丹参酮对肥大心肌细胞中电生理特征和钙调神经磷酸酶活性的作用

目的观察丹参酮对肥大心肌细胞中电生理特征和钙调神经磷酸酶(CaN)活性的作用。方法通过膜片钳、胞内钙测定和分子生物学技术,观察丹参酮对"一肾一夹"手术导致的肥厚心肌细胞膜上动作电位时间、L型钙通道电流(ICa,L)、胞内钙离子浓度以及CaN活性的影响。结果丹参酮可以显著缩短肥厚心肌细胞中存在的动作电位时间延长(P<0.001)、降低膜电容和ICa,L峰值幅度(P均<0.001),但不影响ICa,L密度,并能够显著减少胞内钙离子浓度。丹参酮能显著抑制肥厚心肌中CaN的表达(P<0.05)。结论丹参酮可以有效地减少肥大细胞中的Ca2+浓度并抑制L-型钙通道,并使肥大心肌细胞中的CaN活性降低,从而改善肥大心肌细胞中存在的电生理异常和减轻心肌肥厚的发生。     

丹参酮ⅡA对心肌梗死模型大鼠心肌钙调蛋白及心功能的影响

目的：观察丹参酮ⅡA对心肌梗死模型大鼠心肌钙调蛋白(cardiac muscle, CaM)及钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(calcium/calmodulin-dependentproteinkinase-Ⅱ, CaMKⅡ)mRNA 表达和心功能的影响。方法100只大鼠按随机数字表法分为假手术组、模型组、丹参酮ⅡA组。模型组、丹参酮ⅡA组采用结扎左侧冠状动脉前降支45 min再灌注45 min,并反复3次阻断与再灌注的方法建立大鼠心肌梗死模型。丹参酮ⅡA组尾静脉注射丹参酮ⅡA磺酸钠注射液10 mg/kg,假手术组、模型组尾静脉注射等体积生理盐水。连续给药7 d后断头处死,取心脏用Langendorff离体心脏灌流器灌流离体心脏,测定各组大鼠给药前后离体心脏左室最大上升/下降速率(±LVdp/dtmax)、心肌收缩张力、心率等心功能指标;TTC染色观察心肌梗死面积;检测缺血区心肌组织CaM及CaMKII mRNA表达。结果与模型组比较,丹参酮ⅡA 组 CaM mRNA[(1.29±0.19)比(2.31±0.21)]及 CaMKⅡ mRNA[(1.10±0.07)比(2.13±0.18)]表达下调(P＜0.05),心肌梗死范围[(25.12±0.43)%比(35.15±0.64)%]缩小(P＜0.05),心肌收缩张力[(2.03±0.14)g比(1.06±0.12)g]及±LVdp/dtmax[(4701.2±135.3)mmHg/s比(3214.7±110.2)mmHg/s;(2518.7±65.4)mmHg/s比(1960.3±62.5)mmHg/s]增高(P＜0.05)。结论丹参酮ⅡA可下调急性心肌梗死模型大鼠心肌细胞CaM、CaMKⅡ mRNA表达,对心肌缺血有保护作用。     

从CaN信号通路探讨川芎嗪对AngⅡ诱导的大鼠VSMCs增殖的抑制作用及机制

目的从钙调神经磷酸酶(CaN)信号通路探讨川芎嗪对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖的抑制作用及机制。方法以AngⅡ诱导体外培养的大鼠主动脉平滑肌细胞建立细胞增殖模型,实验分为空白组、AngⅡ组、AngⅡ 川芎嗪(低、中、高)剂量组。采用定磷法分别测定各组细胞CaM和CaN活性,MTT法检测细胞增殖活度的变化,免疫组化定量技术观察细胞内c-myc、PCNA的表达水平。结果AngⅡ组VSMCs细胞增殖活度(吸光度值)、胞内CaM、CaN活性以及c-myc、PCNA表达量(光密度值)显著高于空白组(P<0.01);同时加入不同剂量(低、中、高剂量)川芎嗪温育,各组CaM、CaN活性以及c-myc、PCNA表达水平均显著低于AngⅡ组(P<0.05或P<0.01)。结论川芎嗪可通过降低细胞内CaM、CaN活性,下调胞内c-myc、PCNA表达水平,从而显著抑制AngⅡ诱导的VSMCs增殖。     

丹参酮ⅡA抑制大鼠血管平滑肌细胞增殖及其机制研究

目的：观察丹参酮ⅡA（tanshinone ⅡA，TA）对10％胎牛血清诱导的大鼠血管平滑肌细胞（RVSMC）增殖的抑制作用，并探讨其可能的作用机制。方法：体外培养大鼠主动脉平滑肌细胞A7r5细胞株，以终浓度为10％的胎牛血清（FBS）作为刺激因素，用细胞计数法、噻唑蓝（MTY）比色法和5-溴脱氧尿嘧啶（BrdU）掺入法测定TA对细胞增殖的影响，用流式细胞术（FCM）分析细胞周期分布特征，用Western blot实验测定细胞外信号调节激酶1／2（ERK1／2）磷酸化活性，用RT—PCR测定c—fos的表达水平。结果：细胞计数、MTY比色法和BrdU掺入实验表明丹参酮Ⅱ。能抑制10％FBS所诱导的VSMC增殖，作用强度呈剂量依赖性；细胞周期分析显示，TA处理组G0／G1期细胞百分比高于10％FBS组，而S期比例低于10％FBS组，表明TA可阻止10％FBS所诱导的细胞周期由G0／G1期向S期推进；Western blot结果显示与10％FBS组相比，TA处理组ERK1／2磷酸化活性降低；RT—PCR结果显示TA处理组c—fos表达水平降低。结论：丹参酮可抑制10％FBS诱导的体外培养大鼠动脉平滑肌细胞增殖，此作用可能与其阻止细胞周期由G0／G1期向S期推进，抑制MAPK信号转导通路激活，进而下调c-fos表达有关。     

丹参酮ⅡA通过CaN信号通路对异丙肾上腺素诱导的心肌细胞肥大的保护作用

目的:利用异丙肾上腺素(Iso)诱导的肥大心肌细胞模型,从钙调神经磷酸酶(Calcineurin,Ca N)信号通路角度探讨丹参酮IIA(Tan IIA)对乳鼠心肌细胞的保护作用及其可能机制。方法:利用原代培养新生乳鼠心肌细胞,以10 mol/L异丙肾上腺素诱导心肌细胞肥大,观察环孢菌素-A(Cs A)、丹参酮IIA 0.1,1,10 mol/L剂量组对肥大心肌细胞的影响。采用考马斯亮蓝试剂盒检测心肌细胞中总蛋白含量;罗丹明-鬼笔环肽染色观察细胞面积;Till阳离子测定系统及Fura-2/AM荧光探针观察细胞内[Ca2+]i瞬间变化;Wertern blot检测心肌细胞Ca N和活化T细胞核因子(nuclear factor 3 of activated T cells,NAFT3)表达。结果:与正常对照组细胞比较,异丙肾上腺素模型组总蛋白含量、细胞体积、细胞面积、钙离子瞬间变化幅度、钙离子频率、Ca N和NAFT3表达分别增加97.90%、56.27%、49.75%、60.60%、56.88%、209.52%和200.00%。丹参酮IIA有效抑制异丙肾上腺素诱导的心肌细胞肥大,丹参酮IIA 10 mol/L组可抑制异丙肾上腺素诱导的心肌肥大,使模型组细胞体积减小49.25%、面积减小32.14%、总蛋白含量降低35.61%、钙离子瞬间变化幅度和频率分别降低34.71%和36.68%,Ca N和NAFT3的表达分别降低50.77%和39.13%。结论:丹参酮IIA可抑制异丙肾上腺素诱导的心肌细胞肥大,其机制可能与抑制Ca2+-Ca N-NFAT3信号通路有关。     

川芎嗪抗血管紧张素Ⅱ诱导的离体培养血管平滑肌细胞增殖的实验研究

目的观察川芎嗪对血管紧张素Ⅱ(angiotensinII,AngⅡ)诱导的血管平滑肌细胞(vascu lar smooth musc le cells,VSMCs)中钙调神经磷酸酶(Calc ineunrin,CaN)活性及原癌基因c-fos表达水平的影响。方法建立AngⅡ诱导VSMCs增殖模型,应用免疫细胞化学法观察不同浓度的川芎嗪在不同时段内对血管平滑肌细胞表达c-fos的影晌;并用酶促反应定磷法测定CaN活性变化。结果与正常对照组比较,AngⅡ组能够明显刺激VSMCs增殖,细胞增殖活度明显升高(P<0.01):AngⅡ作用后VSMCs中CaN活性和c-fos表达量(A值)较正常对照组均显著增高(P<0.01)。同时加川芎嗪作用后,各组CaN活性和c fos表达水平均显著下降(P<0.01)。结论AngⅡ能显著刺激血管平滑肌细胞增殖,川芎嗪能使血管平滑肌细胞中原癌基因c-fos的表达减弱及增殖受抑。     

丹参酮对大鼠血管平滑肌细胞增殖及pp-ERK1/2表达的影响

 目的　探讨丹参的脂溶性有效成分(总丹参酮)对血管平滑肌细胞增殖的影响及其可能的细胞内信号传导机制。方法　分离大鼠胸主动脉,贴壁法培养平滑肌细胞,无血清培养基培养静止后,以5%FBS刺激VSMC增殖,分别加入不同浓度的总丹参酮,以MTT及细胞总蛋白测定法观察药物对VSMC增殖的影响;用Westernblot方法检测pp-Erk1/2蛋白表达量。结果　丹参酮对VSMC增殖具有抑制作用,并具有浓度依赖性;2,10,50μg·mL^-1丹参酮可浓度依赖性抑制pp-Erk1/2表达,抑制率分别为(17.7±3.6)%,(26.2±4.1)%,(72. 7±3.8)%,与对照组相比P<0.05。结论　丹参的脂溶性有效成分丹参酮可能通过抑制ERK途径抑制血管平滑肌细胞增殖。     

赤芍对家兔血管内膜平滑肌细胞增生的影响

目的观察赤芍对兔颈动脉平滑肌细胞增殖细胞核抗原 (PCNA)表达作用,以了解赤芍对动脉损伤后内膜增生的影响.方法新西兰大白兔随机分为对照组、高脂饲料组、赤芍高剂量组及赤芍低剂量组,高脂喂养 8周后行兔颈总动脉球囊损伤术, 10周取材,用免疫组化法检测平滑肌细胞中 PCNA表达.结果各组内皮增生成分主要为平滑肌细胞.与高脂饲料组比较,赤芍高剂量组内膜、中膜、外膜 PCNA阳性着色及内膜增生面积均显著减少.结论赤芍有抑制平滑肌细胞增殖的作用.     

丹参不同组分对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响

[目的]探讨丹参的水溶性有效成分 (总丹酚酸 )和脂溶性有效成分 (总丹参酮)对大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响 ,以寻找药物的作用靶点。[方法]分离大鼠主动脉中层平滑肌 ,贴壁法培养平滑肌细胞 ,无血清培养基培养静止后 ,以5 %胎牛血清(FCS)刺激VSMC增殖 ,分别加入不同浓度的总丹参酮或丹酚酸 ,以四甲基偶氮唑蓝 (MTT)法观察药物对VSMC增殖的影响 ;以Bradford法检测细胞总蛋白 ;流式细胞仪检测药物对细胞周期的影响。[结果]与对照组相比丹参酮使VSMC增殖活性下降(P<0.05) ,细胞总蛋白合成降低 (P<0.05) ,并呈浓度依赖性,而丹酚酸组与对照组相比无显著性差异 ;此外流式细胞术检测结果显示丹参酮使VSMCG0/G1 期比例升高 ,S期比例下降 ,而丹酚酸组与对照组相比仍无显著性差异。[结论]丹参的脂溶性有效成分总丹参酮具有抑制血管平滑肌细胞增殖的作用 ,而丹酚酸对VSMC不具有以上作用     

丹参酮ⅡA对血管平滑肌细胞内质网应激相关基因表达的影响

目的:研究丹参酮ⅡA对同型半胱氨酸(HCY)诱导增殖血管平滑肌细胞(VSMC)内质网应激(ERS)相关基因免疫球蛋白重链结合蛋白(Bip)表达的影响,探讨丹参酮ⅡA抗动脉粥样硬化的机制.方法:建立HCY诱导的兔VSMC增殖模型,与不同浓度的丹参酮ⅡA共同培养,Annexin/PI双染法、原位缺口末端标记(TUNEL)法检测细胞凋亡率,观察凋亡细胞形态;实时荧光定量PCR检测Bip基因表达.结果:丹参酮ⅡA可显著促进兔VSMC凋亡,细胞凋亡率与HCY组相比差异显著(P＜0.01),且存在剂量依赖性;丹参酮ⅡA组Bip mRNA表达水平显著升高,与HCY组相比差异显著(P＜0.05,P＜0.01).结论:丹参酮ⅡA上调Bip基因表达,放大ERS信号,诱导兔VSMC凋亡,可能是其抗动脉粥样硬化的机制之一.     

参麦注射液对大鼠心肌肥大模型血管紧张素Ⅱ介导的钙调神经磷酸酶通路的干预效应

目的 探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)介导的钙调神经磷酸酶(CaN)信号通路在大鼠心肌肥大中的作用,及参麦注射液逆转心肌肥厚可能的分子机制.方法 腹主动脉缩窄法建立压力超负荷大鼠心肌肥大模型.实验动物按随机原则分为模型组、假手术组、参麦注射液治疗组、缬沙坦治疗组.放免法测定血清和心肌组织中的AngⅡ的含量,测定左室质量指数、心系数,应用免疫印迹(Western blot)法检测CaN蛋白表达.结果 与假手术组比较,其它各组左室质量指数和心系数明显升高;缬沙坦组、参麦注射液组左室质量指数和心系数明显低于模型组.模型组、缬沙坦组、参麦注射液组血浆AngⅡ含量均高于假手术组;模型组、参麦注射液组心肌AngⅡ含量均高于假手术组;与模型组比较,缬沙坦组血浆AngⅡ含量显著升高,心肌AngⅡ含量降低.模型组CaN蛋白表达量显著高于假手术组,参麦注射液组、缬沙坦组CaN蛋白表达量低于模型组.结论 证实过度激活的肾素血管紧张素(RAS)系统是心肌肥大发生发展的重要机制之一,AngⅡ介导的CaN信号通路在压力超负荷大鼠心肌肥大中起重要作用;参麦注射液对CaN信号通路致心肌肥大有抑制作用.     

丹参酮ⅡA对血管紧张素Ⅱ诱导的大鼠心肌间质成纤维细胞α-平滑肌动蛋白表达的影响

目的研究丹参酮ⅡA(TanⅡA)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的大鼠心肌间质成纤维细胞α-平滑肌动蛋白(SMA)表达的影响。方法体外培养大鼠心肌间质成纤维细胞,分为正常对照组、AngⅡ刺激组和TanⅡA干预组。免疫荧光法和Western免疫印迹法检测各组转分化肌成纤维细胞中标志蛋白α-平滑肌动蛋白(α-SMA)的表达。结果免疫荧光检测显示,细胞培养24 h后对照组胞浆中仅有少量α-SMA表达,而经AngⅡ作用后,α-SMA表达量明显增多。AngⅡ干预心肌间质成纤维细胞不同时间点,Western免疫印迹法显示α-SMA表达量逐渐增加。AngⅡ的这种诱导心肌间质成纤维细胞发生肌成纤维细胞转分化作用可被含TanⅡA的培养液所抑制,且呈剂量和时间依赖性。结论 TanⅡA能有效地抑制大鼠心肌间质成纤维细胞的转分化,此作用可能与其能下调AngⅡ诱导的α-SMA过表达有关。     

大蒜素对血管平滑肌细胞增殖细胞核抗原表达的影响

目的：观察大蒜素对培养的兔主动脉平滑肌细胞（ＳＭＣ）增殖细胞核抗原（ＰＣ－ＮＡ）表达的影响。方法：用免疫组化ＬＳＡＢ法检测ＳＭＣ的ＰＣＮＡ表达，同时测定培养液中超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）、脂质过氧化物（ＬＰＯ）、前列环素（ＰＧＩ２）及环磷酸腺苷（ｃＡＭＰ）的含量。结果：大蒜素能增加ＳＯＤ活性，降低ＬＰＯ，升高ＰＧＩ２和ｃＡＭＰ水平，抑制ＳＭＣ的ＰＣＮＡ表达（Ｐ〈０．０５－０．０１）。结论：大蒜素有抑     

淡豆豉异黄酮对Ang Ⅱ诱导大鼠血管平滑肌细胞周期的影响

目的:观察淡豆豉异黄酮对血管紧张素Ⅱ(Angiotensin Ⅱ,Ang Ⅱ)诱导大鼠血管平滑肌细胞(Vascular Smooth MuscleCell,VSMC)细胞周期的影响,探讨其抑制增殖的可能机制。方法:原代培养大鼠VSMC,建立AngⅡ诱导VSMC增殖模型,MTT法观察淡豆豉异黄酮对Ang Ⅱ诱导VSMC增殖的干预作用,流式细胞仪观察淡豆豉异黄酮干预细胞后细胞周期的变化。结果:淡豆豉异黄酮50μg/L预孵育12、24 h,100μg/L预孵育1、4、12、24 h,200μg/L预孵育1、4、24 h,500μg/L预孵育4 h可显著抑制AngⅡ诱导的VSMC增殖;50、100、200μg/L作用24 h抑制增殖作用最为明显,并可显著增加VSMC G0/G1期比例,降低S期比例。结论:淡豆豉异黄酮抑制Ang Ⅱ诱导的VSMC增殖作用机制可能与阻止细胞由G0/G1期进入S期,进行VSMC细胞周期的调控有关。     

丹参酮ⅡA对大鼠缺氧及正常心肌细胞内钙、膜电位和线粒体膜电位的影响

目的：探讨丹参酮ⅡA（Tan）抗心律失常的分子机理。方法：胰蛋白酶法分离培养心肌细胞，用不同荧光染料分别标记细胞，在激光共聚显微镜上测定Tan血清对心肌细胞内钙[Ca^2 ]i，膜电位（MP）和线粒体膜电位（MMP）的变化。结果：缺氧使心肌细胞[Ca^2 ]i升高，而使MP和MMP降低，Tan血清降低缺氧心肌细胞[Ca^2 ]i，升高了缺氧引起的MP和MMP降低，使缺氧状态下MP和MMP保持在基线水平。结论：Tan降低了缺氧引起的[Ca^2 ]i升高，升高了缺氧引起的MP和MMP降低，保护心肌细胞，防治心律失常。     

丹参酮ⅡA 促进氧糖剥夺再灌注神经干细胞的增殖作用

目的观察丹参酮ⅡA 对原代培养的小鼠神经干细胞（NSCs）在氧糖剥夺再灌注（OGD/R）损伤条件下增殖 作用的影响。方法对原代小鼠NSCs 进行培养、鉴定;采用CCK-8 法测定细胞活力;通过检测神经球细胞 直径来观察NSCs 的增殖情况;对OGD/R 损伤条件进行筛选,建立OGD/R NSCs 模型。结果与溶剂对照组相 比,0.03、0.1、0.3、1、3、10、30 μmol·L-1 丹参酮ⅡA 干预48 h后,NSCs 的细胞活力显著提高（P＜0.01）; 0.3、1、3 μmol·L-1 丹参酮ⅡA 干预48 h 后,NSCs 神经球细胞透光性良好,神经球细胞直径明显增大（P＜ 0.05,P＜0.01）。NSCs 糖氧剥夺4 h 再灌注后的细胞活力介于40%~60%之间,故选择OGD/R（4 h/20 h）作为 NSCs 的OGD/R 损伤条件。与溶剂对照组比较,模型组NSCs 神经球细胞直径明显缩小、细胞活力明显下降 （P＜0.01）;与模型组比较,3 μmol·L-1 丹参酮ⅡA 干预48 h后,NSCs 神经球细胞直径明显增大、细胞活力明 显升高（P＜0.01）。结论丹参酮ⅡA 可促进正常条件及OGD/R 损伤条件下NSCs 的增殖及其细胞活力,丹参 酮ⅡA 对脑缺血损伤的保护作用机制值得进一步探讨。     

丹参酮ⅡA磺酸钠对大鼠肥厚心肌血管紧张素受体STAT3的影响

目的 观察丹参酮ⅡA磺酸钠盐对腹主动脉缩窄致高血压大鼠肥厚心肌血管紧张素Ⅱ受体 (AT1R) 基因、蛋白表达以及对 STAT3 蛋白表达的影响,探讨其延缓心肌肥厚的机制。方法 取 24 只9周龄 SD 大鼠,环扎其腹主动脉,制成高血压大鼠模型,随机分为模型组(n=8)、丹参酮ⅡA 磺酸钠组 (n=8)、缬沙坦组 (n=8);另取8只行假手术,作为假手术组。给药8周后测量大鼠的尾动脉收缩压 (SBP) 及左室质量指数 (LVMI),应用 HE 染色、VG 染色,检测心肌纤维直径 (MFD),采用 RT-PCR、Western blotting 方法分别检测 AT1 R 的 mRNA 和蛋白的表达水平以及 STAT3 蛋白的表达水平。结果：与假手术组比较,模型组的 SBP、LVMI、MFD 均显著增加;AT1R mRNA 和蛋白的表达水平明显增高,STAT3 的表达也明显升高 (P＜0.05)。与模型组相比,丹参酮ⅡA磺酸钠组大鼠 LVMI、MFD 均显著降低;AT1R mRNA、蛋白表达和 STAT3 的表达均受到一定程度的抑制,但作用不如缬沙坦明显 (P ＜0.05)。结论 丹参酮ⅡA磺酸钠有延缓心肌肥厚的作用,可能与一定程度上抑制 AT1R 以及 STAT3 的表达有关。     

天麻钩藤饮对血管紧张素Ⅱ诱导血管平滑肌细胞A7r5增殖的影响

目的观察天麻钩藤饮对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导血管平滑肌细胞(A7r5)增殖的影响及机制。方法 AngII刺激A7r5细胞建立细胞增殖模型。采用CCK-8法检测细胞增殖,观察天麻钩藤饮(0.25,0.5,1,2 mg.mL-1)、亚硝基-精氨酸甲酯(100μmo1.L-1)对AngII诱导血管平滑肌细胞增殖的影响。硝酸还原酶及化学比色法测定细胞上清液中一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)水平。结果天麻钩藤饮在0.25～2 mg.mL-1呈剂量及时间依赖性抑制A7r5增殖;天麻钩藤饮能升高NO、NOS、iNOS水平。结论天麻钩藤饮对AngII诱导的A7r5细胞增殖有抑制作用,升高NO和NOS水平可能是其发挥作用的机制。     

姜黄素对血管紧张素Ⅱ诱导新生大鼠心肌细胞肥大的保护作用

目的研究姜黄素(Cur)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导新生大鼠心肌细胞肥大的保护作用并探讨其可能作用机制。方法 AngⅡ刺激新生大鼠心肌细胞,制备心肌细胞肥大模型,用Cur2.5×10-5mol/L进行预防性治疗。采用相差显微镜测量细胞大小及测定心肌细胞总蛋白含量作为心肌细胞肥大的指标;fura-3/AM孵育心肌细胞,利用荧光显微镜及Felix软件分析测定细胞内钙离子浓度((Ca2+)i);Western blot检测钙调神经磷酸酶(CaN)蛋白表达。结果 AngⅡ组细胞直径增大,总蛋白含量增加,与对照组相比有显著性差异(P均<0.01);Cur 2.5×10-5mol/L能够降低心肌细胞肥大程度(P<0.01)、(Ca2+)i(P<0.01)及CaN蛋白表达(P<0.05)。结论 Cur对AngⅡ诱导心肌细胞肥大有明显的保护作用,其机制可能与抑制Ca2+/CaN信号转导通路有关。