SLE患者Th1/Th2平衡状态及与外周血淋巴细胞CD28及CTLA-4分子表达的关系

目的:了解SLE患者Th1/Th2平衡状态以及共刺激分子CD28/CTLA-4与Th1/Th2平衡状态的关系。方法:研究对象为18例SLE患者(活跃期12例、缓解期6例)。对照组14例,为健康体检者。外周血单个核细胞(PBMCs)经梯度密度离心法分离后置于含PMA(5μg/L)及ionomycin(500μg/L)培养液中培养72 h。采用ELISA方法检测培养的PBMCs上清液中IFN-γ及IL-10的含量。应用流式细胞技术检测培养的淋巴细胞CD28及CTLA-4分子的表达。结果:活跃期SLE患者培养的PBMCs分泌IL-10的量(351.29 ng/L±153.31 ng/L)较对照组(254.48 ng/L±120.69 ng/L)有一定程度的升高,但差异无显著(P0.05),IFN-γ的分泌量(25.76 ng/L±16.09 ng/L)明显低于对照组(50.71 ng/L±27.92 ng/L,P0.05),IL-10/IFN-γ比值(18.74±13.77)明显高于对照组(6.66±4.95,P0.05)。培养前、后SLE患者CD3+及CD8+T细胞CD28分子表达量与对照组比较均无显著差异。培养前活跃期SLE患者CD3+T细胞CTLA-4分子表达量(0.79%+0.37%)较对照组(1.31%+0.61%)明显降低(P0.05)。培养后SLE患者CD3+T细胞及CD8+T细胞CTLA-4分子表达量仍低于对照组,但差异无显著(P0.05)。活跃期SLE患者培养的PBMCs中CD3+T细胞CTLA-4分子的表达量与上清液中IFN-γ含量呈明显的直线正相关关系(r=0.681,P0.05)、与上清液中IL-10及IL-10/IFN-γ比值呈明显的直线负相关关系(r=-0.624,P0.05;r=-0.738,P0.01)。结论:SLE患者存在Th1/Th2平衡向Th2方向偏移,即Th2优势状态。CTLA-4分子可能通过抑制CD28的信号转导参与Th2优势状态的形成。     

系统性红斑狼疮患者血清IL-10的水平及临床意义

目的观察系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)患者血清IL-10的表达与疾病活动的关系。方法选取22例SLE患者及24名健康人作为对照,根据狼疮疾病活动指数(SLE disease activity index,SLEDAI)将SLE患者分为活动期组和非活动期组,检测血清抗dsDNA抗体,血清总补体溶血活性(CH50)及C反应蛋白(C reactive protein,CRP),酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清IL-10表达。结果与对照组[(18.11±6.97)ng/L]相比,IL-10在SLE活动期组[(78.54±5.62)ng/L,P<0.01]及非活动期组[(30.36±10.98)ng/L,P<0.05]均有所增高,活动期组增高更为明显(与非活动期组相比,P<0.05)。IL-10水平与SLEDAI呈正相关(SLE活动期,r=0.77,P<0.01;SLE非活动期,r=0.84,P<0.01),IL-10的水平与抗dsDNA抗体(r=0.71,P<0.01)、CRP(r=0.63,P<0.01)和CH50(r=-0.56,P<0.05)均相关。结论IL-10在SLE患者血清中表达升高,在疾病活动时更为明显,IL-10能反应疾病活动的程度,可以做为临床观察SLE疾病活动的指标之一。     

系统性红斑狼疮患者外周血CD4~+T细胞细胞因子的检测

本文通过检测系统性红斑狼疮 (SLE )患者外周血中Th1和Th2分泌IFN γ、IL 2、IL 4细胞因子的表达情况 ,探讨Th1/Th2细胞因子水平与SLE的发病关系。采用流式细胞分析法对 4 1例SLE患者和 15例健康志愿者外周血中细胞因子(IFN γ、IL 2、IL 4 )在辅助性T细胞 (CD4 )内的表达进行检测。结果活动期SLE患者Th1细胞因子的表达率较正常人明显下降 (P <0 0 1)。SLE患者Th1细胞因子 (IFN γ、IL 2 )的表达与SLEDAI之间具有明显的负相关性 (P <0 0 5 )。活动期SLE患者Th1细胞因子的表达明显下降 ,SLE患者Th1细胞因子水平与SLEDAI之间呈负相关性     

系统性红斑狼疮患者血清IL-10的水平及临床意义

目的 观察系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)患者血清IL-10的表达与疾病活动的关系.方法 选取22例SLE患者及24名健康人作为对照,根据狼疮疾病活动指数(SLE disease activity index,SLEDAI)将SLE患者分为活动期组和非活动期组,检测血清抗dsDNA抗体,血清总补体溶血活性(CH50)及C反应蛋白(C reactive protein,CRP),酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清IL-10表达.结果 与对照组[(18.11±6.97)ng/L]相比,IL-10在SLE活动期组[(78.54±5.62)ng/L,P＜0.01]及非活动期组[(30.36±10.98)ng/L,P＜0.05]均有所增高,活动期组增高更为明显(与非活动期组相比,P＜0.05).IL-10水平与SLEDAI呈正相关(SLE活动期,r=0.77,P＜0.01;SLE非活动期,r=0.84,P＜0.01),IL-10的水平与抗dsDNA抗体(r=0.71,P＜0.01)、CRP(r=0.63,P＜0.01)和CH50(r=-0.56,P＜0.05)均相关.结论 IL-10在SLE患者血清中表达升高,在疾病活动时更为明显,IL-10能反应疾病活动的程度,可以做为临床观察SLE疾病活动的指标之一.     

荷载人生存素的多表位树突状细胞疫苗的抗肿瘤活性研究

目的:观察荷载人生存素(survivin)的多表位树突状细胞(DC)疫苗的抗肿瘤活性.方法:分别将含4个sur-vivin的HLA-A2类限制性CD8+ CTL表位和1个CD4+ Th细胞表位的重组真核表达质粒pPIRESneo3.0-survivin(4)/Th,以及含4个CD8+ CTL表位的重组质粒pPIRESneo3.0-survivin (4),转染人DC并制备DC疫苗.实验分为survivin(4)/Th组、survivin (4)组、空质粒组、未转染DC与T细胞共培养组和单独T淋巴细胞组.DC疫苗作用后,MCF-7细胞的凋亡率明显高于survivin(4)组(P＜0.05),亦明显高于空质粒组、未转染DC与T细胞共培养组和单独T淋巴细胞组(P＜0.05).运用流式细胞术(FCM)分别检测DC表面CD83、CD86、T淋巴细胞表面CD4、CD8a的表达以及DC疫苗作用后MCF-7乳腺癌细胞的凋亡.用ELISA法检测上清中IFN-γ的含量.用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测DC疫苗诱导的CTL对MCF-7细胞的抑制率.结果:流式细胞术检测显示,人DC高表达CD83、CD86;人外周血T淋巴细胞高表达CD4、CD8a;survivin (4)/Th组IFN-γ的含量[(66.50±3.34) ng/L]明显高于survivin(4)组[(46.10±1.35)ng/L]、空质粒组[(25.17±0.32) ng/L]、未转染DC与T细胞共培养组[(25.47±0.95)ng/L]和单独T淋巴细胞组[(23.73 +0.50)ng/L],P＜0.05.survivin (4)/Th组中MCF-7细胞的抑制率明显高于survivin (4)组、空质粒组、未转染DC与T细胞共培养组和单独T淋巴细胞组(P＜0.05).DC疫苗作用后,MCF-7细胞的凋亡率[ (10.63±0.29)％]明显高于survivin(4)组(P＜0.05),亦明显高于空质粒组、未转染DC与T细胞共培养组和单独T淋巴细胞组(P＜0.05).结论:荷载多个survivin的CD8+ CTL表位的树突状细胞肿瘤疫苗具有很强的抗肿瘤活性,CD4+ Th细胞对CD8+ CTL的抗肿瘤方面有明显的促进作用.     

pCP能够增强树突状细胞对乙肝表面抗原肽提成能力

目的:研究对氯苯酚(pCP)对乙肝疫苗反应性差志愿者外周血分离、诱导的DC细胞对乙肝表面抗原肽(HB-sAg)的负载及抗原提呈能力的影响.方法:用梯密度离心法分别分离10例对乙肝疫苗反应性差志愿者外周血单核细胞,黏附的单核细胞培养液中加入HBsAg、rhGM-CSF、rhIL-4、pCP培养7 d诱导成熟的DC细胞(实验组),培养体系中不加入pcP为阴性对照组,不加入pCP及HBsAg为空白对照组,ELISA实验检测各自上清其IL-12水平;培养7 d后DC细胞与自身T淋巴细胞共培养3 d后收集上清,ELISA实验检测其IFN-γ含量.结果:IL-12的水平在实验组(265.68±16.21)ng/L明显高于阴性对照组(168.76±10.01)ng/L(P<0.05)及空白对照组(87±5.79)ng/L(P<0.05);与自身T淋巴细胞共培养3 d后,上清中IFN-γ水平在实验组(773.04 ±32.73)mg/L也明显高于阴性对照组(573.59±26.11)mg/L(P<0.05)及空白对照组(362.81±24.27)mg/L(P<0.05).结论:pCP能够有效增强乙肝疫苗反应性差志愿者外周血分离、诱导的DC细胞埘HBsAg的负载及抗原提成能力,这种效应也能明显增强成熟的CD细胞对自身T淋巴细胞的刺激力,有望成为乙肝疫苗佐剂提高其临床效率.     

DC-CIK联合化疗对多发性骨髓瘤患者细胞免疫功能的影响

目的:研究树突状细胞(DC)和细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)为效应细胞的过继免疫联合化疗治疗多发性骨髓瘤(MM)的临床疗效及对患者外周血T细胞亚群、CD4+CD25+调节性T(Treg)细胞的影响,从而探讨以上治疗对MM患者的细胞免疫调节功能。方法:将50例MM患者随机分为两组:化疗组24例,给予合适的化疗方案;联合组26例,除接受适合的化疗外,还给予DC/CIK免疫治疗,比较两组患者的临床疗效及外周血T细胞亚群、CD4+CD25+调节性T(Treg)细胞比例,并比较两组患者细胞免疫指标(Th1/Th2比值、Ag NORs比值、TGF-β)的差异。结果:3周期治疗后,联合组患者的生活质量和临床疗效[PS评分为2.10±0.49;瘤细胞百分比为(28.55±7.11)%;β2微球蛋白表达水平为(10.21±3.03)mg/L;血清M蛋白水平为(27.11±6.87)g/L;24h尿液轻链为(9.11±3.66)mg;肌酐水平为(159.33±29.68)μmol/L]均优于化疗组患者[2.59±0.52;(37.34±12.89)%;(17.22±4.21)mg/L;(35.26±12.32)g/L;(14.87±4.06)mg;(254.19±37.46)μmol/L](P值均<0.05)。联合组CD3+CD8+比例[(24.68±7.38)%]、CD4+CD25+[(1.22±0.26)%]、CD4+CD25+/CD4+[(3.58±1.69)%]、TGF-β含量[(1.32±0.39)ng/m L]均明显低于化疗组[(27.56±6.59)%、(1.45±0.40)%、(4.67±2.77)%、(1.49±0.59)ng/m L](P<0.05);CD3+CD4+/CD3+CD8+比值[(1.46±0.33)%]、Th1/Th2比值(1.49±0.29)、Ag NOR比值[(5.06±0.69)IS%]均明显高于化疗组[(1.38±0.28)%、(1.32±0.31)、(4.37±0.67)IS%](P<0.05),提示联合治疗组对MM具有更有效的免疫调节功能。结论:DC/CIK免疫治疗联合化疗治疗MM有良好的临床疗效和应用价值,可能通过免疫调节使MM患者Th2向Th1逆转,从而增强机体抗肿瘤效应。     

系统性红斑狼疮外周血单个核细胞CD40L的表达增高

目的:了解系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单个核细胞(PBMCs)的白细胞分化抗原40配体(CD40L)表达,探讨其在发病中的作用。方法:分离SLE患者和正常人PBMCs,采用流式细胞术,检测其在正常状况和应用植物凝集素(PHA)及地塞米松(Dex)后,CD40L的表达水平,并进行比较;分析SLE患者CD40L的表达水平和狼疮活动指数(SLEDAI)的相关性。结果:活动期SLE患者PBMCs的CD40L阳性细胞百分率(%)明显高于对照组,且高于静止期SLE患者;应用PHA处理24h后,3组PBMC表达CD40L均明显增加,但活动期SLE患者增加更明显;应用地塞米松后,SLE患者(活动期和静止期)PBMCs的CD40L表达明显减少,对照组无明显改变;SLE患者(活动期和静止期)CD40L的表达水平和SLEDAI均呈明显正相关。结论:CD40L在SLE患者PBMCs的表达增加,和疾病活动度有关;其受PHA和Dex调控,在SLE发病和病程中起重要作用。     

hMSC对异体DC-CIK细胞分泌细胞因子的影响

目的:通过检测人骨髓间充质干细胞(hMSCs)对共培养的异体树突状细胞活化的细胞因子激活的杀伤细胞(DC-CIK细胞)分泌细胞因子IFN-γ、TNF-α、IL-10、IL-6、IL-4和IL-2的影响,探讨hMSCs的免疫调控机制。方法:从健康人骨髓液中分离、培养hMSCs,通过观察细胞形态,检测其分化为神经元样细胞的神经元烯醇化酶(NSE),脂肪样细胞的油红O染色以及CD29和CD44的表达鉴定hMSCs。从健康人的外周血分离、培养DC,CIK细胞。用流式细胞术(FCM)检测CD1α,HLA-DR的表达来鉴定DC;检测CIK细胞CD3+CD56+的表达。将hMSCs与DC-CIK细胞以1:10的比例共培养4d,用FCM检测培养上清中IFN-γ、TNF-α、IL-10、IL-6、IL-4和IL-2的含量。结果:hMSCs呈长梭形,表达CD29和CD44的阳性细胞数分别为96.6%,94.6%,分化为神经元样细胞的NSE阳性;脂肪样细胞的油红O染色为阳性。DC细胞表达CD1α,HLA-DR的阳性细胞数分别为(91.9±10.04)%,(88.80±8.92)%。DC与CIK细胞共培养第4天表达CD3+CD56+的细胞数为29.23±12.23%。hMSCs与DC-CIK细胞共培养第4天的培养上清中IFN-γ为(135.05±48.19)ng/L;TNF-α为(11.33±1.42)ng/L;IL-10为(10.15±2.25)ng/L;IL-6为(494.63±235.222)ng/L;IL-4为(7.07±2.30)ng/L;IL-2为(1074.63±303.74)ng/L。对照组(DC-CIK细胞)的IFN-γ为(717.60±248.15)ng/L;TNF-α为(17.78±7.52)ng/L;IL-10为(29.95±12.76)ng/L;IL-6为(8.03±0.21)ng/L;IL-4为(9.08±3.07)ng/L;IL-2高于1250ng/L。结论:DC-CIK细胞与hMSCs共培养后,IFN-γ分泌减少,IL-10轻微下调。表明hMSCs可能通过干扰DC-CIK细胞分泌细胞因子来发挥免疫调节作用。     

香烟烟雾暴露对肺气肿小鼠CD4+IL-17+辅助性T细胞的影响

目的 探讨香烟烟雾暴露对肺气肿小鼠肺实质、外周血中CD4+IL-17+辅助性T细胞(Th17)的影响。方法 将40只雄性BALB/c小鼠按随机数字表法分为4组：对照12周组(C12)、对照24周组(C24)、烟雾暴露12周组(S12)、烟雾暴露24周组(S24),每组10只。香烟烟雾暴露法建立小鼠肺气肿模型。HE染色观察小鼠肺气肿的改变,计算平均内衬间隔(Lm)和肺泡破坏指数(DI);酶联免疫吸附法检测小鼠支气管肺泡灌洗液中IL-17、干扰素(IFN)-γ和肿瘤坏死因子(TNF)-α水平及肺实质中IFN-γ和TNF-α水平;流式细胞术检测小鼠肺实质、外周血中CD4+ IL-17+T(Th17)细胞占CD4+T细胞的百分比;免疫荧光PCR法检测小鼠肺实质、外周血中RORγt和IL-17的mRNA表达,并分析这些指标的相互关系。结果 (1)S12组和S24组Lm为(39.19±3.51) μm和(46.87±7.16) μm,DI为39.13±1.57和45.16±3.13,均明显高于C12组和C24组(32.60±3.21) μm和(32.38±3.73) μm及28.23±1.62和28.86±2.07,以S24组增高更为明显,差异均有统计学意义(均P＜0.05)。(2) S12组和S24组BALF中IL-17、IFN-γ及TNF-α水平[(119.72±10.72) ng/L和(296.40±14.00) ng/L、(129.7±22.2) ng/L和(251.1±62.4) ng/L,(17.35±1.60) ng/L和(36.35±1.43) ng/L]较C12组和C24组[(52.06±4.70) ng/L和(51.89±6.82) ng/L、(85.8±26.8) ng/L和(88.9±11.5) ng/L,(6.41±0.90) ng/L和(5.85±0.92) ng/L]明显增高;在肺实质中,S12组和S24组IFN-γ及TNF-α水平[(1124.3±174.4) ng/L和(1342.7±206.1) ng/L,(77.2±13.7) ng/L和(101.7±19.0) ng/L]亦较C12组和C24组[(946.2±81.9) ng/L和(1027.2±188.3) ng/L,(62.1±16.1) ng/L 和(64.4±15.1) ng/L]明显增高;且以S24组增高更为明显,差异均有统计学意义（均P＜0.05）。(3)S12组和S24组肺实质中Th17细胞比例[(3.27±1.12)％和(7.19±2.24)％]明显高于C12组和C24组[(1.80±0.75)％和(1.99±0.59)％];S12组和S24组外周血中Th17细胞比例[(1.96±0.61)％和(3.82±1.26)％]亦明显高于C12组和C24组[(0.90±0.37)％和(0.97±0.32)％];且以S24组增高更为明显,差异均有统计学意义（均P＜0.05）。(4) S12组和S24组肺实质中RORγt和IL-17 mRNA表达量（1.73±0.35和4.52±1.15,4.00±0.87和83.43±21.01）较C12组和C24组（0.83±0.21和0.90±0.36,0.80±0.22和0.64±0.31）明显增高,以S24组增高更为明显,差异均有统计学意义(均P＜0.05);外周血中,S12组和S24组RORγt和IL-17 mRNA表达量(1.48±0.32和2.75±0.79,201.25±5.49和416.22±99.64)亦较C12组和C24组(0.59±0.25和0.75±0.36,24.90±5.49和22.28±4.24)明显增高,以S24组增高更为明显,差异均有统计学意义（均P＜0.05）。(5)烟雾暴露组中,外周血和肺实质的Th17细胞比例均与Lm、DI值显著正相关(r值分别为0.767、0.772;0.722、0.706,均P＜0.05)。结论 Th17细胞在香烟暴露肺部炎症、肺气肿小鼠外周血及肺内表达增高,并伴活性的增强,且随烟雾暴露时间延长而增强,提示香烟暴露肺气肿小鼠Th17细胞上调可能是导致小鼠肺内及全身炎症反应放大的原因之一。     

肝素诱导的DC对慢性乙肝患者Th1/Th2分化的影响

探讨肝素体外对慢性乙肝患者CD4~+T细胞亚群分化的影响。分离慢性乙肝患者外周血单核细胞,以rhIL-4(50 ng/ml)、rhGM-CSF(10 ng/ml)、rhTNF-α(100 u/ml)和肝素(50 u/ml)诱导培养DC。免疫磁珠分离外周血CD4~+T细胞亚群,ELISA法检测DC或CD4~+T细胞培养上清中IL-6、IL-12、IFN-γ和IL-4的含量。以流式细胞仪检测肝素处理前后DC表面CD1a、CD83、CD80、CD86、HLA-DR分子表达情况。结果:纯化的慢性乙肝患者CD4~+T细胞培养上清中IFN-γ显著低于同期培养的正常人CD4~+T细胞(P0.05);肝素处理的慢性乙型肝炎患者的DC表达CD1a、CD83、CD80、CD86、HLA-DR分子水平及分泌的IL-12水平明显升高(分别P0.05、P0.01);而分泌的IL-6水平降低(P0.05)。肝素处理后的DC与慢性乙肝患者外周血中CD4~+T细胞共培养后,其上清中Th1型细胞因子IFN-γ的水平明显升高(P0.01)。体外肝素处理后的慢性乙肝患者的DC能部分改善外周血Th1细胞分化的不足。     

雷公藤内酯醇对系统性红斑狼疮患者DC细胞功能及成熟的影响

目的 通过体外实验研究雷公藤内酯醇(triptolide)对系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)患者树突状细胞(dendritic cell,DC)功能及成熟的影响,为进一步阐明雷公藤内酯醇的免疫学活性提供依据.方法 从SLE患者外周血分离单个核细胞,流式细胞仪分选DC,加入0、5、10、30μg/L的雷公藤内酯醇共孵育,24h后收集上清液,ELISA检测IFN-α、IL-6、TNF-α量,5d后收集细胞,流式细胞仪检测DC表型CD11c、CD80、CD86阳性率,光镜观察DC的形态,扫描电镜观察DC的超微结构.结果 雷公藤内酯醇显著减低活动期与非活动期SLE患者IFN-α、IL-6、TNF-α量,并呈雷公藤内酯醇浓度依赖性(P＜0.05);雷公藤内酯醇可抑制SLE患者DC的分化和成熟,并呈雷公藤内酯醇浓度依赖性(P＜0.05).结论 雷公藤内酯醇能够减弱SLE患者DC的功能,并抑制其分化和成熟.     

HSP90以及IL-6在系统型红斑狼疮发病中的作用

目的研究系统型红斑狼疮(systemiclupuserythematosus,SLE)患者外周血单个核细胞(PBMC)中热休克蛋白90(HSP90)、血清中白细胞介素6(IL6)的水平,探讨与活动期SLE的相关性。方法应用Western印迹检测20例SLE活动期患者(A组)与20例正常人(B组)PBMC中HSP90的表达,并利用酶联免疫法(ELISA)检测其血清中IL6水平。结果①A组HSP90表达水平为0.47±0.05,B组为0.18±0.07,差异有统计学意义(P<0.01);②血清中IL6水平在A组[(32.97±8.65)pg/ml]显著高于B组[(10.46±4.33)pg/ml](P<0.05);③A组血清中IL6水平与PBMC中HSP90表达呈正相关(r=0.61,P<0.01),且与SLE疾病活动指数(SLEDAI)正相关(r=0.48,P<0.01)。结论IL6可作为病情活动监测指标,IL6与HSP90的异常高表达可能在SLE发病机制中起重要作用。     

ICOS/ICOSL在类风湿关节炎患者外周血淋巴细胞的表达及临床意义

目的:检测初发类风湿关节炎(Rheumatoid arthritis,RA)患者外周血淋巴细胞表面共刺激分子ICOS和ICOSL的表达,并探讨其临床意义。方法:采用流式细胞术和RT-PCR的方法,检测85例初发RA患者和50例健康对照(Healthy control,HC)外周血CD4+T细胞表面ICOS及CD14+单核细胞和CD19+B细胞表面ICOSL的表达,比较15例初诊RA患者治疗前后ICOS和ICOSL表达水平变化,分析其临床意义。结果:RA患者外周血中ICOS/ICOSL的mRNA的表达水平显著高于HC。RA患者外周血CD4+T细胞表面ICOS表达显著增高[(7.08±4.72)%vs(3.01±1.39)%,P0.0001]。RA患者外周血中CD14+单核细胞[(5.77±3.45)%vs(3.64±1.43)%,P0.05]和CD19+B细胞[(5.78±4.52)%vs(3.97±1.63)%,P0.05]表面ICOSL的表达均高于HC。活动期的RA患者外周血单核细胞和B细胞表面的ICOSL表达高于非活动期患者[(5.45±3.50)%vs(4.04±1.55)%,P=0.036]、[(6.59±5.74)%vs(5.63±4.30)%,P=0.016],治疗后CD4+T细胞表面ICOS的表达及CD14+单核细胞和CD19+B细胞表面ICOSL的表达均显著下降[(3.33±0.31)%vs(5.56±1.11)%,P=0.076]、[(5.12±1.23)%vs(9.99±2.02)%,P=0.045]、[(3.74±0.57)%vs(8.62±1.77)%,P=0.011]。结论:RA患者外周血单个核细胞表面ICOS和ICOSL异常高表达,且与疾病活动度和临床疗效密切相关。提示ICOS/ICOSL信号通路可能参与RA免疫病理进程。     

系统性红斑狼疮患者CD4+T细胞上CD137的表达

目的:探讨系统性红斑狼疮(Systemic lupus erythematosus,SLE)患者CD4 T细胞上共刺激分子CD137的表达及其作用机制。方法:应用流式细胞术检测30例系统性红斑狼疮患者和20例正常对照者外周血T细胞活化前后CD137的表达。结果:活动期SLE患者CD4 T细胞表达的CD137明显高于稳定期及正常对照组(表达百分率分别为21.56±4.08、3.01±0.09和1.24±0.12,P<0.01),稳定期SLE患者表达的CD137与正常对照组比较无统计学差异(P>0.05)。但是活动期和稳定期SLE患者的CD4 T细胞用抗CD3单抗体外刺激活化后表达的CD137均显著高于正常对照组(表达百分率分别为56.25±9.11、27.26±3.41和13.17±1.54,P<0.01)。另外,活动期SLE患者CD4 T细胞活化后表达的CD137与补体呈负相关关系(r=-0.447,P<0.05),与IgG和24小时尿蛋白定量呈正相关关系(r=0.451,P<0.05,r=0.245,P<0.05)。结论:活动期系统性红斑狼疮患者T细胞活化前后CD137的表达均显著增高,而且CD4 T细胞活化后CD137表达水平可能提示病情和肾脏受累程度。     

哮喘急性发作期患儿外周血Th17水平及其功能初步研究

目的:观察哮喘急性发作期患儿外周血Th17水平和功能状态,初步探讨Th17在儿童哮喘发病中的作用.方法:以正常儿童(对照组,n=20)为对照,流式细胞术(FCM)检测哮喘急性发作期患儿(哮喘组,n=26)外周血Th17以及Th1,Th2细胞百分率,ELISA方法检测外周血单个核细胞(PBMC)体外培养上清IL-17,IFN-γ以及血浆IL-17,IL-23,IgE水平.结果:(1) 哮喘组和对照组外周血CD4+T中CD4+IL-17+T比例[(1.25±0.66)% vs (1.27±0.66)%(P>0.05)];CD4+IL-4+T比例[(2.40±2.55)% vs(2.52±1.26)%(P>0.05)];两组比较无统计学意义.哮喘组CD4+IFN-γ+T比例低于对照组[15.79±7.48 vs 24.10±12.70(P<0.05)].(2) PHA活化的PBMC体外培养72 h上清中,哮喘组IL-17水平为17.53(0～245.57)ng/L,低于对照组101.74(25.12～500.60)ng/L(P<0.01);IFN-γ水平与对照组比较无统计学意义[3507±2788 ng/L vs 3027±2737 ng/L];两组血浆中IL-17均<2 ng/L,IL-23均<15 ng/L.(3) 哮喘组血浆总IgE 499.26(2.3～945.1)IU/mL,高于对照组54.57(1.7～318.26)IU/mL(P<0.001);IgE阳性(>150 IU/mL)和阴性(<150 IU/mL)哮喘患儿体外PBMC培养上清中IL-17,IFN-γ水平比较无统计学意义.结论:哮喘急性发作期患儿外周血Th1细胞以及PHA活化的IL-17表达水平降低,Th1水平和Th17功能异常的机制及其在儿童哮喘发病中的作用值得进一步研究.     

从CD4+CD25-Foxp3+ T细胞变化看系统性红斑狼疮外周免疫耐受失衡

目的: 检测CD4+CD25-Foxp3+ T细胞在系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血中的表达,探讨该细胞亚群在SLE发病机制中的意义.方法: 采用流式细胞术检测25例SLE患者和15例健康对照的外周血CD4+CD25-Foxp3+ T细胞比例、分析其表型;利用免疫磁珠细胞分选法(MACS)分选出CD4+CD25-T细胞,通过实时定量聚合酶链反应(real-time PCR)检测FOXP3基因表达.结果: 活动期和稳定期SLE患者外周血CD4+CD25-Foxp3+ T细胞比例分别是: (9.89 ±0.85)%和(7.11±0.86)%,与健康对照组 (3.35±0.31)% 比较差异有统计学意义(P<0.01).SLE患者CD4+CD25-Foxp3+ T细胞表达频率与SLEDAI评分呈明显正相关(P=0.0008).活动期SLE患者CD4+CD25-T细胞中Foxp3在蛋白和基因转录水平上的表达均高于健康对照组(P<0.01).SLE患者CD4+CD25-Foxp3+ T细胞表面低表达CD127.结论: SLE患者外周血中CD4+CD25-Foxp3+ T细胞比例变化可能反应了SLE发病中T细胞外周免疫失耐受机制"调节性T细胞的抑制效应被抵抗".     

系统性红斑狼疮患者外周血B淋巴细胞PD-L1的表达

目的 探讨系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)患者外周血B淋巴细胞PD-L1的表达及其在SLE发病中的意义.方法 应用免疫荧光标记和流式细胞仪技术检测SLE患者外周血B淋巴细胞上PD-L1的表达水平.结果 活动期SLE患者外周血B淋巴细胞CD19 、CD19 /PD-L1 的表达水平明显高于SLE非活动期患者(P＜0.05)和正常对照组(P＜0.05).结论 活动期SLE患者B淋巴细胞的PD-L1表达异常增加,其可能在SLE发病机制中起重要作用.     

重组人可溶性CD40配体对树突状细胞体外分化、成熟及功能的影响

用Ficoll密度离心及贴壁法获得外周血单个核细胞 (PBMC ) ,PBMC经细胞因子组合诱导分化成树突状细胞 (DC ) :GM CSF (10 0ng/ml)与IL 4 (5 0ng/ml)诱导 5d后 ,分别加入TNF α (10ng/ml)或rhsCD4 0L (2 μg/ml)继续培养 4d ;倒置显微镜下观察DC形态 ,免疫荧光标记和流式细胞术分析DC表型 (CD1a、CD80、CD83、HLA DR、CD14、CD16、CD19)及摄取FITC Dextran抗原的能力 ;3 H TdR掺入法检测DC刺激自体混合淋巴细胞体外增殖反应 (MLR )能力 ;ELISA法分析DC培养上清中IL 12的水平 ;Trans well细胞趋化实验检测DC对自体外周T淋巴细胞的趋化能力。发现经rhsCD4 0L刺激的DC表面分子 (CD1a、CD80、CD83、HLA DR )的表达水平高于经典的细胞因子组合组 (GM CSF +IL 4 +TNF α ) ,同时rhsCD4 0L刺激后的DC摄取FITC Dextran的能力下降而刺激自体MLR和分泌IL 12的能力明显提高 ;而且rhsCD4 0L诱导的DC表面趋化因子受体CXCR4的表达水平及对自体外周T淋巴细胞的趋化能力均强于TNF α或FL激发的DC。rhsCD4 0L在体外不仅具有显著的诱导DC分化 ,促进DC成熟的功能 ,而且经rhsCD4 0L作用的DC能更有效地激发T淋巴细胞     

强直性脊柱炎患者Th17细胞与CD4+CD25+FoxP3+调节性T细胞的变化及意义

目的 探讨强直性脊柱炎( ankylosing spondylitis,AS)患者Th17和CD4+ CD25+ FoxP3+调节性T细胞比例及相关细胞因子水平的变化及意义.方法 强直性脊柱炎患者40例,正常同年龄对照37例.采用流式细胞术检测外周血Th17与调节性T细胞的比例,双抗体夹心酶联免疫吸附法( ELISA)检测血清IL-6、IL-23、IL-17和TGF-β水平.结果 AS组患者外周血Th17细胞比例明显高于对照组[(1.02±0.34)％vs(0.68:±0.29)％,P＜0.05],CD+ CD25+ FoxP3+细胞比例明显低于对照组[(3.77±0.81)％ vs (4.69±1.23)％,P＜0.05].AS患者血清中IL-6、IL-23、IL-17水平明显高于对照组[ (6.15±2.71) ng/L vs(3.31±1.65) ng/L; (9.44±3.12) ng/ml vs (5.82±2.61) ng/ml;( 10.53±4.97) ng/L vs (6.78±3、26) ng/L,P均＜0.01];差异有统计学意义.与对照组相比,AS组TGF-β水平有下降的趋势[(4,76±2.15) ng/ml vs(5.16±2.02) ng/ml,P＞0.05],但差异无统计学意义.AS患者血清各细胞因子含量与临床及实验室指标无相关性.结论 强直性脊柱炎患者Th17与CD4+CD35+FoxP3+调节性T细胞比例失衡,血清IL-6、IL-23、IL-17和TGF-β水平变化,这些原因可能参与强直性脊柱炎免疫发病过程.