固定化酵母生产L－间羟基苯基乙酰基甲醇的研究

报道间羟基苯基乙酰基甲醇的高产酵母菌株筛选,并将其固定化,海藻酸钙包埋法比聚乙烯醇（ＰＶＡ）－海藻酸钙包埋法效果好,其浓度为１％,包埋量为３ｇ／１０ｍｌ。固定化细胞的最佳底物浓度、糖浓度和最佳反应时间与游离细胞一致,分别为１０ｍｇ／ｍｌ、１００ｍｇ／ｍｌ和６ｈ;但最适反应温度比游离细胞高５℃,为３０℃;最佳ｐＨ比游离细胞高１～２个ｐＨ单位,为ｐＨ６。固定化细胞能反复用于羟基苯基乙酰基甲醇生产５次。但在柱式反应器中,转化效率大大下降。固定化细胞在４℃时贮存３０ｄ活性基本上无损失。     

薄层色谱法测定转化液中L─间羟基乙酰基甲醇含量

利用薄层色谱技术测定转化液中Ｌ－间羟基苯基乙酰基甲醇的含量。采用硅胶ＧＦ２５４薄层板,以二氯甲烷－乙酸乙酯－乙醇（１８∶２∶１）为展开剂,在紫外灯下刮下Ｒｆ值为０．４７的暗斑,经９５％乙醇洗脱,在２７９．４ｎｍ处测定吸收值,从标准曲线读出样品含量。标准曲线线性范围２０～１００ｎｇ,最低检出量１ｎｇ,平均回收率１００．０５±１．０８％,板内和板间ＲＳＤ分别小于６％和９％。     

间羟基苯甲醛在酵母细胞中的代谢初探

报道间羟基苯甲醛在酵母中的代谢情况。前者经酵母转化后,从发酵液中分离得三个化合物,经ＩＲ,￣１ＨＮＭＲ,ＭＳ分析,分别确定为间羟基苯基乙酰基甲醇（收率：３７．４％）;间羟基苯甲醇（收率：４１．１％）;１－间羟基苯基－１,２－丙二醇（收率３６．３％）。此外还证实１－间羟基苯基－１,２－丙二醇是由间羟基苯基乙酰基甲醇进一步转化的产物。     

丙酮酸脱羧酶催化合成L-苯基乙酰基甲醇的研究

用酵母的丙酮酸脱羧酶粗提物催化苯甲醛合成Ｌ－苯基乙酰基甲醇（Ｌ－ＰＡＣ）,后者为合成Ｌ－麻黄素的前体。酶转化反应的最佳温度为１０℃,ｐＨ６．８,时间为５～６ｈ,酶用量７ｕ／ｍｌ,乙醇２．０ｍｏｌ／Ｌ,苯甲醛１５０～１８０ｍｍｏｌ／Ｌ,丙酮酸１５０～２００ｍｍｏｌ／Ｌ,转化液中Ｌ－ＰＡＣ浓度可达１４０ｍｍｏｌ／Ｌ。     

丙酮酸脱酸酶催化合成L—苯基乙酰甲醇的研究

用酵母的丙酮酸脱羧酶粗提物催化苯甲醛合成Ｌ－苯基乙基甲醇,后者为合成Ｌ－麻黄素的前体。酶转化反应的最佳温度为１０℃,ＰＨ６．８,时间为５－６ｈ,酶用量７ｕ／ｍｌ,乙醇２．０ｍｏｌ／Ｌ,苯甲醛１５０－１８０ｍｍｏｌ／Ｌ,丙酮酸１５０－２００ｍｍｏｌ／Ｌ,转化液中Ｌ－ＰＡＣ浓度可达１４０ｍｍｏｌ／Ｌ。     

薄层色谱法测定转化液中L—间羟基乙酰基醇含量

利用薄层色谱技术测定转化液中Ｌ－间羟基苯基乙酰基甲醇的含量,采用硅胶ＧＦ３５４支板,二氯甲烷乙酸乙酯－乙醇（１８：２：１）为展开剂,在紫外灯下刮下Ｒｆ值为０．４７的暗斑,经９５％乙醇洗脱,在２７９．４ｍｍ,从标准曲线读出样品含量。标准曲线线性范围２０－１００ｎｇ,最低检出量１ｎｇ,平均回收率１００．０５±１．０８％,板内和板间ＲＳＤ分别小于６％和９％．     

固定化酵母细胞生产1,6—二磷酸果糖的动力学研究

筛选获得一株１，６－二磷酸果糖（ＦＤＰ）的高产酵母菌株，改变通透性后的酵母细胞，在发酵及固定化生产ＦＤＰ过程中发现Ｆｅ＾２＋和甘油能大量提高ＦＤＰ的积累。将戊二醛交联后的酵母细胞，用卡拉胶固定化后，装入酶反应柱，连续生产ＦＰＤ，柱反应可稳定在１０天以上，转化率维持在２０％以上。     

利用固定化酵母细胞生产ATP

利用明胶戊二醛制备的固定化啤酒酵母细胞,由腺苷酸(AMP)生产腺嘌呤核苷三磷酸(ATP)。在含有15 mmol/L AMP,75 mmol/L葡萄糖,5mmol/L硫酸镁(MgSO_4·7 H_2O)的0.2 mol/L磷酸缓冲液(pH 7.0)中,在34℃振荡反应1h,ATP转化率可达100%,分批连续反应10次,ATP转化率保持在90%以上。     

吡唑类化合物的研究Ⅸ——1—苯基—3—羟基—4—苯氧乙酰基—5—吡唑酮的合成及其性质

β-二酮是—类用途广泛的螯合剂，它与稀土元素的络合性能等已有大量报道。自1959年Jensen首次合成了1—苯基—3—羟基—4—苯氧乙酰基—5—吡唑酮并初步研究了它对金属离子的螯合作用后，β-二酮类配合物得到了国内外的广泛关注。本文以1—苯基—3—羟基—5—吡唑酮和苯氧乙酰氯为原料，氢氧化钙为催化剂，     

吡唑类化合物的研究IX 1—苯基—3—羟基—4—苯氧乙酰基—5—吡唑酮的合成及其性质

β—二酮是一类用途广泛的螯合剂 ,它与稀土元素的络合性能等已有大量报道 [1～ 5]。自 1 95 9年Jensen[6]首次合成了 1—苯基— 3—甲基— 4—苯甲酰基— 5—吡唑酮并初步研究了它对金属离子的螯合作用后 ,β—二酮类配合物得到了国内外的广泛关注 [7]。本文以 1—苯基— 3—羟基— 5—吡唑酮 [4]和苯氧乙酰氯为原料 ,氢氧化钙为催化剂 ,合成了新螯合剂 1—苯基— 3—羟基— 4—苯氧乙酰基—5—吡唑酮 ( PHPP) ,并对它的一些性质进行了研究。合成反应式为 :1　实验部分1 .1　仪器与试剂试剂 :二氧六环、氢氧化钙、苯氧乙酰氯、盐酸、乙醇…     

固定化酵母细胞生产1，6－二磷酸果糖的动力学研究

筛选获得一株１,６－二磷酸果糖（ＦＤＰ）的高产酵母菌株,改变通透性后的酵母细胞,在发酵及固定化生产ＦＤＰ过程中发现Ｆｅ２＋和甘油能大量提高ＦＤＰ的积累。将戊二醛交联后的酵母细胞,用卡拉胶固定化后,装入酶反应柱,连续生产ＦＰＤ,柱反应可稳定在１０天以上,转化率维持在２０％以上。     

吡唑类化合物的研究IX-苯基-3-羟基-4-苯氧乙酰基-5-吡唑酮的合成及其性质

β-二酮是一类用途广泛的螯合剂,它与稀土元素的络合性能等已有大量报道[1～5].自1959年Jensen[6]首次合成了1-苯基-3-甲基-4-苯甲酰基-5-吡唑酮并初步研究了它对金属离子的螯合作用后,β-二酮类配合物得到了国内外的广泛关注[7].本文以1-苯基-3-羟基-5-吡唑酮[4]和苯氧乙酰氯为原料,氢氧化钙为催化剂,合成了新螯合剂1-苯基-3-羟基-4-苯氧乙酰基-5-吡唑酮(PHPP),并对它的一些性质进行了研究.合成反应式为:     

固定化细胞联产L—苹果酸和L—天冬氨酸的研究

用延胡索酸铵为底物溶液,通过串联的固定化延胡索酸酶产生菌细胞和固定化Ｌ－天冬氨酸酶产生菌细胞的两柱式反应器,延胡索酸定量地被转化为Ｌ－苹果酸和Ｌ－天冬氨酸。转化液用浓盐酸调至ｐＨ２．７８,Ｌ－天冬氨酸沉淀析出,过滤洗涤后可得Ｌ－天冬氨酸产品。滤液中加入氢氧化钙,使苹果酸转为苹果酸钙沉淀,再经酸化、离交、浓缩、结晶,可得Ｌ－苹果酸产品。使用该法,可有效地降低Ｌ－苹果酸产品中延胡索酸含量,简化工艺,提     

间羟基苯甲醛合成工艺的改进

间羟基苯甲醛 (Ｉ)是合成抗胃溃疡罗沙替丁的中间体。文献报道的合成方法有 :(1 )Ｗｏｏｄ ｗａｒｄＲＢ报道的以苯甲醛为原料 ,经硝化、还原、重氮化水解而得 ,收率较低[1 ] 。 (2 )ＯｉＴａｔｓｕ以间羟基苯甲醇为原料经氧化而得 ,方法似简单 ,但原料价高 ,无实用价值[2 ,3]     

基因工程菌CTB2的固定化及其制备L—苯丙氨酸的研究

对以卡拉胶为载体固定化基因工程菌ＣＴＢ２制备Ｌ－苯丙氨酸进行了研究。比较了固定化细胞的最适温度和最适ＰＨ,考察了该固定化细胞的柱以应特性以及产物Ｌ－苯丙氨酸的分离方法。结果表明,固定化细胞的最适温度为３０℃,最ＰＨ为７．０,柱反应最佳空时速度ＳＶ＝０．１９ｈ＾－１底转化率为２０％,固定化酶半衰期大于３０ｄ。     

天麻成分对羟基苯甲醇抗实验性脑血栓形成及抗炎作用研究

［摘要］目的　观察天麻成分对羟基苯甲醇抗脑血栓形成及抗炎作用．方法　本实验采用经大鼠一侧颈内动脉注射花生四烯酸诱发同侧大脑半球脑血栓形成方法评价天麻成分对羟基苯甲醇的抗实验性脑血栓形成作用;采用二甲苯诱导小鼠耳廓肿胀模型、花生四烯酸、角叉菜胶诱导大鼠足趾肿胀反应模型考察了天麻成分对羟基苯甲醇的抗炎作用．结果　天麻成分对羟基苯甲醇20 mg/kg和15 mg/kg组均能够降低花生四烯酸注射侧大脑伊文思蓝吸光度与脑重的比值（P＜0.01）;天麻成分对羟基苯甲醇30 mg/kg、20 mg/kg和15 mg/kg组均能够显著抑制二甲苯诱导小鼠耳廓肿胀,抑制率分别为60.01%、52.72%、45%（P＜0.01）;天麻成分对羟基苯甲醇20 mg/kg组能够抑制大鼠足趾注射角叉菜胶诱导的足趾肿胀反应,抑制率为42.56%（P＜0.01）,对大鼠足趾注射花生四烯酸诱导的足趾肿胀反应无明显影响．结论　天麻成分对羟基苯甲醇具有显著的抑制实验性脑血栓形成及抗炎作用,其抗炎作用与抑制花生四烯酸环氧合酶代谢途径有关.     

装载趋化因子CXCL13的中空羟基磷灰石微球对间充质干细胞的趋化效应研究

目的 以中空羟基磷灰石(HA)微球装载趋化因子CXCL13,观察其对间充质干细胞(MSCs)的趋化效应.方法 采用压力渗透法将重组人CXCL13 (rhCXCL13)装载于中空HA微球,ELISA法测定其体外释放曲线.以含CXCL13浸提液处理的MSCs为实验组,单纯DMEM处理的MSCs为对照组,通过Boyden小室法与活细胞工作站观察两组MSCs的迁移率、迁移速率和迁移效率,流式细胞术测定两组MSCs中CXCL13特异性受体CXCR5的表达.结果 rhCXCL13最终累积释放率约为80％,释放周期延续至30 d以上.实验组MSCs的迁移率、迁移速率和迁移效率均高于对照组,且实验组MSCs中CXCR5表达增强.结论 中空HA微球是CXCL13的有效控释载体,其释放的CXCL13具有对MSCs良好的趋化效应,可能与CXCR5受体上调有关.     

正交试验优选天麻中天麻素与对羟基苯甲醇的提取工艺

目的 优选天麻中天麻素与对羟基苯甲醇的超声提取工艺.方法 采用高效液相色谱法测定天麻中天麻素与对羟基苯甲醇的含量,以乙醇浓度、提取时间、料液比为考察因素,以天麻中天麻素与对羟基苯甲醇的含量为考察指标,采用L9(34)正交试验优选最佳提取工艺条件.结果 最佳提取工艺为提取溶剂50%乙醇,提取时间15 min,料液比1:20.结论 该提取工艺具有效率高、时间短、能耗低、环保等优点,可为天麻中天麻素与对羟基苯甲醇的工业化生产和新药开发提供依据.     

手性流动相添加剂法测定5－（对－羟基苯基）－5－苯基乙内酰脲的体外代谢的立体选择性

作者研究了５－（对－羟基苯基）－５－苯基乙内酰脲（ｐ－ＨＰＰＨ）体外形成葡萄糖醛酸甙的立体选择性。以β－环糊精为手性流动相添加剂，反相高效液相法测定底物Ｓ－和Ｒ－ｐ－ＨＰＰＨ的消失量。结果显示，在苯巴比妥（ＰＢ）和β－萘黄酮（β－ＮＦ）诱导的鼠肝微粒体中，Ｒ－ｐ－ＨＰＰＨ形成葡萄糖醛酸甙较Ｓ－ｐ－ＨＰＰＨ快，尤其是β－ＮＦ诱导的微粒体，反应液中Ｓ－／Ｒ－浓度比值由起始时１．０，经反应５０ｍｉｎ后上升到１．８５；而ＰＢ诱导的微粒体，经５０ｍｉｎ反应后，Ｓ－／Ｒ－浓度比值为１．０９。这一结果表明，β－ＮＦ诱导的鼠肝微粒体对Ｒ－ｐ－ＨＰＰＨ葡萄糖醛酸甙的形成，具有显著的立体选择性。     

复合珊瑚羟基磷灰石人工骨用于颈椎椎间融合的实验研究

目的 评价复合珊瑚羟基磷灰石（珊瑚羟基磷灰石/rhBMP-2/几丁糖，combined coralline hydroxyapatite CCHA)在颈椎融合中的成骨效果。方法 按照序贯实验设计方法设计，以实验犬为实验对象，同体对照研究，分别选择颈椎3/4和5/6为融合节段，随机选择其中一个节段应用CCHA为植入物，另一个节段则选择自体髂骨为植入物，按照Robinson‘s法进行椎间融合手术。并加钢板内固定。手术后10周进行X线检查，并按照Lane-Sandhu评分法中骨形成的评定标准来确定愈合情况，以骨融合情况为观察指标，进行统计、分析，并选定α=0.05,β=0.05,γ=FS/SF=2时，接受CCHA优于自体骨。结果 CCHA应用于颈椎融合时，在手术后10周时，达到完全愈合，去除结果相同的1例，第12例时，曲线上界相交，停止实验。结论 从手术后10周的骨融合情况来看，CCHA比自体骨融合效果更好。