经冠状动脉自体骨髓间充质干细胞移植治疗急性心肌梗死：3个月疗效随访

背景：急性心肌梗死预后的决定因素是心肌梗死的面积。减少梗死面积的方法有改善血运和替代治疗。骨髓间充质干细胞可以分化为心血管组织，而且获取容易体外培养扩增，成为心血管替代治疗的理想细胞。目的：评价经冠状动脉人骨髓间充质干细胞移植治疗心肌梗死的疗效。设计：患者自身前后对照观察。单位：南京医科大学附属南京第一医院心内科、核医学科、超声心动图室。对象：选择2003-03／2004—03南京医科大学附属南京第一医院心内科收治的急性心肌梗死进行骨髓间充质干细胞移植治疗患者20例。患者知情同意，术后完整随访〉3个月。男15例，女5例，平均年龄（64&;#177;10）岁。方法：①20例患者，均行经皮冠状动脉介入治疗治疗梗死相关血管。术后3d内采集患者自体骨髓，提取干细胞体外诱导、分化、增殖。2周内经冠状动脉植入梗死相关血管，平均植入干细胞数量为（21．7&;#177;30．14）&;#215;10^7。②干细胞植入前及术后3个月行门控双核素心肌灌注／代谢显像（^18F-脱氧葡萄糖，^18F—FDG）检查，预测存活及坏死心肌，并获取梗死面积。同时行超声心动图检查评价室壁运动、心功能指标，术后3个月复查超声心动图检查评价室壁运动、心功能指标改善情况。③门控双核素心肌灌注／代谢显像（^18F—FDG—SPECT）评价采用5分法：正常0分，稀疏1分，明显稀疏2分，缺损3分。超声心动图评价标准：正常1分，减低2分，明显减低3分，室壁无运动或矛盾运动4分；室壁运动二个分值或二个分值以上为室壁运动改善。主要观察指标：①门控双核素心肌灌注／代谢显像（^18F—FDG—SPECT）结果。②超声心动图随访观察患者干细胞移植前后梗死相关心肌节段评分及心功能指标。结果：20例患者全部进入结果分析。①门控双核素心肌灌注／代谢显像（^18F—FDG—SPECT）结果：20例患者心肌灌注缺损面积治疗后较治疗前明显减少（（33&;#177;15）％，（44&;#177;18）％，P〈0．05）；代谢缺损面积治疗后较治疗前明显减少（（33&;#177;17）％，（43&;#177;21）％，P〈0．05）；治疗前共有199个节段血流灌注及糖代谢缺损匹配，判定为坏死心肌，治疗后79个节段血流灌注代谢明显改善，仍有120个节段血流灌注、糖代谢无明显改善（P〈0．05）。⑥超声心动图结果：患者术后射血分数值术后显著大于术前[（53&;#177;8）％，（42&;#177;7）％，P〈0：05]。结论：经冠状动脉途径植入人骨髓间充质干细胞治疗心肌梗死，方法简单易行，治疗后梗死面积明显减少，坏死区域心肌血流灌注、代谢改善，术前判定为无存活心肌节段术后明显减少，患者心功能得到改善。     

负荷^201Tl／静息^99Tc^m-MIBI双核素心肌断层显像鉴别活性心肌的应用

目的探讨多巴酚丁胺负荷-再分布^201Tl／静息^99Tc^m-MIBI双核素心肌断层显像法鉴别活性心肌的临床应用。方法102例临床怀疑有冠心病的病人进行了多巴酚丁胺负荷-再分布^201Tl／静息^99Tc^m-MIBI同时心肌断层显像，原始图像经三维重建后由两位以上有经验的核医学医师进行图像分析。断层显像后2周内102例病人全部进行了冠状动脉造影。结果（1）102例病人行冠状动脉造影均发现冠状动脉狭窄，其中单支病变48例，两支病变33例，三支病变21例。（2）20例负荷。^201Tl图像和静息^99Tc^m-MIBI图像放射性缺损，再注射^201Tl图像发现放射性填充，提示冬眠心肌存在；41例负荷^201Tl图像放射性稀疏缺损，静息^99Tc^m-MIBI图像和再分布^201Tl图像发现放射性填充，考虑为缺血心肌；以上两种心肌均为活性心肌。（3）35例负荷^201Tl和静息^99Tc^m-MIBI图像均发现放射性缺损，而再注射^201Tl图像未发现放射性填充考虑为梗死心肌即无活力心肌。（4）6例负荷^201Tl及再分布^201Tl图像和静息^99Tc^m-MIBI图像均未发现放射性稀疏，为假阴性。结论多巴酚丁胺负荷-再分布^201T1／静息^99Tc^m-MIBI双核素心肌断层显像法是一种有效、无创的鉴别活性心肌的方法。     

骨髓间充质干细胞移植心肌梗死大鼠的心功能

背景：前期研究发现移植的骨髓间充质干细胞能在受损心肌组织内存活和分化。目的：进一步观察局部注射移植同种异体骨髓间充质干细胞对心肌梗死模型大鼠心功能的影响。方法：体外培养的同种异体骨髓间充质干细胞达到一定数量（106）后用BrdU标记。24只SD大鼠随机分为3组：正常对照组未行冠状动脉前降支结扎,取骨髓间充质干细胞约1mL直接注射到冠状动脉前降支心肌的周围;假移植组：在冠状动脉前降支结扎后7d,取等量DMEM培养液直接注射到梗死心肌的周围;骨髓间充质干细胞移植组：冠状动脉前降支结扎后7d,取等量骨髓间充质干细胞直接注射到梗死心肌的周围;分别于移植前、移植后5周测定大鼠心功能。结果与结论：①移植后5周假移植组最大左室收缩末压、左室内压最大（最小）变化速率均低于移植前（P〈0.01）,而左室舒张末压高于移植前（P〈0.01）;移植后5周骨髓间充质干细胞移植组最大左室收缩末压、左室内压最大（最小）变化速率高于移植前（P〈0.01）,而左室舒张末压低于移植前（P〈0.01）。②移植后5周,骨髓间充质干细胞移植组大鼠的最大左室收缩末压、左室内压最大（最小）变化速率均高于假移植组（P〈0.01）,而左室舒张末压明显低于假移植组（P〈0.01）。结果可见骨髓间充质干细胞移植可明显改善心肌梗死模型大鼠心功能。     

骨髓CD34^＋细胞移植促进梗死心肌血管形成的实验研究

目的：研究骨髓CD34^+细胞移植对梗死心肌血管再生的作用。方法：用免疫磁珠法从犬肋骨骨髓分离CD34^+细胞并注射到CO2冷冻建立的慢性心肌梗死模型区，2，4，8周后取标本，应用免疫组化方法检测血管第八因子的表达，计数血管密度，分别于建立模型前、后4周和干细胞移植后8周应用。^99TC^m-甲氧基异丁基异腈(^99TC^m-MIBI)单光子计算机断层扫描对心肌血流灌注进行评价，计算放射性分布缺损计数(F值)。结果：骨髓CD34^+细胞移植2，4，8周后梗死区血管密度(200倍视野下数)分别为(3．2&;#177;1．2)，(8．2&;#177;0．8)，(12．7&;#177;2．2)条／视野，明显高于对照组(t=5．09，14．07，8．67，尸均&;lt;0．05)。骨髓CD34^+细胞移植前、后8周的心肌灌注显像F值分别为5．44&;#177;0．70，1．50&;#177;0．55。细胞移植后梗死区心肌血流灌注得到明显改善(t=10．84，P均&;lt;0．05)。结论：骨髓CD34^+细胞梗死心肌移植可明显促进梗死区血管形成，提高梗死区心肌的血流灌注。     

腺病毒介导血管内皮生长因子基因转染大鼠骨髓间充质干细胞移植梗死心肌的血管再生

背景：骨髓间充质干细胞的存活率与良好的血液供应关系密切，在移植早期其自身所分泌产生的促血管生长因子不足以刺激血管新生而容易导致移植的细胞死亡。目的：观察骨髓间充质干细胞移植联合血管内皮生长因子基因转染对大鼠梗死心肌组织修复重建、血管再生的影响。设计、时间及地点：随机分组设计的细胞基因工程实验，于2006-01／2007-12在中山大学第二附属医院医学研究中心完成。材料：选取具有相同遗传背景的雄性SD大鼠40只建立急性心肌梗死模型，6~8周龄．体质量250～300g。方法：体外分离、培养、纯化SD大鼠骨髓间充质干细胞，以BrdU标记骨髓间充质干细胞。腺病毒介导血管内皮生长因子基因转染骨髓间充质干细胞。将造模后大鼠随机分为4组．每组10只：基因转染骨髓间充质干细胞组，梗死心肌内注射体外转染腺病毒介导血管内皮生长因子的骨髓间充质干细胞；骨髓间充质干细胞组，梗死心肌内注射骨髓间充质干细胞；基因转染组，注射腺病毒介导的血管内皮生长因子；对照组，注射无血清IMDN培养液。主要观察指标：移植4周后观察移植细胞分化和新生血管的形成，并通过超声多普勒检测心功能变化。结果：细胞移植4周后，基因转染骨髓间充质干细胞组、骨髓间充质干细胞组移植区移植细胞表现为心肌肌钙蛋白T染色阳性，细胞呈肌样细胞形态，并且两组心功能都较移植前有明显改善，基因转染骨髓间充质干细胞组改善程度优于骨髓间充质干细胞组。部分BrdU染色阳性的细胞可以分化成为内皮细胞，参与构成了梗死区域新生毛细血管，相对于单纯细胞移植与细胞因子移植，细胞移植结合血管内皮生长因子基因转染促进毛细血管新生更明显。结论：骨髓间充质干细胞移植联合血管内皮生长因子基因转染可以通过促进心肌再生和新生血管的形成来重建缺血心肌，明显改善心功能。     

冠状动脉搭桥与骨髓CD34~+细胞移植后心肌血流灌注及细胞代谢 双核素显像评价

背景:对于没有心肌存活的梗死区域或心肌梗死区域占心脏很大部分的患者,冠状动脉搭桥的疗效并不明显;当前利用各种干细胞实现心肌和血管的再生已成为缺血性心血管疾病研究热点,移植后心肌的存活与血流灌注的改善有直接关系.目的:应用~(18)F-FDG和 ~(99)Tc~m-MIBI双核素显像评价陈旧性心肌梗死患者经冠状动脉搭桥的同时,选择性行自体骨髓CD34~+细胞移植后的心肌血流灌注及细胞代谢情况.方法:术前1 d于患者髂前上嵴抽取骨髓,Ficoll法密度梯度离心骨髓单个核细胞,应用磁珠分离系统分离纯化CD34~+细胞.全麻下检查患者冠状动脉病变情况,行移植物血管和冠状动脉的端侧吻合,然后抽取浓度为1×10~(11) L~(-1)的骨髓CD34~+细胞悬浊液,在梗死灶(血流/代谢匹配性缺失处)周边及中心6点分别注射,每点注射0.2 mL.根据术前灌注/代谢显像结果,将心肌节段分为匹配和不匹配两类:①匹配类型:血流灌注和代谢显像均稀疏缺损或均正常,即梗死心肌或正常心肌.②不匹配类型:血流灌注显像稀疏缺损,而代谢显像正常或有放射性分布,即存活心肌.移植前后行~(18)F-FDG及~(99)Tc~m-MIBI双核素显像,通过圆周剖面半定量分析,评价冠状动脉搭桥和干细胞移植对心肌灌注及代谢的影响.结果与结论:31例患者共分为279个节段.不匹配组145个节段,与术前比较,术后4个月~(99)Tc~m-MIBI及~(18)F-FDG摄取分数均显著增加(P < 0.01);匹配非移植组81个节段,与术前比较,术后4个月~(99)Tc~m-MIBI及~(18)F-FDG摄取分数均无明显变化(P > 0.05);匹配移植组54个节段,与术前比较,术后4个月~(99)Tc~m-MIBI及~(18)F-FDG摄取分数均显著增加(P < 0.01).冠状动脉搭桥只能改善有存活心肌细胞梗死心肌的血流灌注及细胞代谢,而自体骨髓CD34~+干细胞移植能够改善无存活心肌细胞梗死心肌的血流灌注及细胞代谢.     

腺病毒介导的肝细胞生长因子/血管内皮生长因子双基因转染骨髓间充质干细胞移植治疗心肌梗死

背景：骨髓间充质干细胞可以分化为心肌细胞,促进血管再生,但在移植早期其自身分泌的细胞因子不足以维持良好的分化和再生。目的：验证腺病毒介导的肝细胞生长因子和血管内皮生长因子双基因转染新西兰兔骨髓间充质干细胞移植对新西兰兔梗死心肌组织的修复重建和血管再生的影响。方法：腺病毒介导肝细胞生长因子/血管内皮生长因子双基因转染BrdU标记的新西兰兔骨髓间充质干细胞。取新西兰兔50只建立急性心肌梗死模型,4周后随机分为5组,分别于梗死心肌内注射：①骨髓间充质干细胞/Ad.血管内皮生长因子＋肝细胞生长因子。②骨髓间充质干细胞/Ad.肝细胞生长因子。③骨髓间充质干细胞/Ad.血管内皮生长因子。④骨髓间充质干细胞。⑤对照组注射等量无血清IMDM培养液。移植4周后观察移植细胞的分化和新生血管的形成,并通过超声多普勒检测心功能变化。结果与结论：除对照组外,其余4组兔心功能都较移植前有明显改善（P〈0.05）,其中移植双基因转染骨髓间充质干细胞/Ad.血管内皮生长因子＋肝细胞生长因子组兔的心功能改善程度要明显高于其他3组。部分BrdU染色阳性的细胞可以分化成为内皮细胞,参与构成了梗死区域的新生毛细血管。与对照组比较,其余4组都有明显的血管新生（P〈0.05）,而以骨髓间充质干细胞/Ad.血管内皮生长因子＋肝细胞生长因子组最显著。提示肝细胞生长因子/血管内皮生长因子双基因转染新西兰兔骨髓间充质干细胞移植于梗死心肌可以促进心肌再生和新生血管的形成,明显改善心功能。     

心肌灌注显像对心梗恢复期骨髓细胞移植效果估侧的实验研究

目的应用99Tcm-MIBI心肌灌注显像评价猪急性心梗恢复期自体骨髓细胞移植的治疗效果.方法结扎小型猪冠状动脉前降支创建心肌梗死动物模型,分两组,分别于结扎后2周经前降支注入自身骨髓干细胞和磷酸缓冲液(PBS).结扎后2周及第5周,同时对两组动物行99Tcm-MIBI心肌灌注显像.结果骨髓细胞移植组,移植后3周心肌灌注显像血流灌注较PBS组明显改善,两组显像评分结果有显著性差异[(42.4±5.0)和(29.8±9.5)(P＜0.05)].并与冠造及免疫组化结果一致.结论心肌灌注显像是评价骨髓干细胞移植后,心梗心肌血流灌注和心肌细胞活性的较好方法.骨髓干细胞移植可明显改善心肌血运供应及心肌活力.     

同种异体骨髓间充质干细胞穴位移植:急性心肌梗死后血管新生及相关细胞因子的变化

背景:骨髓间充质干细胞移植途径主要包括外周静脉注射移植、冠状动脉移植以及心肌内注射移植,但存在迁移缺少靶向性,价格高昂等局限性.目的:观察同种异体骨髓间充质干细胞穴位移植兔急性心肌梗死后梗死区血管新生及相关细胞因子的变化.方法:提取兔骨髓进行骨髓间充质干细胞的分离、培养、纯化、扩增、鉴定,并标记.将55只兔随机分为正常组与手术组.手术组急性心肌梗死后1周,再随机分为3组:穴位注射干细胞组、模型对照组、穴位注射生理盐水组.5周后,取心肌组织进行免疫组织化学BrdU染色、心肌特异性肌钙蛋白T免疫组织化学染色检测;免疫组织化学法检测梗死心肌组织血小板内皮细胞黏附因子1水平;免疫组织化学法,夹心酶联免疫法、RT-PCR法、Western-Blot法检测血管内皮细胞生长因子及免疫组织化学法榆测碱性成纤维细胞生长因子.结果与结论:穴位注射的骨髓间充质干细胞可迁移至梗死区,并可以在梗死区分化为心肌样细胞.与模型对照组及穴位注射生理盐水组比较,穴位注射骨髓间充质干细胞可使梗死区及周围组织血小板内皮细胞黏附因子1表达上调,诱导梗死区及周围组织血管新生,其机制是刺激心肌组织中碱性成纤维细胞生长因子表达上调.穴位注射骨髓间充质干细胞组梗死心肌组织中和血清中血管内皮细胞生长因子表达均无上调趋势,因此推测,血管新生由碱性成纤维细胞生长因子及未知因素诱导.     

骨髓间充质干细胞移植对大鼠急性心肌梗死后心功能及bcl-2和caspase-3mRNA表达水平的影响

目的观察急性心肌梗死大鼠应用骨髓间充质干细胞（MSCs）移植前后心功能及凋亡相关蛋白bcl-2和caspase-3 mRNA的变化,以期了解骨髓间充质干细胞移植治疗心梗的机制。方法40只SD大鼠,雌雄各半,随机分为对照组、假手术组、心梗组、移植组,每组各10只。心梗组和移植组大鼠分别结扎前降支造成心梗模型。取大鼠骨髓,体外分离扩增培养MSCs。术前4组大鼠进行超声心动图检测心功能,结扎后移植组立即予MSCs多点注射到大鼠心肌梗死区周边,而梗死组和假手术组注射同剂量培养液,对照组不注射。饲养8周后,分别予超声心动图心功能检测。取梗死周边区心肌行RT-PCR检测bck2和caspase-3mRNA的表达。结果术前4组大鼠心功能指数无显著差异（P〉0．05）;而MSCs移植后,梗死组大鼠心肌LVESD、LVEDD较其它3组明显增高,差异具有显著性（P〈0．05）;而移植组又较对照组和假手术组明显增高（P〈0．05）;而对照组和假手术组在上述指标中无显著差异（P〉0．05）;梗死组大鼠EF较其它3组明显降低（P〈0．05）;而移植组又较对照组、假手术组明显降低（P〈0．05）;而对照组与假手术组之间无显著差异（P〉0．05）。bd-2mRNA在对照组和假手术组表达较少,而在梗死组表达增加,差异有显著性（P〈0．05）;在移植组表达更多,与梗死组相比有显著性（P〈0．05）;caspase-3在对照组和假手术组表达较少,在梗死组表达增加,有显著差异（P〈0,05）;在移植组表达又较梗死组表达减少,有显著差异（P〈0．05）;但与对照组和假手术组相比,表达增加（P〈0．05）。结论急性心肌梗死移植MSCs后,心功能得到改善,心肌凋亡得到抑制。     

疗养护理病历存在的缺陷分析及防预对策

目的调查疗养护理病历存在的缺陷,探求提高护理疗案质量的改进措施。方法对2002年10月至2004年10月的护理病历检查结果进行归纳分析。结果医嘱记录单存在的质量缺陷146次,一般护理记录单存在的质量缺陷142次,体温单存在的质量缺陷68次。结论注重护士的在职培训、实施有效的监督管理是护理疗案质量的保障。