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1.
目的探讨巢式PCR法检测急性淋巴细胞白血病(ALL)微小残留细胞(MRD)在评价疗效、预测复发、判断预后的意义。方法对28例ALL的患儿采用巢式PCR法扩增T细胞受体TCR的Vδ2─Dδ3重排片段,检测急淋患儿的骨髓(BM)及外周血(PB)标本。结果在完全缓解(CR)后一段时间内仍有MRD存在,随访8例中,CR后MRD存在但渐少者呈持续缓解,而CR后MRD持续阳性或由阴转阳,提示复发机会增大。结论巢式PCR检测急淋缓解期MRD对预测复发、指导治疗有重要意义。  相似文献   

2.
目的 探讨急性淋巴细胞白血病(简称急淋,ALL)微小残留病(MRD)与肿瘤多药耐药基因mdrl-mRNA表达的关系。方法 选择本院住院及门诊的ALL患儿33例,采集初治前及完全缓解(CR)后不同时期的骨髓标本2ml,提取DNA及RNA。用聚合酶链反应(PCR)法扩增T细胞受体γ链(TCRγ)单克隆性基因重排,以确定MRD的存在;同时采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法对同一份标本进行mdrl-mRNA表达的检测,将具有阳性特异性条带的电泳胶片用GQS-960图像处理系统软件进行定量分析,计算mdrl与β2-MG的比值,以mdrl/β2-MG比值≥0.3定为阳性表达。CR后按时进行强化治疗,每隔3-6个月对MRD DNA及mdrl-mRNA作动态观察。结果 (1)33例ALL患儿初诊时TCRγ单克隆性基因重排阳性率为82%(27/33),完全缓解(CR)率为91%(30/33),CR时MRD阳性率为80%(24/30)。(2)随访观察6-18个月MRD阳性率呈逐渐下降趋势,而mdrl-mRNA阳性表达率呈逐渐上升趋势。(3)根据随访结果,将处于CR期的28例患儿分为4个组:MRD及mdrl均阳性组(1组)7例ALL患儿有6例复发;MRD及mdrl均阴性组(4组)ALL复发数为0;MRD阳性而mdrl阴性组(2组),8例中有2例复发;MRD阴性而mdrl阳性组(3组)4例中有1例复发。1组与4组比较,P<0.05,其他各组间比较差异均无显著意义。结论 (1)ALL完全缓解后随着CR时间延长及按时进行强化治疗,MRD阳性率逐渐下降,而mdrl阳性率却呈上升趋势,两者呈负相关;(2)MRD与mdr1均阳性者ALL复发率高,提示预后差;而MRD与mdr1均阴性者复发率低,预后较好;(3)CR期按时进行MRD及mdr1的监测,可为临床化疗方案个体化提供依据,有利于微小残留白血病细胞(MRLC)的彻底清除。  相似文献   

3.
目的探讨在儿童急性淋巴细胞性白血病(ALL)患儿中进行胞浆糖皮质激素受体(GR)检测及其与治疗效果的相关性,探讨GR能否作为判断儿童ALL预后的因素。方法利用GR的单克隆抗体,通过流式细胞仪检测48例初治ALL患儿的骨髓液(起病时和疾病获缓解时)和15例随机长期持续缓解(CCR)状态下ALL患儿骨髓液及30例正常儿童外周血液单个核细胞胞浆GR表达水平,分析其与疾病疗效的关系。并对前期实验组进行临床追踪,分析前期实验数据与CCR或复发的关系。结果初发ALL患儿起病时GR与治疗后是否获得缓解(CR)无相关性(P=0.56);起病时GR表达水平与CR时GR表达水平无统计学差异(P=0.10);与疾病缓解时的骨髓微小残留病(MRD)指标无相关性(P=0.54)。患儿CR时其GR与正常对照组GR表达水平无统计学差异(P=0.21)。对前期实验组追踪结果显示,起病时GR表达水平与CCR或疾病复发不存在统计学差异(P=0.45);15例CCR患儿GR表达水平,与正常对照组比较,二者无统计学差异(P=0.28)。结论ALL患儿起病时其基础水平胞浆GR表达与治疗后缓解率、缓解时MRD水平、疾病长期持续缓解或复发无相关性,不能作为独立判断疾病的预后因素。而ALL患儿缓解及长期持续缓解时其胞浆GR与正常儿童GR表达水平无差异,故动态监测胞浆GR表达水平意义不大。  相似文献   

4.
白血病儿童外周血及骨髓中WT1基因表达的临床意义   总被引:5,自引:1,他引:4  
目的 比较外周血 (PB)和骨髓 (BM)标本中WT1基因的表达在儿童白血病微小残留病(MRD)检测中的意义。方法 采用筑巢式逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR) ,同步动态观察了 34例急性白血病 (AL)患儿的PB及BM单个核细胞WT1基因表达的相对水平。结果  (1) 34例AL患儿的BM中WT1阳性表达为 2 7例 ,表达水平 0 784± 0 311;PB中为 2 6例 ,表达水平为 0 734± 0 2 95 ,两者的阳性率及表达水平差异无显著性。 (2 )完全缓解后PB与BM中WT1表达水平明显下降。PB中WT1表达阳性的 5例均复发 ,转阴的 13例中有 3例复发 ,P =0 0 0 6 5 ,差异有显著性 ;而BM标本中WT1表达阳性与转阴者之间差异无显著性。结论 动态观察儿童急性白血病WT1基因的改变 ,可监测MRD ,预测复发。而PB在MRD监测中比BM特异性更强 ,临床应用更方便。  相似文献   

5.
本文运用PCR技术,以IgH和TCRγ基因重排作为标志,检测了40例急性淋巴细胞白血病(ALL)微小残留病(MRD),其中有7例初治未缓解、12例部分缓解(PR)、13例完缓解(CR)的ALL患儿MRD检测阳性,另有8例(1例PR、7例CR)检测MRD阴性。文中发现CR时间越长,MRD阳性率越低,反之,CR时间越短,MRD阳性率越高。提示MRD可作为白血病治疗效果及判断预后的一个重要指标,CR后,MRD检测阳性有复发的危险,长期的MRD检测阴性,可作为临床停药观察的一个重要指标。PCR方法准确,先进,适于广泛推广应用。  相似文献   

6.
【摘要】目的 阐明神经母细胞瘤(NB)患儿骨髓微量肿瘤病灶(minimal residual disease MRD)的检测方法及其结果对预后的影响。方法 应用CD45-FITC/CD81-PE/CD56-PECy5单抗组合通过流式细胞术(FCM)检测了人NB细胞株TGW的免疫表型并确定本实验室FCM的敏感度;比较BM细胞形态学检查与FCM检测骨髓中的CD45-/ CD81+/ CD56+细胞,分析病程中MRD检测与预后的关系。结果 ⑴ TGW细胞株表达CD56和CD81,不表达CD45,本实验室FCM敏感度为1/104。⑵61例患者共144份标本中细胞形态学提示BM转移者23份;FCM显示表达CD45-/ CD81+/ CD56+细胞的标本数62份,BM细胞形态学检测方法和FCM阳性检出率的比较有显著性差异,(P﹤0.01 X2检验)。⑶比较平均化疗4个疗程后MRD结果与预后关系:31例患儿初诊时BM MRD检测阳性,化疗4个疗程后11例患儿MRD转阴,随访至今无复发及进展,DFS中位时间23mos;另外20例化疗4个疗程后仍为阳性,其中11例复发或进展,包括1例死亡,两组比较有显著性差异(P﹤0.01)。⑷化疗后移植患儿PBSC采集前骨髓MRD结果与预后的相关性:共有19例患儿接受化疗后PBSCT,13例患儿采集时骨髓MRD为阴性,其中2例复发,自移植后始DFS中位时间9mos;6例患儿采集时骨髓MRD为阳性,5例复发,两组比较有显著性差异,(P﹤0.05)。结论 运用FCM检测NB患儿骨髓中的微量肿瘤细胞敏感度高、特异性强,可协助初诊患儿的诊断、评估临床疗效,骨髓中的微量肿瘤细胞残留与神经母细胞瘤预后相关.  相似文献   

7.
目的探讨急性淋巴细胞白血病(ALL)IgH和Vδ2Sδ3基因重排微小残留病(MRD)值在判断预后的意义.方法运用极限稀释法对ALL完全缓解期(CR)后不同时期的骨髓标本进行IgH和Vδ2Dδ3基因重排的定量检测.结果24例初诊时存在IgH或Vδ2Dδ3基因重排的ALL患者CR后不同时期51份骨髓标本中,MRD>0.1%者3例,其中2例复发,1例失访,复发率为75%.MRD为0.002%~0.1%者6例,1例复发,复发率为17%.MRD<0.002%者15例,无复发.复发组3例MRD均值为0.239%,未复发组20例MRD均值为0.004%.复发组MRD明显高于未复发组,P<0.05.结论 ALL时IgH和Vδ2Dδ3基因重排的定量检测的MRD增高,则病人的复发危险率随之增高.加强化疗后化疗药物对白血病细胞的杀伤效应使MRD减少,CR后MRD定期监测对指导化疗药物的选择、观察疗效、判断预后有指导意义.  相似文献   

8.
目的:研究监测微小残留白血病(MRD)在B系急性淋巴细胞白血病(ALL)患儿治疗中的作用。方法:回顾性研究了2001年9月1日至2005年4月31日,采用ALL-XH-99方案治疗的B系ALL患儿中进行MRD监测的患儿共124例。用四色多参数流式细胞仪监测ALL患儿治疗过程中不同时间点的MRD。结果:在124例进行过MRD监测的B系ALL患儿中,其中MRD<0.01%、0.01%~0.1%和>0.1%的分别有103例、13例和8例,其5年无复发生存率(RFS)分别为(88.9±3.9)%、(70.0±14.5)%和0%,而5年无事生存率(EFS)分别为(82.4±4.4)%、(21.2±18.0)%和0%,两者均P<0.01;将首次CR后半年内MRD检查分成阴性(<0.01%)和阳性两组,其5年RFS分别为(87.7±4.1)%和(58.3±14.2)%,(P<0.01);5年EFS分别为(80.7±4.6)%和(25.6±13.8)%(P<0.01);首次CR后半年以后MRD检查阴性和阳性两组的5年RFS分别为(92.0±3.6)%和(48.5±15.5)%(P<0.01)。多因素分析显示结果显示诱导缓解后MRD、泼尼松诱导窗口反应、第19天骨髓象是否达M-1级骨髓象和是否检出BCR-ABL或MLL-AF4融合基因对患儿治疗过程中是否发生复发有预后价值(P<0.05)。结论: 在B系ALL患儿治疗过程中,无论在诱导缓解达到CR时,还是在随后的治疗过程中,监测MRD水平对于评估ALL患儿疗效有重要意义。  相似文献   

9.
目的:微量残留病(MRD)监测是儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)早期治疗反应中最重要的预后因素之一。目前常用的MRD检测的方法主要有流式细胞术和PCR技术,但单用一种方法均不能为所有的患儿找到合适的监测标记,该研究探讨两种方法联合应用是否能为大多数ALL患儿找到合适的MRD监测标记。方法:联合应用流式细胞术和PCR技术筛选上海儿童医学中心2001年9月至2003年10月126例新发ALL患儿骨髓标本的异常免疫表型及抗原受体基因重排。结果:①106例B系-ALL患儿骨髓标本用四色流式细胞术进行了MRD免疫表型标记的筛选,其中11例标本未筛选出监测标记,阳性率为89.6%;有1个监测标记的标本为11例(11.6%),至少有两个标记的标本占88.4%。②PCR技术筛选27例ALL骨髓标本抗原受体基因重排,26例至少有一个标记(占96.3%),其中9例(34.6%)骨髓标本只有一个监测标记,17例(65.4%)至少有两个监测标记。在T系-ALL骨髓标本中,以TCRVγⅠ-Jγ1.3/2.3阳性最多,双等位基因重排发生阳性率较高;系性交叉抗原表达在B系-ALL骨髓标本中表达较高,达57.1%(4/7)。③两种方法联用能为121例(96.0%)的患儿提供合适的筛选指标。结论:流式细胞技术检测异常免疫表型与PCR技术检测抗原受体基因重排联用,可为绝大多数的ALL患儿找到合适的MRD监测指标;在抗原受体基因重排中,存在系性交叉抗原表达及双等位基因重排。[中国当代儿科杂志,2009,11(4):246-250]  相似文献   

10.
目的 研究采用实时荧光定量聚合酶链反应 (RQ-PCR)技术检测具有tal-1缺失的急性T淋巴细胞白血病(T ALL)患儿骨髓微小残留病 (MRD)水平的可行性,并探讨不同时间点MRD水平在预后和临床治疗干预上的意义。方法 采用最常见的tal 1缺失断裂点sildb1-tal1db1,对 50例T-ALL患儿初治标本进行阳性筛选;应用RQ-PCR技术检测所有阳性患儿初治标本的敏感度,并对这些患儿化疗达完全缓解(CR)及其后不同时间点的骨髓标本进行MRD定量检测,并以极限稀释法检测结果进行比较;对上述两种方法分别检测出的结果进行相关回归分析。结果  ( 1 )在 50例T-ALL患儿中,共检测出 10例阳性患儿; (2)采用RQ-PCR技术和极限稀释法分别检测患儿CR期及其后各个时间点的 28份标本,有 24份标本两种方法检测结果均大于 10-5,两种方法检测结果的相关性很好(r=0 898,P<0.001); (3)在规律治疗的 8例患儿中,CR时骨髓MRD水平高于 10-4的 3例患儿皆在化疗过程中复发,而低于 10-4的 5例一直未复发。结论 RQ-PCR技术是一项特异性强,重现性好、精确快速的MRD定量检测手段。不同时间点的MRD水平升高对预后的意义不同,对及时调整治疗方案、改善预后有重要价值。  相似文献   

11.
目的 探讨儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)诱导治疗完全缓解后微小残留病(MRD)与预后的关系.方法 回顾性分析内蒙古自治区人民医院小儿血液科2015年06月-2018年12月期间收治的60例ALL患儿,使用流式细胞术检测患儿第33天MRD,追踪至形态学复发或随访截止日期.定义MRD≥104为微小残留病阳性.结果 60例...  相似文献   

12.
目的对88例儿童急性B淋巴细胞白血病(B—ALL)治疗的长期随访结果进行分析,探讨微小残留病(MRD)监测下儿童B—ALL的无事件生存率(EFS)。方法回顾性分析2005年1月.2008年5月接受儿童ALL诊疗建议(第三次修订草案)治疗的88例B.ALL患儿,应用流式细胞术(FCM)检测MRD,采用Kaplan—Meier方法评估患儿EFS,各临床危险度分组间患儿EFS差异用Logrank检验。结果88例患儿骨髓完全缓解(CR)率为97.7%,2年、3年、4年、5年EFS率分别为87.5%、86.4%、81.8%、77.2%,标危、中危、高危5年EFS率分别为86.2%、84.6%、63.1%。5例死亡,9例复发(10.5%),复发中位时间为23(3—59)个月。结论采用儿童ALL诊疗建议(第三次修订草案)治疗CR率较高,在MRD监测下指导治疗,总体上B—ALL患儿的5年EFS提高。  相似文献   

13.
目的探讨微小残留病(MRD)在儿童急性白血病的临床意义。方法对1996年2月~2005年3月在我科正规治疗的30例急性白血病患儿采用外周血,利用单克隆抗体直接免疫荧光标记法和流式细胞仪多参数分析技术进行MRD的检测,并动态随访。结果在已停药的14例患儿中,7例MRD持续阴性或由阳转阴,7例由阴性转阳性,其中2例复发;在维持治疗的16例中,缓解后MRD持续阴性者6例,缓解时MRD阳性者8例(其中2例分别于缓解后3月、8月复发,4例经治疗后转阴),缓解时MRD可疑阳性2例(其中1例转阳性)。结论诱导治疗能杀死大量的白血病细胞,但尚未彻底清除MRD;缓解期一定时间内的病人MRD阳性不一定复发;维持治疗的后期或停药后MRD持续阳性,则有可能复发,MRD持续阴性的患儿预后较好。因此,连续监测MRD对指导临床治疗、早期预测复发有重要意义。  相似文献   

14.
目的 分析小儿急性淋巴细胞白血病(急淋)缓解时和缓解不同时期微小残留病(MRD)的水平与复发的相关性。方法:用极限稀释定量PCR法和巢式PCR法追踪检测MRD,数据处理用Kaplan Meier方法及COX回归模型等。结果:46例急淋患儿缓解时MRD值与骨髓复发呈正相关(r=0.4396,P<0.01),骨髓复发组MRD值为7.359×10-3,与未复发组MRD值(3.954×10-4)差异有显著性(P<0.01);缓解期MRD持续阳性或由阴性转为阳性者,骨髓复发的相对危险度明显增高(P<0.05)。结论:缓解时MRD水平及缓解期MRD定性结果可作为估计急淋预后的一个重要指标,动态追踪检测MRD是指导治疗和预防复发的有效手段。  相似文献   

15.
目的探讨儿童B系急性淋巴细胞白血病(B-ALL)患儿骨髓微小残留病(MRD)及检测,预测预后的可能性。方法应用四色荧光抗体标记法通过流式细胞仪检测儿童B-ALL的MRD。对41例MRD阳性患儿加强化疗强度,多次连续监测,进行追踪分析。结果41例MRD阳性患儿中复发6例,复发患儿的MRD均>0.1%,MRD出现阳性的时间均>3个月,临床分型都属高危型。MRD阳性患儿经1个疗程强烈化疗转阴27例,其中1例复发,其他均在随访中,中位随访时间24.8个月;MRD阳性2个疗程转阴14例,复发5例,缓解患儿中位随访时间22.8个月。结论MRD对B-ALL预后监测有重要意义,MRD阳性时间越长对预后越不利,加强对MRD阳性患儿的治疗对改善预后有积极作用。  相似文献   

16.
采用更加敏感的半重叠式TCRγ特异性引物的PCR方法,对28例ALL初治、CR及BMT患儿进行检测,并用消化煮沸及酚抽提法分别对所有骨髓标本进行DNA提取,将PCR结果进行比较。结果表明:消化煮沸法用于微量标本的DNA提取优于酚抽提法,28例ALL患儿中16例检出TCRγ特异性条带,MRD组18例,阳性检出12例,其中免疫分型标记为B细胞型的4例,占25%,免疫标记为T细胞型者全部出现TCRγ阳性条带。并对该引物的语系特异性及双克隆重排问题进行了理论探讨。  相似文献   

17.
目的 探讨急性淋巴细胞性白血病(简称急淋)缓解时和缓解期微小残留病(MRD)的水平和变化以及与发生中枢神经系统白血病(CNSL)的关系。方法 用改良一步煮沸法提取脑脊液DNA,酚/氯方法提取骨髓DNA,巢式聚合酶链反应(PCR)法和极限稀释定量PCR法追踪检测微小残留病,数据处理用Kaplan-Meier方法及COX回归模型等。结果 46例急淋患儿缓解时骨髓MRD定量值与中枢神经系统白血病的发生呈正相关(COX回归模型,γ=0.3496,P<0.05),脑脊液MRD阳性可预示发生CNSL的相对危险度(P<0.05);缓解期脑脊液MRD持续阳性或由阴性转为阳性,发生中枢神经系统白血病的相对危险度明显增高(P<0.05)。结论 缓解时骨髓MRD定量值和脑脊液MRD定性结果以及缓解期间脑脊液MRD的变化可以预示CNSL的危险度,MRD检测对判断急性淋巴细胞性白血病的预后和指导治疗有重要意义。  相似文献   

18.
目的 探讨并研究实时定量聚合酶链反应(RQ—PCR)技术定量检测小儿急性淋巴细胞白血病(ALL)微小残留病(MRD)的临床适用性和临床价值。方法 以免疫球蛋白重链(IgH)基因重排作为ALL的肿瘤标志,应用RQ—PCR、胚系探针策略,定量检测了34例B细胞ALL(B—ALL)患儿的MRD,并对其中的16例患儿进行了缓解期MRD的定量动态追踪观察。结果在34例B—ALL患儿的初治标本中IgH基因单克隆重排16例,对16例单克隆IgH重排靶基因进行序列分析发现,V片段使用最频繁的是V3家族,J片段使用最频繁的是J4和J6。在16个靶基因中,RQ—PCR的检测敏感度有9例为10-4,6例为10-5,1例为10-3,非特异性扩增见于6例患儿。16例初治患儿的标准曲线相关系数均为0.99以上,斜率均值为-3.34±0.37,截距均值为24.30±2.95。对16例患儿随访期样本的MRD动态追踪研究发现,复发患儿的MRD水平较高且复发前有动态增加。诱导化疗结束时的MRD水平与ALL高危因素无明显相关性(P>0.05)。结论 研究表明,RQ—PCR技术胚系探针策略检测ALL患儿的MRD具有临床适用性,随访期标本MRD的定量检测及动态追踪监测具有临床价值。  相似文献   

19.
目的探讨急性淋巴细胞性白血病(ALL)患儿诊断时胞质糖皮质激素受体(GR)表达水平与疗效的相关性,探讨GR能否作为判断儿童ALL预后的因素之一。方法2005年8月1日-2007年9月30日,本院利用GR单克隆抗体,通过流式细胞仪检测147例初治ALL患儿诊断时骨髓液单个核细胞GR表达水平,并进行临床资料追踪,应用SPSS 13.0软件分析GR表达水平与疾病各治疗阶段疗效的相关性。结果147例患儿治疗后缓解(CR)143例,12例复发。ALL患儿起病时GR表达水平与泼尼松窗口治疗结果是否敏感无相关性(F=1.769 P=0.174);与诱导治疗第19天骨髓检查结果无相关性(F=0.411 P=0.664);与诱导治疗结果是否获得疾病缓解无相关性(t=1.670 P=0.096);与疾病获得缓解时按微小残留病(MRD)水平分组无相关性(F=2.040 P=0.134);与临床随访中疾病处于缓解状态或复发无相关性(t=1.471 P=0.143);但与疾病治疗失败(诱导治疗不缓解和疾病复发)有相关性(t=2.128 P=0.035)。在随访时间超过1 a的75例患儿中(中位随访时间17个月),9例复发,患儿起病时GR表达水平与疾病的长期持续缓解或复发无相关性(t=1.848 P=0.069)。结论GR尚不能作为独立判断疾病预后的因素,但有可能作为指导治疗的指标之一。  相似文献   

20.
小儿急性淋巴细胞白血病IgH和Vδ_2Dδ_3基因重排的研究   总被引:4,自引:0,他引:4  
目的 探讨IgH和Vδ2Dδ3基因重排在初诊儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)中的分布频率及其在中枢神经系统白血病(CNSL)早期诊断与脑脊液(CSF)微量残留病(MRD)监测中的意义。方法 对初诊ALL患者的骨髓标本及不同病期CSF标本采用聚合酶链反应(PCR)检测IgH基因重排和巢式聚合酶链反应(Nested-PCR)检测Vδ2Dδ3基因重排。结果 32份ALL患者骨髓标本中有23份存在克隆特异性IgH基因重排和/或Vδ2Dδ3基因重排。在骨髓标本存在异常基因重排的诱导缓解治疗期患儿的23份CSF中,9份检出Vδ2Dδ3基因重排,4份检出IgH基因重排。而完全缓解期患儿的37份CSF中,3份检出IsH基因重排,7份检出Vδ2Dδ3基因重排。结论 在所检初诊ALL患者的骨髓标本中,IgH重排片段的阳性检出率为47%,Vδ2Dδ3基因的阳性检出率为38%;ALL患者脑脊液中ISH和Vδ2Dδ3基因重排的PCR动态监测较CSF常规、生化及细胞学检测更灵敏,更有助于CNSL的早期诊断,对CNSL的预防及预后的判断有指导意义。  相似文献   

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