腺病毒载体介导的早幼粒细胞性白血病生长抑制因子诱导胆囊癌细胞凋亡的实验研究

目的　探讨腺病毒载体介导的早幼粒细胞性白血病(promyelocyticleukemia ,PML)生长抑制因子抑制胆囊癌细胞系(GBC- SD)的生长作用。方法　用重组绿色荧光蛋白的腺病毒(Ad GFP)感染胆囊癌细胞系,检测其对胆囊癌细胞株的感染力及Ad- PML对细胞体外生长的影响。用DNAladdering和TUNEL法检测细胞凋亡,用流式细胞仪检测细胞周期。结果　腺病毒滴度为10 0MOI时被感染的胆囊癌细胞可达10 0 % ;PML能明显抑制GBC SD细胞体外生长(P <0 .0 5 ) ;Ad PML感染后GBC SD细胞出现DNA降解带,凋亡细胞数量明显增加(P <0 .0 1) ;但细胞周期无明显改变。结论PML能显著抑制GBC- SD细胞的体外生长,PML通过诱导胆囊癌细胞凋亡发挥其生长抑制作用。     

重组腺病毒介导的KDR-CDglyTK基因诱导人胃癌细胞凋亡的研究

目的探讨KDR启动子驱动双自杀基因体系对人胃癌细胞靶向治疗的作用。方法用重组腺病毒AdEasy-KDR-CDglyTK体外感染SCG7901细胞和HepG2细胞,观察该体系对SCG7901细胞的杀伤效应。应用透射电镜、Hoechest 33258/PI染色、流式细胞仪观察细胞超微结构、细胞凋亡率和细胞周期的变化。建立小鼠SCG7901细胞动物模型,计算抑瘤率。用TUNEL法检测细胞凋亡率。结果受感染SCG7901细胞和HepG2细胞中均有绿色荧光蛋白的表达。已转染腺病毒的SCG7901细胞和HepG2细胞的存活率分别为(21.5±3.2)%和(89.1±3.4)%,两种细胞表现出对前药不同的敏感性(t=25.23,P=0.00)。流式细胞术检测表明该体系抑制SCG7901细胞的DNA合成,亚二倍峰数值之间差异有统计学意义(t=8012,P=0.00)。Hoechest 33258/PI染色和电镜下可见SCG7901细胞有凋亡改变。裸鼠移植瘤的肿瘤体积明显缩小。实验组肿瘤细胞凋亡指数为(36±6)%,较对照组显著增加(P=0.00)。结论KDR启动子可以调控融合基因体系在体外选择性地杀伤人胃癌SCG7901细胞,并且诱导体内外人胃癌细胞的凋亡。     

Dapper1在胃癌组织中的表达及其对survivin介导的细胞凋亡的调控

目的 研究Dapper1(Dpr1)在胃癌组织中的表达及其对survivin介导的细胞凋亡的调控.方法 用RT-PCR方法检测30例患者胃癌及癌旁正常组织中Dpr1 mRNA的表达情况;用RT-PCR检测SGC7901细胞转染pcDNA3.1-Dpr1质粒前后Dpr1和survivin mRNA表达的变化;用Western blot检测转染前后Dvl-2、β-catenin及survivin蛋白表达的变化;用流式细胞术检测转染后SGC7901细胞凋亡率的变化. 结果本组30例胃癌组织中17例Dapperl mRNA表达下调,发生率为57%,且与胃癌的浸润深度和分化程度相关(P＜0.05);转染pcDNA3.1-Dpr1后SGC7901细胞中Dpr1 mRNA表达水平上调,survivin mRNA表达水平下调;Dvl-2、β-catenin以及Survivin蛋白表达量降低;转染pcDNA3.1-Dpr1质粒后SGC7901细胞的凋亡率升高. 结论 Dpr1能够通过经典WNT通路抑制凋亡相关蛋白survivin的表达,在胃癌细胞的凋亡中发挥重要作用.     

小片断干扰RNA抑制保罗样激酶1基因的表达诱导胃癌细胞凋亡

目的 观察抑制保罗样激酶基因（polo like kinasel，plkl）表达对胃癌细胞——MKN45凋亡的诱导，探讨plk1基因对胃癌细胞增殖及生存力的作用。方法 化学合成小片断干扰RNA（siRNA）阻断MKN45细胞plkl基因的表达；实时定量PCR及Western blot检测干扰前后plk1 mRNA及蛋白质表达的变化；免疫荧光及激光共聚焦显微镜观察MKN45细胞微管改变，流式细胞仪检测MKN45细胞周期及凋亡的变化；Western blot检测pro-caspase3水平的变化。结果 经靶向plk1的siRNA作用后，plk1 siRNA mRNA及蛋白质表达明显下降；MKN45细胞纺锤体结构变得模糊，失去完整性；较多MKN45细胞呈现G2期细胞DNA含量（P〈0．05）；MKN45细胞在48、72h凋亡率较对照组明显上升（P〈0．05）；伴随pro-caspase3水平在72h出现下降。结论 抑制plk1基因表达可导致MKN45细胞凋亡，凋亡机制可能通过caspase3途径；plk1基因对胃癌细胞增殖及存活起着至关重要的作用。     

粒细胞巨噬细胞集落刺激因子抑制氟尿嘧啶诱导的胃癌细胞凋亡增强耐药性的实验研究

目的通过检测粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）对氟尿嘧啶（5-FU）诱导后胃癌细胞凋亡的影响,初步探讨GM-CSF参与胃癌细胞耐药性的相关机制。 方法体外培养胃癌SGC7901细胞,MTT法检测5-FU作用于胃癌细胞的半致死剂量;将GM-CSF添加到5-FU处理的胃癌细胞中,MTT法和平板克隆实验检测其对细胞活性和克隆增殖的影响,Annexin V-FITC/PI双染法流式细胞术检测细胞凋亡情况。Western blotting检测凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的表达差异。 结果5-FU对胃癌细胞的半致死剂量为（16±0.4）mg/L。5-FU对胃癌细胞的活性和增殖能力有明显的抑制作用,GM-CSF能有效减弱5-FU的抑制效果（P<0.05）。5-FU能显著诱导胃癌细胞凋亡,Bax/Bcl-2比值显著升高,而加入GM-CSF后,5-FU诱导的凋亡被抵抗,Bax/Bcl-2比值升高趋势被抑制（P<0.05）。 结论GM-CSF能够促进胃癌细胞增殖并有效抑制5-FU诱导的胃癌细胞凋亡,在增强胃癌细胞化疗耐药性方面具有重要作用。     

胰腺癌细胞凋亡相关基因的表达

我们采用免疫组化方法检测ｂｃｌ２、ｐ５３、ｃｍｙｃ等３种细胞凋亡相关基因在胰腺癌、胰腺癌转移组织和胰腺良性病变中的表达，旨在探讨这些基因产物的表达及相互关系。１．材料和方法：本院病理科存档的石蜡标本，取胰腺癌４８例，Ⅰ期１４例，Ⅱ期２０例，Ⅲ期８...     

丝氨酸/苏氨酸激酶15基因沉默诱导胃癌细胞凋亡

目的 观察丝氨酸／苏氨酸激酶15基因（STK15）沉默后对胃癌细胞MKN45凋亡的诱导作用，阐述STK15基因对胃癌细胞生存的关键作用。方法 化学合成小片断干扰RNA（siRNA）抑制MKN45细胞STK15基因的表达；实时定量PCR及Western印迹检测STK15mRNA及蛋白质表达的变化；流式细胞仪检测MKN45周期分布及凋亡的变化；Hoechest染色观察凋亡形态变化，Western印迹检测pro-caspase3水平的变化。结果 经靶向STK15的siRNA作用48h后，STK15siRNAmRNA及蛋白质表达明显下降；较多MKN45细胞呈现岛期细胞DNA含量（P〈0．05）；细胞凋亡率较对照组明显上升（P〈0．05）；伴随pro—caspase3水平下降。结论 抑制STK15基因表达通过caspase3途径导致MKN45细胞凋亡，STK15基因对胃癌细胞增殖及存活起着关键作用。     

莪术醇对胃癌细胞凋亡的影响及机制研究

目的 观察莪术醇对胃癌细胞株BGC823细胞凋亡的影响,并探讨其作用机制.方法 体外培养BGC823细胞,分别加入12.5、25、50、100 mg/L莪术醇培养液,对照组加入10 ml/L无水乙醇培养液,分别孵育24 h和48 h,采用MTT法分析增殖率;应用流式细胞仪检测各浓度莪术醇处理BGC823细胞48 h的凋亡率及细胞周期的分布;分光光度法检测Caspase-3活性;100 mg/L莪术醇孵育BGC823细胞48 h后,用RT-PCR和Western blot法检测Caspase-3、Bcl-2、Bax和Survivin mRNA和蛋白的表达水平.结果 莪术醇抑制BGC823细胞增殖,并且随浓度的增加和时间的延长而加强;不同浓度莪术醇处理BGC823细胞,均使处于G0/G1期的细胞显著增加,S期细胞明显减少(P＜0.05);细胞凋亡率随莪术醇浓度增加而升高(P＜0.05);Caspase-3活性呈浓度依赖性增加(P＜0.05);100 mg/L莪术醇孵育BGC823细胞48 h后,Caspase-3、Bax表达均显著升高(P＜0.05),Survivin、Bcl-2表达均显著下降(P＜0.05),Bcl-2/Bax比值显著降低(P＜0.05).结论 莪术醇对胃癌BGC823细胞生长具有抑制作用,阻滞细胞周期于G0/G1期,并促进其凋亡.其作用与增强Caspase-3的活性,上调Caspase-3、Bax表达,下调Survivin、Bcl-2表达及降低Bcl-2/Bax比值有关.     

肿瘤坏死因子凋亡诱导配体诱导膀胱癌EJ细胞凋亡的研究

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)是能够较特异性诱导肿瘤细胞凋亡的肿瘤坏死因子超家族成员 ,由于对正常组织不表现毒性[1] ,在肿瘤治疗方面得到广泛研究。我们对TRAIL诱导膀胱癌细胞EJ凋亡的作用进行了研究 ,现报告如下。材料与方法　重组人TRAIL(rhTRAIL)由KamiyaBiomedical公司制备和纯化 ,浓度设置为 10 0、5 0、2 0和 10ng/ml。Annexin V FluosStainingKit试剂盒购自罗氏公司。人膀胱癌EJ细胞用含 10 %小牛血清 ,10 0U/ml青霉素和10 0 μg/ml链霉素的RPMI 16 4 0 37℃、5 0ml/LCO2 、饱和湿度下培养。细胞按 5× …     

三氧化二砷诱导人胃癌MKN45细胞凋亡及其分子机制的初步研究

目的研究三氧化二砷(As2O3)对人胃癌细胞的生物学效应及其作用机制。方法胃癌细胞经As2O3处理后,用台盼蓝方法检测As2O3的IC50,采用流式细胞仪、DAPI荧光染色、原位末端标记(TUNEL)及DNA电泳检测细胞凋亡。结果As2O3在一定浓度范围内以浓度依赖的方式抑制胃癌细胞生长,其IC50为(11.05±0.25)μmol/L。经1～10μmol/LAs2O3处理胃癌细胞后,流式细胞仪检测出凋亡峰,流式细胞光度计下可见明显的凋亡细胞形态特征,琼脂糖凝胶电泳出现DNA梯形条带。结论As2O3在体外可诱导胃癌细胞的凋亡,这是其对胃癌细胞产生生物学效应的基础。     

过表达急性早幼粒白血病基因对膀胱肿瘤细胞UM-UC-2体外增殖影响

目的 探讨急性早幼粒白血病基因（PML）对于膀胱肿瘤细胞株UM-UC-2的体外增殖抑制作用及其诱导凋亡的作用。方法 应用脂质体Lipofeetamine2000建立稳定可诱导表达的膀胱肿瘤细胞株UM-UC-2，Western blot检测PML蛋白的表达情况；噻唑蓝（MTT）比色法检测肿瘤生长情况；Giemsa染色、TUNEL和DNA ladder法检测肿瘤的凋亡情况。结果 经100μmol／L的ZnSO4诱导表达后，与对照组比较PML组细胞生长明显受到抑制并且细胞周期停滞在G1期。Giemsa染色提示过表达PML蛋白的细胞核浓染，细胞变圆，DNA ladder电泳提示转染PML细胞细胞在诱导表达后24h出现梯状凋亡特征的电泳条带，TUNEL显示转染PML细胞细胞核内蓝褐色颗粒，对照组未见明显凋亡特征性改变。结论 建立了稳定的可诱导表达PML的膀胱肿瘤细胞株。同时，过表达PML可以抑制膀胱肿瘤细胞株UM-UC-2的体外增殖作用，诱导膀胱肿瘤细胞凋亡。     

温热化疗诱导胃癌细胞凋亡及其对凋亡调控基因表达的影响

目的探讨温热化疗诱导不同分化程度胃癌细胞SGC7901和MKN45凋亡及其对凋亡调控基因表达的影响。方法体外培养中分化胃癌细胞SGC7901和低分化胃癌细胞MKN45并实施(43.0±0.1)℃温热化疗。用透射电子显微镜观察温热化疗后两种不同分化程度胃癌细胞的形态学改变。用末端原位标记法(TUNEL)测定肿瘤细胞的凋亡率。用流式细胞仪和Westernblot法分别测定凋亡调控基因Fas和bcl-2的表达水平。结果温热化疗诱导中分化胃癌细胞SGC7901凋亡的作用强于低分化胃癌细胞MKN45。温热化疗可诱导SGC7901凋亡调控基因Fas表达上调、bcl-2基因表达下调;但只诱导MKN45bcl-2基因表达下调,对MKN45Fas基因表达水平的影响不明显。结论温热化疗诱导分化较好的胃癌细胞的凋亡率大于低分化胃癌细胞;而Fas和bcl-2的表达水平可能是温热化疗后不同分化程度胃癌细胞凋亡率不同的重要原因。     

腺病毒载体介导的PML生长抑制因子对前列腺癌细胞生长和致瘤能力的抑制效果

为探讨用腺病毒载体携带ＰＭＬ（ＰｒｏｍｙｅｌｏｃｙｔｉｃＬｅｕｋｅｍｉａ）基因作为前列腺癌基因治疗的可能性，应用重组人携带ＰＭＬ基因腺病毒（ＡｄＰＭＬ）感染培养的前列腺癌细胞，观察表达ＰＭＬ蛋白的癌细胞与对照组癌细胞的体外生长和裸鼠体内致瘤能力变化，对荷瘤裸鼠瘤体周围注射ＡｄＰＭＬ，观察治疗组和对照组肿瘤生长的变化。结果显示，感染ＡｄＰＭＬ的前列腺癌细胞体外生长和裸鼠体内致瘤能力明显下降，荷瘤裸鼠瘤体周围注射ＡｄＰＭＬ后肿瘤生长速度明显减慢。证实了ＰＭＬ是一种生长抑制因子，提示其可能被应用于前列腺癌的基因治疗研究     

表观沉默蛋白SUZ12与胃癌病理特征及预后的关系

目的 探讨表观沉默蛋白SUZ12在胃癌组织中的表达及其与胃癌患者临床病理指标和预后的关系.方法 采用免疫组化染色方法检测SUZ12蛋白在97例胃癌组织中的表达,分析其与胃癌患者临床病理学指标及生存的关系.结果 SUZ12蛋白在本组胃癌组织中的阳性率为43%,明显高于临近非癌组织的15%(P=0.002).SUZ12基因表达与胃癌的分化程度(P=0.018)、淋巴结转移(P=0.023)、TNM分期密切相关(P=0.014).SUZ12表达阳性患者的预后明显比阴性患者差(P=0.024),为独立预后因素.结论 SUZ12基因可能在胃癌发生发展中起促进作用,其过表达程度可以作为胃癌某些生物学行为及判断预后的新的参考指标.

Abstract：

Objective To investigate the relationship between the expression of suppressor of zeste 12(SUZ12) and the clinicopathological parameters and prognosis in patients with gastric cancer. Methods SUZ12 protein expression levels in 97 cases of resected gastric cancer were detected by immunohitochemistry method, the relations between SUZ12 expression levels and the survival were estimated by Kaplan-Meier curve. Results The positive rate of SUZ12 expression in gastric cancer tissues was 43%, significantly higher than that (15%)in the adjacent noncancerous tissues( P = 0. 002). SUZ12-positive expression was significantly correlated with tumor differentiation ( P = 0. 018 ), lymph nodes metastasis ( P = 0. 023 ) and TNM staging(P = 0. 014). Gastric cancer patients with SUZ1 2-positive expression had worse prognosis than those with SUZ12-negative expression ( P = 0. 024). Conclusions SUZ12 is overexpressed in tissues of gastric carcinoma, SUZ12 is an independent prognosis factor of patients with gastric carcinoma.     

冬凌草甲素诱导胃癌细胞MKN45凋亡的实验研究

目的探讨冬凌草甲素对胃癌细胞MKN45生长及调亡的影响及其机制。方法MTT法检测冬凌草甲素对MKN45细胞生长抑制作用：AO／EB和Hoechest33258荧光染色法及倒置显微镜观察细胞形态学变化：单细胞分析系统PI单染检测细胞周期变化：采用单细胞分析系统Annexinv—PE和7-AAD双染色法检测细胞凋亡率：Western blot检测凋亡相关蛋白Bel-2、Bax和caspase-3的表达改变。结果冬凌草甲素对胃癌细胞MKN45具有明显的生长抑制作用,普通形态学、AO／EB及Hoechest33258荧光染色均可见典型的细胞凋亡改变。冬凌草甲素作用MKN45细胞12h后的细胞凋亡率为8．7％～17．9％,24h后的细胞凋亡率为13．9％．29．3％,与未加药对照组（12h：3．3％;24h：4．8％）比较,差异具有统计学意义（P〈0．01）。细胞周期分析显示冬凌草甲素使MKN45细胞增殖阻滞于G2-M期。Western blot检测显示．冬凌草甲素作用MKN45细胞后,Bax和caspase-3蛋白的表达随着药物作用浓度增高而增加．而Bcl-2蛋白表达无明显变化．Bcl-2／Bax比值减低。结论冬凌草甲素对胃癌细胞MKN45具有明显的增殖抑制作用：冬凌草甲素可能通过增加Bax蛋白表达．改变Bcl-2／Bax比率．继而启动caspase途径诱导胃癌细胞MKN45凋亡。     

抑制polo-like kinase-1基因表达对5-氟脲嘧啶及顺铂体外诱导胃癌细胞凋亡的影响

目的观察抑制polo-like kinase-1(Plk-1)基因对5-氟脲嘧啶(5-Fu)及顺铂(CDDP)体外诱导胃癌细胞株-MKN45凋亡的影响。方法小片断干扰RNA(siRNA)阻断MKN45细胞Plk-1 基因的表达;定量PCR及Western blot检测Plk-1表达的变化;MTT法检测MKN45细胞增殖速率;流式细胞仪检测MKN45细胞凋亡率。结果经靶向Plk-1的siRNA作用24 h、48 h及72 h后,Plk-1 mRNA水平分别下降了51．91％、89．45％、91．03％,蛋白水平在48 h及72 h分别降低了38．43％和 60．66％;联合应用5-Fu、CDDP与靶向Plk-1 siRNA组的MKN45细胞增殖速率较单用5-Fu、CDDP或靶向Plk-1 siRNA组明显减慢(P<0．05);在48 h及72 h细胞凋亡率明显上升(P<0．05)。结论 Plk-1基因表达抑制在体外可增强5-Fu及CDDP对MKN45细胞的凋亡诱导作用;联合应用靶向Plk-1 的siRNA有可能提高5-Fu及CDDP对胃癌细胞杀伤作用。     

ω-3多不饱和脂肪酸二十二碳六烯酸对胃癌细胞株AGS生长和增殖的影响

目的评价ω-3多不饱和脂肪酸（ω-3PUFA）体外抑制胃癌细胞株AGS增殖和诱导细胞凋亡的能力。方法在处于指数生长期的AGS细胞株培养剂中添加二十二碳六烯酸（DHA）,采用噻唑蓝法、DNA琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪等方法检测AGS细胞株的生长和增殖情况,并通过免疫组化检测经DHA处理前后细胞中COX-2的表达。结果经DHA作用后,AGS细胞增殖受抑制,随DHA浓度的递增AGS细胞增殖率逐次下降,呈现明显量效关系,同时诱导细胞凋亡;琼脂糖凝胶电泳显示DNA裂解片段出现典型的阶梯状条带;流式细胞仪检测出凋亡峰,细胞周期分析表明细胞阻滞于G0／G1期。ω-3PUFA对正常肠上皮细胞增殖无明显影响。经DHA作用后,AGS细胞中COX-2表达下调。结论DHA可能通过抑制COX-2而阻遏AGS细胞的增殖,诱发细胞凋亡。     

RASSF1A在胃癌组织中的表达及其临床意义

目的探讨抑癌基因RASSF1A在胃癌组织中的表达及其与胃癌发生、发展的关系。方法采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测58例胃癌组织及癌旁正常组织RASSF1A基因产物的表达水平。结果癌旁正常组织RASSF1A全部表达,而胃癌组织的表达率为46.5%。TNM分期Ⅲ期表达缺失率为74.3%,显著高于Ⅰ、Ⅱ期的27.3%、31.3%(P<0.05)。低分化腺癌表达缺失率为65.6%,显著高于高分化腺癌的38.5%(P<0.05)。RASSF1A基因表达与性别、年龄无明显关系(P>0.05)。结论RASSF1A表达缺失在胃癌的发生、发展中起重要的作用。