树突状细胞对大鼠牙移植后组织学及Th1/Th2细胞因子影响的研究

目的研究不同来源树突状细胞(dendritic cell,DC)对大鼠同种异体牙移植后免疫排斥反应的抑制效果。方法用BN大鼠60只、Lewis大鼠80只分别作为供、受体建立牙移植模型,将动物完全随机分为4组,每组各20只:A组为同基因牙移植组,将Lewis大鼠牙移植到Lewis大鼠;B、C、D组为同种异体牙移植组,将BN大鼠牙移植到Lewis大鼠;A、B组于术前7 d通过尾静脉输注PBS 0.5 ml于受体大鼠体内,C组于术前7 d通过尾静脉输注1×106/只的供体致耐受DC于受体大鼠体内,D组于术前7 d通过尾静脉输注1×106/只的受体致耐受DC于受体大鼠体内。各组于术后第1、2、4、8周随机处死5只大鼠,行移植牙病理学检查和ELISA检测外周血清IL-2、IFN-γ、IL-4、IL-10浓度。结果 C、D组IL-2、IFN-γ在各时间点均高于A组低于B组,IL-4、IL-10在各时间点均高于A、B组(P<0.05)。C组IL-2在第1周时低于D组,到第8周时则高于D组(P<0.05)。C组IL-4、IL-10在第1、2周时高于D组,到第8周时则低于D组(P<0.05)。C、D组牙根吸收较B组有所减少但仍高于A组(P<0.05),C、D组牙根吸收在2、4周时没有差异,在8周时D组低于C组(P<0.05)。C、D组炎性细胞浸润较B组均明显减轻但重于A组。结论供、受体致耐受DC均可抑制大鼠同种异体移植牙的排斥反应,减轻排斥反应程度。供体致耐受性DC对早期急性排斥反应抑制更明显,受体致耐受性DC对晚期慢性排斥反应抑制更明显。     

二步冷冻保存同种异体骨-ACL-骨移植后排斥反应的影响

目的 :探讨新鲜异体和二步冷冻保存同种异体骨 前交叉韧带 (ACL) 骨移植后排斥反应的差异。方法 :将 6 0只新西兰兔和 6 0只日本大耳兔分别随机分成自体骨 ACL 骨移植组、新鲜异体骨 ACL 骨移植组和二步冷冻保存同种异体骨 ACL 骨移植组 ,分别于术前及术后 1周、2周、3周、4周各采血 2ml测定血清中白细胞介素 2 (IL 2 )水平 ,术后 4周、12周切取移植关节 ,作苏木精 -伊红染色。结果 :光镜下检查显示 ,自体移植组和二步冷冻保存移植组均未见明显炎性细胞浸润 ,胶原排列规则 ,分化成熟。新鲜异体移植组有大量淋巴细胞浸润 ,其IL 2水平明显高于自体移植组和二步冷冻保存同种异体移植组且高于术前水平 (P <0 .0 1)。结论 :二步冷冻减轻了同种异体骨 ACL 骨移植后排斥反应 ,移植后其组织学改变同自体移植相似     

探讨γδT细胞在小鼠胰岛移植排斥反应中的作用

目的 通过胰岛移植模型,观察移植后小鼠血糖及存活时间,从而探讨肠上皮γδT细胞在胰岛移植排斥反应中的作用.方法 建立小鼠胰岛移植模型,分为野生型小鼠组、γδ敲基因小鼠组和γδ敲基因回输γδT细胞小鼠组,移植后分别于1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29 d测量空腹血糖,并于术后两周取移植物观察病理情况.结果 术后野生型小鼠组和γδ敲基因回输γδT细胞小鼠组移植后血糖升高明显慢于γδ敲基因小鼠组,差异有统计学意义(P＜0.05),γδ敲基因回输γδT细胞小鼠组与野生型小鼠组差异无统计学意义(P＞0.05).野生型小鼠组存活时间(27±2)d及γδ敲基因再回输组小鼠组存活时间(24±1)d均明显长于γδ敲基因小鼠组的(17±3)d,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 肠上皮γδT细胞作为一种特殊的T细胞在胰岛移植排斥反应中起着重要作用.     

阻断ICOS分子对小鼠移植胰岛功能的影响

目的:拟观察小鼠同种异体胰岛移植排斥反应中,可诱导共刺激分子(Inducible costimulator,ICOS)的表达情况及阻断其对排斥反应的影响。方法:供体为BALB/C小鼠,受体为C57BL/6。随机分成4组,每组10只。对照组:单纯胰岛移植,不给ICOSmAb处组;实验1、2、3组:分别于移植后1、3、5d腹腔内注射ICOSmAb50、100、200?g/kg。术后观察小鼠的血糖变化和移植胰岛组织病理学改变;采用微量全血3H-胸腺嘧啶掺入法检测单个核细胞在刀豆蛋白A刺激下的增值程度;流式细胞仪检测外周血T细胞亚群及ICOS在CD4+细胞/CD8+细胞表面的表达情况。结果:实验2组小鼠血糖维持正常时间和实验3组相同,差异无统计学意义,而与对照组和实验1组相比,差异有统计学意义;术后7d,对照组和实验1组单个核细胞在刀豆蛋白刺激下的增值程度明显强于实验2组和实验3组,差异有统计学意义;术后7d,对照组和实验1组ICOS分子表达上调明显,并且以CD4+细胞表面表达为主,与实验2组和实验3组相比,差异有统计学意义;术后7d,实验2组和实验3组小鼠肾被膜下胰岛素免疫组化染色强度均高于实验1组和对照组。结论:ICOS分子在小鼠同种异体胰岛移植排斥反应中表达上调,以CD4+细胞为主;ICOS单克隆抗体(ICOSmAb)通过阻断ICOS共刺激信号途径,可明显减轻小鼠胰岛移植后排斥反应的发生,显著延长移植胰岛有功能存活时间;ICOSmAb的最佳给药剂量为100μg/kg。     

CTLA-4Ig与ICAM-1单抗促进供者来源的未成熟树突状细胞诱导移植受体免疫耐受

目的:研究细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4融合蛋白(CTLA-4Ig)和细胞间黏附分子1(ICAM-1)单抗体内注射促进供者未成熟树突状细胞(imDC)诱导受者免疫耐受的可能机制.方法:实验分对照组(仅输注imDC)、CTLA-4Ig组、ICAM-1单抗组和CTLA-4Ig ICAM-1单抗联合组,每组均以2×106 C57BL/6供者imDC经尾静脉输注受鼠(雄性),自imDC输注之日起连续2周向受鼠腹腔内注射CTLA-4Ig或(和)ICAM-1单抗(0.1 mg/d),DC输注1周后4组均行异位心脏移植,于心脏移植后7 d和21 d,进行免疫学分析.结果:CTLA-4Ig或联合ICAM-1单抗治疗后均明显抑制同种imDC免疫的移植受体脾脏T细胞对同种抗原刺激的增殖反应,降低淋巴细胞毒活性,明显抑制血清和MLR反应中Th1细胞因子IL-2、IFN-γ的产生,显著提高Th2细胞因子IL-10的水平;明显降低心脏移植受体同种抗体IgG的产生.ICAM-1单抗治疗组的受体T细胞对同种抗原刺激的增殖反应虽有减弱,但与对照组相比没有显著的差异;对MLR反应上清和血清中IL-2的产生有明显的抑制,而对其他细胞因子的产生没有明显的作用.结论:CTLA-4Ig联合ICAM-1单抗治疗可通过诱导受体T细胞对同种抗原特异性的低反应性,抑制淋巴细胞毒活性和B细胞的体液免疫反应,并促进Th2细胞的极化来促进imDC诱导的同种抗原特异性的免疫耐受.     

兔骨髓基质细胞同种异体移植修复骨缺损的实验研究

目的 :观察同种异体骨髓基质细胞移植治疗骨缺损的效果。方法 :取新生新西兰大白兔四肢长管骨骨髓 ,分离后加入条件培养液体外培养 ,冻存复苏的细胞以明胶海绵吸附后回植于异体兔的桡骨缺损处作为实验侧 ,对侧以明胶海绵吸附生理盐水作为对照侧。分别于术后 2、4、8、 1 2周取材 ,观察其修复骨缺损的能力和免疫排斥反应。结果 :植入异体骨髓基质细胞明胶海绵复合体未见明显的免疫排斥反应 ;术后 1 2周实验侧全部骨性愈合 ,对照侧由纤维组织填充。结论 :同种异体骨髓基质细胞移植能有效地修复骨缺损     

抑制T细胞CDK9对TLR5靶向监测同种异体移植排斥的影响

目的 探讨抑制T细胞中的细胞周期蛋白依赖性激酶9(CDK9)对Toll样受体5(TLR5)靶向监测同种异体移植急性排斥的影响。 方法 Iodogen法碘化标记抗TLR5抗体(¹²⁵I-anti-TLR5),体外实验分析特异性及稳定性,脾细胞与¹²⁵I-anti-TLR5结合及解离实验分析脾细胞与标记物的亲和力;构建C57BL/6 -SCID小鼠T细胞介导同种异体移植急性排斥模型,LDC000067(CDK9抑制剂)(5 μmol/L)或等量PBS处理BALB/c小鼠T细胞并过继转输至模型小鼠,分为对照组(n=14)、抑制组(n=16),另有抑制组小鼠在注射¹²⁵I-anti-TLR5之前注射未标记抗TLR5抗体(10 mg/kg)为阻断组。观察抑制T细胞CDK9对同种异体移植物生存期影响及局部病理学改变;于对照组排斥高峰期时,对照组和抑制组小鼠尾静脉注射¹²⁵I-anti-TLR5,分析生物学分布、动态全身磷屏自显影显像及标记物的TLR5靶向性。 结果 抑制组移植皮片生存期(28.20±2.77)d,而对照组为(20.00±1.58)d;炎性浸润明显减少,TLR5表达增加。制备的¹²⁵I-anti-TLR5标记率达96.2%,体外稳定性良好(72 h仍保持在90%以上)。CDK9抑制剂体外处理后,受体鼠脾细胞与标记物的结合率增加,解离率降低(P均<0.05)。体内生物学分布研究表明,标记物主要经肝肾代谢,移植皮片放射性浓聚明显,抑制组72 h靶/非靶比值(3.70±0.16)较对照组(2.02±0.06)增高(P<0.05)。全身磷屏放射自显影结果显示,注射后48 h移植皮片显影,抑制组较对照组显像明显,且放射性浓聚持续时间长,阻断组未见明显放射性浓聚。 结论 抑制T细胞CDK9可明显延长同种异体移植物生存期,促进¹²⁵I-anti-TLR5同种异体移植物局部浓聚,有利于体内TLR5靶向同种异体移植急性排斥监测。     

兔同种异体肌腱移植的电镜观察

目的:观察分析同种异体肌腱(经深低温和普通低温处理)、自体肌腱、未经处理的同种异体肌腱移植后电镜下的微观变化特点,为同种异体肌腱移植提供理论依据。方法:新鲜自体肌腱和未经处理的同种异体肌腱切下后立即移植于相应受体,同种异体肌腱分别经普通低温(-26℃)、深低温冷冻(-80℃)处理10d后移植于相应受体,移植后3周,取移植腱段,透射电镜下观察。结果:深低温处理组:腱细胞增生活跃,数量多,细胞器发达,新生的细胶原原纤维较多,与自体肌腱移植组镜下观察结果比较接近;普通低温处理组:腱细胞数量少,细胞器功能不发达,仍能见到少量的新生的细胶原原纤维;未经处理的同种异体肌腱组:偶见腱细胞,未见到新生的细胶原原纤维,粗胶原原纤维排列紊乱、疏松。结论:经深低温冷冻处理的同种异体肌腱移植后与自体肌腱移植后的电镜观察结果接近,提示免疫排斥反应轻;普通低温处理的同种异体肌腱移植后电镜观察结果优于未经处理的同种异体肌腱移植,但又差于深低温冷冻处理的同种异体肌腱移植,提示仍存在明显的免疫排斥反应。     

同种异体近交系小鼠原位气管移植模型的建立

目的:建立近交系小鼠同种异体原位气管移植模型.方法:供受体体质量配对后,C57BL/6 和BALB/c小鼠随机分为2组,每组各10对,A组为C57BL/6(供体) → BALB/c(受体)组,B组BALB/c(供体) →BALB/c(受体)组,昆明种小鼠10对作为C组即KM(供体) →KM(受体)组. 利用颈前肌肉及周围组织被覆移植气管提供血供建立同种异体小鼠原位气管移植模型. 使用HE染色以及扫描电镜对同种异体小鼠原位气管移植模型进行评估,观察比较上皮积分、淋巴细胞计数以及无核软骨细胞/全部软骨细胞等指标.结果:A, B组全部存活,C组存活6只. A, C组移植气管均发生一定程度的排斥反应,B组无排斥反应发生. A, B, C三组上皮积分分别为: 1.094±0.120分,2.872±0.059分及0.995±0.444分;无核软骨细胞数/骨细胞总数比值分别为:(27.22±1.09)%, (10.60±1.01)% 及(31.40±6.43)%;淋巴细胞计数分别(20.18±1.31)个/HPF,≤5个/HPF及(22.55±4.87)个/HPF. A, B组及C,B组各项指标相比均有统计学意义,而A,C组相比则差异无统计学意义;且C组各数值离散程度均大于A组.结论:成功建立了C57BL/6(供体) → BALB/c(受体)小鼠原位气管移植模型. 近交系及封闭群模型均能反应移植气管的各种病理生理变化,但封闭群模型稳定性较近交系差.     

B7特异性RNA干扰对皮肤移植的影响

目的探讨RNA干扰技术阻断B7／CD28共刺激信号对小鼠异体皮肤移植排斥反应的影响。方法设计并合成B7特异性siRNA,在脂质体的介导下转染树突状细胞,转染后72h收集细胞,用蛋白印迹法检测B7-1、B7-2蛋白的表达。在小鼠异体皮肤移植前7d,经静脉将转染B7特异性siRNA的DC输入小鼠体内（DC转染组）,同时设立同种异体移植对照组、同系移植对照组、环孢素A（CsA）治疗组（术后每日皮下注射CsA5mg／kg）和未转染DC组（移植前输注未转染DC）,观察各组移植皮瓣的存活时间和排斥反应情况,并用MTT法检测混合淋巴细胞增殖反应,术后1个月观察迟发性超敏反应情况。结果Western Blot结果显示转染72h后,siRNA1对B7-1蛋白表达的抑制率为（77.2±6.26）％;siRNA2对B7-2蛋白表达的抑制率为（73.3±5.42）％。与同种异体移植对照组和未转染DC组比较,DC转染组移植皮瓣成活时间明显延长（P〈0.01）,组织排斥反应程度较轻,混合淋巴细胞反应和DTH反应显著降低（P〈0.01）。结论聊特异性siRNA可明显抑制树突细胞B7基因的表达,以阻断B7／CD28共刺激通路,抑制小鼠皮肤移植排斥反应,为进一步研究siRNA诱导免疫耐受提供了新方法。