不同缺血后处理方案对大鼠肾脏缺血再灌注损伤的保护作用

目的 试建立恰当的大鼠肾脏缺血再灌注损伤（IRI）的缺血后处理模型。方法 选8 ～ 12周健康60只SD雄性大鼠,体质量220 ～ 260 g。随机分为6组：对照组（S组）、缺血再灌注组（IR组）及IR缺血后处理A、B、C、D组,每组10只。S组：分离出双侧肾蒂,仅行右肾蒂结扎和左肾蒂游离;IR组：结扎右侧肾蒂,夹闭左侧肾蒂60 min后恢复灌注;缺血后处理A、B、C、D组在肾脏缺血60 min后分别进行6次（开放10 s ＋ 阻断10 s）、5次（开放20 s ＋ 阻断20 s）、3次（开放10 s ＋ 阻断10 s）、3次（开放2 min ＋ 阻断2 min）的循环,然后充分开放灌注。再灌注24 h后监测肾功能,对肾组织结构损伤程度评分。结果 与IR组相比,A、B、C、D组后处理的血尿素氮（BUN）、血肌酐（SCr）及肾小管损伤程度评分均降低（P 〈 0.05）,肾组织损伤明显减轻。处理组中,A、B两组的BUN、SCr及肾小管损伤程度评分相当（P 〉 0.05）,且缺血后处理效果优于C、D两组（P 〈 0.05）。结论： 采用缺血后处理A组方法和B组方法均可以成功制作出缺血后处理模型。     

姜黄素预处理及缺血后处理对大鼠肾脏缺血再灌注损伤的保护作用

背景：有研究发现姜黄素预处理、缺血后处理对大鼠肾脏缺血再灌注损伤具有保护作用。 目的：建立大鼠肾脏缺血再灌注损伤模型,观察姜黄素预处理、缺血后处理、姜黄素预处理联合缺血后处理对大鼠肾脏缺血再灌注损伤的保护作用。 方法：60只SD雄性大鼠随机均分为5组,假手术组、肾脏缺血再灌注模型组、姜黄素组、缺血后处理组以及联合处理组。肾脏再灌注24 h后,取下腔静脉血测定肌酐和尿素氮。肾组织测定超氧化物岐化酶活性和丙二醛含量,并行苏木精-伊红染色观察各组肾组织病理学变化。 结果与结论：与假手术组比较,其余各组肌酐、尿素氮均升高(P < 0.05)。与缺血再灌注模型组比较,姜黄素组、缺血后处理组和联合处理组的肌酐、尿素氮值在再灌注24 h后均下降(P < 0.05)。与姜黄素组和缺血后处理组比较,联合处理组的肌酐更低(P < 0.05)。与假手术组比较,缺血再灌注模型组超氧化物歧化酶活性明显降低,丙二醛含量明显升高,差异有显著性意义(P < 0.05)。与缺血再灌注模型组比较,姜黄素组、缺血后处理组和联合处理组的超氧化物歧化酶活性升高,丙二醛含量降低,差异有显著性意义(P < 0.05)。与姜黄素组和缺血后处理组比较,联合处理组的超氧化物歧化酶活性升高,差异有显著性意义(P < 0.05)。与假手术组比较,缺血再灌注模型组肾小管损伤明显;与缺血再灌注模型组比较,姜黄素组、缺血后处理组和联合处理组肾小管损伤减轻明显,与姜黄素组和缺血后处理组比较,联合处理组损伤更轻。说明示姜黄素预处理和缺血后处理联合应用具有协同作用,可以更好的保护大鼠缺血再灌注损伤肾脏。     

一氧化氮供体对缺血再灌注肾脏ICAM-1表达的影响

目的 观察缺血再灌注后加用NO供体对肾脏ICAM-1表达及白细胞浸润的影响。方法 分别采用ICAM-1和整合素β2多克隆抗体，免疫组化方法观察加有NO供体后大鼠肾脏缺血再灌注24hICAM-1表达的变化及肾功能改变。结果 缺血再灌注24h大鼠肾脏ICAM-1及β2阳性细胞表达显著增强，以外髓直小血管，皮质肾小管外毛细血管较为明显，再灌注同时灌注NO供体SIN-1可显著抑制缺血再灌注后ICAM-1的表达增强，减少局部炎细胞浸润，改善肾功能，结论 NO供体可减少肾组织ICAM-1的表达及炎细胞浸润，发挥对急性缺血性肾衰的治疗作用。     

黄芪对大鼠急性肾缺血再灌注损伤的保护作用

肾缺血再灌注损伤过程十分复杂 ,氧自由基的产生并介导组织损伤是其中一个重要环节。黄芪具有提高过氧化物歧化酶 (ＳＯＤ)活性、过氧化氢酶活性及降低脂质过氧化物的药理作用。本文观察黄芪注射液在大鼠急性肾缺血再灌注损伤过程中对肾组织ＳＯＤ活性与丙二醛 (ＭＤＡ)含量的变化。1　材料与方法1 1　实验动物与分组 :雄性ＳＤ大鼠 5 0只 ,体重 2 0 0～ 2 5 0ｇ ,随机分正常组 (Ａ组 ) 5只 ,假手术组 (Ｂ组 ) 15只 ,模型组 (缺血再灌注组 ,Ｃ组 ) 15只 ,黄芪组 (Ｄ组 ) 15只。其中黄芪组在实验前 ,每日腹腔注射黄芪注射液 2ｍＬ 0 1ｋｇ体…     

钙卫蛋白在肾脏缺血再灌注损伤大鼠中的表达及其作用

目的:探讨钙卫蛋白(CALP)在肾脏缺血再灌注损伤(IRI)大鼠中的表达及其在炎症反应中的作用。方法:50只雄性SD大鼠随机分为IRI组和假手术组(sham组),每组25只。各组分别于缺血再灌注后6 h、12h、24 h、48 h和72 h观察肾脏病理改变,检测大鼠血清尿素氮(BUN)和肌酐(SCr)水平,ELISA法检测大鼠血清CALP、肿瘤坏死因子(TNF)-α和白细胞介素(IL)-6的含量,免疫组织化学法和Western blot法分别检测大鼠肾脏CALP、Toll样受体4(TLR4)和NF-κB p65蛋白表达水平。结果:IRI组大鼠肾脏呈现不同程度的肾小管上皮细胞和间质损伤,伴炎细胞浸润。血清BUN、SCr、CALP及促炎细胞因子TNF-α、IL-6的含量在各时点均显著高于sham组(P0.05)。CALP、TLR4和NF-κB p65主要表达于肾小管上皮细胞胞质中,在IRI组呈高表达,在各时点各因子的表达与sham组相比均显著增强(P0.05)。结论:肾脏IRI大鼠的血清CALP、TNF-α和IL-6水平升高,CALP、TLR4和NF-κB p65在肾组织中表达增强。CALP在大鼠肾脏IRI的炎症反应中可能起重要作用。     

缺血预处理对大鼠肥大心脏缺血再灌注损伤的影响

本实验用一氧化氮合成抑制剂－左旋硝基精氨酸复制大鼠高血压心脏肥大模型并作缺血再灌注处理，以观察缺血预处理对高血压肥大心脏Ｉ／Ｒ损伤的影响及ＮＯ在其中的作用。结果显示：ＩＰＣ能减轻大鼠高血压有肥大心脏Ｉ／Ｒ损伤，其程度与ＩＰＣ对正常心脏Ｉ／Ｒ损伤的保护相近，表明高血压肥大心脏同样具有ＩＰＣ保护现象，但ＮＯ在本模型中未起作用。     

缺血后处理对小肠缺血-再灌注损伤大鼠肠系膜微循环的影响

目的:观察缺血后处理对小肠缺血/再灌注损伤大鼠肠系膜微循环变化的影响。方法:64只雄性Wistar大鼠随机分为假手术(Sham)组、缺血/再灌注(I/R)组、缺血后处理(I-postC)组及缺血预处理(IPC)组,分别于再灌注2h、12h观测肠系膜微循环、肠壁血流量和血流动力学的变化,并按Hackel氏分度法判定肠道出血损伤情况。结果:与Sham组比较,I/R组平均动脉压、±dp/dtmax明显降低(P<0.05),小肠明显水肿、出血,Hackel氏分度显著升高(P<0.01);I-postC组与IPC组动脉压和±dp/dtmax明显高于I/R组(P<0.05),上述小肠病理变化明显减轻(P<0.05);I-postC明显减轻I/R所致的细动静脉收缩(P<0.05)、血流速度减慢(P<0.05)和微血管内白细胞贴壁滚动、粘附;肠缺血再灌注2h时,I-postC组肠壁血流量降低程度较I/R组减轻(P<0.05),与IPC的保护效果接近。结论:I-postC通过改善微循环减轻小肠I/R损伤。     

大鼠小肠缺血预适应对缺血-再灌注损伤保护作用及机制

目的:探讨小肠缺血预适应(ischemic preconditioning,IP)对缺血再灌注(ischemia／reperfusion,I／R)肠黏膜损伤的保护作用及可能机制。方法:以大鼠肠系膜前动脉制造I／R和IP模型;用分光光度法测血和肠组织二胺氧化酶(diamine oxidase,DAO)活性;用H-E和PAS特染显示肠黏膜的病理改变并进行Chiu CJ评分;用免疫组化方法显示肠绒毛CGRP、NPY肽能神经并用测微尺测定阳性神经纤维密度。结果:与对照组相比,I／R组及IP I／R组血DAO水平升高而肠黏膜DAO水平降低,肠黏膜损伤Chiu CJ评分数升高;肠绒毛CGRP阳性神经纤维密度降低而NPY阳性神经纤维密度升高;但IP轻于I／R的变化。结论:小肠IP能减轻I／R引起的肠黏膜机械屏障的组织病理损伤,其机制是通过肠黏膜局部CGRP、NPY肽能神经参与调节其微血管舒缩平衡而实现的。     

己酮可可碱缓解大鼠皮瓣缺血再灌注损伤

近年来有陆续报道己酮可可碱用于脑[1]、肺、肝等脏器的缺血再灌注损伤,但对于皮瓣缺血再灌注的作用未见报道;本实验拟明确其对皮瓣缺血再灌注损伤的保护作用,为减轻皮瓣缺血再灌注损伤、提高皮瓣移植成功率提供一定的实验依据.     

褪黑激素抗缺血再灌注损伤

缺血再灌注损伤（ischemia-reperfusion injury,IRI）是临床常见的病理过程,其发生发展过程涉及到自由基、钙超载 、白细胞的呼吸爆发等损伤作用。长期以来主要围绕以上几个方面进行对IR损伤的防治。褪黑激素(melatonin,MEL)是由松果体分泌的一种吲哚类激素,能够增强机体多个系统功能,近年来研究发现其通过抗氧化以及在分子水平发挥抗器官IR损伤作用。     

小檗碱减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤

目的探讨小檗碱(BBR)减轻大鼠心肌缺血再灌注(MI/R)损伤的作用及其与JAK2/STAT3信号通路的关系。方法雄性SD大鼠(250只)随机分为7组(n=36):假手术组(sham)、sham+BBR组、sham+AG490(AG,JAK2/STAT3通路抑制剂)组、MI/R+溶剂组(MI/R+V)、MI/R+BBR组、MI/R+BBR+AG组、MI/R+AG组。常规结扎大鼠冠状动脉左前降支行心肌缺血再灌注手术,缺血30 min后再灌注4 h,用Western blot法检测心肌JAK2、STAT3磷酸化水平及心肌凋亡相关蛋白表达,再灌注6 h后检测心肌细胞凋亡率、梗死面积及氧化应激相关指标,再灌注72 h后检测心功能。结果 BBR可显著改善心肌缺血再灌注术后心功能并减轻心肌凋亡及梗死,这种保护作用可被AG阻断(均P0.05)。BBR治疗还可显著提高心肌JAK2及STAT3磷酸化水平,抑制凋亡相关信号分子表达,这种作用也被AG阻断(P0.05)。结论 BBR可显著减轻大鼠MI/R损伤后心肌梗死及凋亡水平,改善心功能,JAK2/STAT3可能介导此作用。     

细胞自噬水平在大鼠缺血/再灌注肺组织内变化及其作用

目的 探讨大鼠肺缺血再灌注后肺组织内自噬水平的变化和自噬在肺缺血再灌注损伤中的作用.方法 大鼠分为假手术组和缺血1 h再灌注0、2、6 和24 h组,免疫印迹法检测自噬标志蛋白LC3-Ⅱ的表达,电子显微镜观察细胞内自噬体.自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)和安慰剂分别预处理假手术组和缺血再灌注2 h组大鼠,HE染色和血气分析检测肺组织损伤程度.结果 LC3-Ⅱ/Actin比值在缺血1h时即有升高,再灌注2～6h达高峰(P＜0.01),再灌注24 h恢复至接近假手术组水平.主要在Ⅰ型肺泡上皮细胞和血管内皮细胞内观察到自噬体.3-MA预处理降低肺组织损伤评分,升高血氧分压,减轻肺缺血再灌注损伤(P＜0.05).结果证实,肺缺血及再灌注诱发肺组织呼吸膜细胞自噬激活,3-MA预处理通过抑制自噬改善肺缺血再灌注损伤.结论 细胞自噬可能是肺缺血再灌注病理生理过程中加重损伤的因素.     

他米巴罗汀减轻大鼠脑缺血再灌注损伤

目的探讨他米巴罗汀(Am80)对大鼠脑缺血再灌注损伤(CIR)的作用。方法将大鼠随机分为:假手术组(sham)、模型组(I/R)和他米巴罗汀干预组(Am80,灌胃给予Am80 6 mg/kg)。采用线栓法建立大脑中动脉栓塞(MCAO)模型。术后24 h断头取脑,在处死前采用双盲法进行神经行为学评分;TTC染色测定脑梗死体积;Western blot和RT-q PCR法分别检测RARα、Bcl-2和Bax蛋白及mRNA的表达。结果 Am80可显著改善MCAO大鼠神经功能缺损,有效地降低脑梗死体积(P0.01),上调RARα和Bcl-2表达(P0.01),降低Bax的表达(P0.01)。结论他米巴罗汀对脑缺血再灌注损伤大鼠有保护作用,其作用可能与抗凋亡有关。     

大鼠肝缺血再灌注损伤中肝细胞凋亡的研究

目的： 研究阻断门脉和肝动脉所造成的肝缺血再灌注（I/R）模型中肝细胞凋亡的发生率、空间分布规律及与凋亡发生相关的因素。方法：将60只SPF级SD大鼠分为正常对照组（18只）、假手术组（18只）、I/R组（24只，缺血20 min，再灌注22 h）。在实验终点时取各组大鼠的肝组织行HE染色、TUNEL法检测细胞凋亡、检测MDA含量及SOD活性；取血液检测TBIL、AST、ALT、ETX、TNF-α、IFN-γ、IL-4。结果：所有大鼠均检测到了凋亡的肝细胞，但只在I/R组有6只大鼠（6/24，25%）出现肝细胞坏死；I/R组大鼠的肝细胞凋亡较正常对照组、假手术组显著增加（P＜0.05）；正常对照组和假手术组的凋亡在肝内呈散在分布，各区的凋亡指数（AI）相近；I/R组包膜下区的肝细胞AI较中央静脉区、汇管区明显增高（P＜0.05），细胞坏死区AI显著高于其它区（P＜0.05）；相关检测指标中ALT、AST、TNF-α、SOD/MDA与肝脏AI显著相关（P＜0.05）。结论：肝脏I/R损伤中，存在凋亡与坏死2种细胞死亡方式，凋亡与坏死可在同一病灶中同时存在；肝包膜下区、坏死区AI较其它区域显著增加；肝脏总的AI与血液中ALT、AST、TNF-α水平及肝组织的SOD/MDA有相关性。     

α-亚麻酸减轻糖尿病大鼠心肌缺血/再灌注损伤

 目的 研究摄食?-亚麻酸（ALA）对糖尿病大鼠心肌缺血/再灌注（MI/R）损伤的影响。方法 构建高脂饲料-链脲霉素诱导的2型糖尿病大鼠模型（HFD-STZ）,每日灌胃给予正常或HFD-STZ大鼠ALA处理（500 μg/kg）,4周后行心肌缺血（30 min）/再灌注（4或6 h）,并检测心肌梗死范围、血清肌酸激酶（CK）、乳酸脱氢酶（LDH）活性、细胞凋亡,用Western blot检测PI3K、Akt等。结果 HFD-STZ大鼠MI/R损伤加重,虽摄食ALA 4周对正常动物MI/R损伤无影响,但可将HFD-STZ大鼠的心梗面积减小至37.7% ± 5.4%,显著低于对照组的45.6% ± 8.5%（P < 0.05）,且血清CK、LDH活性及细胞凋亡减少;还可增加HFD-STZ大鼠心肌PI3K表达及Akt磷酸化。结论 长期摄食ALA有效减轻糖尿病大鼠MI/R损伤,可能与激活PI3K-Akt信号有关。     

促红细胞生成素预处理对大鼠急性缺血再灌注肾的保护作用

目的：探讨促红细胞生成素（rHuEPO）预处理对急性缺血再灌注肾（IR）的保护作用。方法：SD大鼠分为3组:假手术组、IR组、rHuEPO+IR组。除假手术组外，其余两组用动脉夹夹闭双侧肾动脉45 min后恢复灌注。24 h前静脉注射rHuEPO。术后24 h处死各组大鼠。检测血肌酐（SCr）、血尿素氮（BUN）、血红蛋白（Hb）、血球容积比（Hct）。肾组织以过碘酸雪夫（PAS）染色、细胞凋亡以TUNEL assay测定。正常大鼠在给予rHuEPO后，在不同时点处死，利用免疫印迹和免疫组化检测热休克蛋白-70的表达。结果：IR组表现为肾功能下降、肾组织坏死性改变、TUNEL阳性细胞数增多。rHuEPO预处理使上述各项均逆转，各组间的Hb和Hct无显著差异。正常大鼠给予rHuEPO明显增加热休克蛋白-70的表达，呈时间依赖性，24 h达高峰。结论：rHuEPO预处理提高了大鼠对急性肾IR的耐受性，有显著的肾保护作用而不依赖于其抗贫血功能。     

乳果糖预处理减轻大鼠肠缺血再灌注损伤的机制研究

 目的： 探讨乳果糖预处理对大鼠肠缺血再灌注损伤的影响及其作用机制。方法： 随机将30只SD大鼠分成假手术组、缺血再灌注组和乳果糖预处理组。乳果糖预处理组在手术前7 d每天给予乳果糖灌胃,假手术组和缺血再灌注组在手术前7 d每天给予等量生理盐水灌胃。手术分离肠系膜上动脉,通过夹闭30 min、再灌注60 min诱导缺血再灌注损伤。收集血清检测白细胞介素6（IL-6）、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和IL-1β水平。HE染色用来评估组织的损伤程度,TUNEL检测小肠上皮细胞的凋亡。部分小肠组织用来检测丙二醛、超氧化物歧化酶及激活型caspase-3的表达水平。结果： 乳果糖预处理显著减轻缺血再灌注引起的肠组织损伤和小肠上皮细胞凋亡,并显著抑制血清中细胞因子的水平和肠组织的脂质过氧化。结论： 乳果糖预处理可能通过抑制细胞凋亡和脂质过氧化减轻缺血再灌注引起的肠道损伤。     

多巴胺受体2减轻离体大鼠心肌缺血/再灌注损伤

目的 观察多巴胺受体2(DR2)对离体大鼠心肌缺血/再灌注(I/R)损伤的影响及其可能机制.方法 将大鼠40只,每组n=10,随机分成对照组(control)、I/R组、10 pmol/L Bromocriptine(DR2激动剂)组(Bro),10 μmol/L Haloper-idol(DR2抑制剂)组(Hal).用Langendorff离体灌流装置,复制大鼠心肌I/R损伤模型.Powerlab生理记录仪记录心功能;比色法测定冠脉流出液LDH、CK活性和心肌组织匀浆SOD活性以及MDA含量;TUNEL染色检测心肌细胞凋亡;Western blot检测DR2、Bcl-2、caspase-3和caspase-9蛋白的表达.结果 与对照组比较,I/R组DR2、Bcl-2、caspase-3和cmpase-9蛋白表达、LDH和CK活性、MDA含量和细胞凋亡率均增加(P＜0.01),唯有SOD活性降低,心功能减弱(P＜0.01).与I/R组比较,Bro降低LDH和CK活性、MDA含量、细胞凋亡率、caspase-3和caspase-9的表达,升高SOD活性,改善心功能和进一步增加Bcl-2的表达(P ＜0.01);Hal对上述指标影响不显著.结论 DR2可减轻心肌I/R损伤,其机制与抗氧化、清除自由基、上调Bcl-2表达以及下调caspase-3和caspase-9的表达有关.     

HIF-1α抗心肌缺血再灌注炎性损伤的作用

目的:本文旨在通过稳定低氧诱导因子1α(HIF-1α)表达,探讨其在大鼠心肌缺血再灌注(I/R)所致炎性损伤中的作用及可能的机制。方法:60只清洁级雄性Wistar大鼠随机分为4组:假手术(sham)组、I/R组、HIF-1α稳定剂二甲基乙二酰甘氨酸(DMOG)+I/R组和HIF-1α抑制剂YC-1+I/R组。各组分别予相应处理后,用Western blot法检测心肌组织的Toll样受体4(TLR4)和核因子κB(NF-κB)的蛋白表达;real-time PCR检测白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、TLR4和NF-κB的mRNA水平;并利用试剂盒检测心肌组织的髓过氧化物酶(MPO)活性;HE染色观察炎性细胞浸润情况。结果:HIF-1α可明显降低心肌组织中炎性细胞的浸润、MPO活性及炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α的mRNA水平,同时降低TLR4和NF-κB的mRNA及蛋白水平(P0.05)。结论:HIF-1α可减轻心肌I/R引起的炎性损伤,其机制可能与抑制TLR4/NF-κB信号通路激活有关。     

小鼠急性缺血-再灌注肾损伤模型的建立及体会

目的观察应用小鼠制备急性缺血-再灌注性肾损伤模型的效果。方法应用微型动脉夹夹闭小鼠双侧肾动脉制备急性缺血-再灌注肾损伤模型,其中两组分别于术后24h和48h后处死观察肾功能及肾脏病理变化,另一组观察其病情及存活情况14天。结果各次造模成功率均达85%以上;术后24h及48h实验组血清肌酐(Scr)和血尿素氮(BUN)水平明显升高,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01);实验组肾脏外观出现典型"大白肾"表现,镜下出现典型急性肾小管坏死表现,并有较多炎症细胞浸润,肾小管组织学评分与对照组比较差异有统计学意义(P均<0.01);实验组在观察期间逐渐出现典型急肾衰竭表现,至14天末,死亡率达91.7%,而对照组全部正常存活。结论应用微型动脉夹夹闭小鼠双侧肾动脉可制备稳定急性缺血-再灌注肾损伤模型,而且成功率较高。