短暂性前脑缺血-再灌注后小鼠海马星形胶质细胞bcl-2和bax蛋白表达的动态变化及抗呆Ⅰ号的影响

应用免疫组织化学方法观察抗呆Ⅰ号对小鼠前脑缺血再灌注损伤海马星形胶质细胞表达bcl-2和bax动态变化的影响,探讨其与缺血性神经元的联系.结果发现:前脑缺血再灌注3～7 d bcl-2表达呈强阳性.再灌注7～10 d bax表达呈强阳性.用药组bcl-2和bax的表达较模型组均减弱.而正常对照组和假手术组无bcl-2和bax的表达.且星形胶质细胞表达bcl-2和bax的强弱与神经细胞的存亡有关.本实验提示:前脑缺血再灌注后海马反应性星形胶质细胞表达bcl-2和bax呈动态变化,抗呆Ⅰ号对缺血再灌注损伤星形胶质细胞和神经细胞有良好的保护作用.     

大鼠面神经高位损伤后面神经核区磁共振波谱成像

目的：探讨质子磁共振波谱成像（1 H-MRS）对大鼠面神经高位损伤后面神经元细胞凋亡检测的价值。方法20只正常 SD大鼠（对照组）和20只面神经高位损伤 SD 大鼠（实验组）分别行1 H-MRS 并测量面神经核区 N-乙酰天门冬氨酸（NAA）、肌酸（Cr）和胆碱（Cho）的峰下面积,比较两组间 NAA、Cho、NAA/Cr 及Cho/Cr 的差异。1 H-MRS检查后取对照组2只与实验组4只行面神经核苏木素-伊红（HE）、甲胺苯蓝（TB）和末端脱氧核苷酸转移酶介导的 dUTP 原位切口末端标记（TUNEL）染色。结果与对照组相比,实验组 NAA（t＝3．159,P＜0．05）及 NAA/Cr（t＝3．782,P＜0．05）明显降低,同时实验组面神经核区 HE、TB和TUNEL染色显示有大量凋亡细胞。结论1 H-MRS可以作为一种无创性评价面神经损伤后面神经核区神经元细胞凋亡的方法。     

异丙酚对谷氨酸诱导大鼠脊髓背角星形胶质细胞凋亡及相关基因表达的影响

目的 观察异丙酚对谷氨酸诱导大鼠脊髓背角星形胶质细胞的凋亡和相关基因bcl-2、bax蛋白表达变化的影响。方法 取新生2～3d Wistar大鼠T12～L5脊髓背角星形胶质细胞，原代纯化培养3周。将细胞分为正常对照组（C组）、乳剂对照组（L组）、谷氨酸对照组（G组）、异丙酚对照组（P组）、谷氨酸和异丙酚合用组（GP1、GP2、GP3组）。加药后培养24h免疫细胞化学法观察bcl-2和bax蛋白平均吸光度（A）值及细胞形态学变化，流式细胞仪检测星形胶质细胞凋亡率。结果 与C组比较，G组、GP。组细胞发生大量凋亡（均P〈0.01），bax蛋白阳性表达，bax蛋白A值升高（均P〈0.01），bcl-2蛋白阴性表达，bcl-2蛋白A值降低（均P〈0.01）。与G组比较，GP2组、GP3组凋亡降低（P〈0.05，P〈0.01），bcl-2蛋白阳性表达，bcl-2蛋白A值升高（P〈0.05，P〈0.01），bax蛋白阴性表达，bax蛋白A值降低（P〈0．05，P〈0.01）。结论 异丙酚通过增强bcl-2蛋白表达，显著抑制谷氨酸诱导的星形胶质细胞凋亡，其抑制程度与剂量有关。     

胆管癌组织中自发性细胞凋亡和bcl-2/bax表达的状况及意义

目的：研究胆管癌组织中自发性细胞凋亡和bcl-2/bax基因表达的状况及意义。方法：TUNEL法原位检测凋亡细胞，免疫组化检测bcl-2和bax蛋白表达。结果：40例胆管癌标本自发性细胞凋亡指数（AI）的中位值为7．89％，高／中分化和无淋巴结转移胆管癌AI分别高于低分化和淋巴结转移者（P＜0．01），胆管癌组织bcl-2和bax蛋白表达率分别为７２．５％（２９／４０）和５７．５％（２３／４０），与癌旁正常胆管壁组织比较差异显著（Ｐ＜０．０１），高／中分化胆管癌bcl-2蛋白表达率高于低分化胆管癌（P＜0．01），bcl-2表达阳性胆管癌AI低于阴性，bax阳性高于阴性（P＜0．01），结论：胆管癌细胞仍保胃凋亡机制，bcl-2凋亡途径参与了胆管癌的发生，发展过程，AI和bcl-2蛋白表达可作为判断胆管癌恶性程度的指标。     

瘦素对缺血缺氧损伤脑星形胶质细胞凋亡的影响

目的 研究瘦素对缺血缺氧/复氧损伤星形胶质细胞凋亡的影响及其作用机制.方法 制作缺血缺氧大鼠脑皮质星形胶质细胞损伤模型,MTT法检测星形胶质细胞活力;采用Annexin V-FITC试剂盒检测星形胶质细胞凋亡;RT-PCR和Western blot方法检测凋亡相关基因bcl-2、bax、caspase-3的表达.结果 与缺血缺氧损伤组比较,瘦素干预组星形胶质细胞存活率升高(P<0.01)、凋亡率下降(P<0.01);抑凋亡基因bcl-2 mRNA和蛋白表达水平上调(P<0.01),促凋亡基因bax、caspase-3 mRNA和蛋白表达水平下调(P<0.01),呈剂量依赖性.结论 瘦素能够使凋亡相关基因bcl-2表达上调、bax和caspase-3表达下调,从而抑制缺血缺氧损伤星形胶质细胞发生凋亡.     

异丙酚对谷氨酸诱导大鼠脊髓背角神经元和星形胶质细胞损伤的影响

目的 观察不同浓度异丙酚对谷氨酸诱导大鼠脊髓背角神经元和星形胶质细胞损伤的影响。方法 取出生1～3d Wistar大鼠T12～L5脊髓背角神经元和星形胶质细胞，原代混合培养2周。将细胞随机分为7组（n=9）：正常对照组（C组）加入Hanks液；乳剂对照组（L组）加入乳剂0．2ml／L；谷氨酸组（G组）加入谷氨酸至终浓度100μmol／L；异丙酚组（P组）加入异丙酚至终浓度50μmol／L；CP1，GP2，GP3组先加入谷氨酸至终浓度100μmol／L，30min后分别加入异丙酚至终浓度5，25，50μmol／L。培养24h后取各组细胞上清液检测IL-1β和TNF-α含量，取各组细胞检测MDA含量和SOD活性，流式细胞仪检测神经元和星形胶质细胞凋亡，瑞氏染色观察细胞形态变化。结果 与C组比较，G组和CP1组神经元和星形胶质细胞凋亡增加，未凋亡的星形胶质细胞被激活增生肥大，IL-1β和TNF-α浓度升高（P〈0.01），MDA含量增加，SOD活性显著降低（P〈0．01），两组比较差异无显著性（P〉0．05）。与G组比较，GP2组和GP1组凋亡细胞减少，星形胶质细胞无明显增生肥大，IL-1β和TNF-α浓度降低，MDA含量降低，SOD活性增加（其中GP2组P〈0．05，GP3组P〈0．01）。C组与L组比较差异无显著性（P〉0.05）。结论 异丙酚可显著抑制谷氨酸引起的大鼠脊髓背角神经元和星形胶质细胞的损伤，其抑制程度与剂量有关。     

FK506对大鼠面神经损伤后面运动神经元凋亡及bcl-2,bax表达的影响

目的 研究FK506对大鼠面神经损伤后运动神经元凋亡及bcl-2和bax表达的影响.方法 将40只Wistar大鼠随机分为实验组和对照组,制作大鼠单侧面神经总干切断模型,实验组每日腹腔注射FK506注射液,对照组给予相同剂量的盐水,在术后各时间点,通过Nissl染色观测面神经核神经元的形态学变化;TUNEL检测细胞凋亡;免疫组化检测bcl-2和bax表达的变化.结果 面神经损伤后,FK506组与盐水组相比较,FK506组运动神经元凋亡明显减少,bcl-2表达增加,bax表达降低.结论 FK506有助于增加面神经损伤后运动神经元bcl-2的表达、降低bax表达,抑制细胞凋亡,为药物在神经损伤疾病的临床应用提供了实验依据.     

辛伐他汀对缺血再灌损伤心肌细胞凋亡及bcl-2／bax基因蛋白的影响

目的：辛伐他汀对缺血再灌心肌细胞凋亡及bcl-2／bax基因蛋白的影响。方法：20只大白兔随机分为2组，辛伐他汀治疗组（灌服辛伐他汀15mg／kg，每日1次，共7天）及对照组（灌服等量生理盐水，每日1次，共7天）；采用结扎左冠状动脉前降支30分钟后再灌注120分钟制备心肌缺血再灌模型；实验结束前取心脏标本，进行细胞凋亡TUNEL法检测以及免疫组化检测心肌组织中bcl-2、bax蛋白水平。结果：①治疗组心肌细胞凋亡指数（AI）明显低于对照组（P〈0．05）；②治疗组心肌组织bcl-2蛋白明显高于对照组（P〈0．05），bax蛋白明显低于对照组（P〈0．05）。结论：辛伐他汀可抑制细胞凋亡，减轻心肌损伤，其抑制凋亡可能是通过上调bcl-2蛋白表达和下调bax蛋白表达来实现的。     

粉防己碱对血管内皮剥脱后再狭窄的预防作用及其分子机制研究

目的：研究球囊损伤后血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells,VSMC)凋亡机制及粉防己碱（tetrandrine,Tet)对VSMC凋亡及凋亡相关基因表达的影响。方法：采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的三磷酸脱氧尿嘧啶缺口末端标记法和免疫组化技术检测球囊务内皮后VSMC凋亡及bcl-1,bax蛋白表达的变化。结果：球囊损伤后血管壁增生，血管中膜和内膜出现的细胞凋亡较少，Tet可明显促进VSMC凋亡，降低球囊损伤后内膜及中膜厚度，增加管腔面积（P＜0．05），促进bax蛋白的表达，抑制bcl-2蛋白的表达（P＜0．05），结论：bax,bcl-2参与了球囊损伤内皮后血管平滑肌细胞凋亡的调节，Tet可能通过对bax,bcl-2基因表达的调节，增加VSMC细胞凋亡，防止血管再狭窄。     

星形胶质细胞对PC12细胞的分化及突触素和生长相关蛋白43表达的影响

目的：体外观察星形胶质细胞对PC12细胞向神经元分化的作用，以及对PC12细胞突触素和生长相关蛋白43（GAP-43）表达的影响，探讨星形胶质细胞促进非神经元细胞形成神经突触的可能性。方法：采用PC12细胞与新生大鼠皮层组织来源的星形胶质细胞共同孵育，分为共育组和对照组，应用免疫荧光技术检测星形胶质细胞对PC12细胞分化、神经元特异性烯醇化酶（NSE）、突触素和GAP-43表达的影响。结果：共育组培养4d，大部分PC12细胞已具备神经元形态，PC12有突细胞／总细胞数目比率、突起长度和突触数目明显高于对照组（P〈0．01）；NSE、突触素和GAP-43免疫荧光染色强阳性的PC12细胞明显增多，与对照组比较具有统计学意义（P〈0．01）。结论：提示星形胶质细胞有助于促进非神经元细胞形成神经突触。     

切断面神经干后大鼠面神经元bcl-2、bax基因表达变化及意义

目的 观察面神经干切断后面神经元ｂｃｌ－２、ｂａｘ基因表达与面神经元调亡的关系。方法 采用大鼠面神经干切断模型,应用免疫组织化学方法观察面神经干切断后面神经元内ｂｃｌ－２、ｂａｘ基因表达变化和对面神经元凋亡的影响。结果 面神经干切断后可以导ｂｃｌ－２、ｂａｘ基因表达的明显变化及面神经元的凋亡。结论 ｂｃｌ－２、ｂａｘ基因参与了面神经干切断诱导的面神经元凋亡过程的调控。     

大鼠面神经切断及修复对面神经核磷酸化的影响

目的：探讨面神经损伤及修复对面神经核蛋白磷酸化的影响。方法：采用免疫组化染色法，观察成年大鼠面神经切断和即刻端端吻合后面神经核磷酸苏氨酸和磷酸酪氨酸的时程变化。结果：面神经切断后，损伤侧面神经核于损伤早期即出现磷酸苏氨酸和磷酸酪氨酸免疫染色强度的明显增加，术后14d已基本降至正常水平。磷酸苏氨酸免疫染色部位主要位于面神经核运动神经元，而磷酸酪氨酸免疫染色阳性细胞为小胶质细胞，面神经切断后吻合组面神经核磷酸苏氨酸和磷酸酪氨酸免疫染色强度的变化趋势同面神经单纯切断组。结论：面神经损伤所诱导的细胞信号转导的变化主要出现在损伤早期。     

迷走神经刺激后大鼠孤束核内星形胶质细胞的反应

目的：观察颈部迷走神经干剌激(VNS)后孤束核内星形胶质细胞数量、形态的改变,同时在电镜水平观察星形胶质细胞与神经元之间突触形态、数量的变化,从胶质细胞的角度阐明VNS治疗神经精神疾病的重要机制。方法：利用免疫组织化学及免疫电镜的方法,观察VNS前后重要中继核团孤束核内星形胶质细胞的特异性标示物-胶原纤维酸性蛋白(GFAP)的表达变化,并在电镜水平计数了星形胶质细胞与神经元形成突触的数量。结果：VNS后,孤束核内GFAP阳性细胞的数量明显增多,深染。细胞形态也发生了变化：胞体肥大,突起变得粗长。电镜下神经元与星形胶质细胞之间突触的数量明显增多。结论：本实验结果显示VNS不仅可以兴奋重要传入核团区域神经元,同时可以改变星形胶质细胞的活性。提示孤束核内星形胶质细胞形态功能的改变在VNS抑制癫痫发作及治疗其他神经系统疾病过程中起了重要作用。     

Study on Remodeling of Astrocytes in Facial Neuclus after Peripheral Injury

To observe the glial reactions surrounding facial motor neurons following facial nerve anastomosis. At 1,7,21 and 60 d following facial nerve anastomosis, the recovery process of facial movement was observed, the glial fibrillary acidic protein （GFAP） immunoreactivity was analyzed by a combined method of fluorescent retrograde tracing and immunofluorescent histochemical staining, and the uhrastructure of astrocytes were observed under a transmission electron microscope （TEM）, respectively. Postoperatively the function of facial muscles could not return to normal, often accompanied with hyperkinetic syndromes such as synkinesis at the late stage. Motor neurons in every facial subnucleus could be retrogradely labeled by fluoro-gold （FG）, and displayed an evident somatotopic organization. Normally there was a considerable number of GFAP-positive cells in nonnucleus regions but few inside the facial nucleus region. Postoperatively the GFAP immunoreactivity in the anastomotic side increased significantly, but gradually decreased at the late stage. The ultrastructure of astrocytes in our experiment showed that the sheet-like process of astrocytes invested and protected the injured facial motor neurons. The present study shows that reactive astrocytes undergo some characteristic changes during the process of facial nerve injury and regeneration. The plastic change at the late stage may be involved in the mechanism of synkinesis.     

腹腔注射卡因酸对大鼠海马细胞凋亡的影响

目的: 探讨腹腔注射兴奋性氨基酸对大鼠海马神经元及Bax/bcl-2表达的影响。方法: 将大鼠随机分成两组,实验组给予腹腔注射卡因酸,对照组给予腹腔注射等体积磷酸盐缓冲液(PBS);3天后以尼氏染色海马神经元,T U NEL法检测海马神经元凋亡;Bax/bcl-2抗体标记神经元Bax/bcl-2蛋白,SABC法检测。结果: 实验组大鼠海马神经元带变狭,TUNEL染色阳性对照片可见大量阳性细胞,阴性对照片未见阳性细胞;实验组Bax为强阳性,Bcl-2为阳性;PBS生理盐水对照组Bax为弱阳性(+),Bcl-2均为强阳性(++)。结论: 腹腔注射卡因酸可以引起大鼠海马神经元凋亡,Bax表达上调,Bax/bcl-2平衡改变可能与神经元凋亡有关。     

大鼠面神经切断后其神经元形态变化的研究

目的观察面神经高位切断后其神经元的形态改变．方法建立SD大鼠面神经高位切断模型后行HE、TB和TUNEL染色,观察健侧面神经元及术后1、3周时伤侧面神经元的形态改变．结果健侧和术后1周伤侧面神经元均未见明显凋亡,术后3周伤侧面神经元见明显凋亡．结论面神经损伤后3周可导致伤侧面神经元出现明显凋亡．     

成年及新生大鼠面神经结扎后NADPH-d阳性神经元的不同表达

目的: 研究新生及成年大鼠面神经结扎后,面神经核运动神经元(FMN)NADPH-d阳性细胞的动态变化. 方法: 于新生及成年大鼠茎乳孔处结扎面神经,于3, 7, 14, 21, 28, 56, 84 d采用NADPH-d组织化学方法观察NADPH-d阳性细胞在面神经核中的变化. 并观察NADPH-d阳性细胞与存活神经元之间的关系. 结果: 成年大鼠面神经结扎FMN受损后,3 d～12 wk NADPH-d阳性持续表达. 但是幼年大鼠面神经结扎FMN受损后1 wk,NADPH-d阳性方可在损伤侧观察到,至8 wk则几乎观察不到NADPH-d阳性FMN. 结论: 面神经损伤后,成年及新生大鼠损伤侧NADPH-d阳性FMN数目均有所增加,但是它们在表达时程上显示了不同的模式.     

迷走神经刺激对大鼠丘脑室旁核及下丘脑室旁核星形胶质细胞的影响

目的:观察迷走神经刺激(VNS)后丘脑室旁核(PV)、下丘脑室旁核(PVN)星形胶质细胞数量和形态的改变,阐明星形胶质细胞在VNS治疗癫中的机制。方法:利用免疫组织化学方法,观察VNS前后PV、PVN胶原纤维酸性蛋白(GFAP)的表达变化。结果:VNS后,PV、PVNGFAP阳性纤维数量增多,染色加深,部分细胞胞体增大,突起增多,变粗变长。结论:VNS可以改变星形胶质细胞的活性。提示PV、PVN星形胶质细胞形态功能的改变可能在VNS抑制癫过程中起了重要作用。     

视神经损伤后上丘BMP4 mRNA与Noggin mRNA表达的变化

目的 探讨大鼠视神经损伤后上丘BMP4 mRNA与Noggin mRNA的表达变化.方法 采用单侧眼球摘除的视神经损伤动物模型,将大鼠分成正常对照组、眼球摘除后24 h、1周、2周、3周组,原位杂交检测对侧上丘BMP4 mRNA与Noggin mRNA的表达变化,免疫组化检测MAP2和GFAP阳性细胞数量和形态的变化.结果 BMP4 mRNA在损伤后24 h显著升高(P＜0.01),1周组的表达较24 h降低;Noggin mRNA在损伤后各组的表达水平与正常对照组相比无明显变化(P＞0.05).GFAP阳性细胞在损伤后24 h即明显增加(P＜0.01),MAP2阳性细胞在损伤后1周数量减少(P＜0.01).结论 单侧眼球摘除后大鼠对侧上丘BMP4 mRNA与Noggin mRNA的表达水平可能是导致损伤后星形胶质细胞反应性增生和神经元退行性死亡的因素之一.