吸入糖皮质激素对哮喘内皮素和内皮素转化酶mRNA表达的影响

目的探讨内皮素１（ＥＴ－１）和内皮素转化酶（ＥＣＥ）ｍＲＮＡ在哮喘气道粘膜的表达，以及吸入激素对其表达的影响。方法应用逆转录－ＤＮＡ聚合酶链反应，测定支气管粘膜组织ＥＴ－１和ＥＣＥｍＲＮＡ的表达量；对支气管粘膜炎症程度进行评分。结果哮喘非激素组（１０例）和对照组（１０名）ＥＴ－１ｍＲＮＡ表达量分别为０．８６±０．０６，０．１４±０．０６（Ｐ＜０．０５）；ＥＣＥｍＲＮＡ表达量分别为０．３１±０．０４，０．３０±０．０５（Ｐ＝０．２３８）；哮喘激素组（１０例）ＥＴ－１ｍＲＮＡ表达量为０．２２±０．０１，ＥＣＥｍＲＮＡ表达量为０．１６±０．０１；哮喘非激素组粘膜炎症评分为６．０±１．９，且与ＥＴ－１ｍＲＮＡ表达量呈正相关（ｒ＝０．７８，Ｐ＜０．０５）。结论哮喘支气管粘膜ＥＴ－１ｍＲＮＡ表达增高明显，而ＥＣＥｍＲＮＡ无明显改变；吸入糖皮质激素显著抑制ＥＴ－１和ＥＣＥｍＲＮＡ的表达，可能是抗炎治疗哮喘的机制之一     

肝癌组织及血清中细胞间粘附分子-1表达的研究

目的研究细胞间粘附分子－１（ｉｎｔｅｒｃｅｌｕｌａｒａｄｈｅｓｉｏｎｍｏｌｅｃｕｌｅ－１，ＩＣＡＭ－１）作为判断肝癌发展程度及转移状态指标的可能性。方法以免疫组化的方法检测ＩＣＡＭ－１在肝癌组织和正常肝组织中的表达，观察了ＩＣＡＭ－１表达在细胞的定位。以点免疫印迹法测定不同患者血清和不同肝组织中ＩＣＡＭ－１的表达。分析ＩＣＡＭ－１表达与肿瘤生长转移状态、肿瘤特性的关系。结果肝癌细胞ＩＣＡＭ－１表达阳性（阳性率为８００％），主要分布在细胞膜，正常肝细胞则为阴性。肝癌患者血清可溶性细胞间粘附分子－１（ｓＩＣＡＭ－１）水平高于正常人（Ｐ＜００１）及肝良性肿瘤患者（Ｐ＜００５），肝癌伴转移者高于无转移者（Ｐ＜００５）。肝癌组织中ＩＣＡＭ－１含量明显高于癌旁组织（Ｐ＜００１）及正常肝组织（Ｐ＜００１），而与肿瘤大小及有无包膜无关（Ｐ＞００５）；转移组肝癌中ＩＣＡＭ－１的表达明显高于非转移组（Ｐ＜００５），两组癌旁组织中ＩＣＡＭ－１表达无差别（Ｐ＞００５）。结论血清及组织中ＩＣＡＭ－１的水平在一定程度上可以反映肝癌发展程度及转移状态，有可能作为预测肝癌转移复发的指标。     

哮喘豚鼠肺组织粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子mRNA表达及雷公藤的影响

目的探讨粒细胞－巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）在哮喘嗜酸细胞（Ｅｏｓ）炎症中的作用。方法建立哮喘豚鼠实验模型，用雷公藤处理，观察肺组织Ｅｏｓ密度，斑点分子杂交检测支气管肺组织ＧＭ－ＣＳＦｍＲＮＡ含量。结果哮喘组肺组织Ｅｏｓ浸润密度增加，ＧＭ－ＣＳＦｍＲＮＡ表达水平增高，与对照组相比差异有显著性（Ｐ＜０．０５）。雷公藤处理后ｍＲＮＡ表达显著降低，但Ｅｏｓ浸润密度减少不明显。结论ＧＭ－ＣＳＦｍＲＮＡ表达增加可能是导致哮喘Ｅｏｓ气道炎症的原因。雷公藤能抑制ＧＭ－ＣＳＦｍＲＮＡ表达，可能具有哮喘抗炎治疗的潜在应用价值。     

哮喘气道炎症粘附机制的实验研究

目的评价细胞间粘附分子１（ＩＣＡＭ１）、Ｐ选择素在哮喘气道炎症粘附机制中的作用,进一步阐明哮喘的发病机理。方法用酶联免疫吸附试验、肺组织免疫组化检查和呼吸生理学方法系统观察正常组和哮喘组豚鼠各项指标。结果（１）哮喘组豚鼠肺潮气量、动态肺顺应性（Ｃｄｙｎ）和肺气道阻力与对照组比较差异有显著性（Ｐ＜０．０１及Ｐ＜０．０５）。（２）哮喘组豚鼠血浆和肺泡灌洗液（ＢＡＬＦ）可溶性ＩＣＡＭ１（ｓＩＣＡＭ１）、可溶性Ｐ选择素、血清和ＢＡＬＦ嗜酸粒细胞阳离子蛋白（ＥＣＰ）与对照组比较,差异有显著性（Ｐ＜０．０１）;ＢＡＬＦ中白细胞介素８（ＩＬ８）与对照组比较差异也有显著性（Ｐ＜０．０１）。（３）哮喘组豚鼠肺组织（气道上皮和血管内皮）ＩＣＡＭ１和ＩＬ８表达与对照组比较,差异有显著性（Ｐ＜０．０１）。结论ＩＣＡＭ１、Ｐ选择素、ＩＬ８、ＥＣＰ参与介导了哮喘气道炎症的粘附过程     

哮喘患者外周血单个核细胞白细胞介素—4和介素—5的基因表达

为进一步了解激素抵抗型哮喘的发病与细胞免疫功能紊乱的关系，应用地高辛标记ｃＤＮＡ探针、抗地高辛抗体－碱性磷酸酶检测系统行细胞涂片原位杂交，测定了１５例激素抵抗（ＳＲ）型和１５例激素敏感（ＳＳ）型哮喘患者外周血单个核细胞（ＰＢＭＣｓ）中白细胞介素（ＩＬ）－４和ＩＬ－５基因的ｍＲＮＡ表达。结果显示：（１）单独培养的ＳＲ型和ＳＳ型哮喘患者的外周血单个核细胞中ＩＬ－４ｍＲＮＡ和ＩＬ－５ｍＲＮＡ阳性细胞率差异无显著性（Ｐ＞０．０５）。（２）与氟美松（１０－７ｍｏｌ／Ｌ）共同培养４８小时后，ＳＳ型哮喘患者的外周血单个核细胞中ＩＬ－４ｍＲＮＡ和ＩＬ－５ｍＲＮＡ阳性细胞率较单独培养时明显减少（Ｐ＜０．０１）；而在ＳＲ型患者中则无明显改变（Ｐ＞０．０５）。提示氟美松不能有效地抑制ＳＲ型哮喘患者的外周血单个核细胞中ＩＬ－４和ＩＬ－５基因的ｍＲＮＡ表达，这可能是发生激素抵抗的机制之一。     

哮喘豚鼠肺组织粒细胞—巨噬细胞集落刺激因子mRNA表达…

目的 探讨粒细胞－巨噬细胞集落刺激因子在哮喘嗜酸细胞炎症中的作用。方法 建立哮喘豚鼠实验模型，用雷公藤处理，观察肺组织Ｅｏｓ密度，斑点分子杂交检测支气管肺组织ＧＭ－ＣＳＦ ｍＲＮＡ含量。结果 哮喘组肺组织Ｅｏｓ浸润密度增加，ＧＭ－ＣＳＦ ｍＲＮＡ表达水平增高，与对照组相比差异有显著性（Ｐ〈０．０５），雷公藤处理后ｍＲＮＡ表达显著降低，但Ｅｏｓ浸润密度减少不明显。结论 ＧＭ－ＣＳＦ ｍＲＮＡ表达增加     

E-选择素mRNA在哮喘豚鼠支气管组织中的原位表达

Ｅ－选择素ｍＲＮＡ在哮喘豚鼠支气管组织中的原位表达曹国强杨肇亨周向东实验将豚鼠制作出哮喘模型后，用原位杂交技术观察Ｅ－选择素的表达变化，旨从细胞粘附分子的角度探讨哮喘气道嗜酸性粒细胞（ＥＯＳ）浸润的发生机理。２４只豚鼠，雌雄不限，体重３００～５５０ｇ...     

细胞间粘附分子－1在乙型肝炎中的表达及意义

为观察细胞间粘附分子－１（ＩＣＡＭ－１）在乙型肝炎肝组织内的表达状况，探讨ＩＣＡＭ－１在乙型肝炎肝细胞免疫损伤中的作用。采用链菌素亲生物蛋白法（ＬＳＡＢ），以ＩＣＡＭ－１的单克隆抗体，检测１０４例急、慢性乙型肝炎，９例无症状携带者，１０例正常肝组织标本内ＩＣＡＭ－１抗原表达情况。结果发现：ＩＣＡＭ－１在正常肝细胞无表达，肝窦内皮细胞弱表达；ＨＢＶ感染后肝细胞呈不同程度的表达，肝窦内皮表达增强；中、重度慢性肝炎，活动性肝硬化肝细胞ＩＣＡＭ－１表达较急性肝炎，轻度慢性肝炎显著增强（Ｐ＜０．０１）；急性肝炎较轻度慢性肝炎显著增强（Ｐ＜０．０１）；轻度慢性肝炎较无症状携带者，正常肝组织显著增强（Ｐ＜０．０１）。表明ＩＣＡＭ－１在乙型肝炎肝细胞内表达与肝细胞损伤有关，对ＨＢＶ的清除可能起着重要作用，ＩＣＡＭ－１在肝窦内皮的表达有助于淋巴细胞向肝组织内浸润。     

皮肤白细胞碎裂型血管炎患者皮损组织中粘附分子的表达及与病理变化的关系

应用免疫组化技术检测１８例白型血管炎（ＬＣＶ）患者皮损组织中粘附分子的表达,观察其与皮损组织病理变化的关系,并与１５例对照者进行比较。结果显示：ＬＣＶ患者血管内皮细胞的细胞间粘分子－１（ＩＣＡＭ－１）表达明显上调,血管内皮细胞粘附分子－１（ＶＣＡＭ－１）表达仅见于后期皮损,内皮白细胞粘附分子－１（ＥＬＡＭ－１）与皮损持续时间呈负相关（ｒ＝－０．９６２３,Ｐ〈０．０５）、与中性粒细胞浸润吴正相关（ｒ     

内皮素在低氧性肺动脉高压大鼠肺内表达和水平变化的研究

为了确定在慢性缺氧过程中大鼠肺内内皮素（ＥＴ）－１ｍＲＮＡ是否表达及变化，采取体外转录并用地高辛－ＵＴＰ标记ＥＴ－１和ｃ－ｆｏｓＲＮＡ探针进行组织原位杂交，用放射免疫法测定血浆和肺组织匀浆ＥＴ－１浓度。结果显示，缺氧３周大鼠肺内ＥＴ－１ｍＲＮＡ表达增加，主要阳性反应部位位于血管内皮和支气管上皮细胞。ｃ－ｆｏｓｍＲＮＡ主要位于血管平滑肌和支气管平滑肌细胞。缺氧３周大鼠静脉血浆ＥＴ－１浓度为３．８５±１．５２ｎｇ／Ｌ（与对照组比较，Ｐ＜０．０５），动脉血浆为４．７２±１．６６ｎｇ／Ｌ（Ｐ＜０．０５），肺组织匀浆中为２．０５±０．６８ｎｇ／ｇ（Ｐ＜０．０５）。认为慢性缺氧可引起大鼠肺动脉压力升高，同时伴有肺血管的重建以及右心室的肥厚；随着肺动脉压的改变，其血浆和肺组织匀浆中内皮素水平显著升高。肺内ＥＴ－１的表达和产生主要位于肺血管内皮细胞以及支气管上皮细胞     

气道上皮细胞阴离子交换蛋白2在豚鼠支气管哮喘模型中表达的实验研究

目的 研究支气管哮喘（简称哮喘）豚鼠气道上皮细胞阴离子交换蛋白2( anion exchanger2,AE2)的表达及意义。方法取20只豚鼠随机分为2组,每组用卵清白蛋白(OVA)致敏,然后分别用生理盐水（对照组）和OVA(哮喘组)雾化吸入激发豚鼠哮喘。在连续雾化3d后,刮取气道上皮以免疫印迹( western blo...     

哮喘豚鼠肺组织中嗜酸细胞凋亡与白细胞介素5mRNA表达？…

目的 探讨哮喘时嗜酸细胞（ＥＯＳ）凋亡与肺组织白细胞介素５（ＩＬ－５）ｍＲＮＡ表达的关系。方法 将豚鼠随机分为对照组（正常组７只）、哮喘组（８只）、地塞米松组（８只），应用脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记（ＴＵＮＥＬ）技术和原位杂交方法，检测支气管肺泡灌洗液（ＢＡＬＦ）中不同密度ＥＯＳ凋亡百分比和肺组织ＩＬ－５ｍＲＮＡ的表达。结果 （１）正常对照组ＢＡＬＦ中低密度ＥＯＳ、正常密度ＥＯＳ凋是     

气道上皮细胞阴离子交换蛋白2在豚鼠支气管哮喘模型中表达的实验研究

目的研究支气管哮喘（简称哮喘）豚鼠气道上皮细胞阴离子交换蛋白2（anion exchanger2,AE2）的表达及意义。方法取20只豚鼠随机分为2组,每组用卵清白蛋白（OVA）致敏,然后分别用生理盐水（对照组）和OVA（哮喘组）雾化吸入激发豚鼠哮喘。在连续雾化3 d后,刮取气道上皮以免疫印迹（western blotting）和逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法作AE2蛋白及其mRNA表达水平的检测。结果①呼吸频率：激发后对照组与哮喘组比较差异有统计学意义（P〈0.01）;同组内激发前后比较对照组内差异无统计学意义（P〉0.05）,哮喘组内比较差异有统计学意义（P〈0.01）。②血清IgE浓度和血嗜酸粒细胞（EOS）计数：对照组IgE浓度和EOS计数与哮喘组比较,差异有统计学意义（P〈0.01）。③豚鼠肺组织病理形态改变：光学显微镜观察发现：对照组,豚鼠肺组织未见病理形态改变,哮喘组则有明显哮喘病理形态改变。④AE2蛋白及其mRNA的表达：结果表明对照组豚鼠气道上皮有较高的AE2蛋白和mRNA表达量,哮喘组相对对照组表达明显降低,差异有统计学意义（P〈0.01）。结论 AE2蛋白及mRNA在正常豚鼠气道上皮有一定的基础表达。过敏性哮喘模型豚鼠气道上皮细胞表达的AE2蛋白及mRNA表达明显减少。     

孟鲁司特钠对哮喘大鼠肺组织、脾脏、胸腺NF-κB mRNA表达的影响及病理变化的研究

目的观察白三烯受体拮抗剂孟鲁司特钠对哮喘大鼠肺组织、脾脏、胸腺NF-κB mRNA的表达及病理变化的影响。方法建立哮喘大鼠模型后,将动物随机分成三组,正常对照组、哮喘组、孟鲁司特钠组。干预后处死动物,用原位杂交法检测肺组织、脾脏、胸腺淋巴细胞中NF-κB mRNA的表达及光镜观察肺组织、脾脏的病理变化。结果与正常对照组比较,哮喘组大鼠肺组织气道周围炎症明显,肺泡隔增宽。脾脏白髓淋巴细胞区中度增生。孟鲁司特组肺组织气道周围炎症减轻,肺泡隔增宽有所减轻,脾脏白髓淋巴细胞区轻-中度增生。哮喘组大鼠肺组织、脾脏、胸腺淋巴细胞中NF-κB mRNA的表达增加（P〈0.05）。孟鲁司特钠组大鼠肺组织、脾脏、胸腺淋巴细胞中NF-κB mRNA的表达受抑（P〈0.05）。结论孟鲁司特钠在支气管哮喘的发病机制中有一定的抗炎作用。     

雷公藤甲素对支气管哮喘小鼠STAT-1与ICAM-1表达的影响

目的 研究雷公藤甲素对支气管哮喘（简称哮喘）小鼠肺组织中信号转导和转录激活因子-1（STAT-1）与细胞间黏附分子-1（ICAM-1）表达的影响,探讨其治疗哮喘的机制.方法 40只雄性昆明小鼠随机分成4组：正常对照组、哮喘组、地塞米松治疗组及雷公藤甲素治疗组,以卵清蛋白致敏和激发方法建立哮喘小鼠动物模型并给予相应治疗.24 d后处死小鼠,检测BALF中白细胞总数及嗜酸粒细胞（EOS）计数;采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测肺组织中STAT-1、ICAM-1 mRNA表达水平;采用免疫组织化学法检测肺组织中STAT-1、ICAM-1蛋白表达水平.结果 哮喘组STAT-1、ICAM-1 mRNA及蛋白表达明显高于正常对照组（P＜0.01）,雷公藤甲素治疗组及地塞米松组明显低于哮喘组（P＜0.01）.肺组织STAT-1蛋白的表达与BALF中白细胞数、EOS计数及肺组织ICAM-1蛋白表达呈正相关（r分别为0.665,0.735,0.677,P＜0.01）.肺组织ICAM-1蛋白表达与白细胞总数、EOS计数呈正相关（r分别为0.792,0.776,P＜0.01）.结论 雷公藤甲素抑制哮喘气道炎症的机制可能与其抑制STAT-1与ICAM-1的表达活性有关.     

支气管哮喘急性发作期激活转录因子-3的表达及作用

目的探讨支气管哮喘（简称哮喘）急性发作期激活转录因子-3（ATF3）的表达及作用。方法 30只健康雄性豚鼠,按随机数字表法分为对照组（A组）、哮喘组（B组）及地塞米松治疗组（C组）,每组10只。卵清蛋白致敏法复制哮喘模型。收集支气管肺泡灌洗液（BALF）并进行细胞总数及分类计数;观察豚鼠肺组织病理学改变;检测豚鼠肺组织及BALF中ROS含量;采用免疫组织化学和Westernblot法测定豚鼠肺组织中ATF3蛋白的表达和量的变化;原位杂交、RT-PCR法检测ATF3 mRNA的表达变化;免疫细胞化学检测豚鼠BALF细胞中ATF3蛋白的表达。结果①哮喘组豚鼠BALF中炎细胞总数、嗜酸粒细胞百分比（EOS%）显著高于对照组（P〈0.01）,哮喘组豚鼠肺组织可见大量炎症细胞浸润及明显气道重塑改变,且哮喘组ROS含量显著升高,而地塞米松治疗组上述变化明显减低（P值均〈0.01）;②ATF3蛋白及mRNA表达哮喘组明显高于对照组（P值均〈0.01）;③ATF3蛋白及mRNA的表达变化与ROS含量及BALF炎细胞总数、EOS%变化均呈正相关。结论哮喘急性发作期豚鼠肺组织及BALF细胞中ATF3的表达升高,可能与气道炎症反应和氧化应激有关;给予地塞米松治疗后ATF3表达下降,可能在哮喘的防治中起重要作用。     

哮喘豚鼠气道重塑与气道反应性的图像分析

目的研究哮喘豚鼠气道重塑的机制及气道反应性的变化。方法实验分二组对照组（20只）和哮喘组（20只）,取双肺与不同刺激因素作用后作组织切片、HE染色,通过图像分析仪测定支气管内周长、管壁厚度、外周长,并计算平滑肌收缩百分比（PMS）。结果（1）哮喘组支气管壁厚度（WA/Pi）为（10.0±2.0）μm     

An experimental study on the regulation of the expression of Th2 cytokines by nuclear factor-kappaB and protein kinase C in asthma]

OBJECTIVE: To explore the role of nuclear factor-kappaB (NF-kappaB) in the signal pathway of protein kinase C (PKC) regulating the expression of Th2 cytokines, interleukin 4 (IL-4) and IL-5, by T lymphocyte in asthma. METHODS: 16 guinea pigs were randomly divided into 2 groups, normal control and asthmatic group. 16 asthmatic patients and 16 normal control persons also participated in the study. T lymphocytes were isolated and purified from blood of each guinea pig and each person and divided into 3 groups: cells of 1st group were control group, cells of 2nd group were stimulated with phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA), cells of 3rd group were stimulated with PMA and pyrrolidine dithiocarbamate (PDTC). The expression of NF-kappaB were observed by immunocytochemical staining, the expression of IL-4 and IL-5 mRNA were observed by in situ hybridization staining, IL-4 and IL-5 protein in supernatants were measured by ELISA. RESULTS: The percentage of cells of active NF-kappaB, the percentage of positive cells of IL-4 and IL-5 mRNA, IL-4 and IL-5 protein in supernatants of asthmatic T lymphocyte stimulated with PMA were significantly higher than those of asthmatic T lymphocyte stimulated without PMA (q = 8.44 approximately 38.66, P < 0.01) and those of normal control T lymphocyte stimulated with PMA (q = 8.11 approximately 40.12, P < 0.01), and were significant reduced by PDTC (q = 6.50 approximately 35.63, P < 0.01). There were good positive correlation between the percentage of cells of active NF-kappaB and the percentage of positive cells of IL-4 and IL-5 mRNA (r = 0.60 approximately 0.82, P < 0.001, respectively), and also good positive correlation between the percentage of active NF-kappaB and IL-4 and IL-5 protein in supernatants (r = 0.42 approximately 0.70, P < 0.005 or < 0.001, respectively). CONCLUSIONS: The active PKC of asthmatic T lymphocyte increasing the expression of IL-4 and IL-5 may be mediated by activating NF-kappaB, the activation of PKC-NF-kappaB signal pathway of T lymphocyte NF-kappab may play an important role in the pathogenesis of asthma.