VP22增强慢病毒介导的自杀基因治疗抑制人卵巢癌裸鼠腹腔种植瘤生长的研究

目的:探讨单纯疱疹病毒壳膜蛋白VP22的细胞间传递作用促进HSV-TK/GCV(单纯疱疹病毒胸苷激酶/更昔洛韦)系统对卵巢癌腹腔移植瘤的杀伤效应。方法:将慢病毒包装质粒、包膜质粒、转移载体质粒采用磷酸钙沉淀法共转染包装细胞293T,收集病毒上清,并建立人上皮性卵巢癌(3AO)细胞株腹腔移植瘤模型。单药组分为TK+生理盐水(NS)组、VP22-TK+NS组、NS+NS组,分别腹腔注射慢病毒TK、VP22-TK或NS1ml,继而腹腔注射NS;联合用药组分为TK+GCV组、VP22-TK+GCV组、NS+GCV组分别腹腔注射慢病毒TK、VP22-TK及NS,24h后腹腔注射GCV治疗。每组裸小鼠均为5只。观察各组裸鼠的生存时间及慢病毒的毒性作用。结果:平均生存时间TK+NS组、VP2-TK+NS组、NS+NS组、NS+GCV组、TK+GCV组、VP2-TK+GCV组分别为18.3±2.7d、18.4±1.9d,17.2±1.3d、18.7±1.9d、21±4d和46±22d,6组差异有显著性(χ2=24.81,P=0.002);并且VP2-TK+GCV组平均生存时间较TK+GCV组裸鼠明显延长(χ2=7.42,P=0.006)。结论:VP22介导的自杀基因产物的细胞间扩散作用可明显加强对体内肿瘤细胞的杀伤效应。     

GE7导入系统介导I型单纯疱疹病毒胸腺嘧啶核苷激酶基因联合5-FU治疗卵巢癌的研究

目的 :观察HSV1 tk/GCV基因治疗系统与 5 FU序贯应用 ,对卵巢上皮癌SKOV3细胞的体内杀伤效应。方法 :建立裸鼠卵巢癌皮下移植瘤模型 ,免疫组化检测移植瘤组织中表皮生长因子受体 (EGFR)的表达 ;于瘤周分别注射GE7 β gal、GE7 HSV1 tk复合物 ,用X gal及RT PCR检测两种基因的表达 ;取 2 4只荷瘤裸鼠随机分成空白对照组、5 FU组、GE7 HSV1 tk/GCV组及GE7 HSV1 tk/GCV/5 FU组进行实验 ,观察肿瘤体积及重量的变化 ,计算各组抑瘤率。结果 :移植瘤中有较高的EGFR表达 ,β gal基因及HSV1 tk基因经瘤周注射导入移植瘤后均有不同程度的表达 ,5 FU组、GE7 HSV1 tk/GCV组及GE7 HSV1 tk/GCV/5 FU组抑瘤率分别为 14 .6 %、39.4 %和 6 0 .5 % (P <0 .0 5 )。结论 :HSV1 tk/GCV和 5 FU序贯治疗能有效地抑制肿瘤生长 ,并能有效地抑制单纯使用HSV1 tk/GCV系统治疗后的远期反跳作用 ,提高卵巢癌基因治疗的远期疗效。     

人端粒酶逆转录酶启动子调控下胞嘧啶脱氨酶-胸苷激酶融合基因治疗卵巢癌的体外研究

目的　探讨人端粒酶逆转录酶 (hTERT)启动子调控下的融合双自杀基因———胞嘧啶脱氨酶 胸苷激酶 / 5 氟胞嘧啶 更昔洛韦 (CD TK/ 5 FC GCV)系统对人卵巢癌细胞及正常细胞的体外杀伤作用。方法　应用脂质体转染法将hTERT核心启动子报告质粒pBTdel 2 79转染人卵巢癌细胞系3AO、正常卵巢上皮细胞 (NOEC)和人胚肺成纤维细胞株HELF ,用荧光素酶分析检测hTERT启动子活性 ;应用RT PCR技术检测hTERTmRNA的表达水平。应用基因克隆技术分别构建hTERT启动子和巨细胞病毒 (CMV)启动子调控下的CD TK基因真核表达载体pBTdel 2 79 CD TK和pcDNA3 CD TK ,以及hTERT启动子调控下的TK基因表达载体pBTdel 2 79 TK。用四甲基偶氮唑蓝 (MTT)法和流式细胞术检测pBTdel 2 79 CD TK/ 5 FC GCV系统和pcDNA3 CD TK/ 5 FC GCV系统对上述 3种细胞不同的杀伤作用 ;应用RT PCR技术检测pBTdel 2 79 CD TK和pcDNA3 CD TK转染前后 3AO和NOEC细胞中CD和TK基因的表达情况。用扫描电子显微镜观察pBTdel 2 79 CD TK/ 5 FC GCV作用后 3AO细胞的形态变化。结果　卵巢癌细胞系 3AO中hTERT启动子活性增高 ,为 2 4 1% ,RT PCR检测hTERTmRNA为阳性 ,而在正常细胞NOEC和HELF中 ,hTERT启动子活性仅为 0 3%和 0 7% ,hTERTmRNA为阴性。与p     

西罗莫司抑制缺氧诱导因子1α蛋白表达及其对SKOV3裸鼠移植瘤生长的作用

目的　探讨西罗莫司抑制缺氧诱导因子 (HIF) 1α蛋白的表达及其对SKOV3裸鼠移植瘤生长的抑制作用。方法　将卵巢癌细胞株SKOV3种植于 2 4只 4～ 6周龄裸鼠背部皮下 ,待裸鼠皮下肿瘤形成 1周后 ,将 2 4只裸鼠随机分为 4组 :给予生理盐水 2 0 0 μl为对照组 ;给予西罗莫司 4mg/kg为治疗 1组 ;给予西罗莫司 4mg/kg 紫杉醇 2 5mg/kg为治疗 2组 ;给予紫杉醇 2 5mg/kg为治疗 3组。治疗 2周后处死裸鼠 ,测定肿瘤的重量和体积。采用免疫组化和RT PCR技术 ,测定肿瘤细胞HIF 1α蛋白、bcl 2mRNA的表达和细胞凋亡指数。结果　治疗 1组、治疗 2组HIF 1α蛋白的表达与对照组比较 ,差异有显著性 (P <0 0 5 )。以对照组为对照 ,治疗 1组、治疗 2组、治疗 3组的抑瘤率分别为4 7 9% (P <0 0 5 )、5 1 0 % (P <0 0 5 )、31 8% (P >0 0 5 )。对照组、治疗 1组、治疗 2组、治疗 3组的细胞凋亡数分别为 15、36、4 0、2 2个 ,各组间比较 ,差异均有显著性 (P <0 0 5 ) ;且细胞凋亡数的增加与bcl 2mRNA呈负相关性 (P <0 0 0 1)。结论　西罗莫司可抑制卵巢癌细胞HIF 1α蛋白的表达 ,促进细胞凋亡 ,抑制肿瘤生长。     

HSV-TK/GCV系统在难治性卵巢癌裸鼠移植瘤模型中的实验研究

目的:建立人难治性卵巢癌荷瘤裸鼠模型,用HSV-TK/GCV自杀基因系统治疗模型动物,观察疗效及协同因素。方法:常规培养携带HSV-TK基因的重组逆转录病毒包装细胞PA317,测定病毒滴度。在移植瘤内多点注射包装细胞,观察GCV、ATRA、TPT对移植肿瘤独立及协同治疗后的肿瘤体积变化。治疗结束后分析移植肿瘤组织病理,PCR检测TK基因在NIH3T3细胞及移植肿瘤组织的转导。结果:人卵巢癌标本裸鼠原代移植成功率16.7%,鼠间传代移植成功率89.7%;重组逆转录病毒滴度为6×104cfu/ml;HSV-TK/GCV系统或TPT治疗后肿瘤生长受到抑制(P<0.05),两者联合治疗后,抑制更明显(P<0.05);ATRA灌胃未显示独立或协同治疗作用(P>0.05);HSV-TK/GCV组、TPT组及两者联合组有明显的治疗反应;PCR检测证实,TK基因在NIH3T3细胞及肿瘤组织中的转导。结论:HSV-TK/GCV系统及TPT对人难治性卵巢癌荷瘤裸鼠有单独及协同治疗作用,全反式维甲酸灌胃对人难治性卵巢癌荷瘤裸鼠疗效不明显。     

TRAIL对3AO裸鼠移植瘤治疗作用的实验研究

目的 :探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 (TRAIL)对 3AO裸鼠皮下及腹腔移植瘤的治疗作用。方法 :将 5× 10 6 和 2× 10 7对数生长期的 3AO分别接种于BALB/C裸鼠右下肢皮下和腹腔内 ;待皮下组移植瘤长至 0 .2 5cm3,腹腔移植瘤组移植后 96h ,随机分为 5组。裸鼠皮下和腹腔移植瘤A、B组为TRAIL组 ,剂量分别为 0 .5 μg/ml和 1μg/ml;C组为TRAIL0 .5 μg/ml加cDDP 1.5mg/kg ,D组为cDDP 3mg/kg ;E组为对照组 (将生理盐水分别注射于瘤周和腹腔 ) ,观察移植瘤成瘤率、裸鼠生存期和生存期延长率。同时观察停药后 1d、1周、2周裸鼠移植瘤细胞的细胞凋亡率及CD95、Apo2 .7、P5 3、Bcl 2基因表达的变化。结果 :(1)A、B、C和D组裸鼠皮下移植瘤的抑制率分别为 2 3%、4 9.1%、6 2 .3%和 5 2 .6 % ,差异有显著性 (P <0 .0 5 ) ;(2 )腹腔移植瘤组 :A、B、C、D组裸鼠移植瘤的成瘤率分别为 89.1%、72 .3%、5 1.7%和 6 1.5 % ;差异有显著性 (P <0 .0 5 ) ;(3)TRAIL作用裸鼠移植瘤后CD95与Apo2 .7的表达均升高 ,P5 3基因表达稍升高 ,Bcl 2基因表达降低。结论 :(1)TRAIL对人卵巢癌裸鼠移植瘤有明显的抑制作用 ,TRAIL能明显降低裸鼠的成瘤率及死亡率 ,延长生存期 ;(2 )其机制可能与基因CD95、Apo2 .7、Bcl 2的调节有关     

乳源免疫调节肽抗人卵巢癌的实验研究

目的:通过荷人卵巢癌裸鼠模型,研究乳源免疫调节肽(PGPIPN)的抑癌作用.方法:建立荷人卵巢癌裸鼠模型,皮下接种肿瘤细胞后,分别用0.9%氯化钠液(NS组),低剂量PGPIPN(2.5×10-4 mg/L)(PGPIPN1组),高剂量PGPIPN(5.0×10-4mg/L)(PGPIPN2组),0.2 ml隔日腹腔注射;氟尿嘧啶(5-Fu)(30 mg/kg·d)(5-Fu组)通过腹腔注射.种植5周后处死裸鼠,测量荷人卵巢癌裸鼠的体重、瘤重、脾重,计算抑瘤率、脾指数,观察PGPIPN对卵巢癌肿瘤的抑制作用,并通过HE染色、DNA凝胶电泳分析技术观察PGPIPN对卵巢癌细胞及其DNA的影响.结果:荷人卵巢癌裸鼠经PGPIPN治疗后出现肿瘤体积缩小,PGPIPN2组抗瘤效果优于PGPIPN1组,同时还能改善荷人卵巢癌裸鼠的体质,提高荷人卵巢癌裸鼠的生存质量,增强SKOV3裸鼠免疫功能.组织病理学检查发现:PG-PIPN1组可见小片状瘤细胞发生凋亡,PGPIPN2组可见瘤细胞大片发生凋亡.PGPIPN组的瘤组织中提取的DNA进行琼脂糖电泳均出现特征性DNA梯形电泳条带.结论:PGPIPN有明显的抑瘤效应,可诱导人卵巢癌细胞发生凋亡.这为卵巢癌的治疗提供了新方法.     

胞嘧啶脱氨酶基因联合5-氟胞嘧啶对卵巢癌裸鼠移植瘤的抑制作用

目的　了解胞嘧啶脱氨酶 (CD)基因联合 5 氟胞嘧啶 (5 FC)对卵巢癌裸鼠皮下移植瘤生长的抑制作用。方法　应用胚肾 2 93细胞扩增整合有CD基因的复制缺陷的腺病毒 ,并将其分离、提纯。以卵巢癌裸鼠模型作为研究对象。实验组 (5只 ) :将整合有CD基因的复制缺陷的腺病毒 0 1ml[1×10 10 菌斑形成单位 (pfu) /ml]注入瘤体内 ,隔日 1次 ,共 3次 ;同时将 5 FC按每次 4 0 0mg/kg注入裸鼠腹腔内 ,每日 2次 ,共 7d。对照组 (5只 ) :以同样方法将同体积生理盐水注入裸鼠体内。观察两组裸鼠的肿瘤生长速度及倍增时间。结果　 (1)整合有CD基因的腺病毒滴度为 1 0 7× 10 10 pfu/ml。 (2 )实验组裸鼠肿瘤生长明显受抑制 ,肿瘤体积由 9mm3 增加到 85 5mm3 ,而对照组肿瘤体积由 7mm3 增加到 2 0 14mm3 ,两组比较 ,差异有显著性 (P <0 0 5 ) ,这种显著性差异在用药结束后约 2 0d才表现出来 ,并维持约 30d。(3)实验组与对照组肿瘤倍增时间分别为 (8 1± 0 7)d和 (6 4± 0 7)d ,两组比较 ,差异有显著性 (P<0 0 5 )。结论　应用CD基因联合 5 FC对卵巢癌裸鼠移植瘤具有良好的抑制作用     

卵巢癌自杀基因治疗的旁观者效应及其与间隙连接蛋白43表达的关系

目的 探讨单纯疱疹病毒－胸苷激酶／更昔洛韦（HSV－TK／GCV）在卵巢癌治疗中的旁观者效应及其与间隙连接蛋白（Cx)43表达的关系,同时观察全反式维甲酸（RA）对两者关系的影响。方法 四甲基偶氮唑蓝（MTT）法比较经HSV－TK／GCV治疗及RA作用前后卵巢癌细胞株OVCAR3、CAOV3细胞旁观者效应的强弱;采用流式细胞仪,蛋白质免疫印迹法（Western Blot)、间接免疫荧光染色检测两卵巢癌细胞株RA作用前后Cx43的表达,Cx43的表达以平均荧光强度表示。结果 （1）HSV－TK／GCV对OVCAR3细胞产生较明显的旁观者效应,而对CAOV3细胞旁观者效应弱,两者比较,差异有显著性（P＜0．05）。（2）RA对OVCAR3细胞的旁观者效应有增强作用（P＜0．05）,但不影响CAOV3细胞的旁观者效应（P＞0．05）。（3）流式细胞仪检测提示,OVCAR3细胞中Cx43的表达为4．45,而CAOV3细胞中Cx43的表达为0．89,两者比较,差异有显著性（P＜0．05）;Western Blot、间接免疫荧光染色检测结果也表明,OVCAR3细胞有Cx43的表达,且定位于细胞膜,而CAOV3细胞中无Cx43的表达。（4）RA作用后,Western Blot、间接免疫荧光染色检测均显示,两卵巢癌细胞株的Cx43表达增加;流式细胞仪检测提示,细胞中Cx43表达均明显增加,OVCAR3细胞由4．45增至9．83,CAOV3细胞由0．89增至3．15（P均＜0．05）,Cx43仍定位于OVCAR3的细胞膜和CAOV3的细胞浆。结论 卵巢癌HSV－TK／GCV治疗的旁观者效应与其Cx43表达以及定位有关,增强细胞膜Cx43表达,将增强卵巢癌HSV－TK／GCV的旁观者效应,提高其疗效。     

冻融抗原致敏的树突细胞对裸鼠人卵巢癌移植瘤治疗作用的研究

目的 :研究冻融抗原致敏的树突细胞 (DC)对裸鼠人卵巢癌移植瘤的治疗作用。方法 :联合应用粒性白细胞与巨噬细胞集落刺激因子 (GM CSF)及白介素 4 (IL 4 )从正常足月产妇分娩后新生儿脐血中培养出DC ,以人卵巢癌细胞系 3AO细胞冻融抗原激活DC ,测定其诱导的细胞毒性T淋巴细胞 (CTL)对 3AO的杀伤活性 ;CTL预防性接种于裸鼠皮下 ,观察裸鼠人卵巢癌移植瘤的发生率 ,以DC激活的CTL治疗裸鼠人卵巢癌移植瘤并观察治疗效果。结果 :体外抗原冲击致敏的DC能显著刺激T淋巴细胞增殖 ,其诱导的CTL对细胞系 3AO具有显著的杀伤作用 ,在效靶比为 4 0 :1、2 0 :1、10 :1、5 :1时 72h杀伤率平均分别为 90 .1%、67.4 %、4 0 .4 %、17.8%。DC激活的CTL能预防裸鼠人卵巢癌移植瘤的发生 (预防组 16.6% ,对照组 10 0 % ,P <0 .0 0 1) ,并能抑制移植瘤生长 ,对照组、治疗组移植瘤的大小分别为 (5 .6± 1.1)cm3 、(2 .7± 0 .78)cm3 (P <0 .0 1)。结论 :人卵巢癌细胞冻融抗原体外冲击致敏的DC可作为一种抗癌疫苗在免疫治疗卵巢癌患者中发挥重要作用     

半胱天冬酶3前酶增强胞嘧啶脱氨酶-胸苷激酶融合双自杀基因系统治疗人卵巢癌的体外研究

目的探讨半胱天冬酶3前酶(procaspase3)能否增强胞嘧啶脱氨酶胸苷激酶/5氟胞嘧啶+更昔洛韦(CDTK/5FC+GCV)系统对人卵巢癌细胞的体外杀伤作用。方法构建procaspase3的表达载体pcDNA3casp3和人端粒酶逆转录酶(hTERT)启动子调控下的CDTK融合双自杀基因表达载体pBTdel279CDTK。应用蛋白印迹法检测pcDNA3casp3和pcDNA3质粒转染后的3AO细胞(3AOpcDNA3casp3、3AOpcDNA3细胞)中procaspase3蛋白的表达情况;应用RTPCR技术检测pBTdel279CDTK和pBTdel279分别转染的3AOpcDNA3casp3和3AOpcDNA3细胞中CD和TK基因的表达情况;应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法、流式细胞仪技术、蛋白印迹法和荧光底物分析法分别检测4种细胞在CDTK/5FC+GCV系统作用后的细胞存活率、细胞周期及半胱天冬酶3(caspase3)活性。结果3AOpcDNA3casp3细胞有明显的procaspase3蛋白表达,而3AOpcDNA3细胞则无表达。3AOpcDNA3casp3和3AOpcDNA3细胞在pBTdel279CDTK转染后均可检测到CD和TK基因,但在pBTdel279质粒转染后则CD和TK基因表达均为阴性。在5FC+GCV作用下,3AOpcDNA3casp3+pBTdel279CDTK细胞的存活率显著低于3AOpcDNA3+pBTdel279CDTK细胞。在5FC(2mmol/L)+GCV(10μg/ml)作用48h后,3AOpcDNA3casp3+pBTdel279CDTK细胞的凋亡率为37.98%,S期比例为49.67%,分别高于3AOpcDNA3+pBTdel279CDTK细胞的21.34%和35.76%,两者分别比较,差异有统计学意义(P<0.05)。在5FC(1mmol/L)+GCV(1μg/ml)作用48h后,3AOpcDNA3casp3+pBTdel279CDTK细胞中的caspase3活性值为189.7,高于3AOpcDNA3+pBTdel279CDTK细胞的44.9,两者比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论procaspase3可显著增强CDTK/5FC+GCV系统对人卵巢癌细胞的杀伤作用。     

单纯疱疹病毒胞腺嘧啶核苷激酶基因羟甲基无环岛苷系对人卵 …

观察单纯疱疹病毒胸腺嘧啶核苷激素酶基因羟甲基无环鸟苷系统对人卵巢癌的体内治疗作用。方法先将人卵巢癌细胞ＡＯ及携有ＨＳＶ１－ｔｋ基因的ＡＯ注射于裸鼠皮下,形成肿瘤后再移植于裸鼠网膜,并以病毒生物细胞的培养液对ＡＯ网膜移植瘤进行体风转染,然后以ＧＣＶ对体外ＡＯ／ＨＳＶ１－ｔｋｃ转移的肿瘤及经体内转染的ＡＯ肿瘤进行治疗。     

转座子piggyBac介导的HSV-tk基因在妇科恶性肿瘤细胞中长期稳定表达的研究

目的 研究piggyBac(PB)转座子介导转移外源基因HSV-tk在多种妇科恶性肿瘤细胞中的表达情况,探讨其作为一种可整合的非病毒载体在肿瘤基因治疗中的应用价值.方法 通过PCR技术扩增HSV-tk基因的编码区,定向克隆至PB表达载体PB[Act-RFP]DS,经酶切、测序鉴定为重组载体PB[Act-RFP,HSV-tk]DS(pPB/TK).联合3种小同的转染试剂FuGENE HD、jetPEI及lipofectamine 2000,分别将pPB/TK转染入4种常见的妇科恶性肿瘤细胞株HeLa、JEG-3、SKOV3和HEC-1B.转染后以mRFP1为报告基因,经荧光显微镜观察和流式细胞仪分析转染效率;逆转录(RT)-PCR技术检测HSV-tk和mRFP1基因的表达;四甲基偶氮唑蓝实验测定不同浓度的更昔洛韦(GCV)对转染后细胞的杀伤作用.转染后细胞经流式细胞仪分选,极限稀释单克隆培养建立稳定转染株,并以反向PCR技术确定转座子插入基因组的位点.结果 (1)成功构建重组载体pPB/TK.(2)在3种转染试剂的辅助下,pPB/TK均可有效转染入HeLa、HEC-1B、SKOV3和JEG-3细胞;不同转染试剂辅助下pPB/TK在同种细胞中的转染效率各不相同,在HeLa细胞中,FuGENE HD的转染效率[(78.7±9.2)%]高于lipofectamine 2000[(54.1±11.4)%]和jetPEI][(46.5±7.4)%],分别比较,差异均有统计学意义(P<0.05);同一转染试剂辅助下pPB/TK在不同细胞中的转染效率也不相同,以FuGENE HD为转染试剂,pPB/TK在HeLa、JEG-3和SKOV3细胞中的转染效率分别为(78.7 ±9.2)%、(74.4±8.9)%和(83.2±9.7)%,高于HEC-1B细胞的(39.5±8.7)%,分别比较,差异均有统计学意义(P<0.05).(3)RT-PCR结果显示,4种细胞均有HSV-tk和mRFP1基因mRNA的表达.(4)GCV对转染有pPB/TK的HeLa、JEG-3、SKOV3和HEC-1B细胞的半数抑制浓度分别为1.29、3.35、0.09和13.28 μg/ml.10μg/ml GCV对转染有pPB/TK的SKOV3细胞抑制率高于单独转染pORF-HSVtk者,细胞抑制率分别为(86±9)%和(52±12)%,两者比较,差异有统计学意义(P<0.05).(5)稳定转染株在转染后3个月仍可观察到mRFP1表达,并可榆测纠基因组中有TTAA位点的插入整合.结论 PB转座子可介导外源基因在多种妇科恶性肿瘤细胞中的长期稳定表达,有望为肿瘤基因治疗提供更为安全有效的转基因技术平台.     

The effects of cervical application of inhibitors of inducible nitric oxide synthase, cyclooxygenase-1, and cyclooxygenase-2 on delivery in rats

OBJECTIVE: To investigate the effect of cervical application of nonselective and selective inhibitors of nitric oxide synthases--N-nitro-L-arginine methyl ester, L-N-iminoethyl-lysine, and aminoguanidine--as well as inhibitors of cyclooxygenases--indomethacin, and nimesulide--on timing of delivery and fetal death and disease in pregnant rats. STUDY DESIGN: In a series of experimental protocols, timed-pregnant Sprague-Dawley rats (length of pregnancy, 22 days) were randomly allocated to daily cervical applications of (1) 0.04 mg (n = 6), 0.4 mg (n = 6), 4 mg (n = 6), or 40 mg (n = 6) L-N-iminoethyl-lysine or vehicle (n = 12) on days 19 to 22 of pregnancy; (2) 50 mg aminoguanidine (n = 6), 150 mg aminoguanidine (n = 6), or vehicle (n = 10) on days 19 to 22 of pregnancy; (3) 3 mg indomethacin (n = 6) or vehicle (n = 6) on days 19 to 22 of pregnancy; (4) 12.5 mg/kg nimesulide (n = 8), 25 mg/kg nimesulide (n = 8), 50 mg/kg nimesulide (n = 12), or vehicle (n = 12) on days 19 to 22 of pregnancy and 50 mg/kg nimesulide (n = 23) or vehicle (n = 23) on days 14 to 22 of pregnancy; (5) 50 mg/kg nimesulide (n = 10), 50 mg aminoguanidine plus 50 mg/kg nimesulide (n = 10), 50 mg aminoguanidine (n = 10), or vehicle (n = 10) on days 14 to 22 of pregnancy. The following variables were evaluated: proportion of animals that were delivered on day 23, time to delivery of the first pup (midnight on day 22 was considered to be 0 hour), number of stillborn pups, and average pup weight of each litter. RESULTS: Unlike L-N-iminoethyl-lysine, aminoguanidine, and indomethacin, 50 mg/kg nimesulide applied on the cervix daily for 8 days significantly increased the proportion of animals that were delivered on day 23 (18 of 23 versus 7 of 23; P =.003) and the time to delivery of the first pup by a mean of 10.8 hours (P <.001). Shorter treatment with nimesulide for 4 days increased only the time to delivery of the first pup at the 25-mg/kg dosage (P =.008). Simultaneous application of aminoguanidine and nimesulide significantly (P =.008) prolonged pregnancy to a degree similar to nimesulide alone. The experiment with N-nitro-L-arginine methyl ester was aborted because of severe maternal side effects. Unlike pups in the L-N-iminoethyl-lysine, aminoguanidine, and nimesulide groups, significantly more pups in the indomethacin group died in utero compared with the control group (36.1% versus 3.1%; P <.001), and the surviving pups had lower birth weights (P <.001). CONCLUSIONS: In an animal model, nimesulide was effective in delaying the onset of labor, was well tolerated during pregnancy, and affected cervical ripening directly independent of progesterone withdrawal. Conversely, cervical application of nitric oxide synthase and nonselective cyclooxygenase inhibitors do not extend the duration of pregnancy in the dosages studied, and some are associated with significant adverse effects in the mothers and fetuses.     

白细胞介素-15治疗3AO裸鼠移植瘤的实验研究

目的:探讨白细胞介素-15(IL-15)治疗3AO裸鼠皮下移植瘤的效果及其机制。方法:建立3AO裸鼠皮下移植瘤模型,随机分为5组,每组12只。I组为顺铂(cD-DP)3mg/kg;Ⅱ组、Ⅲ组分别为IL-1550μg/kg,100μg/kg;Ⅳ组为cDDP1.5mg/kg加IL-1550μg/kg;Ⅴ组为对照组,注射生理盐水(各组药物均腹腔注射,按每只裸鼠0.2ml配制),1次/d,连用1周。观察移植瘤成瘤率、裸鼠生存期、生存延长率及肿瘤生长曲线。停药1天,1周,2周后,观察移植瘤细胞凋亡率及细胞周期,NK细胞群计数;测定裸鼠脾脏重量;对移植瘤及裸鼠肝、脾、肾行常规病理学检查。结果:实验组与对照组相比荷瘤裸鼠生存延长率,脾脏重量,移植瘤细胞凋亡率,NK细胞群计数均有明显差异。病理学检查示各治疗组均见肿瘤坏死,肿瘤细胞周围及肿瘤内淋巴细胞明显浸润。IL-15治疗组脾脏有充血增生表现,肝脏肝细胞嗜酸性变性,肝细胞水肿,周围有浊肿;cDDP治疗组肾脏近曲小管和远曲小管细胞水肿,管腔变小;对照组裸鼠肝、脾、肾未见明显病理改变。结论:IL-15对人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤有明显的抑制作用,其机制可能与IL-15增强NK细胞的细胞毒活性,诱导NK细胞及细胞因子产生有关。