smad4 shRNA 真核表达质粒的构建及鉴定

 目的 针对smad4基因的不同部位,构建不同smad4shRNA表达质粒载体,在转录后水平抑制smad4的表达,对其克隆进行鉴定并挑选出抑制效率最高的克隆。方法 用DNA重组技术将针对人smad4基因不同部位所设计的3对shRNA序列克隆到真核表达质粒pGenesil-1中,构建smad4shRNA表达载体pGenesil-smad4-shRNA1、2、3。脂质体介导转染人宫颈癌细胞株HeLa,经G418筛选抑制smad4表达的稳定细胞克隆。结果 3个smad4shRNA表达载体pGenesil-smad4-shRNA1、2、3经限制性酶切及序列分析证明基因插入正确。RT-PCR、Westernblotting均证实：3种shRNA重组质粒中pGenesil-smad4-shRNA2可明显降低细胞内smad4mRNA丰度及smad4蛋白表达。结论 成功构建了smad4shRNA表达载体pGenesil-smad4-shRNA1、2、3,并筛选出特异而高效地阻断smad4表达的克隆。此实验结果为进一步研究smad4蛋白分子的生物学功能及应用奠定了基础。     

LRIG1基因特异性RNA干扰表达载体的构建、鉴定和稳定株的筛选

目的构建针对LRIG1（leucine-rich repeats and immunoglobulin-like domains 1,LRIG1）基因的特异性RNA干扰质粒,稳定转染人胶质瘤GL15细胞系,观察其对目的基因LRIG1表达的影响,为探讨LRIG1基因沉默对人脑胶质瘤细胞的生物学行为调控奠定基础。方法根据GenBank提供的LRIG1基因序列设计2条RNA干扰序列,命名为LRIG1-shRNA1、LRIG1-shRNA2,并设计1条非特异性序列作为阴性对照,命名为pGenesil2-negative shRNA。合成各自的寡核苷酸链,退火后与pGenesil2质粒载体连接,转化扩增后测定序列。用不同浓度的G418作用于GL15细胞确定G418对GL15的筛选浓度。将3种重组表达载体转染GL15细胞,G418筛选后挑单克隆并扩增获得稳定株。Western印迹法在蛋白水平上检测LRIG1的表达。结果重组pGenesil2-LRIG1-shRNA质粒经限制性酶切及DNA测序分析证明序列插入正确。G418对GL15细胞的筛选浓度为600mg/L,筛选出稳定转染三种质粒的GL15细胞,转染pGenesil2-LRIG1-shRNA1组细胞LRIG1蛋白表达明显低于转染pGenesil2-negative shRNA组。结论成功构建了针对LRIG1基因的特异性shRNA表达载体（pGenesil2-LRIG1-shRNA1）,转染细胞后可抑制LRIG1基因表达,为下一步研究其功能奠定基础。     

RNA干扰靶向抑制胃癌细胞株SGC7901 hTERT基因表达

背景与目的：胃癌是全人类常见恶性肿瘤之一。在我国，胃癌居各种癌症死亡之首，其总体五年生存率仅15％～20％。在目前尚无有效一级预防措施的情况下，积极探讨有效防治胃癌的方法成为必然趋势。本研究利用RNA干扰稳定筛选-抑制技术，抑制人端粒酶逆转录酶（hTERT）基因表达，探讨靶向hTERT基因RNAi对胃癌细胞增殖的抑制效应。方法：设计靶向hTERT基因的小干扰RNA，构建重组表达质粒pGenesil—shRNA—hTERT并导入人胃癌细胞系SGC7901细胞株，经G418筛选，建立稳定表达siRNA—hTERT的细胞株。采用real time RT—PCR、MTT和PCR—TRAP法同时检测pGenesil-shRNA—hTERT稳定抑制组和未处理SGC7901细胞组hTERT基因表达、端粒酶活性及细胞增殖变化。结果：在稳定表达pGenesil—shRNA—hTERT的SGC7901细胞株中，RNAi效力持续、稳定存在，hTERT mRNA表达、端粒酶活性明显降低，瘤细胞增殖被抑制。结论：RNA干扰能持续、稳定地抑制靶基因hTERT mRNA表达及肿瘤细胞增殖，是潜在的肿瘤基因治疗新方法。     

RNA干扰对MDA-MB-231乳腺癌细胞株骨保护素基因表达的抑制作用

目的 构建针对骨保护素（OPG）基因的一个载体编码三条短发夹RNA（shRNA）的真核表达质粒,观察其对MDA—MB-231乳腺癌细胞株OPG表达的抑制作用。方法选择3个针对OPG基因的RNA干扰（RNAi）位点,分别设计合成3对编码相应shRNA的DNA单链,每对单链连接形成双链后分别与线性化载体pGenesil-1．1、pGenesil-1．2、pGenesil-1．3连接形成pGenesil-1．1-shRNAl、pGenesil-1．2-shRNA2、pGenesil-1．3-shRNA3,对以上重组载体反复酶切连接,构建成重组质pGenesil—1．1—1．2-1．3-shRNA1-shRNA2-shRNA3,酶切鉴定和测序无误后,将该质粒转染MDA—MB一231细胞,以G418加压筛选,对转染细胞行单克隆化,稳定转染细胞行RT—PCR和Westernblot检测,确定其对OPG基因表达抑制作用。统计分析采用单因素方差分析和SLD分析法。结果成功构建了pGenesil-1．1—1．2-1．3-shRNA1-shRNA2-shRNA3重组质粒;以该质粒稳定转染MDA—MB-231细胞后其OPGmRNA和蛋白表达均较对照差异有统计学意义（P〈0．05）,RNAi对OPGmRNA和蛋白的表达抑制率分别为91％和73％。结论本研究构建了针对OPG的一个载体编码3条shRNA的真核表达质粒,通过RNAi抑制了MDA—MB-231细胞OPG基因表达,为进一步深入探讨肿瘤细胞自身OPG表达在乳腺癌骨转移发生发展中的作用提供了相关实验基础。     

Smad2小干扰RNA载体的构建及其沉默效应的鉴定

目的构建smad2特异性小干扰RNA（siRNA）真核表达载体,并检测肿瘤细胞中其对smad2基因表达的干扰效果。方法根据smad2基因序列设计合理的smad2 siRNA,并将合成的寡核苷酸序列克隆到pSliencer 2.1-U6 neo载体中,转化大肠杆菌DH5α;挑取阳性菌落进行质粒酶切和序列分析;将构建正确的smad2 siRNA重组质粒转染,或与带Flag标签的smads真核表达载体共同转染293T细胞或HeLa细胞,收集细胞裂解物,Westem印迹检测siRNA的干扰效果。结果正确构建了smad2 siRNA重组质粒,对smad2表达的特异性干扰效果可达70%以上。结论成功构建了smad2 siRNA载体,为进一步探讨smad2在肿瘤发生发展中的作用奠定了基础。     

Survivin短发夹状RNA对宫颈癌细胞系HeLa增殖和凋亡的影响

目的:观察survivin基因短发夹状RNA(short hairpin RNA,shRNA)对宫颈癌细胞系HeLa增殖和凋亡的影响。方法:通过脂质体介导的细胞转染技术将含人survivin基因shRNA的重组真核表达质粒pSilenc-er2.1-s2转染宫颈癌细胞系HeLa,G418筛选阳性克隆,半定量PCR、Western blot分别检测survivin mRNA和蛋白表达,四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法绘制细胞生长曲线,流式细胞仪检测细胞周期变化,流式细胞仪、Hoechst染色观察细胞凋亡情况。结果:G418筛选34天后出现阳性克隆,与转染阴性对照质粒(HeLa-NC)、空载质粒(HeLa-U6 neo)及未转染(HeLa)细胞比较,转染pSilencer2.1-s2质粒者survivin mRNA和蛋白表达明显下降,表达抑制率分别为:62.8%和60.1%;细胞增殖受到抑制,最高细胞生长抑制率为:(57.8±2.1)%(P<0.05);细胞周期发生显著变化,细胞被阻滞于G0/G1期,占(72.7±3.1)%(P<0.05),G2/M期明显减少,占(5.1±2.9)%(P<0.05);细胞凋亡率为:(29.2±1.4)%,明显升高(P<0.05)。结论:Survivin基因shRNA可通过下调HeLa细胞中survivin的表达,抑制细胞增殖并诱导细胞凋亡。     

RNA干扰抑制RPS12基因表达对胃癌细胞凋亡的影响及分子机制探讨

目的：探讨RPS12基因特异的RNA干扰对胃癌BGC823细胞凋亡的影响及机制。方法：设计并构建RPS12特异性shRNA表达载体（RPS12-shRNA）,以Lipofectamine2000介导将RPS12特异性shRNA及Scram-ble-shRNA表达载体分别转染胃癌细胞。RT-PCR方法检测BGC823细胞中RPS12基因及凋亡相关基因Bcl-2和Bax mRNA的表达,流式细胞术（flow cytometry,FCM）分析RNA干扰对细胞凋亡的影响。结果：RT-PCR结果显示,RPS12-shRNA表达载体转染第3、5、7天后,RPS12基因表达低于对照组,其中第5天下调最明显。RPS12特异性RNA干扰第5天、第7天后,Bcl-2 mRNA表达明显下调,BaxmRNA表达无明显改变。流式细胞术分析结果显示,RNA干扰RPS12基因第7天后,胃癌细胞凋亡率（17.84%）明显高于对照组（1.89%）。结论：RNA干扰RPS12基因促进胃癌细胞凋亡作用可能是其作为上游基因通过下调Bcl-2基因表达而实现的。     

趋化性细胞因子受体CXCR4基因沉默对乳腺癌细胞体外侵袭和定向肺转移的影响

目的 利用RNA干扰技术下调趋化性细胞因子受体CXCR4基因的表达,探讨其沉默对乳腺癌细胞体外侵袭及肺转移潜能的影响.方法 设计合成CXCR4的特异性短发卡状RNA(shRNA),将其插入至pSilencer载体中,并将重组后的pSilencer质粒载体经脂质体包裹转染乳腺癌MDA-MB-231细胞株,抗性筛选稳定抑制CXCR4表达的永久细胞克隆.应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot法,检测shRNA对细胞内CXCR4基因表达的影响.利用Boyden小室模型检测细胞体外侵袭能力.二苯基溴化四氮唑蓝(MTT)法检测细胞的增殖状况.通过裸鼠尾静脉瘤细胞注射方法,构建肺转移模型,检测CXCR4基因沉默对乳腺癌细胞肺转移能力的影响.结果 成功构建和筛选出CXCR4特异性的shRNA质粒载体,稳定转染CXCR4-shRNA的乳腺癌细胞的CXCR4 mRNA和蛋白的表达较空白对照组明显下调(29.5%±3.8%比69.7%±2.6%,15.4%±1.1%比39.0%±2.4%;均P<0.01),体外侵袭能力减弱,增殖速度减慢,肺转移能力下降.结论 以CXCR4为靶向的shRNA能够有效下调CXCR4基因的表达,降低人乳腺癌细胞体外侵袭、增殖以及肺转移的能力.CXCR4是乳腺癌侵袭和转移过程中的重要调控因子.     

RNAi沉默p53基因对HeLa细胞核转录因子3表达及其对细胞增殖和侵袭能力的影响

目的：探讨RNAi沉默p53基因对宫颈癌HeLa细胞核转录因子3（STAT3）的表达,及对HeLa细胞增殖和侵袭能力的影响。方法：构建3种靶向p53基因的shRNA1~3序列,并转染HeLa细胞,采用逆转录PCR和Western blot检测细胞p53 mRNA和蛋白的表达,以筛选有效沉默p53的shRNA序列。将筛选的序列转染HeLa细胞后,采用逆转录PCR和Western blot检测STAT3 mRNA和蛋白的表达;采用四甲基噻唑蓝法（MTT）检测细胞增殖;采用Transwell检测细胞侵袭能力。结果：构建的3种p53-shRNA均可沉默宫颈癌HeLa细胞p53的表达,尤以shRNA3的沉默效果最好,转染shRNA3后,HeLa细胞p53 mRNA和蛋白的表达量分别为0.23±0.05和0.41±0.11,显著低于未转染组、空质粒组、p53-shRNA1组和p53-shRNA2组（P均 < 0.05）,故后续试验均以shRNA3转染HeLa细胞。将shRNA3序列转染HeLa细胞沉默p53基因后,p53-shRNA3组STAT3 mRNA和蛋白表达量分别为1.09±0.21和1.46±0.25,显著高于未转染组（0.53 ±0.10和0.74±0.14）及空质粒组（0.55±0.11和0.73±0.15）（P均 < 0.05）。MTT法分析结果显示,在孵育24、36、48和72 h时,p53-shRNA3组HeLa细胞增殖能力均显著大于未转染组和空质粒组（P均 < 0.05）。Transwell法分析结果显示,转染12 h后p53-shRNA3组穿膜细胞数目（59.36±5.33）显著高于未转染组（15.73±1.29）和空质粒组（16.01±1.34）（P均 < 0.05）。结论：RNAi沉默p53基因能够上调宫颈癌HeLa细胞STAT3的表达,并促进细胞的增殖及侵袭能力。     

抑制STAT3基因表达对人宫颈癌HeLa细胞定植和侵袭的影响

目的 采用RNA干扰(RNAi)技术抑制人宫颈癌HeLa细胞信号转导及转录活化因子3(STAT3)基因的表达,观察其对HeLa细胞定植和侵袭能力的影响.方法 针对STAT3基因设计并合成编码小干扰RNA(siRNA)的寡核苷酸,克隆入pSilencer2.1-U6-neo质粒中,从而构建针对STAT3基因的短发夹状siRNA真核表达质粒,用脂质体法将其转染人人宫颈癌HeLa细胞.利用RT-PCR技术和Western blot方法分别检测STAT3 mRNA和蛋白表达水平;通过软琼脂克隆形成实验和体外侵袭实验检测HeLa细胞的定植和侵袭能力.结果 针对STAT3基因的短发夹状siRNA真核表达质粒成功转染人宫颈癌HeLa细胞;转染成功的HeLa细胞的STAT3基因mRNA及蛋白表达均下降;HeLa细胞在软琼脂中形成的克隆数和穿透Matrigel膜的细胞数均明显减少.结论 针对STAT3基因的短发夹状siRNA真核表达质粒通过下调STAT3基因表达,抑制宫颈癌细胞的定植和侵袭能力.     

应用可调控Notch1干扰载体诱导HeLa细胞增殖抑制

背景与目的:Notch信号转导途径与细胞增殖与分化的调控密切相关,它的功能失调在肿瘤细胞的增殖分化中发挥着重要的作用.本研究构建了针对Notch1的可调控RNA干扰载体,并从分子水平及细胞水平上研究其对HeLa细胞的影响.方法:利用受CRE重组调控的RNA干扰载体pSico和pSicoR构建针对GAPDH和Notch1的shRNA表达载体,以pBS185-CRE作为CRE蛋白的表达载体,将HeLa细胞分为pSico、pSico/CRE、pSicoR和pSicoR/CRE 4组,分别转染相应质粒,RT-PCR和Western blot法检测干扰效率,CBF-1荧光素酶报告载体检测细胞内活性Notch信号水平,MTS实验检测细胞增殖状态.结果:各组细胞在转染重组质粒pSico(R)-GAPDH和pSico(R)-Notch1后,EGFP的表达均表现出明显的CRE依赖性;RT-PCR和Western blot实验显示,pSico(R)-Notch1载体能在CRE蛋白的调控下抑制Notch1基因的表达,CBF-1荧光素酶报告载体实验可见,Notch1的干扰作用使细胞内Notch信号水平下降;MTS实验可见Notch1干扰引起的HeLa细胞增殖抑制.结论:由可调控RNA干扰载体介导的CRE依赖性Notch1表达降低能降低细胞内Notch信号水平并抑制HeLa细胞增殖.     

Effects of RNA interference targeting four different genes on the growth and proliferation of nasopharyngeal carcinoma CNE-2Z cells

To explore the effects of RNA interference targeting four different genes (VEGF, C-myc, Survivin, hTERT) on the growth and proliferation of nasopharyngeal carcinoma (NPC) CNE-2Z cells. Fluorescein-labeled short-hairpin (sh)RNA plasmids together and separately targeting VEGF, C-myc, Survivin and hTERT were built and respectively called plasmid-shVEGF-shC-myc-shSurvivin-shhTERT, plasmid-shVEGF, plasmid-shC-myc, plasmid-shSurvivin, plasmid-shhTERT. These plasmids were respectively transfected into human NPC CNE-2Z cells and xenograft tumors in nude mice. The expression of plasmids in NPC CNE-2Z cells and xenograft tumors was observed. Cell proliferation was detected with MTT assay. The mRNA and protein expression were determined by real-time PCR and western blot, respectively. The effects of plasmids on the biological behavior of CNE-2Z cells were observed with transwell invision chamber models. Apoptosis was determined with flow cytometer. The inhibitory effect of plasmids on xenograft tumors was observed in nude mice. The plasmid containing four different shRNAs could significantly inhibit CNE-2Z cell proliferation and decrease invasion ability in vitro compared with plasmids with each single shRNA (P<0.05). The plasmid containing four different shRNAs could simultaneously downregulate VEGF, C-myc, surviving, hTERT mRNA and protein expression in the CNE-2Z cells. The multiple gene shRNA could more significantly induce cell apoptosis than each single shRNA, respectively (P<0.05). The combinative silencing of these four genes had a better inhibitory effect on xenograft tumors than the silencing of each single shRNA (P<0.05). RNA interference targeting multiple genes can effectively inhibit NPC proliferation and induce apoptosis, which provides an experiment basis for NPC gene therapy.     

整合素β1表达下调对非小细胞肺癌细胞迁移和黏附能力的影响

目的:构建整合素β1基因特异的RNA干扰质粒,探讨抑制整合素β1蛋白表达对非小细胞肺癌(non-small cell lung carcinoma,NSCLC)细胞生物学行为的影响.方法:根据GenBank数据库提供的整合素β1基因核苷酸序列,选择设计1条能转录短发夹RNA (small hairpin RNA,shRNA)的DNA序列,命名为17-2;同时设计1条非特异性序列作为阴性对照,命名为N.将设计序列与pUC19质粒载体连接,转化感受态大肠埃希菌,挑选阳性克隆,抽取重组质粒.2种重组质粒分别转染NSCLC耐药细胞株PC-9/AB2细胞,用G418筛选后挑选单克隆并扩增获得稳定转染株.荧光显微镜、实时荧光定量PCR(real-time fluorescent quantitative PCR,RFQ-PCR)和Western印迹法检测整合素β1 mRNA及蛋白表达水平.细胞划痕实验和黏附实验比较整合素β1对细胞迁移和黏附能力的影响.结果:G418筛选出稳定转染2种质粒的PC-9/AB2细胞,荧光显微镜下可见满视野带绿色荧光的细胞,转染17-2组细胞中整合素β1的mRNA及蛋白表达水平明显低于转染N组细胞及母细胞PC-9/AB2.划痕实验和黏附实验表明,整合素β1抑制可以使细胞迁移和黏附能力明显降低.结论:成功构建针对整合素β1基因的特异性shRNA真核表达载体,转染NSCLC细胞后可抑制整合素β1蛋白表达.整合素β1表达抑制后细胞迁移和黏附能力明显降低.     

靶向cortactin基因的shRNA重组质粒的构建和筛选

目的 构建靶向cortactin基因的shRNA重组质粒,并筛选出沉默cortactin基因效果最明显的shRNA重组质粒。方法 设计并合成3对针对cortactin基因不同位点的shRNA片段,构建相应的重组质粒（命名为pBSilence1.1-cortactin-shRNA1-3）,并进行酶切鉴定和测序分析。通过脂质体转染方法将各重组质粒及阴性对照质粒分别转染至人肝癌HepG2细胞中,转染24 h后荧光显微镜下观察各组细胞的转染情况,并采用RT-PCR检测各组细胞mRNA的表达情况。结果 构建的重组质粒经酶切鉴定与测序分析证实完全符合设计要求, 转染成功的细胞在荧光显微镜下显示绿色荧光,3组重组质粒组HepG2细胞的cortactin基因mRNA表达水平明显低于阴性对照组和空白对照组（P<0.05）。与pBSilence1.1-cortactin-shRNA1和pBSilence1.1-cortactin-shRNA2两组相比,pBSilence1.1-cortactinshRNA3组的cortactin基因mRNA表达降低更加显著（P<0.05）。结论 成功构建并筛选的重组质粒能有效抑制HepG2细胞中cortactin基因mRNA表达,为下一步研究沉默cortactin基因对肝癌细胞生物学行为的影响提供了实验基础。     

Vector-based RNAi approach to isoform-specific downregulation of vascular endothelial growth factor (VEGF)165 expression in human leukemia cells

Vascular endothelial growth factor (VEGF) plays a critical role during normal embryonic angiogenesis and also in the pathological angiogenesis that occurs in a number of diseases, including cancer. K562 human leukemia cells overexpress VEGF, with a shift in isoform production from membrane-bound VEGF189 to the more soluble VEGF165. In the present study, three 19 bp reverse repeated motifs targeting exons 5 and 7 boundary of VEGF165 gene sequence with 9 bp spacer were synthesized and cloned into eukaryotic expression plasmid pGenesil-1 containing U6 shRNA promoter and termination signal of RNA polymerase. The recombinant plasmids pGenesil-VR1, pGenesil-VR2, pGenesil-VR3 and pGenesil-con (plasmid containing random DNA fragment) were transfected into K562 cells, respectively, through lipofectamine reagent. A vector-based small interfering RNA(SiRNA) inhibited VEGF165 mRNA expression by 72% and protein production by 67% in K562 cells. Human microvascular endothelial cell migration induced by conditioned medium from VEGFsi-transfected K562 cells was significantly less than that induced by conditioned medium from K562 cells and control vector-transfected K562 cells. Furthermore, the VEGF shRNA dramatically suppressed tumor angiogenesis and tumor growth in a K562 s.c. xenograft model. Vessel density as assessed by vWF immunohistochemical analysis was also decreased. This strategy provides a novel tool to study the function of various VEGF isoforms and may contribute to VEGF-specific treatment in cancer.     

CtBP1基因shRNA真核表达载体的构建及其干扰效果的初步鉴定

目的：构建C-末端结合蛋白-1（CtBP1）基因RNA干扰（RNAi）的真核表达载体,转染人子宫内膜癌耐药细胞株B-MD-C1（ADR＋/＋）,初步鉴定其干扰效果。方法：以人CtBP1基因为靶基因,以pGenesil-1质粒为载体,根据GenBank数据库提供的CtBP1基因核苷酸序列,选择设计两条siRNA干扰序列,将带9个碱基茎环结构的干扰序列插入带有绿色荧光蛋白（EGFP）基因、卡那霉素（Kanr）抗性基因及U6启动子的真核表达载体pGenesil-1中,构建针对CtBP1基因的shRNA真核表达载体,转化大肠杆菌DH5α菌株,提取质粒,进行限制性内切酶酶切鉴定和测序分析。确认载体构建成功后,用脂质体LipofectamineTM2000将重组质粒瞬时转染人子宫内膜癌耐药细胞株B-MD-C1（ADR＋/＋）,在荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达,计数转染细胞数,计算转染效率,RT-PCR法检测载体对CtBP1基因的表达抑制效果。结果：构建针对CtBP1基因的pGenesil-1-CtBP1小发夹RNA（pGenesil-1-CtBP1-shRNA）,经限制性内切酶酶切、PCR和DNA测序证实与设计完全一致;在荧光显微镜下观察到B-MD-C1（ADR＋/＋）细胞表达绿色荧光蛋白（EGFP）,证实重组质粒己转染入细胞,转染效率达到60%-70%;RT-PCR结果显示B-MD-C1（ADR＋/＋）细胞中CtBP1基因被特异抑制,基因表达抑制率达40%以上,与转染试剂对照组、空白对照组和阴性序列对照组间的差异均具有统计学意义（P均〈0.05）。结论：成功构建CtBP1基因的shRNA表达载体,可以有效抑制B-MD-C1（ADR＋/＋）细胞上CtBP1基因表达。为进一步研究CtBP1基因功能进而逆转肿瘤的多药耐药奠定基础。     

胰岛素样生长因子1型受体短发夹RNA抑制乳腺癌增殖和迁移能力的体外实验研究

目的 应用短发夹RNA（short hairpin RNA,shRNA）抑制乳腺癌MDA—MB-231细胞胰岛素样生长因子1型受体（type I insulin—like growth factor receptor,IGF-1R）的表达,探讨IGF～1R对乳腺癌体外增殖和迁移的作用。方法构建携带有绿色荧光蛋白报告基因的IGF-1R shRNA质粒载体,脂质体介导转染MDAMB-231细胞,通过倒置荧光显微镜检测转染效率,CCK-8法检测细胞增殖能力,体外迁移实验检测细胞迁移能力。细胞增殖实验结果的组间比较采用重复测量方差分析和多元方差分析,RT—PCR定量结果和迁移实验结果的组间比较采用单因素方差分析。结果成功构建IGF-1RshRNA质粒载体,转染效率为55％～60％。IGF-1R shRNA转染MDA—MB-231细胞后,MDA—MB-231细胞IGF-1R mRNA与蛋白表达水平显著下降;细胞体外增殖和迁移能力受到显著抑制（P均〈O．05）。结论IGF-1R shRNA表达质粒可以有效抑制MDA—MB-231细胞IGF-1R的表达,显著抑制乳腺癌细胞的体外增殖和迁移能力。