五味子甲素对大鼠肝微粒体CYP3A活性的影响

目的：通过体外药物代谢实验探讨五味子甲素对CYP3A活性的影响。方法：以大鼠肝微粒体为载体,选取咪达唑仑（MDZ）作为药物“探针”,建立高效液相色谱（HPLC）检测方法,体外给药测定五味子甲素对MDZ的IC50值以及相关酶动力学参数。结果：孵育体系内源性物质不干扰测定,方法快捷、稳定、灵敏度高。在肝微粒中,五味子甲素对MDZ的IC50浓度为6．26μmol／mL,相关酶动力学参数：Km=15．77μmol／L,K1=5．50μmol／mL。结论：五味子甲素对大鼠肝微粒体CYP3A活性具有抑制作用,其抑制作用为混合型,即：非竞争与反竞争抑制。     

五味子甲素对大鼠肝微粒体CYP3A活性的影响

目的：通过体外药物代谢实验探讨五味子甲素对CYP3A活性的影响。方法：以大鼠肝微粒体为载体,选取咪达唑仑（MDZ）作为药物“探针”,建立高效液相色谱（HPLC）检测方法,体外给药测定五味子甲素对MDZ的IC50值以及相关酶动力学参数。结果：孵育体系内源性物质不干扰测定,方法快捷、稳定、灵敏度高。在肝微粒中,五味子甲素对MDZ的IC50浓度为6．26μmol／mL,相关酶动力学参数：Km=15．77μmol／L,Ki=5．50μmol／mL。结论：五味子甲素对大鼠肝微粒体CYP3A活性具有抑制作用,其抑制作用为混合型,即：非竞争与反竞争抑制。     

五味子甲素对CYP3A活性的影响及其体内外相关性研究

目的:通过"探针"法探讨五味子甲素体内、外对大鼠肝微粒体CYP3A活性的影响及其相关性。方法:选取咪达唑仑作为CYP3A探针,用高效液相色谱法测定五味子甲素体外孵育给药和体内灌胃给药后大鼠肝微粒体酶CYP3A活性,通过药动学参数K_m确定其体内、外作用的相关性。结果:体外试验结果表明,五味子甲素非竞争性抑制咪达唑仑的代谢,其K_i为5.5μmol·L^-1,体内试验亦证实了五味子甲素能显著抑制肝微粒体CYP3A酶活性（P<0.01）并呈剂量依赖性,其体内给药的K_i值为30.67 mg·kg^-1。体内外K_m值十分接近。结论:五味子甲素在体内和体外均可非竞争性抑制大鼠肝微粒体酶CYP3A活性,其对CYP3A影响的体内、体外结果具有良好的相关性。     

刺五加注射液对大鼠肝CYP3A活性的影响

目的:考察刺五加注射液对大鼠肝细胞色素P4503A活性的影响。方法:制备大鼠空白肝微粒体,加入刺五加注射液孵育,HPLC法测定咪达唑仑浓度,计算咪达唑仑代谢速率评价刺五加注射液体外对大鼠CYP3A酶的影响。大鼠随机分为对照组和实验组,分别尾静脉注射生理盐水和刺五加注射液,连续7 d,制备肝微粒体,进行孵育反应,评价刺五加注射液体内对大鼠CYP3A的影响。结果:刺五加注射液体外对大鼠CYP3A酶具有抑制作用,测得刺五加注射液抑制CYP3A酶的IC50为5.00 mL/100mL。大鼠连续7 d静脉注射刺五加注射液,使探针药物咪达唑仑的代谢减少了21.11%。结论:刺五加注射液对大鼠CYP3A的活性有抑制作用。     

大鼠肝细胞色素P4503A活性测定及其孵育条件的优化

目的:测定大鼠肝微粒体中细胞色素P4503A(CYP3A)的活性,并对其体外孵育条件进行优化。方法:采用1’-羟基咪哒唑仑的生成量表示肝中CYP3A的活性,高效液相色谱法测定肝微粒体中1’-羟基咪哒唑仑的浓度,用单因素试验法对其体外孵育条件进行优化,用线性Lineweaver-Burk双倒数作图法研究肝CYP3A酶促动力学。结果:1’-羟基咪哒唑仑在18.20~1 820.00μg.L-1范围内线性关系良好;体外优化的孵育条件为5μmol.L-1咪哒唑仑、0.102mg肝微粒体、孵育15min;肝CYP3A酶促动力学参数Km为1.67μmol.L-1,Vmax为95.15pmol.min-1.mg-1。结论:HPLC法操作简便、灵敏、快速,适用于肝微粒体中1’-羟基咪哒唑仑的浓度测定,肝CYP3A孵育条件及其酶促动力学研究为研究经CYP3A代谢的药物相互作用及其他物质对CYP3A酶的影响提供理论依据。     

大鼠肝微粒体法测定3种中药对CYP3A4 亚型的作用

［摘要］目的建立肝微粒体测定法,观察中药制剂对CYP3A4 亚型的作用。方法取大鼠肝脏,制备肝微粒体,分别优化肝微粒体体外温孵系统的反应时间、蛋白浓度及探针药物咪达唑仑的浓度;高效液相色谱 质谱联用（HPLC MS MS）法测定大鼠肝微粒体中咪达唑仑的浓度,计算咪达唑仑的活性;在肝微粒体体外温孵系统中分别加入不同浓度的血脂康胶囊、通心络胶囊、枣仁安神胶囊内容物及对照药物酮康唑,测定其半数抑制浓度（IC50）及抑制常数（Ki）。结果肝微粒体体外温孵系统的反应条件为0.4 g&;#8226;L 1大鼠肝微粒体,4 μmol&;#8226;L 1咪达唑仑溶液,37 ℃温育5 min。酮康唑、血脂康胶囊、通心络胶囊的IC50分别为（3.4±0.2）,（25.1±0.3）,（56.2±0.3） mg&;#8226;L 1,枣仁安神胶囊的IC50﹥150 mg&;#8226;L 1;酮康唑、血脂康胶囊、通心络胶囊的Ki分别为（1.7±0.1）,（25.0±0.2）,（50.0±0.3） mg&;#8226;L 1。结论建立了中药制剂对CYP3A4亚型作用的大鼠肝微粒体研究模型。血脂康胶囊和通心络胶囊对大鼠CYP3A4亚型有较弱的抑制作用。     

绿豆衣提取物对大鼠肝微粒体CYP3A4活性的影响

摘 要 目的：研究绿豆衣提取物（MBSC）对大鼠肝微粒体中细胞色素P450 （CYP）3A4酶活性的影响。方法: 采用高效液相色谱法,以咪达唑仑为CYP3A4探针药物,建立检测咪达唑仑代谢产物1 羟基咪达唑仑在大鼠肝微粒体孵育体系中浓度的方法,对体外肝微粒体孵育体系中孵育时间、肝微粒体量、孵育时间进行优化,以优化后的条件先后评价绿豆衣提取物对CYP3A4活性的影响及其潜在作用机制。结果: MBSC初提物可显著抑制CYP3A4酶活性,其活性仅为对照组的38.14%（P<0.05）,且IC50值为489.7 μg·ml^-1,抑制机制为竞争 非竞争性抑制。结论: 绿豆衣提取物在体外对大鼠CYP3A4酶的活性具有抑制作用,尚需进一步应用体内模型评价其对CYP3A4活性的影响。     

建立用大鼠肝微粒体快速考察药物体外CYP3A1活性抑制的方法

目的研究酮康唑对大鼠肝微粒体细胞色素P450同工酶3A1（CYP3A1）活性的作用,建立一种用大鼠肝微粒体快速考察药物体外CYP3A1活性抑制的方法。方法采集大鼠肝微粒体,随机分为对照组和药物处理组。酮康唑药物处理组分别加入不同浓度的酮康唑,对照组只加入培养液,混匀后放入37℃培养箱中孵育15 min,然后加入CYP 3A1底物睾酮,继续孵育10 min,最后加入内标物氢化可的松。用HPLC法测定睾酮经大鼠肝微粒体温孵后生成6-β羟基睾酮的量,代表CYP3A1的活性。结果各个处理组与对照组的比较差异均有显著性差异（P〈0.05）;提示在一定浓度范围内,大鼠同工酶CYP3A1的相对活性百分比随着酮康唑浓度的增加而逐渐减低,各处理组与对照组比较差异均有显著性意义（P〈0.5）。半数抑制浓度（IC50）值为3.25μg/ml。结论酮康唑对大鼠肝微粒体细胞色素P450同工酶3A1的活性有强抑制作用,建立的通过大鼠肝微粒体快速考察药物体外CYP3A1探针抑制的方法重复性和稳定性均良好,为评价新药对大鼠肝微粒体CYP3A1的活性的体外作用提供可靠的检测手段。     

建立用大鼠肝微粒体快速考察药物体外CYP3A1活性抑制的方法

目的 研究酮康唑对大鼠肝微粒体细胞色素P450同工酶3A1( CYP3A1)活性的作用,建立一种用大鼠肝微粒体快速考察药物体外CYP3A1活性抑制的方法.方法 采集大鼠肝微粒体,随机分为对照组和药物处理组.酮康唑药物处理组分别加入不同浓度的酮康唑,对照组只加入培养液,混匀后放入37℃培养箱中孵育15 min,然后加入CYP 3A1底物睾酮,继续孵育10 min,最后加入内标物氢化可的松.用HPLC法测定睾酮经大鼠肝微粒体温孵后生成6-β羟基睾酮的量,代表CYP3A1的活性.结果 各个处理组与对照组的比较差异均有显著性差异(P＜0.05);提示在一定浓度范围内,大鼠同工酶CYP3A1的相对活性百分比随着酮康唑浓度的增加而逐渐减低,各处理组与对照组比较差异均有显著性意义(P＜0.5).半数抑制浓度( IC50)值为3.25 μg/ml.结论 酮康唑对大鼠肝微粒体细胞色素P450同工酶3A1的活性有强抑制作用,建立的通过大鼠肝微粒体快速考察药物体外CYP3A1探针抑制的方法重复性和稳定性均良好,为评价新药对大鼠肝微粒体CYP3A1的活性的体外作用提供可靠的检测手段.     

中药止咳橘红颗粒对CYP3A4和CYP1A2抑制作用的研究

目的：在人体内研究止咳橘红对CYP3A4和CYP1A2的抑制作用，以预测止咳橘红与常用临床药物的相互作用。方法：咪哒唑仑和咖啡因分别作为CYP3A4和A2的探针药物，采取交叉设计，10名受试者在服用3d止咳橘红的前后均服用7.5mg咪哒唑仑和100mg咖啡因，服药后采血测定两者及代谢产物的代谢动力学参数，探讨针药物及代谢物的浓度用HPLC-MS法测定，Cmax,tmax从药时曲线中直接读出，AUC用梯形法计算，Ke用3P87程序进行拟合计算，分析服药前后CYP3A4和CYP1A2被抑制的情况，结果 服用止咳橘红后，咪哒唑仑的代谢受到了轻微的抑制，它的血药浓度，达峰时间和药时曲线下面积都有了升高趋势，但无显著差异。而咖啡因的代谢未受到影响。结论 止咳橘红对CYP3A4的活性有较弱的抑制作用，能够导致CYP3A4底物咪哒唑仑代谢的轻微抑制，而对CYP1A2的活性没有影响。止咳橘红长期使用或超过治疗剂量使用时是否会对CYP3A4产生显著性影响。尚需进一步的研究证明。     

Cocktail 探针药物法评价辣椒素对大鼠CYP450亚型的影响

目的：采用cocktail 探针药物法研究辣椒素在体外对大鼠肝微粒体CYP 450四种亚型的影响。方法：分为试验组和对照组,试验组采用大鼠肝微粒体孵育体系、探针药物和系列浓度的辣椒素（对照组仅加入缓冲液）共同孵育20 min,反应终止后用HPLC方法检测代谢产物的生成量以代表酶的活性。采用Graphpad prism 5.0计算辣椒素对各亚型的IC50值。将辣椒素与大鼠肝微粒体分别预孵育0,5,10,15,20,30 min,计算不同预孵育时间下各亚型的相对活性百分比。结果：辣椒素对大鼠肝微粒体CYP1A2、CYP2C11、CYP2E1和CYP3A2的IC50值分别为36.21,17.19,51.64,18.86μmol·L-1。预孵育没有增强辣椒素对CYP450的抑制作用。结论：辣椒素在体外对大鼠肝微粒CYP1A2、CYP2C11、CYP2E1和CYP3A2具有抑制作用,且未呈现出预孵育时间依赖性。     

补骨脂素和异补骨脂素对体外细胞色素P450酶活性的抑制和诱导作用

目的探讨补骨脂素(PSO)和异补骨脂素(IPSO)对细胞色素P450(CYP)活性的抑制和诱导作用。方法将人肝微粒体或鼠肝微粒体与PSO或IPSO以及CYP特异性探针底物共孵育30 min,分别以非那西丁O-脱乙基、甲苯磺丁脲4-羟基化、美芬妥因-4-羟基化、右美沙芬O-脱甲基化和咪达唑仑1'-羟基化为同工酶CYP1A2,CYP2C9,CYP2C19,CYP2D6(大鼠2D2)和CYP3A4(大鼠3A1/2)代谢活性的标志,用HPLC-MS/MS法检测相应代谢产物的生成量并计算相应的IC50值,评价PSO和IPSO对5种CYP同工酶的潜在抑制作用。将PSO和IPSO或阳性诱导剂与"三明治"培养大鼠肝原代细胞共孵育72 h后,再加入CYP探针底物孵育1 h,检测相应代谢产物的生成量,与阳性诱导剂组比较,评价二者对CYP1A和CYP3A的诱导作用。结果 PSO和IPSO对人肝微粒体和鼠肝微粒体的CYP1A2均有较强的抑制作用,在人肝微粒体中的IC50值分别为0.17和0.13μmol·L-1;在鼠肝微粒体中的IC50值分别为0.47和0.36μmol·L-1。二者对人肝微粒体的CYP2D6也有中等强度的抑制作用,IC50值分别为3.59和9.51μmol·L-1。PSO和IPSO 100μmol·L-1可分别将大鼠肝细胞的CYP3A活性提高1.18和0.96倍,有一定的诱导作用。结论 PSO和IPSO能显著抑制CYP1A2酶活性,对CYP3A有一定的诱导作用。     

血塞通注射液对鼠肝CYP3A体外抑制作用研究

目的：研究血塞通注射液对大鼠肝微粒体CYP3A酶活性的体外抑制作用。方法：在大鼠肝微粒体体外孵育体系中加入CYP3A酶的底物睾酮和不同体积的血塞通注射液,用高效液相色谱法测定睾酮的羟化代谢产物6β-羟基睾酮的生成量反映CYP3A酶的活性。酮康唑为阳性对照药。结果：在大鼠肝微粒体体外孵育体系中,血塞通注射液对CYP3A酶的IC50和Ki值分别为血塞通注射液原液的0．87％和0．43％。结论：血塞通注射液在体外对大鼠肝微粒体CYP3A酶活性有抑制作用,符合混合型抑制模型。     

Involvement of cytochrome P450 1A in sanguinarine detoxication

Sanguinarine (SA), a member of the benzo[c]phenanthridine alkaloids, is a potent anti-microbial agent with anti-inflammatory and anti-neoplastic properties. However, toxicity of the alkaloid severely limits its medical applications. Recent report by Williams et al. implicated rat hepatic cytochrome P450 (CYP) 1A2 as a likely modulator of SA toxicity. Indeed, the in vitro toxicity of SA in primary culture of rat hepatocytes and human hepatic cell line HepG2, demonstrated as lactate dehydrogenase leakage and metabolic capability (MTT assay), was diminished following induction of CYP1A by 2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin, 3-methylcholanthrene, and beta-naphtoflavone. Using microsomes containing recombinant CYP1A1 or CYP1A2 we show that SA causes non-competitive inhibition of the former and competitive inhibition of the latter as assessed by ethoxyresorufin de-ethylation (EROD). In human hepatic microsomes SA exhibits competitive inhibition of EROD activity with apparent K(i) of 2 microM, a value identical to that observed for CYP1A2 inhibition in recombinant system. Pre-incubation of SA with human liver microsomes resulted in time-dependent, but not dose-dependent decline in EROD activity suggesting CYP1A2 inhibition is not mechanism based. SA also inhibits activity of NADPH:CYP reductase, an enzyme required for CYP activity, with IC(50) very similar to that observed for EROD inhibition. Tentative mechanism for CYP1A involvement in decreased in vitro SA toxicity is discussed.     

三七总皂苷主要成分对人肝微粒体CYP3A4酶的抑制作用研究

目的：研究三七总皂苷主要成分人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1和三七皂苷R1对人肝微粒体CYP3A4酶的体外抑制作用.方法：采用人肝微粒体体外孵育法,在孵育体系中分别加入不同浓度的人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1和三七皂苷R1与探针底物睾酮共孵育,用LC-MS /MS 法测定代谢产物6β-羟基睾酮的生成量反映CYP3A4酶活性的影响.结果：人参皂苷Rg1在2～1 000 μmol·L-1的测试浓度范围内对CYP3A4未见剂量相关的抑制作用;人参皂苷Rb1在2～200 μmol·L-1的测试浓度范围内对CYP3A4未见剂量相关的抑制作用,在1 000 μmol·L-1的测试浓度下对CYP3A4具有轻微抑制作用;三七皂苷R1在2～1 000 μmol·L-1的测试浓度范围内对CYP3A4的IC50为126 μmol·L-1（＞100 μmol·L-1）.结论：三七总皂苷3个主要有效成分单体对CYP3A4酶的体外抑制作用不同,人参皂苷Rg1无抑制作用,人参皂苷Rb1高浓度下有轻微抑制作用,三七皂苷R1有弱抑制作用,三七总皂苷制剂与CYP3A4酶代谢相关的药物之间产生相互作用的可能性低.     

CYP2B6 mediates the in vitro hydroxylation of bupropion: potential drug interactions with other antidepressants.

The in vitro biotransformation of bupropion to hydroxybupropion was studied in human liver microsomes and microsomes containing heterologously expressed human cytochromes P450 (CYP). The mean (+/-S.E.) K(m) in four human liver microsomes was 89 (+/-14) microM. In microsomes containing cDNA-expressed CYPs, hydroxybupropion formation was mediated only by CYP2B6 at 50 microM bupropion (K(m) 85 microM). A CYP2B6 inhibitory antibody produced more than 95% inhibition of bupropion hydroxylation in four human livers. Bupropion hydroxylation activity at 250 microM was highly correlated with S-mephenytoin N-demethylation activity (yielding nirvanol), another CYP2B6-mediated reaction, in a panel of 32 human livers (r = 0.94). The CYP2B6 content of 12 human livers highly correlated with bupropion hydroxylation activity (r = 0.96). Thus bupropion hydroxylation is mediated almost exclusively by CYP2B6 and can serve as an index reaction reflecting activity of this isoform. IC(50) values for inhibition of a CYP2D6 index reaction (dextromethorphan O-demethylation) by bupropion and hydroxybupropion were 58 and 74 microM, respectively. This suggests a low inhibitory potency versus CYP2D6, the clinical importance of which is not established. Since bupropion is frequently coadministered with other antidepressants, IC(50) values (microM) for inhibition of bupropion hydroxylation were determined as follows: paroxetine (1.6), fluvoxamine (6.1), sertraline (3.2), desmethylsertraline (19.9), fluoxetine (59.5), norfluoxetine (4.2), and nefazodone (25.4). Bupropion hydroxylation was only weakly inhibited by venlafaxine, O-desmethylvenlafaxine, citalopram, and desmethylcitalopram. The inhibition of bupropion hydroxylation in vitro by a number of newer antidepressants suggests the potential for clinical drug interactions.     

中药有效成分对细胞色素P450酶的抑制活性评价

目的评价10个中药有效成分对人肝微粒体5种CYP同工酶(CYP1A2、2C9、2C19、2D6和3A4)的抑制活性,为临床合理用药提供参考。方法在混合人肝微粒体孵育体系中,分别以非那西丁O-脱乙基、甲苯磺丁脲4-羟基化、奥美拉唑5-羟基化、右美沙芬O-脱甲基化和咪达唑仑1'-羟基化反应为5种同工酶代谢活性的标志,用阳性抑制剂对试验体系进行验证。应用LC-MS检测受试物对探针底物代谢产物生成量的影响,得到抑制率并计算IC50。结果柚皮素是CYP2C19的强抑制剂和1A2的中等抑制剂(IC50为0.43和4.79μmol.L-1)。异鼠李素是CYP1A2、2C9和2C19的中等抑制剂,IC50分别为5.36、1.40和3.28μmol.L-1。大黄酸对CYP1A2和3A4的IC50分别为8.32和2.50μmol.L-1,为中等抑制剂。喜树碱是CYP2C9和2C19的中等抑制剂(IC50为2.01和2.48μmol.L-1)。金雀花碱、小檗碱和齐墩果酸抑制CYP2C9、2D6和2C19的IC50分别为8.13、4.69和3.56μmol.L-1,为中等抑制剂。结论柚皮素、异鼠李素、金雀花碱、盐酸小檗碱、喜树碱、大黄酸和齐墩果酸对CYP同工酶有不同程度的抑制作用,在临床应用时应注意可能的药-药相互作用。     

刺五加注射液对大鼠肝微粒体四种CYP450亚型酶活性的影响

目的:研究刺五加注射液在大鼠体外肝微粒体中对CYP2C9、CYP2D6、CYP2E1和CYP3A4活性的影响,为临床合理联合用药提供参考。方法:在大鼠体外肝微粒体中分别加入四种亚型酶的探针药物甲苯磺丁脲(TB)、右美沙芬(DM)、氯唑沙宗(CLZ)、睾酮(TS)和低、中、高剂量的刺五加注射液,温孵后用HPLC法测定各空白对照组和不同剂量刺五加注射液给药组中各探针药物代谢产物的浓度并比较代谢率的差异,以评价刺五加注射液对各亚型酶活性的影响;中剂量组活性显著降低的亚型酶进一步考察抑制作用的强弱(即IC50和Ki值)。结果:与空白对照组比较,刺五加注射液低、中、高剂量给药组对CYP3A4活性的影响均有统计学意义(P<0.01),抑制率分别为10.22%、19.00%、30.29%,其IC50和Ki值分别为3.96%和2.74%(V/V);低、中、高剂量给药组对CYP2D6活性的影响均无统计学差异(P>0.05);低剂量给药组对CYP2C9、CYP2E1活性的影响无统计学差异(P>0.05),中、高剂量给药组对两个亚型的抑制作用有统计学差异(P<0.05),但中剂量给药组抑制率均小于8.50%,高剂量给药组抑制率均小于12.00%。结论:刺五加注射液对大鼠体外肝微粒体CYP3A4有抑制作用,且符合混合型抑制模型;对CYP2C9、CYP2E1抑制作用较弱;对CYP2D6活性无影响。     

Synthesis and evaluation of heteroaryl-substituted dihydronaphthalenes and indenes: potent and selective inhibitors of aldosterone synthase (CYP11B2) for the treatment of congestive heart failure and myocardial fibrosis

In this study, the synthesis and biological evaluation of heteroaryl-substituted dihydronaphthalenes and indenes (1-16) is described. The compounds were tested for activity by use of human CYP11B2 expressed in fission yeast and V79 MZh cells and for selectivity by use of human CYP11B1, CYP17, and CYP19. The most active inhibitor was the 6-methoxydihydronaphthalene 4 (IC(50) = 2 nM), showing a K(i) value of 1.3 nM and a competitive type of inhibition. The 5-methoxyindene 3 was found to be the most selective CYP11B2 inhibitor (IC(50) = 4 nM; CYP11B1 IC(50) = 5684 nM), which also showed only marginal inhibition of human CYP3A4 and CYP2D6. Docking and molecular dynamics studies using our homology-modeled CYP11B2 structure were performed to understand some structure-activity relationships. Caco-2 cell experiments revealed highly cell-permeable compounds, and metabolic studies with 4 using rat liver microsomes showed sufficient stability.