卵巢囊肿脓液中检出甲型副伤寒沙门菌1例

甲型副伤寒沙门菌为革兰氏阴性需氧或兼性厌氧菌，在自然界中分布广泛，主要存在于污水及动物肠道中。2006年1月，我们从一患者卵巢囊肿脓液中分离中一株甲型副伤寒沙门菌，现报道如下。     

甲型副伤寒沙门菌致脊柱骨髓炎一例

1病历资料患者男,53岁。1个月前无明确诱因出现午后高热,每次持续约10～20min,体温波动在38．9～40．1℃,伴有寒战,呈间歇性发作,近半个月来发热时伴有胸背部疼痛,而且在发热消退后胸背部痛有所缓解。曾先后在多家医院就诊,诊断为胆囊炎、胰腺炎,给予环丙沙星、先锋霉素V治疗,症状未见缓解。2004年11月2日我院血液科以“发热原因待查”收入院。实验室检查：结核杆菌聚合酶链反应阴性,红细胞沉降率85mm/h,C-反应蛋白4．61mg/L,白细胞8．6×10~9/L,中性粒细胞0．728,淋巴细胞0．201,单核细胞0．053,嗜酸细胞0．018,甲胎蛋白1．56μg/L,癌胚抗原     

74例甲型副伤寒沙门菌药敏结果及临床分析

目的：分析74例甲型副伤寒沙门菌药敏结果。方法：对74例甲型副伤寒经细菌学鉴定均为甲型副伤寒沙门氏菌菌株，并进行药敏试验。结果：分离的74株甲型副伤寒沙门菌对氟喹诺酮类、头孢三代及氯霉素等药的敏感率均超过95％，对复方新诺明敏感仅有38％。结论：甲型副伤寒沙门菌对氟喹诺酮类药物敏感，成为治疗甲型副伤寒的首选和常规用药。     

159例甲型副伤寒患者的临床观察与护理

甲型副伤寒是急性肠道传染病,其病原体副伤寒甲杆菌与伤寒杆菌同属于沙门菌属,革兰染色阴性,细菌学特征相似。云南省红河州地区是甲型副伤寒高发疫区。我科2001年1月-2002年12月共收治159例血培养阳性的住院和门诊患者,预后良好,均痊愈出院。现对其护理体会总结如下。     

昆明市一起甲型副伤寒流行的临床分析

目的对昆明市一起甲型副伤寒的流行进行调查,以了解其流行病学和临床发病特点。方法从2008年9月22日～11月28日,收集105例发热患者的临床资料,均为昆明市某职业技术学院师生。采用自制《发热病人个案调查表》行流行病学调查和临床特点分析。结果 78例血培养发现甲型副伤寒杆菌生长,主要症状为发热（100%）、相对缓脉（95.2%）;4例合并伤寒肝炎,5例合并支气管肺炎。经敏感抗生素治疗后,全部105例患者治愈出院,未发生肠穿孔及肠出血等严重并发症。其中复发2例,经治疗后治愈出院。结论甲型副伤寒除发热及相对缓脉外,症状多不典型,并发症不多且较轻,对多种头孢类抗生素及三代氟喹诺酮药物敏感,治疗效果良好。     

志贺菌、沙门菌和霍乱弧菌多重PCR快速检测体系的建立

目的 建立快速检测志贺菌、沙门菌和霍乱弧菌的多重PCR方法.方法 根据志贺菌ipaH基因、沙门菌ipaB基因及霍乱弧菌EPSM基因设计特异性PCR引物,加热煮沸法制备DNA模板,进行PCR扩增及琼脂糖电泳检测.结果 应用所建立的多重PCR方法能分别或同时快速、特异地检测出志贺菌606bp、沙门菌314bp和霍乱弧菌482bp的目的基因.结论 初步建立了灵敏、特异的一步法检测志贺菌、沙门菌和霍乱弧菌的多重PCR体系,可用于高危腹泻致病菌的早期快速诊断.     

基于知识图谱的蛋白质组学发展研究

目的分析蛋白质组学经典文献、前沿进展、演化趋势和国际合作网络现状。方法使用基于Java平台的知识图谱分析软件CiteSpaceⅡ。结果运用知识图谱分析蛋白质组学被引文献、主题词和作者国别,快速确定了蛋白质组学经典文献,准确识别到学科前沿热点和演化趋势,掌握了国际合作网络结构特征。结论知识图谱分析为把握蛋白质组学前沿进展、发展脉络和国际合作网络提供科学的量化依据和参考,为我国蛋白质组学未来发展重点提出对策和建议。     

巨噬细胞过氧化物酶体与鼠伤寒沙门菌相互作用的初步分析

目的观察巨噬细胞过氧化物酶体在鼠伤寒沙门菌感染中的作用。方法将感染及未感染鼠伤寒沙门菌的鼠巨噬细胞RAW264.7以氮气压迫法裂解,逐级离心,用制备的TassC多抗磁珠纯化得到粗提液,用Western blot法鉴定TassC多抗磁珠与细胞结合物的性质;用pDs Red2-Perxi质粒转染RAW264.7细胞以标记细胞中的过氧化物酶体,用三维荧光显微镜观察感染细胞中过氧化物酶体(红色)与表达绿色荧光蛋白的鼠伤寒沙门菌突变株的相互作用。结果Western blot分析显示TassC多抗磁珠可以结合细胞内的TassC,并与细胞内的过氧化物酶体结合,也可以与感染细胞中的iNOS结合,而未感染样本中未检测到iNOS。磁珠洗脱物中未检测到溶酶体标志物LAMP1,也未检测到受染菌标志物;免疫荧光显示感染的巨噬细胞中过氧化物酶体聚集在鼠伤寒沙门菌突变株SCV周围,甚至发生重叠,随感染时间延长(1h或24h),过氧化物酶体数量增加(1.2倍或1.3倍),而胞内菌数量下降。结论TassC可能定位于过氧化物酶体而不是溶酶体;感染鼠伤寒沙门菌的巨噬细胞中iNOS可能与过氧化物酶体结合而参与杀灭微生物的作用。     

鼠伤寒沙门菌对巨噬细胞内过氧化物酶体与诱导型一氧化氮合酶结合的诱导作用

目的 探讨鼠伤寒沙门菌感染早期巨噬细胞内过氧化物酶体及诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的作用.方法用pTassC-GFP质粒转染鼠巨噬细胞RAW 264.7,以观察标记了绿色荧光蛋白的靶向沙门菌分泌的SpiC蛋白(TassC)在胞内的存在形式.用pDsRed2-Perxi和pTassC-GFP质粒共转染RAW 264.7...     

伤寒脂多糖被动血凝试验检测118例早型副伤寒的诊断意义

1　临床资料　男性 75例 ,女性 43例。年龄 45 2岁 ,平均2 6 3岁。自发病至入院时间 37天 ,平均 4 1天。病人均发热 ,以驰张热为主。相对缓脉占 41 5 % ,无欲貌 31 4% ,肝脾肿大分别占 11 3%和 17% ,未见伤寒玫瑰疹。全部病人以临床表现和血培养阳性为确诊依据。2　实验室检查　所有病人均行血培养、肥达反应和ＬＰＳ ＰＨＡ。①血培养 :在病人入院后未使用抗生素前即抽取静脉血 5ｍｌ加入血液增菌培养基中 ,经 37℃ 2 4ｈ培养后 ,移种血琼脂板分离培养 ,再经 37℃ 2 4ｈ培养后 ,见有灰白色、较湿润的菌落 ,再进一步作生化反应 ;接种于肠杆…     

沙门菌属pad蛋白的原核表达及抗原性的鉴定

目的在大肠杆菌中表达沙门菌属pad蛋白,纯化后制备兔抗pad抗体。方法利用PCR方法从肠炎沙门茵中扩增出pad基因,构建pET一32a（＋）一pad重组表达质粒;将重组表达质粒转化至大肠杆菌BL21（DE3）中,筛选阳性克隆,测序鉴定后,优化IPTG浓度、诱导温度和诱导时间以诱导重组蛋白的表达;以纯化的pad蛋白免疫家兔,制备抗pad多克隆抗体并进行鉴定。结果与结论成功扩增得到pad基因,经双酶切和测序证实重组表达质粒构建成功,经过诱导条件的优化,在大肠杆菌中表达出相对分子质量为41×10。的目的蛋白;纯化的重组蛋白免疫家兔后,能够有效地刺激家兔产生特异性抗体,经琼脂糖双向扩散测定抗血清效价达到1：32以上。为进一步研制沙门茵属体外快速检测试剂打下了基础。     

钩端螺旋体外膜脂蛋白LipL32的重组表达及纯化

目的：构建L32-pQE32重组质粒，诱导表达重组钩端螺旋体外膜脂蛋白LipL32，对重组蛋白进行纯化。方法：采用PCR法从钩端螺旋体DNA中获取编码LipL32的基因片段，构建重组克隆载体pGEM-T／L32和表达载体L32-pQE32，转化受体茵E.coli DH5α和E．coli M15，IPTG诱导表达重组LipL32蛋白。Ni-NTA亲和层析纯化重组LipL32蛋白。结果：扩增出约750bp的LipL32成熟蛋白基因，LipL32基因插入pQE32表达载体，表达产物6个组氨酸与LipL32蛋白的融合蛋白相对分子质量约为31000，与预期大小一致。Western印迹显示能与钩体抗血清特异结合。结论：LipL32蛋白能在大肠杆菌中表达，Ni-NTA亲和层析可有效纯化重组LipL32蛋白，重组LipL32蛋白具有结合活性。     

大肠杆菌外膜蛋白交叉保护抗原研究

目的：阐明大肠杆菌不同菌株的外膜蛋白之间的免疫交叉反应性和外膜蛋白抗血清在致病性大肠杆菌感染中的交叉保护价值。方法：选择大肠杆菌J5株进行实验研究。采用Triton-EDTA提取Triton不溶物质获得J5外膜蛋白,肌肉途径免疫制备兔抗J5外膜蛋白抗血清: 通过ELISA方法,定量测定J5具代表性的致病性大肠杆菌感染6h后的小白鼠进行被动保护试验。结果：（1）兔抗J5外膜蛋白抗血清与8株大肠杆菌外膜提取物存在广泛的交叉反应;（2）兔抗1J5外膜蛋白抗血清对致病型大肠杆菌和侵袭型大肠杆菌感染具有较强的保护作用,对产毒素型大肠也具有一定的保护性。结论：大肠肝菌中不菌株的外膜蛋白之间广泛存在交叉反应抗原,其抗血清对该属致病性菌株感染具有一定的交叉被动保护价值。这一结论为研制临床免疫制剂和疫苗提供了一定基础。     

霍乱弧菌外膜蛋白W的原核表达及抗原性分析

目的在大肠杆菌中表达霍乱弧菌种特异性外膜蛋白（Omp）W,纯化后制备检测用OmpW抗体。方法采用PCR法以霍乱弧菌基因组为模板扩增ompW基因,插入表达载体pET-32a（＋）的多克隆位点,构建重组表达质粒pET-32a-ompW;重组质粒转化至大肠杆菌BL21（DE3）中,筛选阳性重组菌株,经IPTG诱导获得目的蛋白,纯化后免疫新西兰大耳白兔,制备OmpW的多克隆抗体并进行鉴定。结果扩增得到ompW基因片段,并成功构建pET-32a-ompW原核表达系统,重组蛋白OmpW以包涵体形式高效表达;制备的OmpW抗体能与天然的O1群和O139群霍乱弧菌结合。结论霍乱弧菌OmpW可由原核系统高效表达,免疫获得的抗体具有较好的效价,为进一步制备霍乱弧菌检测用抗体奠定基础。     

贝氏柯克斯体34×103重组外膜蛋白的免疫保护性

目的原核细胞表达贝氏柯克斯体34×103外膜蛋白基因,评价34×103重组外膜蛋白的免疫保护性.方法用PCR从我国贝氏柯克斯体分离株的基因组中扩增34×103外膜蛋白基因,用该基因与原核表达质粒重组,构建重组表达质粒;用IPTG诱导重组质粒在大肠杆菌细胞内表达重组蛋白.用重组蛋白皮下接种免疫BALB/c小鼠2次,在加强免疫后的第28天,用ELISA法检测小鼠的血清特异性抗体水平以及作体外脾淋巴细胞增殖试验检查小鼠的特异性细胞免疫水平;用10 ID50贝氏柯克斯体腹腔注射攻击免疫小鼠,攻击后第7天病理学检查小鼠脏器的组织病变和染色镜检脾脏的贝氏柯克斯体.结果SDS-PAGE和免疫印迹分析证明重组质粒转化的大肠杆菌产生了34×103重组蛋白,重组蛋白能与贝氏柯克斯体感染小鼠血清发生特异性反应.ELISA法检测出免疫小鼠血清中有高滴度的抗重组蛋白抗体,免疫小鼠的体外淋巴细胞增殖水平显著高于非免疫小鼠.组织病理学检查发现免疫小鼠的肺、肝、脾无明显病变,仅个别小鼠脾脏存在少量柯克斯体,而非免疫小鼠的肺、肝、脾病变十分明显,脾脏肿大并含有大量的柯克斯体.结论重组34×103外膜蛋白具有的免疫保护性,能够诱导机体产生有效的抗贝氏柯克斯体的体液和细胞免疫应答.     

3个S100A基因在胃癌及其正常黏膜中表达的QRT-PCR检测

目的比较S100A2、S100A4、S100A6基因在胃癌及其对应正常黏膜中的表达情况。方法应用实时定量RT-PCR构建上述3个基因的定量扩增标准曲线,精确定量3个基因在20例配对胃癌中的表达丰度并分析它们与胃癌的相关性。结果S100A2、S100A4、S100A6基因相对于β2微球蛋白(β2-MG)基因的表达丰度分别为2·83×10-4、6·44×10-2、0·41,3个基因在胃癌中表达均升高,升高倍数分别为10·78、2·31和2·25倍。与正常黏膜比较,S100A2、S100A6表达显著升高(P<0·05)。Spearman分析显示,S100A2与S10A4、S100A2与S100A6基因表达之间呈正相关(P值分别为0·00和0·017)。结论S100A2、S100A6基因表达变化可能是胃癌的早期事件,S100A4基因则可能与胃癌的浸润密切相关。     

Mechanism of magnetization transfer during on-resonance water saturation. A new approach to detect mobile proteins, peptides, and lipids.

The mechanism of magnetization transfer (MT) between water and components of the proton spectrum was studied ex vivo in a perfused cell system and in vivo in the rat brain (n = 5). Water was selectively labeled and spectral buildup consequential to transfer of longitudinal magnetization was followed as a function of time. At short mixing time (T(m)), nitrogen-bound solvent-exchangeable protons were observed, predominantly assigned to amide groups of proteins and peptides. At longer T(m), intramolecular nuclear Overhauser enhancement (NOE) was observed in the aliphatic proton region, leading to a mobile-macromolecule-weighted spectrum that resembles typical protein spectra described in the literature. This effect on the proton spectrum is distinct from that of classical off-resonance MT, which has been shown to be due to the immobile solid-like proton pool. When studying a solution of major brain metabolites under physiological concentrations and conditions (pH), no transfer effects were observed, in line with expectations based on reduced NOE effects in rapidly tumbling molecules and the fast proton exchange rates of amino, amine, SH, and OH groups. The spectral intensities of the amide protons may serve as indicators for pH and cellular levels of mobile proteins and peptides, while the aliphatic components are representative of several types of mobile macromolecules, including proteins, peptides, and lipids.     

CDKN2A基因失活对喉癌的影响及其临床意义

 目的 研究细胞周期依赖性激酶抑制基因(CDKN2A)失活对喉癌的影响及其临床意义.方法 应用半定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫印迹分析法检测喉癌手术切除组织68例,非肿瘤喉部组织68例,观察CDKN2A基因失活与喉癌发生发展的关系.结果 (1)喉癌组织CDKN2A mRNA表达明显少于非肿瘤喉组织(P<0.05);(2)喉癌组织中CDKN2A蛋白的表达明显低于非肿瘤喉组织,差异有统计学意义(两者的低表达率为80.9%、47.1%,过低表达率为52.9%、22.1%,P<0.05),并与病理分型无关;(3)Western blot电泳结果半定量分析显示,喉癌组织CDKN2A蛋白的表达水平明显低于非肿瘤喉组织(t=3.246,P＜0.05).结论 CDKN2A基因的变异及其编码蛋白质的失活与喉癌的发生发展明显相关.