组织,并增强静脉移植CD34+细胞治疗脑梗死的疗效.     

自体外周血干细胞移植治疗恶性血液病临床疗效观察

目的　对４９ 例自体外周血干细胞移植（ＡＰＢＳＣＴ） 治疗的恶性血液病患者有关材料进行总结分析。方法　ＡＰＢＳＣＴ治疗恶性血液病患者４９ 例,计５１ 例次,其中急性髓系白血病（ＡＭＬ）１８ 例,急性淋巴细胞白血病（ＡＬＬ）１０ 例,多发性骨髓瘤（ＭＭ）１４ 例（ 其中２ 例行２ 次移植） ,非霍奇金淋巴瘤（ＮＨＬ）６ 例,骨髓增生异常综合征ＲＡＥＢｔ１ 例。结果　与常规化疗相比,ＡＰＢＳＣＴ可延长移植患者的无病生存期及总生存期,３ 年及５ 年生存率在ＡＭＬ、ＮＨＬ组分别为７４．７８％ 和８３．３３％ ,ＭＭ 组为３８ ．００ ％ 和１９ ．００ ％ ,ＡＬＬ组为４０ ．００ ％ 和０ 。移植后造血重建时间,未用ＧＣＳＦ组干细胞回输后平均第１７ ．６ 天外周血白细胞恢复至＞０ ．５×１０９／Ｌ,用ＧＣＳＦ组平均１１．１４ 天。４９ 例患者移植相关死亡率为零,至今随访７ 年,死亡２１ 例,其中２０ 例死于复发,主要为ＡＬＬ和ＭＭ 患者。移植相关并发症以发热、肝功能受损和低钾最常见,经治疗可好转。结论　ＡＰＢＳＣＴ是治疗血液系统肿瘤,改善其预后的重要手段之一。     

双次自体外周血干细胞移植治疗多发性骨髓瘤

为了探讨双次自体外周血干细胞移植治疗多发性骨髓瘤（MM）的安全性及疗效,为1例49岁女性MM患者行双次自体外周血干细胞移植。第1次移植的动员方案：环磷酰胺2g/m2×1天,粒细胞集落刺激因子（G-CSF）[（10μg/（kg.d）]×5天。预处理方案：马法兰（melphalan）200mg/m^2。自体外周血干细胞回输：单个核细胞（MNC）6.1×10^8/kg;CD34＋细胞4.7×10^6/kg。6个月后行第2次移植的动员方案：G-CSF[（10μg/（kg.d）]×5天。预处理方案：马法兰200mg/m^2。自体外周血干细胞回输：MNC10.2×10^8/kg;CD34＋细胞5.9×106/kg。结果表明：第1次移植后17天中性粒细胞绝对值（ANC）回升至0.5×10^9/L,15天血小板回升至20×10^9/L;第2次移植后22天ANC回升至0.5×10^9/L,13天血小板回升至20×10^9/L。双次移植过程中均未出现明显毒副反应,无严重并发症。经上述治疗后患者的骨痛、贫血症状消失,第2次移植后随访7个月,患者情况良好,仍处于完全缓解（CR）状态。结论：双次自体外周血干细胞移植治疗多发性骨髓瘤是安全、有效和可行的。     

自体纯化CD34~+细胞移植治疗中/高危淋巴细胞来源恶性肿瘤的临床研究

目的分析自体纯化CD34+细胞移植治疗中/高危淋巴细胞来源恶性肿瘤的临床疗效。方法 10名中/高危组淋巴细胞来源恶性肿瘤患者行自体纯化CD34+细胞移植治疗,细胞分选采用cliniMACS系统。计算并统计分选纯度和CD34+细胞回收率,观察移植相关并发症及患者生存情况。结果纯化后CD34+细胞纯度为(87.79±3.73)%,回收率达到(65.74±10.37)%。10名患者全部顺利造血重建,感染发生率50%(5/10例),复发率为20%(2/10例)。结论利用CliniMACS系统进行外周血CD34+细胞分选,CD34+细胞纯度、回收率均满意,自体移植后造血功能重建顺利,近期疗效满意。     

重组人白介素11联合粒细胞集落刺激因子动员的自体外周血造血干细胞移植

本研究旨在探索重组人白介素11（rhIL—11）联合重组人粒细胞集落刺激因子（rhG—CSF）动员外周血造血干细胞进行自体外周血干细胞移植的作用。16例预行自体外周血干细胞移植的非霍奇金淋巴瘤及急性髓系白血病患者随机分为实验组（rhIL-11联合rhG—CSF动员）及对照组（rhG—CSF动员），两组均在动员性化疗后血象下降至最低值有回升迹象时应用rhIL—11及rhG—CSF；rhG—CSF5μg/（kg·d）动员中位时间5．5天，rhIL—1150μg/（kg·d）动员中位时间4天；动员后观察外周血白细胞和血小板计数，以及干细胞采集物单个核细胞、CD34^＋细胞、CFU—GM集落数的变化；按常规进行自体外周血干细胞移植后，观察粒细胞及血小板植活时间及单采血小板输注量。结果显示：实验组及对照组动员后外周血白细胞和血小板计数，以及干细胞采集物单个核细胞、CD54^＋细胞及CFU—GM集落数无显著性差异（P〉0．05）。自体外周血干细胞移植后，实验组中性粒细胞数≥0.5×10^9／L的中位时间为10．5天，对照组中为13天．实验组比对照组提前2.5天（P〈0．05）。实验组血小板数≥20×10^9／L的中位时间为11.5天，对照组为13天，实验组比对照组提前1.5天（p〈0．05）。实验组输注单采血小板中住数为3.5单位，对照组为5单位，实验组比对照组减少1．5单位（P〈0．05）。实验组使用动员剂的不良反应主要有低热、乏力、感冒样症状、食欲不振、头晕、肌肉酸痛等，对照组仅出现低热，患者对以上症状均可以耐受，停药后症状自行消失。结论：rhIL—11联合rhG—CSF动员外周血造血干细胞安全有效，在自体外周血干细胞移植后造血重建较快，单采血小板输注量少。     

Autologous blood cell transplantation in multiple myeloma: impact of CD34+ cell selection with long follow-up

Positive CD34(+) selection to purge blood cell harvests is one way to attempt to reduce the high relapse risk after high-dose chemotherapy (HDT) supported by autologous blood cell transplantation (ABCT) in patients with multiple myeloma (MM). Until recently, however, the impact of CD34(+) selection, if any, on long-term clinical outcome in MM has remained obscure. We have analyzed engraftment kinetics, response to HDT, progression-free survival (PFS), and overall survival (OS) for 64 consecutive MM patients who have been treated with up-front HDT plus ABCT at our institution between 1993 and 1998. Nonrandomized comparisons were made between transplants with unselected (39 patients) and CD34(+)-selected (25 patients) grafts. The engraftment kinetics, need of blood product support, discharge time from hospital, and response to HDT were similar for both unselected and selected transplants. The median PFS was also similar (26 and 30 months, respectively) for the both groups. With a median follow-up time for the survivors of 67.5 months, the median OS (78 and 75 months, respectively) did not differ between transplants with unselected and selected grafts. In conclusion, this nonrandomized study suggests that positive CD34(+) selection has no beneficial impact on long-term outcome of patients with MM.     

Collection of peripheral progenitor cells: a comparison between Amicus and Cobe-Spectra blood cell separators.

The authors compared the efficiency of two different blood cell separators (Amicus and Cobe-Spectra) in collecting peripheral blood progenitor cells for autologous or homologous transplantation. A total number of 129 procedures were performed, 36 with Spectra, 93 with Amicus. There was no difference between Spectra and Amicus efficiencies for CD34+ cell collection (46.685% vs 46.235%; p=n.s) but the platelet efficiencies were 17.31% and 12.54% respectively (p=0.04) and, if autologous and allogeneic collections were considered separately, a marked difference resulted in allogeneic platelet efficiency between 6 Spectra and 23 Amicus procedures (26.83% vs 8.68%, p=0.0004). The authors were able to demonstrate that in 70 Amicus autologous collections there was a different platelet efficiency, if peripheral count was considered: 12 procedures performed with a platelet count > 100 x 10(9)/l had a very low efficiency (6.86%), but this value increased if platelet count lowered (13.02% if between 100 and 50 x 10(9)/l, 22.63% if between 50 and 0 x 10(9)/l, 23 and 35 procedures respectively). The study is preliminary and the number of collections is little, but the overall data suggest that Spectra (AutoPBSC, V 6.0) and Amicus separators have the same efficiency for collecting CD34+ cells while Amicus procedures have a very low platelet contamination, especially with donors.     

CD34+ cell enrichment for autologous peripheral blood stem cell transplantation by use of the CliniMACs device

Several devices for selection of CD34+ peripheral blood stem cells (PBSC) have been used during the last years for reducing tumor cell contamination of the graft. The new CliniMACS system (magnetic-activated cell separation system by Miltenyi Biotech GmbH, Bergisch-Gladbach, Germany) was recently approved for clinical use in Europe. To evaluate its purging efficiency and engraftment data in the autologous transplant, PBSC from 28 adult patients with various malignant diseases (non-Hodgkin's lymphoma, n = 17; chronic lymphocytic leukemia, n = 5; multiple myeloma, n = 4; acute lymphocytic leukemia, n = 1; medulloblastoma, n = 1) were mobilized by chemotherapy and granulocyte colony-stimulating factor (G-CSF) (10 microg/kg per day). Thirty leukapheresis products from 28 patients with a median of 4.4 x 10(8) nucleated cells/kg body weight (bw)(range 0.6-10.8 x 10(8)/kg bw) and a median of 7.1 x 10(6) CD34+ cells/kg bw (range 2.8 to 18.8 x 10(6)/kg bw) were selected using the Cobe spectra cell separator (Cobe BCT Inc., Lakewood, CO). After the CliniMACS procedure, the median yield of CD34+ selected cells was 4.5 x 10(6)/kg (range 2.2-11.1 X 10(6)/kg bw) with a median recovery of 69.5% (range 46.9-87.3%) and a median purity of 97.7% (range 89.4-99.8%). The procedure did not alter viability of selected cells, which was tested by propidium iodide staining. So far, purified PBSC were used for autologous transplantation in 15 out of 28 patients after total body irradiation and/or high-dose chemotherapy. Median time to reach an absolute neutrophil count > 500/microl was 12 days (range 10-18 days), platelet recovery >50,000/microl occurred at day + 16 (range 11-22). With a median follow-up time of 12 months (range 3-19), 5 patients died of relapse. We confirmed the feasibility and safety of the CliniMACS CD34+ cell enrichment procedure in adult patients with autologous PBSC transplantation.     

序贯两次自体外周血造血干细胞移植治疗初治多发性骨髓瘤

为了初步评价序贯自体造血干细胞移植（T-APBSCT）治疗MM的疗效,对3例初治多发性骨髓瘤（MM）患者经正规化疗后进行序贯两次T-APBSCT,初次移植：动员方案为环磷酰胺（CTX）联合G-CSF5μg/（kg.d）,预处理方案为大剂量马法兰;第二次移植：动员方案为CTX＋足叶乙甙联合G-CSF,预处理方案为大剂量马法兰±全身照射。3例序贯两次移植的间隔分别为31、15和27周。两次移植回输的单个核细胞数分别为4.7×10^8/kg、2.798×10^8/kg、6.08×10^8/kg和1.67×10^8/kg、2.798×10^8/kg、4.28×10^8/kg;CD34^＋细胞分别为3.25×10^6/kg、9.6×10^6/kg、5.91×10^6/kg和6.9×10^6/kg、9.6×10^6/kg、5.91×10^6/kg。结果表明：所有患者的造血均快速重建,每两次移植后中性粒细胞数≥1×10^9/L的时间为12、0、10天和12、25、0天,血小板数≥20×10^9/L的时间分别为12、0、10天和11、25、20天。随访时间44（19-58）月,2例存活（1例完全缓解,1例于处于平台期）,1例于T-APB-SCT后58月死亡。结论：两次序贯自体外周血干细胞移植是治疗多发性骨髓的有效手段,动员方法简便安全,患者对预处理方案耐受性好,值得临床进一步研究探索。     

体外扩增脐血CD34+细胞的实验研究

目的 探讨体外扩增脐血干／祖细胞用于成人脐血移植的可能性。方法 从１０份新鲜的脐血标本中纯化的ＣＤ３４＾＋细胞接种于含体积分数为２０％的胎牛血清（ＦＢＳ）的ＩＭＤＭ培养基的悬 培养体系中,分别加入由ＳＣＦ、Ｆｌｔ－３Ｌｉｇａｎｄ（ＦＬ）与ＩＬ－１β、ＩＬ－３、ＩＬ－６、Ｇ－ＣＳＦ、Ｅｐｏ（合称１３６ＧＥ）组成的３组细胞因子（Ａ组：１３６ＧＥ＋ＦＬ;Ｂ组：ＳＣＦ＋１３６ＧＥ;Ｃ组：ＦＬ＋ＳＣＦ＋１３