凋亡抑制因子反义核酸对肝癌细胞生物学作用研究

目的探讨survivin反义寡核苷酸对人肝癌细胞凋亡、增殖的影响。方法设计合成特异性sur-vivin的反义寡核苷酸(ASODN)。以高表达survivin基因的人肝癌细胞系(SMMC-7721)为靶细胞、反义sur vivin(AS-ODN)为阻断剂,倒置显微镜观察细胞形态变化,WesternBlot法检测细胞survivin表达情况,MTT试验观察AS-ODN对该细胞系的生长抑制作用,流式细胞仪分析细胞增殖周期。结果AS-ODN明显抑制了SMMC-7721肝癌细胞的生长,细胞分裂阻滞在分裂期的中期,并诱导细胞发生凋亡,而各对照组细胞生长良好,细胞增殖指数明显低于各对照组(P<0.05)。结论survivingASODN能下调其蛋白表达,诱导人肝癌细胞凋亡,抑制细胞增殖。     

肝细胞癌差异表达基因P-02反义寡核苷酸抑瘤作用的体外实验研究

目的：通过全硫代修饰的肝细胞癌差异表达基因P-02反义寡核苷酸对人肝癌细胞系SMMC-7721增殖活性的影响，探讨P-02基因的功能。方法：以脂质体为载体，采用MTT法、RT-PCR、流式细胞术检测P-02 AS-ODN(antisense oligonucleotide)对SMMC-7721细胞生长、增殖、细胞周期的作用。结果：脂质体介导的P-02基因反义寡核苷酸可抑制SMMC-7721增殖，RT-PCR结果显示P-02基因的扩增条带明显减弱，流式细胞术显示G1期细胞增多，M期及S期细胞数减少。结论：脂质体介导的AS-ODN可抑制SMMC-7721的恶性表型，证实P-02基因在肝细胞癌的发生发展中可能有重要作用。     

iNOS反义寡核苷酸对肿瘤血管生成抑制的研究

目的:探讨诱导型一氧化氮合成酶(induciblenitricoxidesynthase,iNOS)的反义寡核苷酸对肿瘤血管生成的抑制作用。方法:将人工合成的互补于iNOS基因翻译起始部位的反义-寡核苷酸(AS-ODN)及其错义-寡核苷酸(Mis-ODN)经脂质体介导转染入A549细胞后,了解其产生一氧化氮(nitricoxide,NO)的能力;将AS-ODN及其错义序列、空白对照分别在第1、4、7、12和18天注入接种有A549肺腺癌细胞的裸鼠的腹腔中,于第21天检测小鼠体内肿瘤的大小、肿瘤内血管密度(microvesseldensity,MVD)和肿瘤组织血管内皮生长因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)表达的情况。结果:体外实验显示,iNOS的AS-ODN组和对照组相比,对A549细胞产生NO的抑制能力较强,并呈时间和剂量依赖性。在动物实验中,iNOS的AS-ODN对肿瘤的抑制作用较Mis-ODN和空白序列为强,差异均有统计学意义,F值分别为3·24和3·89,P值分别为0·044和0·032;AS-ODN组、Mis-ODN组及空白对照组中MVD的平均值分别为6·9±3·2、11·8±6·8和12·9±5·4,AS-ODN组MVD较Mis-ODN组和空白组明显降低,差异均有统计学意义,F值分别为5·53和7·63,P值分别为0·006和0·001;同时其VEGF的表达阳性率较Mis-ODN组明显下降,u=-2·457,P=0·017。结论:iN-OS的AS-ODN可降低肿瘤细胞产生NO的能力,在动物体内可降低肿瘤VEGF的表达和新生血管的生成,抑制肿瘤的生长。     

乙酰肝素酶反义寡核苷酸对人鼻咽癌CNE-2细胞侵袭力抑制的研究

目的: 探讨乙酰肝素酶(HPSE)反义寡核苷酸(AS-ODN)对人鼻咽癌CNE-2细胞HPSE基因表达的影响及其细胞侵袭力的抑制作用.方法: 设计合成HPSE AS-ODN转染CNE-2细胞进行培养24h,采用完整细胞原位杂交法检测CNE-2细胞HPSE mRNA表达;同时采用基质凝胶侵袭实验对转染CNE-2细胞的侵袭力变化进行检测.并设正常对照组和脂质体对照组.结果: AS-ODN各组的HPSE mRNA表达水平显著低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05).且AS-ODN各浓度组间的HPSE mRNA表达水平差异亦有统计学意义(P<0.05).AS-ODN在终浓度分别为0.1μmol/L、0.2μmol/L和0.4μmol/L时对CNE-2细胞侵袭力抑制率分别为56.3%、78.7%和91.2%.结论: HPSE AS-ODN通过下调HPSE基因表达可显著抑制CNE-2细胞侵袭力.     

反义Ki-67肽核酸对裸鼠人肾癌细胞移植瘤的治疗作用

目的:探讨Ki-67基因反义肽核酸(AS-PNAs)在体内对小鼠人肾癌移植瘤Ki-67表达和肿瘤生长的影响.方法:建立人肾癌移植瘤裸鼠模型,瘤体内注射反义肽核酸(AS-PNAs),定期测量肿瘤体积,处死小鼠后采用免疫组化、Western blot检测肿瘤Ki-67抗原表达,原位末端标记法(TUNEL)检测肿瘤细胞凋亡,并与反义寡核苷酸(AS-ODN)处理组对照.结果:AS-PNAs处理组肿瘤生长受押(513.2±64.2)mm3,Ki-67表达下降(23.0±2.4)%、(59.7±2.3)%,细胞凋亡增加(31.1±2.0)%,与AS-ODN处理组(868.9±128.2)mm3、(33.6±2.6)%、(85.7±4.4)%、(18.3±2.3)%比较差异有显著性(P＜0.01).结论:反义Ki-67肽核酸能抑制小鼠人肾癌移植瘤Ki-67基因的表达,诱导肿瘤细胞凋亡,抑制肿瘤生长,且优于反义寡核苷酸.     

乙酰肝素酶反义寡核苷酸对人胃癌细胞株SGC 7901表达bFGF的抑制作用

目的探讨乙酰肝素酶反义寡核苷酸对人胃癌细胞株SGC 7901细胞中表达碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)的影响.方法用脂质体介导乙酰肝素酶反义寡核苷酸转染人胃癌细胞株SGC 7901细胞,采用免疫细胞化学观察细胞内bFGF的变化.结果脂质体介导转染乙酰肝素酶反义寡核苷酸前后,SGC 7901胃癌细胞内乙酰肝素酶mRNA积分光密度值(integra optical densit,IOD)分别为256.32±3.21、146.89±2.35、85.36±3.58和63.78±1.42.bFGF阳性表达率转染前72.23%,转染0.2、0.4和0.8μmol/L的AS-ODN后分别为57.15%、51.11%和42.36%.与转染前比较,转染后细胞bFGF表达明显减少,P值分别为0.007、0.003和0.001.结论转染乙酰肝素酶反义寡核苷酸可以有效抑制胃癌细胞bFGF的表达.     

肿瘤反义治疗研究进展

肿瘤反义治疗是以反义寡核苷酸为基础的一种基因治疗方法，经过近二十几年的发展，反义寡核苷酸以其高特异性和低毒副作用等优良特性，正成为新一代抗肿瘤药物的主力军。现着重介绍反义技术的原理、反义寡核苷酸在临床应用的进展及具有临床应用前途的反义靶标。     

反义寡核苷酸治疗癌症的动物模型及临床试验

本文综述了反义寡核苷酸在治疗人类恶性肿瘤中的动物模型研究和临床试验的最新进展,其治疗策略主要有单纯反义寡核苷酸治疗、反义寡核苷酸联合化疗、反义寡核苷酸联合放疗、其他联合治疗及其在临床上的试验。     

反义VEGF寡核苷酸抑制小鼠肺癌作用的实验研究

目的:观察阳离子脂质体介导反义血管内皮生长因子(VEGF)寡核苷酸对肺癌小鼠移植瘤生长、转移的抑制作用.方法:取肺癌细胞悬液建立小鼠肺癌动物模型后,选择40只随机分成4组,分别为空白对照组、实验对照组、VEGF反义寡核苷酸(ASODN)治疗组和VEGF正义寡核苷酸(SODN)治疗组.治疗结束后行大体、HE染色观察,并观察小鼠营养状况和症状.结果:对照组、VEGF反义寡核苷酸治疗组和VEGF正义寡核苷酸治疗组平均瘤质量分别为(7.14±1.68)、(4.26±1.37)和(7.33±1.56)g,VEGF反义寡核苷酸治疗组、VEGF正义寡核苷酸治疗组抑瘤率分别为58.2%和7.4%,ASODN组与对照组及SODN组比较差异有统计学意义,x2分别为8.21和8.04,P值均<0.01.结论:阳离子脂质体介导反义VEGF寡核苷酸对小鼠肺癌的生长具有显著抑制作用,未发现明显的毒副反应,阳离子脂质体介导的基因转染技术有望成为治疗癌症的新方法.