刚地弓形虫RH株对小鼠胎盘滋养细胞凋亡的影响

目的 通过研究刚地弓形虫强毒株RH株对体外培养的孕期小鼠胎盘滋养层细胞凋亡的影响,初步探讨不同毒力虫株引起病理妊娠的机制.方法 将小鼠胎盘滋养层细胞分别接种于不同细胞培养瓶,对照组加入DMEM培养基孵育,实验组加入相同体积不同数量(2×106/ml、4×106/ml、8×106/ml)弓形虫速殖子培养2、4、8 h,Annexin-V-FITC/PI染色细胞后上流式细胞仪检测各个时间点细胞凋亡率变化;荧光显微镜观察细胞形态改变情况;Western blot分析凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2的表达或活性.结果 流式细胞仪检测弓形虫感染后的滋养层细胞凋亡率较对照组有下降趋势(P<0 05),呈量效依赖性,弓形虫数量8×106/ml实验组8 h凋亡率最低,为(15.81±0.19)%;荧光显微镜观察到8 h不同数量实验组滋养细胞凋亡形态改变情况,各组均有典型的早期凋亡细胞:细胞膜着绿色,细胞核拒染.随着弓形虫感染数量增加,凋亡细胞数目有所减少.Western blot 检测刚地弓形虫RH株作用于滋养层细胞8 h后实验组的Bax、Bcl-2蛋白表达较对照组分别有明显的降低与升高(P<0.05).结论 刚地弓形虫RH株可抵抗体外培养的孕期小鼠滋养细胞正常凋亡,其机制可能与滋养细胞Bax表达下调和Bcl-2表达上调有关.     

TGFβ1，Bcl-2与妊娠期高血压疾病胎盘细胞凋亡的关系

目的:研究妊娠期高血压疾病患者胎盘组织的细胞凋亡以及TGFβ1和Bcl-2与细胞凋亡的关系,进一步探讨妊娠期高血压疾病发病机制.方法:收集妊娠期高血压疾病患者胎盘组织45例(15例妊娠期高血压,15例子痫前期轻度,15例子痫前期重度)和正常孕妇对照组45例.应用免疫组织化学染色法(SP法)检测胎盘绒毛滋养层TGFβ1和Bcl-2蛋白的表达;应用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL法)检测胎盘绒毛组织中滋养层细胞凋亡情况,并测定凋亡率.结果:妊娠期高血压疾病组较对照组胎盘绒毛组织中滋养层细胞凋亡率及TGFβ1表达明显增高,而Bcl-2表达明显减低(均P＜0.01).随病情加重,妊娠期高血压组、子痫前期轻度组、子痫前期重度组细胞凋亡率及TGFβ1表达呈上升趋势,Bcl-2表达呈下降趋势(均P＜0.01).子痫前期重度组、子痫前期轻度组胎盘绒毛细胞凋亡发生率与TGFβ1呈正相关;与Bcl-2表达呈负相关(均P＜0.05).子痫前期重度组、子痫前期轻度组TGFβ1与Bcl-2表达呈负相关(均P＜0.05).结论:妊娠期高血压疾病胎盘细胞凋亡率明显增高,TGFβ1在滋养层细胞表达增高,Bcl-2在滋养层细胞表达降低,TGFβ1和Bcl-2平衡失调可能导致妊娠期高血压疾病的发生.     

长链非编码RNA母系印记基因3对人类绒毛发育的作用

目的 研究长链非编码RNA (lncRNA)母系印记基因3(MEG3)对人类流产绒毛发育的影响,并探讨其分子机制.方法 收集自然流产及人工流产各15例患者的绒毛组织,使用免疫组化方法检测其凋亡因子Bax及凋亡抑制因子Bcl-2的表达,使用qPCR法检测MEG3的表达.在人滋养细胞系HTR-8/SVneo细胞中过表达MEG3后,利用qPCR法检测MEG3的表达,利用细胞侵袭实验比较过表达组与对照组细胞的侵袭能力.结果 人工流产绒毛组织中Bax的表达低于自然流产绒毛,而Bcl-2的表达高于自然流产绒毛(P＜0.01).人工流产绒毛组织中的MEG3的表达低于自然流产(P＜0.01).人滋养层细胞系HTR-8/SVneo细胞中过表达MEG3后,HTR-8/SVneo细胞侵袭能力降低(P＜0.01).结论 IncRNA MEG3可调控滋养层细胞的凋亡及侵袭能力,影响人类绒毛的发育.     

Study on apoptosis and expression of modulin Bcl-2, Bax in villus syncytiotrophoblast cells in 30 patients with spontaneous abortion

目的 通过观察绒毛合体滋养细胞凋亡以及凋亡调控蛋白Bcl-2和Bax在自然流产患者中的表达,探讨细胞凋亡在自然流产的发病机制.方法 采用原位末端标记法(TUNEL)和免疫组织化学法对30例自然流产患者绒毛合体滋养细胞中调亡指数及凋亡调控蛋白Bcl-2和Bax阳性表达率进行检测,并以30例人工终止早孕的健康妇女做对照(对照组),所有数据采用SPSS16.0进行统计学分析.结果 自然流产组绒毛滋养细胞中凋亡指数为(32.45±5.87)％,明显高于对照组的(19.38±4.16)％,差异有统计学意义(P＜0.01).Bax和Bcl-2在两组合体滋养细胞中的阳性率比较显示,自然流产组中Bax阳性率增高,Bcl-2阳性率下降,Bcl-2/Bax比值升高,差异均有统计学意义(P＜0.01).结论 绒毛合体滋养细胞凋亡明显增加、Bax阳性率增高和Bcl-2阳性率下降在自然流产中产生重要作用.     

刚地弓形虫ME49株对体外培养的小鼠胎盘滋养细胞凋亡的影响

目的研究刚地弓形虫ME49株对体外培养的孕期小鼠胎盘滋养层细胞凋亡的影响。方法制备小鼠胎盘滋养层细胞并分别接种于不同细胞培养板,对照组加入DMEM高糖培养液孵育,实验组加入相同体积不同密度(2×106/ml、4×106/ml、8×106/ml)弓形虫速殖子培养8h后,AnnexinⅤ-FITC/PI染色细胞后上流式细胞仪检测各个时间点细胞凋亡率变化,以蛋白质印迹法分析凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2的表达。结果流式细胞仪检测弓形虫感染后的滋养层细胞凋亡率较对照组有升高趋势(P0.05),呈量效依赖性,弓形虫密度8×106/ml组8h凋亡率最高,为28.37%;荧光显微镜观察,随弓形虫感染密度增加,滋养层细胞凋亡数目增多。蛋白质印迹法检测刚地弓形虫ME49株作用于滋养层细胞8h后实验组的Bax、Bcl-2蛋白表达(与β-actin比值)各为1.24±0.05、1.37±0.03、1.78±0.04与1.15±0.03、1.09±0.05、0.97±0.01,较对照组的比值(1.17±0.06和1.23±0.02)有明显的改变(P0.05)。结论刚地弓形虫ME49株可促进体外培养的孕期小鼠滋养细胞正常凋亡,其机制可能与滋养细胞Bax表达上调和Bcl-2表达下调有关。     

妊娠期糖尿病胎盘细胞凋亡及其调控基因表达的研究(摘要)

目的 :研究胎盘细胞凋亡及其调控基因在妊娠期糖尿病发生、发展中的作用及其与临床结局的关系 .方法 :对40例妊娠期糖尿病 (GDM )患者和 40例对照孕妇的胎盘组织进行检测 ,用DNA缺口原位末端标记 (TUNEL)技术检测细胞凋亡 ,免疫组织化学方法 (S -P)检测促(抑 )凋亡基因Bax/Bcl -2表达水平 .结果 :妊娠期糖尿病组胎盘细胞滋养层细胞、合体滋养层细胞的凋亡指数及Bax ,Bcl -2蛋白表达的阳性率均高于对照组 (P <0 0 5 ) ,Bax/Bcl-2的比率也高于对照组 (P <0 0 5 ) .妊娠期糖尿病组胎盘细胞凋亡指数与孕妇OGTT值和新生儿体重呈正相…     

妊娠期糖尿病胎盘细胞凋亡及其与围产结局的关系

目的 :研究胎盘细胞凋亡在妊娠期糖尿病发生及其与临床结局的关系 .方法 :对 4 0例妊娠期糖尿病 (GDM )患者和 4 0例正常对照孕妇的胎盘组织进行检测 ,用DNA缺口原位末端标记 (TUNE)技术检测细胞凋亡 ,电镜观察凋亡细胞的超微结构 ,免疫组织化学方法 (S -P)检测促 (抑 )凋亡基因Bax/Bcl- 2表达水平 .结果 :妊娠期糖尿病组胎盘细胞凋亡指数及Bax、Bcl - 2阳性率、Bax/Bcl- 2的比率均高于对照组 (P <0 0 5 ) ,妊娠期糖尿病组胎盘细胞凋亡指数与孕妇血糖值和新生儿体重呈正相关 ,对照组胎盘细胞凋亡指数与孕妇血糖值和新生儿体重无相关 .结论 :妊娠期糖尿病组和对照组胎盘中均有一定量的细胞凋亡和Bax ,Bcl- 2的表达 ,妊娠期糖尿病组胎盘细胞凋亡明显增加 ,Bax/Bcl- 2的比值增加 .胎盘细胞凋亡及其调节基因的表达间具有一致性 ,妊娠期糖尿病胎盘细胞凋亡增多与不利妊娠结局有关     

基于PI3K/Akt通路沉默miR-26b对妊娠期高血压胎盘滋养细胞增殖、凋亡的影响

目的 分析沉默微小RNA-26b（Micro RNA-26b,miR-26b）对妊娠期高血压胎盘滋养细胞增殖、凋亡及磷酸肌醇3激酶/蛋白激酶B（phosphoinositide-3 kinase/protein kinase B,PI3K/Akt）通路的影响。 方法 购买人胎盘滋养细胞,使用100 μmol/L N-硝基-L-精氨酸甲酯诱导胎盘滋养细胞模拟妊娠期高血压微环境,分为细胞空白组（N-硝基-L-精氨酸甲酯诱导胎盘滋养细胞）、过表达组（N-硝基-L-精氨酸甲酯诱导胎盘滋养细胞后做miR-26b过表达质粒转染）、沉默组（N-硝基-L-精氨酸甲酯诱导胎盘滋养细胞后做miR-26b沉默质粒转染）。检测3组细胞增殖、细胞凋亡、细胞PI3K/Akt通路蛋白表达情况。 结果 与空白组相比,过表达组miR-26b表达量升高,沉默组miR-26b表达量降低（P＜0.05）,说明miR-26b转染成功。过表达组24 h、48 h、72 h细胞增殖率逐渐降低,沉默组逐渐升高,3组在组间、时点间、组间·时点间差异均有统计学意义（P＜0.05）。与空白组相比,过表达组PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt、Bcl-2蛋白表达量降低,Bax蛋白表达量升高（P＜0.05）;与空白组相比,沉默组PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt、Bcl-2蛋白表达量升高,Bax蛋白表达量降低（P＜0.05）;与过表达组相比,沉默组PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt、Bcl-2蛋白表达量升高,Bax蛋白表达量降低（P＜0.05）。 结论 沉默miR-26b可抑制妊娠期高血压胎盘滋养细胞凋亡、促进增殖,其作用机制可能与PI3K/Akt通路被激活相关。     

醛固酮对肾小管上皮细胞凋亡的影响

目的 研究醛固酮(ALD)对体外培养的肾小管上皮细胞凋亡的影响及其机制.方法 人肾小管上皮细胞(HK-2)培养于无血清DMEM/F12培养液中,以不同浓度的ALD(O、10-11、10-10、10-9和10-8 mol/L)刺激细胞48 h后,Annexin V/PI双染流式细胞术检测ALD对HK-2细胞凋亡的影响 ;Western blotting检测ALD对HK-2细胞中Bax和Bcl-2蛋白表达的影响.结果 流式细胞术结果表明,随着ALD浓度的升高,凋亡细胞百分率逐渐增多,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05).Western blotting结果表明,随着ALD浓度的升高,Bax蛋白表达量逐渐增加,Bcl-2蛋白表达量逐渐减少,Bax/Bcl-2比值增加.结论 ALD可以通过调节凋亡调控蛋白Bax和Bcl-2的表达促进肾小管上皮细胞凋亡,进而促进肾小管间质纤维化的进展.     

Borna disease virus inhibits proliferation and induces apoptosis in human oligodendrocyte in vitro

目的 探讨博尔纳病病毒(Borna disease virus,BDV)感染对人少突胶质细胞(oligodendrocytes,OL)增殖与凋亡的影响.方法 用BDV感染OL细胞,免疫荧光检测OL细胞中博尔纳病病毒P40蛋白的表达,CCK8测定法观察细胞的生长增殖情况,用流式细胞技术检测细胞的凋亡情况和周期变化,Western blot检测凋亡指标Bax、Bcl-2的相对表达量.结果 与阴性对照组细胞比较,感染组在博尔纳病病毒感染少突胶质细胞第3天时,免疫荧光能够检测到P40蛋白的表达.随着感染时间的增加,BDV感染的OL细胞增殖能力下降(P＜0.05),且通过流式细胞仪检测到病毒感染3d后,细胞出现凋亡增多.流式细胞仪检测结果显示,与对照组比较,感染细胞周期G2期延迟(P＜0.05),细胞增殖指数降低(P＜0.05).Western blot检测结果显示,与对照组比较,感染细胞促凋亡蛋白Bax表达量增加(P＜0.05),抑凋亡蛋白Bcl-2表达量下降(P＜0.05).结论 BDV感染可以抑制OL细胞增殖,并能通过上调Bax蛋白及下调Bcl-2蛋白表达量,诱导细胞凋亡的发生.     

辛伐他汀对HT29细胞的促凋亡作用及可能机制

目的:研究辛伐他汀对HT29细胞的促凋亡作用,以及可能存在的调控机制.方法:将人结肠癌HT29细胞在不同浓度辛伐他汀的培养基中培养24、48、72 h,观察细胞的增殖情况,MTT法检测其抑制率;流式细胞术检测不同浓度辛伐他汀对HT29细胞凋亡率的影响,RT-PCR法观察HT29细胞Bcl-2、Bax mRNA水平,蛋白质印迹法观察HT29细胞Bcl-2、Bax蛋白表达情况.结果:不同浓度辛伐他汀对HT29细胞增殖有抑制作用,且其抑制作用同时存在浓度及时间效应(P＜0.01);辛伐他汀对HT29细胞有促凋亡作用,抑制率随药物浓度增大而增加(P＜0.05);PCR、蛋白质印迹法检测表明辛伐他汀可分别在基因及蛋白水平下调Bcl-2的表达及上调Bax的表达.结论:辛伐他汀可显著抑制HT29细胞的增殖,促进其凋亡,其可能与下调Bcl-2基因、上调Bax基因的表达有关.     

Adipo-R2在妊娠糖尿病胎盘中的表达

目的:检测脂联素受体Adipo-R2在妊娠糖尿病胎盘中的表达情况,探讨脂联素受体Adipo-R2在妊娠糖尿病发病机制中的作用.方法:采用口服50g葡萄糖-静脉血1小时血糖进行妊娠期糖尿病的筛查,静脉血-75g葡萄糖耐量试验行妊娠期糖尿病诊断.本研究采用免疫组化法和图像分析技术,观察在16例妊娠期糖尿病患者(A组)、18例妊娠期糖耐量异常患者(B组)和35例糖耐量正常、同期分娩的正常妊娠妇女(C组)中脂联素受体Adipo-R2的表达情况.结果:Adipo-R2阳性表达位于绒毛滋养层细胞(合体滋养细胞,细胞滋养细胞)的胞膜上,极少数滋养细胞胞浆内也可见阳性表达.与B组及C组比较,A组胎盘滋养细胞Adipo-R2的表达减弱,统计学差异显著(P＜0.01),(PU值:A组8.16±1.44,B组11.85±2.19,C组12.8±2.11).B、C组胎盘滋养细胞Adipo-R2的表达比较,统计学差异无显著性(P＞0.05).结论:Adipo-R2主要表达于妊娠胎盘滋养细胞胞膜上;妊娠期糖尿病患者胎盘Adipo-R2的表达显著减弱(P＜0.01).胎盘滋养细胞Adipo-R2的低表达,是妊娠期糖尿病的病理变化之一.     

细胞凋亡相关蛋白Bax,Bcl-2在子痫前期患者胎盘滋养细胞中的表达及意义

目的通过研究轻、重度子痫前期患者和正常妊娠孕妇胎盘滋养细胞Bax,Bcl-2蛋白的表达情况,来分析胎盘滋养细胞Bax,Bcl-2蛋白在子痫前期发病过程中的作用。方法用免疫组化方法（SP法）检验胎盘中Bax,Bcl-2蛋白的表达。结果轻、重度子痫前期患者组胎盘Bax阳性表达强度显著高于对照组,各组间结果差异有统计学意义（P〈0.05）,随着病情加重表达增加。轻、重度子痫前期患者组胎盘Bcl-2阳性表达强度显著低于对照组,各组间结果差异有统计学意义（P〈0.05）,随着病情加重表达降低。结论轻、重度子痫前期患者组胎盘Bcl-2阳性表达强度降低,Bax阳性表达增加,它可能参与子痫前期的发病。     

Bcl-2、Bax在胃癌及胃癌前病变中的表达与细胞凋亡的关系

目的 探讨胃癌及胃癌前病变组织中Bcl-2、Bax的表达情况及其与细胞凋亡的相互关系.方法 采用免疫组织化学SP法分别检测10例正常胃黏膜、60例慢性萎缩性胃炎伴肠化生、30例异型增生、50例胃癌中Bcl-2、Bax蛋白的表达情况,采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记技术（TUNEL法）检测组织切片中细胞凋亡的情况.结果 慢性萎缩性胃炎伴肠化生、异型增生、胃癌中Bcl-2蛋白表达阳性率分别为31.7％,43.3％,62.0％,均显著高于正常胃黏膜（P＜0.01）.慢性萎缩性胃炎伴肠化生、异型增生中Bax蛋白阳性率分别为55.0％,30.0％,其阳性率均显著高于胃癌（P＜0.01,P＜0.05）.Bcl-2蛋白表达阳性慢性萎缩性胃炎伴肠化生、异型增生和胃癌中凋亡细胞指数（AI）显著低于Bcl-2蛋白阴性组（P＜0.05）,Bcl-2蛋白表达阳性率与AI值呈负相关.Bax蛋白表达阳性慢性萎缩性胃炎伴肠化生、异型增生和胃癌中AI显著高于Bax蛋白阴性组（P＜0.05）,Bax蛋白表达阳性率与AI值呈正相关.结论 胃黏膜癌变过程中,AI、凋亡调控基因Bcl-2和Bax的比值逐渐增加,说明它们在胃癌演变过程中可能起重要作用.     

流式细胞术检测苦参素对人胃癌细胞系MGC-803凋亡的作用

目的运用流式细胞术检测苦参素对人胃癌细胞系MGC-803凋亡的作用.方法运用流式细胞术检测细胞凋亡率、凋亡峰及凋亡相关基因蛋白Bcl-2和Bax的表达水平.结果 苦参素1 mg/mL、2 mg/mL作用24 h后,流式细胞仪(FCM)检测结果显示,细胞凋亡率与阴性对照组相比,差异具有显著性(P＜0.05);Bcl-2表达量明显减少,Bax表达量明显增加,差异具有显著性(P＜0.05).结论苦参素对人胃癌细胞系MGC-803有诱导凋亡作用,其机制与上调Bax和下调Bcl-2表达有关.     

三氧化二砷对宫颈癌Hela细胞体外生长的影响

目的 研究1.0、2.0和3.0 μmol/L的三氧化二砷(As2O3)对人宫颈癌Hela细胞体外生长的影响,并初步探讨其机制.方法 应用1.0、2.0和3.0 μmol/L As2O3作用于人宫颈癌Hela细胞系,采用MTT比色法检测细胞生长情况;运用流式细胞术检测细胞凋亡率;应用免疫组化SABC法检测细胞中Bcl-2和Bax蛋白的表达.结果 As2O3能抑制宫颈癌Hela细胞的体外生长,诱导宫颈癌Hela细胞凋亡,并呈浓度和时间依赖性(P＜0.05).As2O3能引起细胞内Bcl-2蛋白表达下调和Bax蛋白表达上调(P＜0.05).结论 As2O3对宫颈癌Hela细胞体外生长具有明显抑制作用,并诱导宫颈癌Hela细胞凋亡,可能与其引起细胞内Bcl-2蛋白表达下调和Bax蛋白表达上调有关.     

Bcl-2、Bax、Fas在妊娠期糖尿病胎盘绒毛细胞中表达及意义

目的定量检测妊娠期糖尿病（GDM）、妊娠期糖耐量异常（GIGT）及正常孕妇胎盘绒毛细胞的凋亡基因Bcl-2、Bax、Fas在其中的表达情况,探讨其表达对GDM病理生理异常改变及妊娠结局的影响。方法采用免疫组化法和图像分析技术测定GDM（A组）、GIGT（B组）和同期分娩的正常妊娠孕妇（C组）胎盘绒毛细胞中Bcl-2、Bax、Fas的表达。结果 （1）Bcl-2、Bax、Fas均表达于3组孕妇胎盘绒毛细胞。（2）Bcl-2在A、B组孕妇胎盘绒毛细胞中表达比正常组减少,有统计学意义,P〈0.01;Bax、Fas在A、B组孕妇胎盘绒毛细胞中表达高于正常组,有统计学意义,P〈0.01。（3）A、B组孕妇FGR、羊水过少发生率比正常妊娠组高,P〈0.01;同时因胎儿窘迫、羊水过少剖宫产率升高,P〈0.01,均有统计学意义。结论 Bcl-2、Bax、Fas在胎盘中异常表达导致胎盘细胞过度凋亡可能与GDM发病有关,从而导致不良妊娠结局。     

脑复苏后细胞凋亡基因调控机制的实验研究

目的:探讨脑复苏后神经细胞凋亡的相关基因的调控机制.方法:大鼠脑缺血再灌注损伤后,分别应用 TUNEL 染色法和免疫组化法检测海马 CA1 区凋亡的神经细胞和 Bcl-2,Bax,C-fos,Fas,p53,Capases 3蛋白在细胞中的表达.结果:与假手术组相比,缺血再灌注24 h 后,凋亡的神经细胞增加(P＜0.01),Bcl-2 蛋白表达的阳性细胞减少(P＜0.01),Bax,C-fos,Fas,p53,Capases 3蛋白表达的阳性细胞增加(P＜0.01).结论:脑复苏后,多基因参与了神经细胞凋亡的调控,Bcl-2具有抗凋亡作用,Bax,C-fos,Fas,p53,Capases 3蛋白表达增加可促进细胞凋亡.     

正常妊娠不同时期胎盘组织中chemerin的表达

目的 探讨正常妊娠不同时期胎盘组织中chemerin水平变化,及其与妊娠进展的关系.方法 选取妊娠早期孕妇20例,妊娠中期孕妇15例,妊娠晚期孕妇30例,采用免疫组织化学技术和实时定量PCR技术检测各妊娠组胎盘绒毛组织中chemerin水平.结果 chemerin阳性染色颗粒主要表达于胎盘组织中的合体滋养细胞及细胞滋养层细胞胞质中,各期均有不同程度的表达,妊娠晚期近临产组chemerin表达水平与早、中期妊娠组相比明显升高,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 chemerin可能在维持妊娠期间母胎免疫应答中起重要的作用.