反相高效液相色谱法测定人血浆中消癌平注射液的绿原酸浓度

 目的　建立人血浆中消癌平高效液相色谱（HPLC）测定法。方法　采用HPLC法，色谱柱为C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流动相为乙腈-0.4 %磷酸溶液（13∶87），流速为1.0 ml／min，柱温为室温，检测波长327 nm。结果　绿原酸在浓度2.5～60.0 mg／L范围内呈良好的线性关系（r＝0.9996），最低检测浓度为0.25 mg／L。方法回收率为100.1 %～102.6 %，提取回收率为78.6 %～80.3 %。日内、日间相对标准偏差值（RSD）均小于3.8 %。结论　反相高效液相色谱法快速、简便、准确，可用于人血浆中消癌平注射液中绿原酸含量测定。     

染料木黄酮抑制多柔比星诱导的多药耐药膀胱肿瘤T24细胞增殖的实验研究

 【摘要】　目的　建立膀胱肿瘤T24细胞多药耐药（MDR）模型并鉴定其耐药特性,观察染料木黄酮对多柔比星（ADM）诱导的多药耐药T24（T24／ADM）细胞增殖的影响。方法　体外培养膀胱肿瘤T24细胞,采用ADM浓度梯度诱导,培养出具有稳定MDR表型的T24／ADM耐药细胞株,光镜观察新建细胞株的形态学特点,MTT法检测多种药物对耐药细胞株的增殖活性以及染料木黄酮对T24／ADM细胞增殖的有效作用浓度。结果　用ADM诱导6个月后的T24／ADM细胞形态无明显改变;T24／ADM细胞对多种化疗药物的耐受能力均明显提高,与亲本细胞株T24相比,耐药细胞株T24／ADM对ADM的耐药指数达15.79,对5-氟尿嘧啶、顺铂、环磷酰胺的耐药指数依次为4.68、3.81、5.53。用染料木黄酮作用于T24／ADM细胞后,对T24／ADM细胞的半数抑制浓度为40 μg／ml,质量浓度为20～100 μg／ml的染料木黄酮具有抑制T24／ADM细胞增殖的作用。结论　建立的T24／ADM细胞具有多药耐药性,达到实验要求。质量浓度为20～100 μg／ml的染料木黄酮可部分抑制人类膀胱肿瘤T24／ADM细胞的增殖。     

蟾毒灵与顺铂协同抑制乳腺癌MCF-7细胞增殖的机制探讨

目的 探讨蟾毒灵（Bufalin）联合顺铂对乳腺癌MCF-7细胞增殖及凋亡的影响,并探讨可能的协同机制。方法 采用MTT法检测空白对照组（仅培养液）、单纯细胞对照组和实验组的细胞增殖率,实验组加入不同浓度的顺铂或Bufalin单药或以固定比例（Bufalin∶顺铂=1 nmol／L∶1 μmol／L）联合作用24 h。分别采用20 nmol／L Bufalin、20 μmol／L顺铂单药或联合作用24 h,用流式细胞术检测细胞凋亡,并用Western Blotting检测活化的Met（p-Met）、Met、活化的Src（p-Src）、Src、PARP及其裂解cleaved PARP蛋白的表达。结果 MTT法检测显示,顺铂和Bufalin均以剂量依赖方式抑制乳腺癌MCF-7细胞增殖。在顺铂≥0.1 μmol／L和Bufalin≥0.1 nmol／L时两药联合作用可协同抑制MCF-7细胞增殖（0＜CI＜0.433）。流式细胞术检测显示,20 μmol／L顺铂作用24 h可诱导（10.7±4.8）％ 的MCF-7细胞凋亡,而20 nmol／L Bufalin作用24 h未明显诱导细胞凋亡,20 nmol／L Bufalin与20 μmol／L顺铂联合作用24 h后可诱导（40.8±8.5）％的MCF-7细胞凋亡。Western Blotting检测显示,顺铂作用后可导致Met和Src活化,Bufalin与顺铂联合作用后可抑制顺铂诱导的Met和Src活化,同时上调PARP裂解。结论 Bufalin可能通过抑制顺铂诱导的Met和Src活化与顺铂协同抑制MCF-7细胞增殖,增强顺铂诱导的细胞凋亡。     

苦参碱和顺铂联合应用对人骨肉瘤细胞株MG-63增殖抑制作用的研究

[目的]观察苦参碱和顺铂单药及联合应用对人骨肉瘤细胞株MG-63细胞增殖的抑制作用。[方法]采用MTT法（四甲基偶氮唑蓝比色法）,利用中效原理判断药物联合应用的效应。[结果]苦参碱与顺铂联合应用对骨肉瘤细胞株MG-63细胞增殖抑制作用加强,低浓度（≤1．0mg／ml）苦参碱与顺铂联合应用时两者为拮抗作用,〉1．5mg／ml苦参碱与顺铂合用时为相加作用。在苦参碱浓度〉2．0mg／ml联合用药的抑制率接近95％。顺铂以20μg／ml的浓度作用于MG-63细胞48h．增殖抑制率是86．7％,而顺铂以5μg／ml的浓度与2mg／ml的苦参碱联合作用48h,增殖抑制率是92．6％,说明苦参碱和顺铂联用可使顺铂在小剂量时即有较好的杀伤作用。[结论]苦参碱和顺铂联合应用可使顺铂在小剂量时有较好的作用,从而避免了顺铂的毒副作用。     

TK/GCV系统联合顺铂对骨肉瘤MG-63细胞生长的抑制作用研究

目的 研究脂质体介导的包含TK基因的质粒pIRES-EGFP-tk在GCV作用下（TK/GCV系统）联合化疗药物顺铂对人骨肉瘤MG-63细胞生长的抑制作用。方法 构建重组质粒pIRES-EGFP-tk,制备和转化感受态大肠杆菌BL21及鉴定测序,培养和转染人骨肉瘤MG-63细胞株,流式细胞仪分析和荧光倒置显微镜下观察细胞生长状态,筛选稳定细胞系,MTT法检测GCV与不同浓度顺铂联合应用对骨肉瘤MG-63细胞株生长的抑制作用。结果 成功构建含TK基因cDNA片段的重组质粒pIRES-EGFP-tk,通过PCR、酶切电泳等方法鉴定质粒位点和大小均符合实验设计。将重组质粒pIRES-EGFP-tk转染入人骨肉瘤MG-63细胞株,获得稳定表达。荧光显微镜下观察MG-63 （tk＋）呈现绿色荧光。流式细胞仪检测转染率为67.7%。通过MTT法检测,当GCV浓度为10 μg/ml时,骨肉瘤MG-63 （tk＋）细胞株的生长受到抑制,同时测得顺铂的最低有效浓度为1 μg/ml。当顺铂与GCV （5 μg/ml）联合应用时,顺铂的有效浓度可降为0.25 μg/ml,并对MG-63 （tk＋）细胞株有明显的抑制作用。结论 TK/GCV系统联合顺铂可对人骨肉瘤MG-63细胞的生长产生抑制作用,并提高MG-63细胞对顺铂的敏感性,降低其有效剂量。可望为骨肉瘤的辅助治疗提供实验依据。     

二甲双胍逆转人卵巢癌细胞株对顺铂耐药的实验研究

目的 探讨二甲双胍对人卵巢癌耐顺铂细胞株SKOV3／DDP的耐药逆转作用及机制。方法 将人卵巢癌细胞株SKOV3细胞设为亲本组,耐顺铂细胞株SKOV3／DDP细胞分为空白对照组、顺铂组、二甲双胍组和联合用药组（顺铂+二甲双胍组）;采用CCK-8法检测不同浓度二甲双胍对SKOV3／DDP细胞的作用,RT-PCR和Western blotting检测各组细胞中内质网应激相关蛋白的表达。结果 不同浓度二甲双胍作用24h后,对SKOV3细胞和SKOV3／DDP细胞均有抑制作用,且呈浓度依赖性（P＜0.05）;当二甲双胍＞5 mmol／L时,其对SKOV3／DDP细胞的增殖抑制率高于SKOV3细胞（P＜0.05）。顺铂对SKOV3细胞和SKOV3／DDP细胞的半数抑制浓度（IC50）分别为15.25 μg／ml和118.68 μg／ml,SKOV3／DDP的耐药倍数为7.78。联合用药组SKOV3／DDP细胞IC50为 73.45 μg／ml,耐药倍数为4.81。二甲双胍对SKOV3／DDP细胞对顺铂耐药性的逆转倍数为1.62。亲本组中GRP78 mRNA和蛋白的相对表达水平分别为0.38±0.02和0.24±0.04;顺铂组、二甲双胍组和联合用药组的GRP78 mRNA的相对表达水平分别为0.93±0.02、0.68±0.02、0.49±0.07,与空白对照组的0.83±0.04比较,联合用药组明显降低,其次为二甲双胍组,顺铂组升高,差异均有统计学意义（P＜0.05）;GRP78蛋白在各组中表达与其mRNA表达趋势一致,差异均有统计学意义（P＜0.05）。顺铂组、二甲双胍组、联合用药组CHOP蛋白的表达量分别为0.42±0.03、0.69±0.03、0.84±0.01,均高于空白对照组的0.39±0.05,差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论 二甲双胍对人卵巢癌顺铂耐药细胞的耐药性有调节作用,其可能作用机制为通过降低GRP78表达,提高CHOP蛋白表达的内质网应激途径促进细胞凋亡来降低耐药细胞对顺铂的耐药性。     

索拉非尼、奥沙利铂单药及不同联合方案对人肝癌细胞HepG2的抑制作用

【摘 要】目的 探讨索拉非尼、奥沙利铂单药和两药联合应用对人肝癌细胞株HepG2增殖、迁移和侵袭的影响。方法 选择人肝癌细胞株HepG2并分为6组处理：奥沙利铂（0.5 μg／ml）组（O）、索拉非尼（2.0 μmol／L）组（S）、同时联合用药（奥沙利铂 0.5 μg／ml,索拉非尼2.0 μmol／L）组（O+S）、奥沙利铂（0.5 μg／ml）序贯索拉非尼（2.0 μmol／L）组（OS）、索拉非尼（2.0 μmol／L）序贯奥沙利铂（0.5 μg／ml）组（SO）和加入100 μl普通培养液的阴性对照组（C）;分别采用MTT法、流式细胞术、免疫荧光技术、迁移与侵袭实验,观察奥沙利铂、索拉非尼单药和两药联合应用对HepG2细胞增殖、侵袭与转移的作用。结果 MTT法显示,48 h后用药组对HepG2细胞增殖均有显著的抑制作用,O+S组的细胞抑制率最高,为（72.13±0.99）％,均明显高于O组、S组和SO组（P＜0.01）,但与OS组的差异无统计学意义（P＞0.05）;流式细胞术及荧光显微镜观察显示,O+S组处理HepG2细胞48 h的凋亡率最高,达65.33％,但与OS组的差异无统计学意义（P＞0.05）;细胞迁移实验表明,O+S组的细胞迁移抑制率为（71.67±6.66）％,均明显高于O组、S组和SO组（P＜0.01）,但与OS组的差异无统计学意义（P＞0.05）;O+S组和OS组均表现为两药协同作用（P＜0.01）,SO组则表现为两药相加作用（P＜0.05）。细胞侵袭实验表明,O+S组的细胞侵袭抑制率为（76.00±5.57）％,明显高于O组、S组（P＜0.01）;O+S组与OS组均表现为两药协同作用。结论 同时联用奥沙利铂和索拉非尼或序贯应用两药较其各自单药对人肝癌HepG2细胞的增殖、迁移、侵袭抑制作用更强,其中先用奥沙利铂序贯索拉非尼与同时联用奥沙利铂和索拉非尼的协同增效作用相似,均优于先用索拉非尼序贯奥沙利铂。     

血清骨特异性碱性磷酸酶及Ⅰ型胶原吡啶交联终肽与乳腺癌骨转移的相关性分析

 目的　分析血清骨特异性碱性磷酸酶（BAP）和Ⅰ型胶原吡啶交联终肽（ICTP）水平在乳腺癌骨转移与非骨转移患者中的分布及其与临床特征的相关性。方法　收集乳腺癌患者血清217例，通过影像学将患者分为骨转移组（109例）和非骨转移组（108例）。应用酶联免疫吸附法测定两组血清中的BAP及ICTP水平。结果　乳腺癌骨转移组血清BAP及ICTP水平中位数分别为24.8 μg／L（7.6~213.7 μg／L）和7.0 μg／L（1.4~32.4 μg／L），高于非骨转移组的21.2 μg／L（7.3～68.8 μg／L）和4.1 μg／L（0.0～15.8 μg／L）（P＝0.003和P＝0.000），多发骨转移组的BAP及ICTP水平中位数分别为32.3 μg／L（9.4~213.7 μg／L）和7.6 μg／L（1.4～32.4 μg／L），高于单发骨转移组的18.1 μg／L（7.6～60.0 μg／L）和4.9 μg／L（1.8～10.5 μg／L）（P＝0.001和P＝0.010）。血清BAP检测诊断乳腺癌骨转移的灵敏度为45.0 %（49／109），特异度为83.3 %（90／108）；血清ICTP的灵敏度为46.8 %（51／109），特异度为84.3 %（91／108）；两者联合检测的灵敏度为61.5 %（67／109），特异度为71.3 %（77／108）。结论　检测血清BAP及ICTP诊断乳腺癌骨转移的灵敏度较低，不适合作为诊断指标。两者联合检测可以提高灵敏度，对辅助诊断有一定价值。     

TRAIL蛋白与顺铂协同诱导横纹肌肉瘤细胞凋亡的实验研究

目的探讨肿瘤坏死因子（INF）相关凋亡诱导配体（TRAIL）蛋白和顺铂联合应用对人横纹肌肉瘤细胞生长抑制和诱导凋亡作用。方法将不同浓度的TRAIL作用于培养的人RD横纹肌肉瘤细胞，通过MTT比色法、流式细胞仪检测细胞凋亡和Fas蛋白表达的方法，观察其对横纹肌肉瘤细胞的作用，及其与顺铂协同作用的效果和机制。结果TRAIL浓度为1．0、10．0、100．0ng／ml时，细胞毒性指数分别为18．9％、20．8％和43．5％；顺铂浓度为1．0、5．0、10．0μg／ml时，细胞毒性指数分别为9．8％、23．4％和37．1％。而浓度为100ng／ml的TRAIL与浓度为5μg／ml的顺铂联合作用时，细胞毒性指数明显增加达66．4％，结合FCM分析显示联合应用提高了Fas蛋白的表达，与细胞凋亡率增加相一致。结论TRAIL和顺铂均能有效诱导横纹肌肉瘤细胞凋亡，联合应用具有明显的协同效果。     

十字孢碱促进多柔比星诱导的多药抗药性肿瘤细胞系的凋亡

 【摘要】　目的　明确蛋白激酶C（PKC）活性的抑制是否能促进化疗药物诱导的多药抗药肿瘤细胞系的凋亡。方法　选用口腔鳞癌细胞KB／S及其多药抗药株KB／VCR，常规细胞培养，比较单独或联合PKC抑制剂十字孢碱的情况下，多柔比星（ADM）诱导这2种细胞的凋亡情况。凋亡采用流式细胞术和吖啶橙荧光染色检测，并经电子显微镜观察证实。结果　ADM 0.04 μg／ml，作用36 h有96.68 % KB／S细胞凋亡，作用48 h有64.99 ％的KB／VCR细胞凋亡；将ADM质量浓度增加到0.4 μg／ml和2.0 μg／ml时，KB／VCR细胞凋亡比例分别为69.74 ％和37.18 ％；合用十字孢碱后，凋亡细胞比例分别增加到82.58 ％和47.65 ％，经统计学处理，前者χ 2 = 4.5，P＜0.05；后者χ 2 = 2.2，P＞0.05。这些结果均经电镜和吖啶橙染色证实。结论　耐受凋亡可能是肿瘤细胞多药抗药的机制之一，而PKC抑制剂可解除这种耐受。     

褪黑素通过促凋亡协同增强顺铂对人喉癌细胞增殖的抑制作用

目的:研究褪黑素(melatonin,MT)对人喉癌细胞增殖与凋亡的影响及MT增强人喉癌细胞对顺铂(cisplatin,DDP)治疗的敏感性.方法:采用不同质量浓度MT和DDP单独或联合处理Hep-2细胞;通过CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期,采用两药相互作用指数(co-efficient of drug interaction,CDI)评估MT是否影响Hep-2细胞对DDP的敏感性.结果:CCK-8检测结果显示,单用MT或DDP可浓度依赖性抑制Hep-2细胞的增殖,MT可协同增强DDP对Hep-2细胞的增殖抑制作用(CDI＜1).流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期结果显示,MT可促进Hep-2细胞凋亡以及增加亚G1期细胞比例(P＜0.01),MT可协同DDP促进Hep-2细胞凋亡[0.5 mmol/L MT联合20μg/ml DDP组的细胞凋亡率显著高于20 μg/ml DDP组,(40.9±3.0)％vs(11.0±0.9)％,P＜0.01]以及亚G1期细胞比例[0.5 mmol/L MT联合20 μg/mlDDP组的亚G1期细胞比例显著高于20 μg/ml DDP组,(73.0±2.4)％vs(40.4±3.0)％,P＜0.01].加入Caspase抑制剂Z-VAD-fmk可逆转MT和/或DDP对Hep-2细胞的增殖抑制作用和凋亡诱导作用(均P＜0.01).结论:MT能以Caspase依赖的方式诱导人喉癌细胞Hep-2的凋亡,从而协同增强DDP对细胞的增殖抑制作用.     

咖啡因与苯巴比妥联合对顺铂的体外抗癌增效作用

目的：研究咖啡因（CAF）对顺铂（DDP）的抗癌增效作用及苯巴比妥（PBT）是否抑制咖啡因的抗癌增效作用。方法：以SPC－A－1细胞为,要用MTT法研究甲基黄嘌呤类药物－CAF及其与PBT联合应用对DDP的体外细胞毒作用的影响,结果：120ug/ml的CAF及10ug/ml PBT对细胞生长无明显的细胞毒作用,120ug/ml的CAF可明显增强DDP对SPC－A－1细胞的细胞毒作用（P＜0．05）,10ug/ml PBT对DDP无增效作用（P＞0．05）,120ug/ml CAF与10ug/ml PBT的混合物也能增强DDP的细胞毒作用（P＜0．01）,其增效作用与单纯CAF的增效作用比较无显著性差异（P＞0．05）,。结论：咖啡因可明显增强DDP对SPC－A－1细胞的体外抗癌效应,而苯巴比妥对咖啡因的体外抗癌增效作用无拮抗作用,提示苯巴比妥作为降低咖啡因副反应的成分,有可能与咖啡因联合作用作为化疗增效剂用于肺癌治疗。     

Toll样受体8在人宫颈癌细胞株HeLa中的表达及其激动剂对HeLa细胞增殖和凋亡的影响

目的 观察Toll样受体8(TLR8)在人官颈癌细胞株HeLa中的表达,探讨TLR8激动剂CL075对HeLa细胞增殖和凋亡的影响。方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)法,检测13种肿瘤细胞系中TLR8 mRNA和经CL075作用后HeLa细胞中环氧化酶2(COX-2)、Bcl-2和血管内皮生长因子(VEGF) mRNA的表达水平;采用免疫荧光技术对HeLa细胞中TLR8蛋白的表达进行定位观察;采用流式细胞术检测不同浓度CL075作用下HeLa细胞的细胞周期和凋亡的变化;采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测HeLa细胞的增殖状态。结果 与其他肿瘤细胞株相比,HeLa细胞中TLR8mRNA的表达水平最高,达703.7±20.6。TLR8蛋白主要定位于HeLa细胞的胞浆中。0.1、0.5和1.0 μg/ml的CL075分别作用于HeLa细胞48 h后,G2/M+S期细胞所占的比例逐渐增高,其中1.0μg/ml CL075作用组G2/M+S期细胞所占的比例最高,达(57.67±1.73)％,明显高于空白对照组[(39.02±2.33)％,P＜0.01]。经不同浓度的CL075处理后,HeLa细胞的凋亡水平与空白对照组相比,无明显改变(P＞0.05);但经顺铂处理后,凋亡细胞明显增多(P＜0.01)。MTT法检测结果显示,与空白对照组比较,CL075作用于HeLa细胞48和72 h后,HeLa细胞的增殖能力明显增强(P＜0.01)。CI075作用于官颈癌HeLa细胞24和48 h后,COX-2、Bcl-2和VEGF mRNA的表达水平明显升高(P＜0.05)。结论宫颈癌HeLa细胞中TLR8的表达水平及其与配体相互作用的信号,可能是肿瘤发生和发展的重要因素之一。TLR8可能是宫颈癌治疗的一个潜在靶点。     

CXCL4对非小细胞肺癌H460细胞顺铂耐药性的影响及其机制探讨

目的:探讨血小板因子4（CXCL4）对人非小细胞肺癌H460细胞顺铂耐药性的影响及其作用机制。方法:体外诱导法建立顺铂耐药的非小细胞肺癌细胞株H460/DDP,并鉴定其生物学特性。采用CCK-8法分别检测H460及H460/DDP对顺铂的耐药性。qRT-PCR及Western Blot检测亲本细胞株H460及顺铂耐药株H460/DDP中CXCL4的mRNA及蛋白表达水平。通过CCK-8法检测过表达或者敲低CXCL4后亲本细胞株H460或顺铂耐药株H460/DDP对顺铂的敏感性。最后利用Western Blot及qRT-PCR法探讨CXCL4抵抗非小细胞肺癌化疗敏感性的调控机制。结果:成功构建了非小细胞肺癌顺铂耐药株H460/DDP（H460/DDP IC50=55.005 μg/ml）,CCK-8结果提示顺铂耐药株H460/DDP与亲本细胞株H460细胞的增殖速度没有明显差异（P＞0.05）;顺铂耐药株H460/DDP中,CXCL4 mRNA及蛋白水平均显著增高（P＜0.000 1）;在亲本细胞株H460中稳定过表达CXCL4能显著降低其对顺铂的敏感性（P＜0.000 1）,而于顺铂耐药株H460/DDP中敲低CXCL4能显著增加H460/DDP对顺铂的敏感性（P＜0.000 1）;Western Blot及qRT-PCR结果显示,CXCL4能激活Wnt/β-catenin 信号通路,促进下游基因MYC、CyclinD1、MMP-7、CDK4的表达。结论:CXCL4通过调控Wnt/β-catenin 信号通路促进非小细胞肺癌对顺铂的耐药性。     

重组性融合蛋白TAT-OSBP-MKK6（E）对耐顺铂卵巢癌细胞增殖与侵袭转移的影响

目的 观察重组性融合蛋白TAT-OSBP-MKK6（E）对卵巢癌顺铂（DDP）耐药细胞株SKOV3／DDP增殖及侵袭转移的影响。方法 采用四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测SKOV3／DDP细胞经融合蛋白处理后的增殖抑制率及采用自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤（3-MA）后融合蛋白对DDP敏感性的影响,单丹磺酰尸胺染色法检测融合蛋白诱导的自噬情况,QPCR和Western blotting检测SKOV3／DDP细胞Beclin 1的表达情况,Transwell体外迁移和重组基底侵袭实验研究融合蛋白对SKOV3／DDP细胞的侵袭和迁移能力。结果 DDP对SKOV3／DDP细胞的半数抑制浓度（IC50）为（37.62±2.63）μg／ml,10、20、40 μg／ml 融合蛋白作用后,DDP的IC50分别降低至（17.07±0.88）、（11.08±0.57）和（1.96±0.31）μg／ml（P＜0.001）;以3-MA抑制细胞自噬,可阻断融合蛋白诱导SKOV3／DDP细胞对DDP的敏感性;SKOV3／DDP自噬情况的比较：融合蛋白组、融合蛋白+3 MA组的荧光强度分别为824±107、459±128,均高于对照组的306±143,差异有统计学意义（P＜0.05）。Beclin 1 mRNA和蛋白的表达水平随融合蛋白的浓度增加（10、20、40 μg/ml）,其表达水平升高,各浓度组与对照组比较差异均有统计学意义（P＜0.05）。空白对照组、DDP组、融合蛋白组和DDP+融合蛋白组中SKOV3／DDP细胞的Beclin 1蛋白表达亦不同,差异有统计学意义（P＜0.05）,其中DDP+融合蛋白组蛋白表达量最高,为0876±0023,其次为融合蛋白组的0.564±0.021。融合蛋白能明显抑制SKOV3／DDP细胞的侵袭和迁移能力,DDP+融合蛋白组和融合蛋白组分别与空白对照组比较,差异有统计学意义（P＜0.05）,DDP组与空白对照组比较,差异无统计学意义（P＞0.05）。结论 融合蛋白可抑制SKOV3／DDP细胞的增殖、侵袭和转移,可能与诱导自噬及上调Beclin 1的表达有关。     

原发性肺癌支气管动脉阿霉素灌注化疗的药代动力学研究

目的通过监测阿霉素(ADM)的血药浓度,比较支气管动脉灌注与静脉全身化疗在药代动力学方面的差异.方法(1)动物实验组家兔24只,观察ADM单独用药或与DDP、MMC不同方式配伍时药代动力学参数的变化.(2)临床研究组原发性中心型肺癌17例,采取联合用药(ADM+DDP+MMC)支气管动脉灌注化疗.分别取动、静脉血,以荧光分光光度法测定血浆中阿霉素浓度.结果线性范围在101～106ng/ml内,r=0.9983.日内标准误差(s)＜2%,日间s＜3%.动物实验组单用ADM者血药浓度-时间方程为Cμg/ml=129.44e-13.36t+0.25e-0.072t;三药配伍者为Cμg/ml=370.93e-23.43t+0.04e-0.09t.临床研究组动脉血样为Cμg/ml=448.61e-66.62t+16.35e-8.13t;静脉血样为Cμg/ml=15.69e-21.66t+0.07e-0.038t.结论从药代动力学的角度衡量,ADM联合用药灌注化疗治疗支气管肺癌,是一种药效高、毒副作用低的治疗方法.     

蟾毒灵对人骨肉瘤细胞化疗增敏作用的实验研究

目的 探讨蟾毒灵对人骨肉瘤细胞Saos 2和U2OS的化疗增敏作用。方法 采用无毒剂量的蟾毒灵联合不同浓度的阿霉素（0.01、0.1、1.0μg／ml ADM）和顺铂（0.5、1.0、2.0μg／ml DDP）分别作用于Saos-2和U2OS细胞24h,用CCK-8法观察药物对细胞增殖的抑制作用,Hoechst 33258 染色法观察细胞凋亡的形态学改变,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果CCK-8法检测显示,蟾毒灵对Saos 2和U2OS细胞增殖的抑制作用呈浓度依赖性;无细胞毒剂量（0.005μmol／L）的蟾毒灵可以显著增强不同浓度ADM和DDP 对Saos-2和U2OS细胞增殖的抑制作用（q＞1.15）。Hoechst 33258染色法显示,蟾毒灵联合DDP或ADM后Saos-2和U2OS细胞的凋亡形态学变化较DDP或ADM单药更显著。流式细胞术检测显示,0.005μmol／L蟾毒灵联合1.0μg／ml DDP或2.0μg／ml ADM组Saos-2和U2OS细胞的凋亡率显著高于DDP或ADM单药组（q＞1.15,P＜0.05）。结论 无毒剂量的蟾毒灵可以增强化疗药物诱导的人骨肉瘤细胞凋亡的能力,具有化疗增敏作用。     

重组人血管内皮抑素逆转人肺腺癌A549/DDP细胞耐药性研究

目的探讨重组人血管内皮抑素(rh-ES)对A549/DDP细胞耐药性的逆转作用.方法采用人肺腺癌细胞株A549及耐药细胞株A549/DDP作为研究对象,以顺铂(DDP)与重组人血管内皮抑素两者联合及单独给药的方式分别作用于人肺腺癌细胞株A549及耐药细胞株A549/DDP,作用时间72 h,观察不同给药方式造成的同株细胞之间耐药性的不同及不同株细胞间耐药性的差别,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测重组人血管内皮抑素对A549/DDP细胞耐药性的逆转作用.结果DDP对A549细胞半数抑制浓度(IC50)为(0.72±0.05)μg/ml,对A549/DDP的IC50为(11.54±0.64)μg/ml.rh-ES联合DDP对A549/DDP的IC50为(2.0±0.1)μg/ml.逆转倍数(RF)为5.77,相对逆转率(RRR)为88.2%.结论重组人血管内皮抑素能逆转A549/DDP对DDP的耐药性.     

电化学发光法检测尿Cyfra21-1对膀胱癌诊断的临床性能评价

目的:评估电化学发光法检测尿Cyfra21-1对膀胱癌的临床诊断价值。方法:收集2020年02月至2022年01月到深圳市罗湖区人民医院就诊的泌尿系统炎症疾病(尿路结石、尿路感染)患者尿液66例、膀胱癌患者尿液58例,收集深圳市众循精准医学研究院健康志愿者尿液37例和健康体检者尿液样本83例作为健康对照样本。参考美国临床和实验室标准协会(Clinical and Laboratory Standards Institute,CLSI)颁布的系列文件使用细胞角蛋白19片段(Cyfra21-1)测定试剂盒(电化学发光法)检测尿Cyfra21-1的最低检出限、线性范围、准确度、批内精密度、干扰试验进行性能,并初步建立正常参考区间,确定Cyfra21-1的阳性判断值,最后纳入新的外部验证队列对结果进行盲测验证。采用SPSS 25.0版本软件进行实验数据分析。结果:Cyfra21-1试剂盒的最低检出限为0.01 ng/mL;在0.1~500 ng/mL范围内,线性良好(r=0.995);每台仪器测得的高、低浓度水平样本相对偏差均不超过±10%;高、低浓度水平的批内精密度变异系数(CV)分别为1.47%与1.28%;干扰实验表明,尿液中含有生物素(≤30 ng/mL)、总蛋白(≤10 g/dL)、HAMA(≤100 ng/mL)、吉西他滨(≤380 μg/mL)、酒石酸·长春瑞滨,98％(≤1.23 μg/mL)、厄洛替尼(≤17 μg/mL)、紫杉醇(≤67 μg/mL)、阿霉素(≤40 μg/mL)、异环磷酰胺(≤800 μg/mL)、依托泊苷(≤12 μg/mL)、碳铂(卡铂)(≤500 μg/mL)时,测定结果的相对偏差均在±10％范围内;尿液中含有类风湿因子(≤1 000 IU/mL)时,测定结果的相对回收率为108.47%;建立的正常参考区间为≤10.809 ng/mL;尿Cyfra21-1的阳性判断值为7.678 ng/mL,敏感度和特异性分别为67.20%和92.50%。盲测样本经检测,23份结果正确,正确率为63.89%。膀胱癌组与健康对照组和泌尿系统炎症疾病组检测结果比较,差异具有统计学意义(P＜0.01);各组内性别比较,差异无统计学意义(P＞0.05),膀胱癌组内TNM各分期比较,差异无统计学意义(P＞0.05),膀胱癌组内肿瘤各分级比较,差异具有统计学意义(P＜0.01),膀胱癌组内肿瘤浸润程度比较,差异具有统计学意义(P＜0.05)。结论:细胞角蛋白19片段(Cyfra21-1)测定试剂盒(电化学发光法)性能良好,符合临床检测尿Cyfra21-1要求。电化学发光法检测尿Cyfra21-1能有效区分膀胱癌和非膀胱癌样本,具备精密度高、时间短、操作自动化等优势,适合于临床应用。