DKK1在雌孕激素受体阴性子宫内膜癌中高表达及意义

目的 探讨DKK1在不同雌孕激素受体状态的子宫内膜癌组织中的表达及意义.方法 采用免疫组化检测DKK1在子宫内膜癌及正常子宫内膜组织中的表达及定位;比较DKK1表达水平在不同雌孕激素受体状态子宫内膜癌组织及正常子宫内膜组织的差异,并探讨其与子宫内膜癌临床病理特征之间的关系.结果 免疫组化结果显示DKK1蛋白主要表达于子宫内膜癌腺上皮上,基质中少量表达.DKK1在雌孕激素受体阴性子宫内膜癌组织中的表达水平高于雌或孕激素受体阳性组和正常子宫内膜组,差异具有统计学意义（P＜0.05）.DKK1蛋白表达水平与雌孕激素受体状态、有无淋巴结转移密切相关（P＜0.05）,而与患者年龄、病理分级、分期无关（P＞0.05）.结论 DKK1在雌孕激素受体阴性子宫内膜癌组织中高表达.     

microRNA-873在子宫内膜癌中的表达及对肿瘤细胞增殖和侵袭的影响

目的探讨microRNA-873(miR-873)在子宫内膜癌患者组织中的表达水平及其对人子宫内膜癌细胞增殖和侵袭的影响。方法采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测子宫内膜癌患者癌组织和子宫肌瘤患者子宫组织中miR-873的表达水平,并分析miR-873表达水平与患者临床病理参数之间的关系。常规培养子宫内膜癌Ishikawa细胞,并设为空白对照组、阴性对照组和miR-873过表达组。采用qRT-PCR检测各组miR-873的表达水平;四甲基偶氮唑盐(MTT)试验检测细胞增殖能力;Transwell试验检测细胞侵袭能力。结果与正常子宫内膜组织(1.07±0.04)比较,子宫内膜癌组织中miR-873的表达水平(0.52±0.12)明显降低(t=34.199,P<0.05)。miR-873的表达水平与肌层浸润深度、淋巴结转移和FIGO分期有关(t分别为11.557、9.626、7.923,P均<0.05)。与阴性对照组(0.51±0.01)和空白对照组(0.51±0.02)比较,miR-873过表达组miR-873的表达水平(1.38±0.02)显著升高(F=5 855....     

miRNA-34b 对子宫内膜癌细胞凋亡、侵袭、迁移的影响及作用机制

目的 探究miR-34b 对子宫内膜癌(endometrial cancer) 凋亡、迁移、侵袭的影响及对Jag1/Cyclin D1 信号通路的影响。方法 将人子宫内膜癌细胞AN3CA 细胞分为对照组、NC 组和miR-34b 组。通过流式细胞技术、Transwell实验分别检测各组细胞凋亡、迁移能力和侵袭能力;通过定量聚合酶链反应(quantitative polymerase chain reaction,qPCR)及Westernblot 检测各组细胞Jagged-1 蛋白(Jag1)及其靶基因G1/S- 特异性周期蛋白-D1(Cycling D1)mRNA和蛋白的表达水平;通过裸鼠荷瘤实验分析miR-34b 对肿瘤生长的影响。结果 对照组、NC 组和miR-34b 组细胞凋亡比例分别为5.6%±0.12%,5.80%±0.22% 和19.4%±0.51%。miR-34 组细胞凋亡比例高于对照组,差异具有统计学意义(t=8.325,P ＜ 0.01);对照组、NC 组和miR-34b 组细胞迁移数分别为322.15±13.71 个,327.67±9.14 个和162.19±7.49 个,miR-34b 组细胞迁移数低于对照组,差异具有统计学意义(t=7.945 , P ＜ 0.01);对照组、NC 组和miR-34b 组细胞侵袭数分别为357.6±14.11 个,364.05±16.12 个和157.58±8.77 个,miR-34b 组细胞侵袭数低于对照组,差异具有统计学意义(t=7.643,P ＜ 0.01);qPCR 结果表明对照组、NC 组和miR-34b 组Jag1 mRNA 表达为2.75±0.21,2.67±0.14 和1.19±0.19,miR-34b 组低于对照组,差异具有统计学意义(t=8.434,P ＜ 0.01);对照组、NC 组和miR-34b 组蛋白表达为1.71±0.11,1.77±0.24 和0.69±0.16,miR-34b 组低于对照组,差异具有统计学意义(t=7.895,P ＜ 0.01);对照组、NC 组和miR-34b 组Cyclin D1mRNA 表达为1.29±0.13,1.32±0.11 和0.59±0.13,miR-34b 组低于对照组,差异具有统计学意义(t=9.124,P ＜ 0.01);对照组、NC 组和miR-34b 组蛋白表达为1.81±0.18,1.79±0.14和1.29±0.16,miR-34b 组低于对照组,差异具有统计学意义(t=8.227,P ＜ 0.01);裸鼠荷瘤实验表明过表达miR-34b 裸鼠肿瘤生长曲线与对照组差异有统计学显著性意义,并且肿瘤体积显著低于对照组(t=8.184,P ＜ 0.01)。结论 miR-34b 可以促进人子宫内膜癌细胞的凋亡,抑制细胞迁移和侵袭能力,其机制与Jag1/Cyclin D1 信号通路活性的抑制相关。     

ACTL8表达与子宫内膜癌的发生及细胞侵袭、迁移能力的关系

目的 探讨子宫内膜癌组织中肌动蛋白样蛋白8(ACTL8)表达与肿瘤发生及癌细胞侵袭、迁移能力的关系。方法 回顾性选取2020年3月至2021年3月恩施土家族苗族自治州中心医院妇儿医院病理科收集的68例子宫内膜癌组织（病例组）,并选取45例正常子宫内膜作为对照组。采用蛋白质印迹法检测两组标本中的ACTL8蛋白。选取人子宫内膜癌KLE细胞系,以携带shRNA特异序列的载体及空载质粒分别KLE细胞系,形成敲出ACTL8基因的sh ACTL8-1组、sh ACTL8-2组及以空载质粒转染KLE细胞系的对照组。采用荧光定量PCR检测3组细胞中ACTL8RNA表达,采用蛋白质印迹法检测3组细胞ACTL8蛋白表达,采用Transwell迁移和侵袭实验分析KLE细胞系培养后的侵袭和迁移能力差异。结果 病例组标本中的ACTL8蛋白的相对表达强度为0.983±0.211,对照组标本中的ACTL8蛋白的相对表达强度为0.377±0.089,子宫内膜癌组织中的ACTL8蛋白相对表达强度显著高于对照组,差异有统计学意义（P<0.05）。在年龄≥55岁、子宫内膜癌分级G3级、FIGO分期（Ⅲ期+Ⅳ期）的子宫...     

上调NDRG1基因表达对人胰腺癌细胞MMP-9、VEGF表达及侵袭和迁移的影响

目的：建立稳定转染含N-myc下游调节基因-1（NDRG1）的SW1990细胞株,探讨NDRG1对 SW1990细胞侵袭与迁移能力的影响及其可能的分子机制。方法经脂质体介导将含有 NDRG1重组表达质粒转染人胰腺癌细胞株 SW1990,用 G418筛选阳性细胞克隆,逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和Western blot鉴定阳性细胞克隆;采用RT-PCR及Western blot检测阳性细胞克隆MMP-9及VEGF mRNA与蛋白表达;采用Transwell小室侵袭实验与划痕实验分别检测细胞侵袭及迁移能力。结果 N17克隆组、转空载体组及未转染组NDRG1 mRNA表达量分别为0.53±0.25、0.26±0.11、0.25±0.13;相应的MMP-9 mRNA表达量分别为0.33±0.18、0.71±0.45、0.76±0.42;相应的VEGF mRNA表达量分别为0.27±0.16、0.68±0.36、0.69±0.38;相应的NDRG1蛋白表达量分别为0.27±0.13、0.11±0.04、0.12±0.06;相应的MMP-9蛋白表达量分别为0.12±0.04、0.38±0.15、0.36±0.14;相应的VEGF蛋白表达量分别为0.15±0.08、0.39±0.21、0.40±0.25。较其他组,N17克隆组NDRG1 mRNA及蛋白表达量显著增加（P〈0.01）,而MMP-9、VEGF mRNA及蛋白表达量显著降低（P〈0.01）。N17克隆组、转空载体组及未转染组微孔滤膜外侧细胞数分别为31.27±11.54、58.93±17.23、60.26±19.38,N17克隆组较其他组微孔滤膜外侧细胞数显著减少（P〈0.01）。N17克隆组、转空载体组及未转染组细胞迁移距离分别为51.35±18.24、120.68±42.97、124.54±51.66,N17克隆组较其他组细胞迁移距离显著减少（P〈0.01）。结论 SW1990细胞NDRG1表达上调后,细胞侵袭和迁移能力受到显著抑制,其作用机制可能与MMP-9及VEGF表达降低有关。     

姜黄素对人子宫内膜癌细胞增殖抑制的初步研究

目的观察姜黄素对体外培养的人子宫内膜癌(HEC-1-B)细胞增殖和细胞周期分布的影响。方法将体外培养的HEC-1-B细胞随机分为5组:对照组、姜黄素Ⅰ组、姜黄素Ⅱ组、姜黄素Ⅲ组和姜黄素Ⅳ组。分别给予不同浓度的姜黄素(0,10,20,40,80)μmol/L培养48 h。采用MTT法和Western blot法检测HEC-1-B细胞的增殖程度;流式细胞仪进行细胞周期时相分析。结果①MTT法显示培养48 h后,姜黄素组的吸光度值A490 nm低于对照组(P<0.01),且在一定浓度范围内呈剂量依赖性。②Western blot法结果显示,与对照组比较,姜黄素作用48 h后,姜黄素各组的PCNA表达减少(P<0.01),且在10～80μmol/L范围内呈剂量依赖性。提示姜黄素可抑制HEC-1-B细胞内PCNA的表达。③流式细胞仪检测显示培养48 h后,姜黄素组的G2/M比例高于对照组(P<0.01),且在一定浓度范围内呈剂量依赖性。结论在一定浓度(10～80μmol/L)范围内,姜黄素可抑制体外培养的HEC-1-B细胞增殖,阻止细胞周期进展。这可能是姜黄素抗HEC-1-B细胞作用的机制之一。     

circNRIP1对宫颈癌细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响研究

目的 探讨环状RNA核受体相互作用蛋白1(circNRIP1)在宫颈癌组织中的表达,并初步考察其对宫颈癌细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响。方法 采用荧光定量PCR(qPCR)检测circNRIP1在宫颈癌组织和癌旁组织中的表达水平,并通过细胞增殖实验(MTS法)、细胞划痕实验和Transwell Matrigel实验分别考察circNRIP1对宫颈癌细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响。结果 与癌旁组织相比,circNRIP1在宫颈癌组织中的表达显著升高(P<0.001);circNRIP1在HeLa细胞系中表达水平最低,在SiHa细胞系中表达水平最高,与其他细胞系circNRIP1表达水平比较差异均有统计学意义(P<0.001)。在SiHa细胞系中,与NC组比较,shRNA1、shRNA2、shRNA3慢病毒均可显著降低circNRIP1的表达水平,其中shRNA2的敲低能力最高,在HeLa细胞系中,与OV-NC组比较,circNRIP1在OV-cNRIP1组的表达水平更高(P<0.01)。MTS实验结果显示,在HeLa细胞系中,与OV-NC组比较,OV-cNRIP1组的H...     

RNA 干扰 HDAC1对人宫颈癌SiHa细胞迁移及侵袭影响

目的 观察应用RNA干扰技术沉默组蛋白去乙酰化酶1（HDAC1）对人宫颈癌SiHa细胞迁移和侵袭的影响,并探讨其可能机制。方法 体外合成针对HDAC1的小干扰RNA（siRNA）,采用脂质体法转染人宫颈癌SiHa细胞。采用Western blot法检测细胞HDAC1蛋白和乙酰化组蛋白H4的表达,荧光定量PCR方法检测HDAC1、核因子-κB （NF-κB）和尿激酶型纤溶酶原激活剂（uPA）基因mRNA表达,划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力。结果 经转染HDAC1基因siRNA后,宫颈癌SiHa细胞HDAC1 mRNA和蛋白表达降低,NF-κB和uPA基因mRNA表达也降低,细胞内组蛋白H4乙酰化水平增加。SiHa细胞迁移速度降低,穿过Transwell滤膜的细胞数量减少。结论 HDAC1基因siRNA能够通过抑制宫颈癌SiHa细胞HDAC1基因表达,抑制人宫颈癌SiHa细胞迁移和侵袭能力。提高组蛋白乙酰化水平,下调NF-κB和uPA基因表达可能是其作用机制。     

重组DKK1及pCMV-HA2/DKK1重组质粒对宫颈癌细胞体外增殖作用的影响

摘要：目的：观察人重组DKK1和pCMV-HA2/DKK1重组质粒对体外培养宫颈癌细胞株Hela细胞增殖的影响。 方法：体外培养Hela细胞,非放射性细胞增殖（MTS）法检测重组DKK1、抗DKK1抗体和人源DKK1真核表达质粒pCMV-HA2/DKK1对Hela细胞增殖作用的影响,western blot及ELISA法检测转染pCMV-HA2/DKK1重组质粒后Hela细胞中DKK1蛋白的表达情况。 结果：与对照组相比,10,50 ng/mL的DKK1对Hela细胞有明显抑制作用（F分别为162.31,184.65,P均<0.01）;抗DKK1抗体对Hela细胞的增殖影响无统计学意义（P均>0.05）;pCMV-HA2/DKK1重组质粒转染Hela细胞后对细胞增殖有明显抑制作用,加入抗DKK1抗体不能完全拮抗pCMV-HA2/DKK1对Hela细胞的抑制作用;pCMV-HA2/DKK1重组质粒转染Hela细胞后可检测到DKK1蛋白表达,经western blot证实为DKK1蛋白（Mr约为38 000）,ELISA法结果表明,DKK1蛋白的分泌量随培养时间的延长而增加,第5天时达峰值(19.82 mg/L)。 结论：重组DKK1和人源DKK1真核表达质粒pCMV-HA2/DKK1可抑制Hela细胞的增殖,抗DKK1抗体可部分抵抗DKK1的抑制作用,提示DKK1在宫颈癌肿瘤发生中对肿瘤细胞具有抑制作用。     

Wnt1和DKK1在宫颈鳞癌中的表达及意义

目的研究Wnt基因家族中Wnt1和Wnt信号通路抑制因子DKK1在宫颈鳞癌中的表达及意义。方法应用免疫组织化学法检测宫颈鳞癌及正常宫颈组织中Wnt1和DKK1蛋白的表达。结果宫颈鳞癌中Wnt1的阳性表达率为71.67%,显著高于正常宫颈组织中的40.00%(P<0.05)。DKK1在宫颈鳞癌中的阳性表达率为43.33%,显著低于正常宫颈组织中的66.67%(P<0.05)。在宫颈鳞癌组织中,Wnt1和DKK1与FIGO分期、组织分化程度、有无淋巴转移及浸润深度有关(P均<0.05)。Wnt1与DKK1在宫颈鳞癌中的表达呈负相关(P<0.01)。结论在宫颈鳞癌中,Wnt1作为Wnt信号通路的始动因子发挥作用,而DKK1作为Wnt信号通路的抑制因子发挥作用。二者有望成为宫颈鳞癌判断预后及指导临床治疗的监测指标。     

Dickkopf1在两株人脑胶质瘤细胞株中的表达分析

目的检测Dickkopf1（DKK1）在人胶质瘤细胞株MGR3和UWR7中的表达情况。方法采用酶联免疫吸附实验,逆转录多聚酶链反应等方法对DKK1在人胶质瘤细胞株MGR3和UWR7中表达水平进行检测。结果酶联免疫吸附实验提示DKK1在MGR3和UWR7中均呈高浓度;逆转录多聚酶链反应提示DKK1基因在胶质瘤细胞株MGR3和UWR7中高表达,但在正常脑组织中表达不明显。结论DKK1在人胶质瘤细胞株MGR3和UWR7中高表达,提示DKK1可能在胶质瘤中的发生发展中起重要作用。     

超声评价子宫内膜癌肌层浸润深度及进展

肌层浸润深度是子宫内膜癌分期的重要依据之一。灰阶超声是子宫内膜癌的常规筛查方法。通过三维超声及多普勒超声可观察内膜的细微结构及血流分布情况,并进行血流动力学分析,可判断子宫内膜癌肌层浸润情况。子宫内膜癌超声造影呈特征性的血流灌注表现,有助于判断子宫内膜癌肌层浸润深度,对子宫内膜癌的诊断具有一定价值。利用三维经阴道超声对未受累肌层厚度进行测量,可较好地评估子宫内膜癌的肌层浸润情况,以指导临床治疗方案的选择。本文对子宫内膜癌肌层浸润深度的超声评价及进展进行综述。     

AHSA1 regulates proliferation,apoptosis, migration,and invasion of osteosarcoma

Activator of 90 kDa heat shock protein ATPase homolog 1 (AHSA1) is a chaperone of heat shock 90 kDa (HSP90) and stimulates ATPase activity of HSP90. The function of AHSA1 in osteosarcoma (OS) has not been reported yet. A previous study showed AHSA1 was overexpressed in OS cells. In this study, we investigated the role of AHSA1 in OS cells by silencing AHSA1. We report that silencing AHSA1 inhibited cell growth, migration, and invasion, and increased apoptosis of MG-63 and Saos2 cells. We also found that silencing AHSA1 decreased the ATPase activity of HSP90 in OS cells. In addition, silencing AHSA1 increased the levels of negative regulators of Wnt/β-catenin signalling pathway, Axin-2 and GSK3β, and decreased the levels of two key members of Wnt/β-catenin signalling pathway, namely, Wnt-5a and β-catenin. In conclusion, silencing AHSA1 regulates cell growth, apoptosis, migration, and invasion by regulating Wnt/β-catenin signalling pathway and their negative regulators.     

曲古抑霉素A对骨肉瘤细胞增殖和迁移能力的影响及其机制

目的：探讨曲古抑霉素A（TSA）对骨肉瘤细胞增殖和迁移能力的影响及其可能的作用机制。方法不同浓度的TSA处理骨肉瘤MG-63、U2OS细胞48 h,镜下观察细胞形态的改变,CCK8法检测不同浓度对肿瘤细胞的抑制效果,并计算其半数抑制浓度;TSA处理48 h后,以流式细胞术检测对骨肉瘤细胞周期的影响;Transwell法检测TSA对骨肉瘤细胞迁移能力的影响;Western blot检测TSA对骨肉瘤细胞GSK3β、pGSK3β蛋白的影响。结果 TSA 处理后,骨肉瘤细胞细胞质减少,失去细胞连接;不同细胞系对TSA的敏感程度不同,与MG-63细胞相比,U2OS细胞更加敏感。流式细胞技术检测结果显示TSA可以使细胞G2/M期增加,G1期和S期减少,将细胞阻滞于G2/M期（P＜0.05）。Transwell结果显示TSA可以明显降低骨肉瘤细胞的迁移能力（P＜0.05）。Western blot结果表明,TSA并不改变GSK3β的表达,但可以降低pGSK3β的表达（P＜0.05）。结论 TSA可以明显抑制骨肉瘤细胞的增殖以及迁移能力,具有显著的抗肿瘤作用,并且这一作用可能是通过下调pGSK3β蛋白表达发挥作用的。     

黄芪总苷对人子宫内膜癌KLE细胞作用的研究

目的 探讨黄芪总苷(TA)单独或与顺铂(DDP)联合应用对人子宫内膜癌KLE细胞生长的影响.方法 培养KLE细胞,分为三组分别加入不同浓度TA和(或)DDP,另设阴性对照组,观察细胞形态学改变,中性红比色法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡及周期分布.结果 TA能明显抑制KLE细胞增殖,且呈剂量-时间依赖性,12 h、24 h、48 h的IC50分别为374.2、263.5、212.1 μg/ml;两药联合应用时抑制率显著增高(P<0.01);流式细胞仪检测显示TA能使KLE细胞发生G1期阻滞,同时诱导细胞凋亡,其凋亡率与浓度-时间呈依赖关系,荧光显微镜可见细胞凋亡形态学变化.结论 TA可抑制KLE细胞增殖,诱导细胞凋亡,且与顺铂联合应用有协同作用.     

坎地沙坦对膀胱癌细胞株BIU-87侵袭力和黏附力的影响

目的探讨血管紧张素Ⅱ1型受体（AT1R）拮抗剂坎地沙坦对膀胱癌BIU-87细胞株的侵袭力和黏附力的影响。方法采用免疫组化SABC法检测膀胱癌BIU-87细胞株AT1R的表达,用Transwell法检测细胞侵袭力,用细胞同质黏附实验检测细胞黏附力。结果 AT1R拮抗剂坎地沙坦能降低BIU-87细胞株的侵袭能力和黏附能力。结论 AT1R拮抗剂有可能通过降低肿瘤细胞的侵袭、黏附能力和抑制血管生成而达到抗癌作用,AT1R拮抗剂将来可能会成为一种抗癌治疗的新方法。     

miR-34a通过调控YY1抑制肾癌细胞的增殖及侵袭

目的探讨miR-34a在肾癌组织中表达、miR-34a对人肾癌ACHN细胞增殖和侵袭的影响及调控机制。方法实时聚合酶链反应(PCR)检测miR-34a在20例肾癌及癌旁组织中的表达;采用脂质体转染法将miR-34a mimics转染入肾癌ACHN细胞中,试验分空白对照组、阴性对照组、miR-34a mimics转染组。实时PCR检测转染24 h后miR-34a表达量;噻唑蓝(MTT)试验检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞周期;Transwell及Matrigel检测细胞侵袭能力;实时PCR和蛋白质印迹(Western blot)技术检测转染后转录因子YY1表达水平。结果与癌旁组织相比,20例癌组织中miR-34a平均表达量为1.06±0.67,显著低于癌旁组织(1.62±0.83,P<0.01);转染后24 h,miR-34a mimics转染组的miR-34a表达量为157.04±13.01,较阴性对照组显著上调(P<0.01);miR-34a mimics转染组细胞增殖能力显著降低(P<0.01),细胞生长被阻滞在G0/G1期;细胞侵袭能力明显减弱(P<0.01);转染miR-34a mimics后YY1基因在mRNA表达无明显变化(P>0.05),蛋白水平下调。结论 miR-34a在肾癌中低表达,可能与肾癌的发生有关;miR-34a调控YY1的表达可能是抑制肾癌细胞生物活性的重要机制之一。