稳定高效表达p21~(WAF1/CIP1)的HCT/8-WAF1细胞株的建立

目的 :建立高效、稳定表达 p2 1 WAF1/ CIP1大肠癌细胞株 HCT/8- WAF1。方法 :应用阳离子脂质体分别将带有目的基因 WAF1的 pc DNA3及空白 pc DNA3质粒转染大肠癌细胞株 HCT/8,经G41 8进行阳性筛选 ,将筛选的阳性细胞连续传代培养 ,应用免疫荧光技术监测 p2 1 WAF1/ CIP1的表达。结果 :经 G41 8筛选后 ,空白对照细胞全部死亡 ,转染目的基因及空质粒组的细胞存活 ,可连续传代培养 30代以上 ,并选择 HCT/8作对照 ;免疫荧光技术监测 p2 1 WAF1/ CIP1表达结果显示转染目的基因的 HCT/8细胞 p2 1 WAF1/ CIP1表达阳性细胞率 ( 89.96% )显著高于转染空质粒组 ( 8.0 2 % )和空白对照组 ( 3.39% ) ( F=1 6 60 8.99,P<0 .0 0 1 ) ;各代间差异无显著性 ( F=2 .1 71 ,P>0 .0 5 )。结论 :HCT/8- WAF1是一株高效、稳定表达 p2 1 WAF1/ CIP1的大肠癌细胞株     

EGFR、TGF-β1、P21WAF1／CIP1在胃癌中的表达及意义

目的:探讨表皮生长因子受体 (EGFR)、转化生长因子 -β1(TGF-β1)、p2 1WAF 1 /CIP1 与胃腺癌发生、发展、转移的关系。方法:采用免疫组织化学方法对 6 4例胃腺癌组织和 15例正常胃组织 EGFR、TGF-β1、p2 1WAF 1 /CIP1 蛋白的表达进行检测。 结果 :EGFR、TGF-β1、p2 1WAF1 /CIP1 在正常胃组织及胃腺癌组织中阳性表达差异均有统计学意义(P均 <0 .0 5 ) ,三者在伴有或不伴有淋巴结转移的胃腺癌组织中阳性表达差异均有统计学意义 (P均 <0 .0 5 )。结论 :EGFR、TGF- β1表达、p2 1WAF1 /CIP1缺失与胃癌的发生、淋巴结转移密切相关 ;EGFR、TGF- β1、p2 1W AF 1 /CIP1表达的检测对胃腺癌的早期诊断及判断预后有重要意义。     

胃癌组织中p53蛋白、p21~(WAF1/CIP1/SDI1)表达的意义

采用 S- P免疫组化技术 ,检测 40例原发胃癌组织中 p53与 p2 1 WAF1/ CIP1/ SDI1蛋白的表达 ,应用 PCR- SSCP技术对 40例胃癌组织中 p2 1 WAF1/ CIP1/ SDI1基因状态进行分析 ,对照1 0例正常胃组织标本 ,与胃癌临床生物学指标进行相关性分析。结果 :p53、p2 1蛋白异常表达仅在胃癌组织中出现 ;p53与 p2 1蛋白异常表达与胃癌患者肿瘤发生部位、浸润深度、淋巴结转移、远处转移及组织分化程度等指标无统计学相关性 (P>0 .0 5) ;胃癌组织中 ,p53蛋白与 p2 1蛋白表达间关系密切 (P<0 .0 5) ;40例胃癌组织中 ,p2 1基因 PCR扩增片段进行单链构象多态性分析 (SSCP) ,未发现异常条带。提示 :p53与 p2 1蛋白异常表达与胃癌发生有关 ,但与胃癌临床生物学行为之间未发现相关性 ;胃癌中 ,p2 1蛋白表达以依赖 p53途径为主 ;40例胃癌标本 PCR- SSCP检测 ,未发现 p2 1基因突变 ;基因状态的完整 ,也为利用可激活 p2 1基因的药物治疗 p53蛋白失活的胃癌提供了重要的理论依据。     

cyclinE和p21WAF1/CIP1蛋白在甲状腺组织癌变过程中的表达及意义

目的:探讨 cyclin E及 p2 1WAF 1 /CIP1蛋白在甲状腺组织癌变过程中的表达及与甲状腺癌发生、发展的关系。 方法 :利用免疫组织化学方法分析 4 7例甲状腺癌、11例甲状腺腺瘤、10例结节性甲状腺肿及 10例正常甲状腺组织中 cyclin E及 p2 1W AF 1 /CIP1 蛋白的表达。 结果:cyclin E和 p2 1WAF 1 /CIP1 在甲状腺癌中的表达显著高于甲状腺腺瘤、结节性甲状腺肿及正常甲状腺组织 (P <0 .0 1,P<0 .0 5 ) ,cyclin E与 p2 1WAF 1 /CIP1蛋白阳性表达无相关性 (P>0 .0 5 )。 结论:检测 cyclin E和 p2 1WAF 1 /CIP1蛋白的表达将有助于甲状腺癌的早期诊断及预后的判断。     

CyclinE和p21/WAF1/CIP1在结直肠癌组织中的表达及意义

目的 :研究 Cyclin E、p2 1 /WAF1 /CIP1蛋白在结直肠癌组织中的表达水平及其与生物学行为和预后的关系。方法 :用免疫组化方法检测 5 5例结直肠癌组织中 P2 1 /WAF1 /CIP1、Cyclin E蛋白的表达。结果 :1 0例癌旁结直肠组织中 ,Cyclin E表达均为阴性 ,5 5例结直肠组织中 ,3 4例 Cyclin E表达阳性 ;1 0例癌旁结直肠组织中 ,p2 1表达均为阳性 ,5 5例结直肠癌组织中 2 5例 p2 1表达阳性 ;Cyclin E蛋白表达多见于浸润深、分化差、淋巴结转移、临床分期晚的结直肠癌组织中 ;p2 1 /WAF1 /CIP1蛋白表达多见于分化好、浸润浅、未发生淋巴结转移、临床分期较早的结直肠癌组织中 ;Cyclin E蛋白表达组的 5年生存率低于阴性组 ;p2 1 /WAF1 /CIP1蛋白表达组的 5年生存率高于阴性组。结论 :Cyclin E、p2 1 /WAF1 /CIP1可作为反映结直肠癌恶性生物学行为及预后的指标。     

原发性肝细胞癌中p33ING1b与p53基因间协同功能的研究

目的　探讨 p33ING1b与 p5 3基因间的协同功能对肝癌细胞生长、阻滞细胞周期、诱导肿瘤细胞凋亡及对 p5 3下游基因p2 1WAF1/CIP1表达的影响。方法　采用脂质体方法将 p33ING1b与wtp5 3基因分别转染入HepG2、PLC/PRF/ 5和Hep3B 3株内源性p5 3基因表达状态各不相同的肝癌细胞株 ,同时设转染反义 p33ING1b及反义wtp5 3质粒实验组和转染空载体对照组 ,转染 4 8h后检测各实验组细胞凋亡率及分析细胞周期变化 ,用Western印迹杂交分析各实验组肝癌细胞中 p33ING1b与 p5 3蛋白表达的变化 ,通过分析受 p2 1WAF1/CIP1启动子调控的荧光素酶报道基因表达的强弱 ,观察各实验组中p5 3下游基因 p2 1WAF1/CIP1的活性情况。采用 6 %乙醇为诱导剂作用于各实验组后 ,再次观察上述各指标的变化。结果　在表达内源性wtp5 3基因的HepG2细胞中 ,转染入 p33ING1b基因后 ,与对照组相比 ,细胞凋亡率增强 (2 2 5 3% ) ,细胞周期中停滞于G0 /G1期细胞的比例增多 (6 7 4 5 % ) ,下游基因p2 1WAF1/CIP1启动子的活性 (13 0 8)增强 (P <0 0 1)。对于表达突变型p5 3蛋白的PLC/PRF/ 5细胞 ,联合共转染 p33ING1b与wtp5 3实验组的G0 /G1期细胞比例 (78 16 % )及 p2 1WAF1/CIP1启动子活性(12 99)比单转染 p33ING1b或wtp5 3基因实验组高 (P     

p21/WAF1和p53在乳腺癌中的表达及其与预后的关系

目的　研究p2 1/WAF1和p5 3在乳腺癌中的表达及其与预后的关系。方法　运用免疫组化LSAB法检测15 2例乳腺癌组织p2 1/WAF1和p5 3蛋白的表达水平。结果　在 15 2例乳腺癌中 ,p2 1/WAF1蛋白阳性 61例 ,占40 1% ,p5 3蛋白阳性 69例 ,占 45 0 % ,两者表达无关联性 (χ2 =3 114 ,P >0 0 5 )。p2 1/WAF1高表达组生存期低于低表达、无表达组 (χ2 =6 92 ,P <0 0 1) ,p5 3阳性组生存期低于阴性组 ( χ2 =8 41,P <0 0 1) ,p2 1/WAF1( +) /p5 3 ( -) ,p2 1/WAF1( +) /p5 3 ( +) ,p2 1/WAF1( -) /p5 3 ( -)和p2 1/WAF1( -) /p5 3 ( +)组生存期依次降低 (χ2 =12 3 ,P <0 0 1)。结论　①p2 1/WAF1在乳腺癌中可能存在正负双向调控 ;②p2 1/WAF1/P5 3免疫表型的检测有助于预测化疗疗效及预后。     

胃肠道类癌中MMP-2和p21WAF1/CIP1蛋白表达的意义

目的 探讨MMP-2和p21WAF1/CIP1蛋白阳性表达与胃肠道类癌组织分化、浸润和转移的关系.方法 采用免疫组化S-P法对36例胃肠道类癌组织MMP-2和p21WAF1/CIP1蛋白的表达进行检测.结果 36例类癌组织中,MMP-2蛋白在低分化类癌组高表达,MMP-2和p21WAF1/CIP1蛋白在高分化类癌组高表达(P＜0.05),随着肿瘤的浸润和淋巴结转移MMP-2阳性表达率显著增加(P＜0.01),MMP-2和p21WAF1/CIP1阳性表达降低(P＜0.05).结论 MMP-2和MMP-2和p21WAF1/CIP1在类癌组织中的表达与组织分化、浸润和淋巴结转移关系密切,可用于临床对病人进行预后判断.     

CyclinD1、P16和P21WAF1/CIP1在胃癌中的表达意义

目的 :探讨癌基因CyclinD1,抑癌基因p16、p2 1与胃癌发生的生物学行为的关系。方法 :采用免疫组化LSAB法测定 43例胃癌CyclinD1、P16和P2 1WAF1/CIP1蛋白的表达。结果 :CyclinD1在胃癌组织中的阳性率为 5 5 .81% ,CyclinD1与胃癌分化程度呈正相关 (P <0 .0 5 ) ;P16和P2 1在胃癌组织中阳性率分别为 48.84%和 46.5 1% ,P16和P2 1与胃癌分化程度均呈负相关 (P <0 .0 5 ) ;CyclinD1与P16、P2 1分别呈负相关 ;P16与P2 1无相关性 ;CyclinD1、P16和P2 1与胃癌的预后相关。结论 :CyclinD1的高表达 ,P16和P2 1的低表达在胃癌的发生发展中起重要作用 ,并可能成为研究胃癌发生、发展的有用指标。     

喉鳞癌中P21~(WAF1/CIP1)、C-erbB-2的表达及其临床意义

目的:研究喉鳞癌组织中P21WAF1/CIP1、C-erbB-2的表达,探讨它们在喉鳞癌的增殖、侵袭、转移中的作用。方法:选取60例喉鳞癌作为研究对象,15例声带息肉组织作为对照,所有标本均切片作HE染色。用链霉素亲生物素-过氧化酶法(S-P法)研究肿瘤及声带息肉组织中P21WAF1/CIP1和C-erbB-2蛋白的表达,显微镜下计数阳性细胞,并分析阳性细胞百分率。结果:(1)P21WAF1/CIP1在声带息肉组织中低表达,在喉癌组织中高表达,二者阳性率差异有显著性(P<0．05);P21WAF1/CIP1在喉癌组织中的表达与肿瘤组织分级(P<0．05)及临床分期(P<0．05)有关,与年龄、性别、肿瘤部位及有无淋巴结转移无显著相关性;(2)C-erbB-2在声带息肉组织中低表达,在喉鳞癌中高表达,两者差异有显著性(P<0．05);C-erbB-2在喉癌组织中的表达与各临床病理因素无显著相关;(3)经Spearman等级相关分析,P21WAF1/CIP1、C-erbB-2在喉鳞癌中表达呈正相关(P<0．05)。结论:P21WAF1/CIP1可以作为一种独立的预后预测因子;C-erbB-2在某种程度上反应了肿瘤的生长特性,但不能判断喉癌预后;在喉鳞癌中P21WAF1/CIP1和C-erbB-2间存在正调控机制。     

P21WAF1／CIP1在大肠癌中的表达

目的探讨Ｐ２１ＷＡＦ１／ＣＩＰＩ与ｐ５３基因大肠癌中的表达意义及其关系，方法应用原位杂交及免疫组化技术检测大肠癌中的抑癌基因Ｐ２１ＷＡＦ１／ＣＩＰ１ｍＲＮＡ及ｐ５３蛋白的表达，统计学采用卡方检验，结果发现大肠癌组织及癌旁组织中Ｐ２１ＷＡＦ１／ＣＩＰＩ表达阳性率分别为８４．１３％（５３／６３）及６１．９０％（３９／６３）两者是差别显著（Ｐ〈０．０５），Ｐ２１ＷＡＦ１／ＣＩＰ１表达程度与癌组织的分化程     

大肠癌P21WAF1/CIP1和P53蛋白表达及其与预后的关系

目的 探讨细胞周期调控因子P212^WSAF1／CIP1和P53蛋白表达在大肠癌发生发展中的作用及其临床意义。方法 采用免疫组化染色对113例大肠癌P21和P53的蛋白表达进行了检测。结果 高分化腺癌P21蛋白阳性表达率显著高于低分化腺癌（P＜0．05）,大肠癌中P53、P21^WAF1／CIPI蛋白表达进行了检测。结果 高分化腺癌P21蛋白阳性表达显著高于低分化腺癌（P＜0．05）,大肠癌中P53、P21^WAF1/CIP1蛋白表达有显著负相关（r＝－0．585,P＜0．01）。P53阳性表达患者的3、5年生存率显著低于阴性表达者（P＜0．05）,而P21阳性表达者高于阴性表达者,且P21^ /P53^-大肠癌死亡率较P21^-/P53^ 患者显著降低。结论 P21蛋白过度表达可能与大肠癌发化有关,p53基因突变,介导P21蛋白产生减少,阻止细胞周期的作用减弱,从而加速大肠癌的发展。P21与P53蛋白联合检测可能有助于其预后判断。     

p21WAF1/CIP1、细胞周期素D1、p53在结肠癌的表达

目的探讨p21WAF1/CIP1、细胞周期素D1(cyclin D1)及p53在结肠癌的表达及三个基因产物间的相关性.方法应用原位杂交技术及免疫组织化学技术检测p21WAF1/CIP1、cyclin D1的mRNA及p53蛋白在结肠癌中的表达.结果 p21WAF1/CIP1 mRNA在癌组织的表达率为84.13%,明显高于癌旁组织61.90%(P<0.05).cyclin D1 mRNA在癌组织表达率为63.49%,明显高于癌旁组织44.44%(P<0.05).p53蛋白在结肠癌的阳性表达率为38.09%,p53过表达组p21WAF1/CIP1 mRNA表达较p53阴性组为低,二者存在显著差异(P<0.05),p53过表达组cyclin D1 mRNA表达较p53阴性组为高,差异具有显著性(P<0.05).p21WAF1/CIP1 mRNA与cyclin D1 mRNA表达存在相关性(P<0.05).结论 p21WAF1/CIP1、cyclin D1、p53的异常表达及它们之间可能存在的相互作用,可能在结肠癌的癌变过程中发挥重要作用.     

RUNX3、p21~（CIP1/WAF1）、cyclinD1在肝细胞性肝癌中的表达及其临床意义

目的探讨RUNX3、p21CIP1/WAF1、cyclinD1蛋白在肝细胞性肝癌（HCC）和癌旁组织中的表达,以及三者在HCC组织中表达的相关性,三者的表达与临床病理因素之间的关系。方法采用回顾性分析方法,收集43例HCC新鲜标本及其癌旁组织,用免疫印迹（Western Blot）技术检测癌及癌旁组织中RUNX3、p21CIP1/WAF1、cyclinD1蛋白的表达。结果RUNX3、p21CIP1/WAF1蛋白在HCC组织中的相对表达值低于癌旁组织,两组比较差异有统计学意义（P〈0.05） cyclinD1蛋白在肝癌组织中的相对表达值高于癌旁组织,差异有统计学意义（P〈0.001） RUNX3、p21CIP1/WAF1c、yclinD1蛋白相对表达值均与TNM分期及组织分化程度有关（均P〈0.05） HCC组织中RUNX3蛋白与p21CIP1/WAF1蛋白表达呈正相关（r=0.696,P〈0.05）,RUNX3蛋白与cyclinD1蛋白表达呈负相关性（r=-0.435,P〈0.05）。结论RUNX3蛋白可能通过影响p21CIP1/WAF1和cyclinD1蛋白的表达影响肝细胞性肝癌的发生发展 联合检测RUNX3、p21CIP1/WAF1和cyclinD1蛋白的表达可能对HCC的诊断及预后判断有一定参考价值。     

宫颈癌中p53、p21WAF1/CIP1、MDM2的表达及其与HPV16感染的关系

目的：探讨子宫颈鳞状细胞癌中p53、p21^WAF1／CIP1、MDM2的表达及其与HPV16感染的关系。方法：采用免疫组化Envision二步法检测p53、p21^WAF1／CIP1及MDM2在43例子宫颈鳞状细胞癌、20例子宫颈上皮内瘤变（CIN）和15例正常对照组中的表达，高危HPV16DNA的检测应用原位杂交法。结果：HPV16、p53、p21^WAF1／CIP1和MDM2在子宫颈癌中的阳性表达率分别为46．51％、34．88％、30．23％、25．58％；在CIN中的阳性表达率分别为45％、5％、60％、15％；HPV16在对照组中的阳性表达率为6．67％，p53、p21^WAF1／CIP1和MDM2未见阳性表达。HPV16、p53、p21^WAF1／CIP1在3种不同组织中表达差异有统计学意义（P〈0．05），MDM2在3种不同组织中表达差异无统计学意义（P〉0．05）。p53、p21^WAF1／CIP1和MDM2在子宫颈癌HPV阳性组和阴性组间表达差异无统计学意义（P〉0．05），p21^WAF1／CIP1蛋白表达与p53有关（P〈0．05），MDM2蛋白表达与p53无关（P〉0．05）。结论：在HPV16感染的子宫颈癌中，p53的转录功能仍然存在。     

MDM2、p53和p21WAF1/CIP1蛋白在胃癌中的表达及意义

目的：探讨MDM2在胃癌中的表达情况以及MDM2、p53和p21^WAF1/CIP1在胃癌发生发展中的作用。方法：应用免疫组化SABC法检测94例胃癌MDM2、p53和p21^WAF1/CIP1蛋白的表达情况，并对三者之间的关系及其与胃癌临床病理特征的关系进行统计分析。结果：94例胃癌中未发现有MDM2的表达。p53及p21^WAF1/CIP1的阳性表达率分别为56.38%（53／94）和41.49%（39／94），阳性表达位于癌细胞核。在癌旁不典型增生灶中，p53有3例，p21^WAF1/CIP1有5例阳生，癌旁正常黏膜均为阴性。p53和p21^WAF1/CIP1两者的阳性表达率之间无显著相关性。在性别、年龄、部位、浸润深度、局产淋巴结转移及组织学类型等临床病理指标中，p53或p21^WAF1/CIP1的阳性表达率的差异均无统计学意义。结论：MDM2在胃癌的发展中不起重要作用，而在胃癌发展中起主要作用的是抑癌基因p53的突变。p21^WAF1/CIP、在胃癌中可能是以不依赖p53的途径增高，说明癌细胞增生已不受G1期检查点的控制。     

p21WAF1/CIP1 gene DNA sequencing and its expression in human osteosarcoma

Background Mutation and expression change of p21^WAF1/CIP1 may play a role in the growth of osteosarcoma. This study was to investigate the expression of the p21^WAF1/CIP1 gene in human osteosarcoma, p21^WAF1/CIP1 gene DNA sequence change and their relationships with the phenotype and clinical prognosis.Methods p21^WAF1/CIP1 gene in 10 normal people and the tumours of 45 osteosarcoma patients were examined using polymerase chain reaction-single strand conformation polymorphism (PCR-SSCP) with silver staining. The PCR product with an abnormal strand was sequenced directly. The p21^WAF1/CIP1 gene mRNA and P21 protein of 45 cases of osteosarcoma were investigated by using in situ hybridization and immunohistochemistrv, respectively.Results The occurrence of P21 protein in osteosarcoma was 17. 78% (8/45), and p21^WAF1/CIP1 mRNA expression in osteosarcoma was 42.22% (19/45). The p21^WAF1/CIP1 gene DNA sequencing of amplified production showed that in p21^WAF1/CIP1 gene exon 3 of 36 cases of human osteosarcoma,there were 17 cases (47.22%) with C→T at position 609; 10 normal blood samples‘ DNA sequence analysis yielded 8 cases (80.00%) with C→T at the same position.Conclusions Along with the increase of malignancy, the expression of p21^WAF1/CIP1 mRNA and P21 protein in osteosarcoma tends to decrease. It is uncommon for the p21^WAF1/CIP1 gene mutation to occur in human osteosarcoma. As a result, the possible existence of tumour subtypes of p21^WAF1/CIP1 gnemutation should be investigated. Our research leads to the location of p21^WAF1/CIP1 gene polymorphism of Chinese osteosarcoma patients, which can provide a basis for further research.     

P21 WAF1/Cip1 Gene Expression in Primary Human Hepatocellular Carcinoma and its Relationship with P53 Gene Mutation

Ｐ２１ＷＡＦ１／Ｃｉｐ１ｐｒｏｔｅｉｎ（ｐ２１）ｉｓｔｈｅｐｒｏｄｕｃｔｏｆｗａｆ１ｇｅｎｅ,ａｌｓｏｋｎｏｗｎａｓｃｉｐ１,ｓｄｉ１［１,２］．Ｐ２１ＷＡＦ１／Ｃｉｐ１ｉｓａｕｎｉｖｅｒｓａｌｉｎｈｉｂｉｔｏｒｏｆｃｙｃｌｉｎ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔｋ...     

大肠癌发生中突变型P53与hMLH1表达的关系

[目的]探讨在大肠癌发生过程中错配修复基因hMLH1对p53基因突变的影响。[方法]采用免疫组化SP法检测37例正常大肠黏膜、32例大肠腺瘤与165例大肠癌中P53及hMLHI蛋白的表达。[结果]（D正常大肠黏膜组、大肠腺瘤组与大肠癌组P53蛋白的阳性表达率分别为0％、21．9％与48．5％,三组间差异有显著性意义（P〈0．05）;hMLH1蛋白的阳性表达率分别为100％、87．5％与87．3％,其中正常大肠黏膜组与大肠癌组的差异有显著性意义（P〈0．05）。②高中分化、低分化与黏液腺癌组中P53蛋白的阳性表达率分别为53．5％、17．6％与16．7％,其中前者与后两者的差异有显著性意义（P〈0．05）;hMLH1蛋白的阳性表达率分别为90．8％、70．6％与50．0％,前者明显高于后两者（P〈0．05）。③在大肠腺瘤轻中度不典型增生和重度不典型增生组中P53蛋白的阳性表达率分别为18．5％与40．0％（P〉0．05）;hMLH1蛋白的阳性表达率分别为92．6％与60．0％（P〈0．05）。④大肠腺瘤中随hMLH1蛋白的表达减少P53蛋白表达增多,但无明显相关性（P〉0．05）;大肠癌中两者的表达呈明显负相关（P〈0．05）。[结论]大肠癌发生过程中hMLH1基因的功能异常可能是p53基因突变的原因之一．