急性髓细胞性白血病病人TCRζ链基因表达特点

目的建立实时定量PCR方法检测TCRξ链表达水平的方法，了解急性髓细胞性白血病病人外周血TCRξ链基因表达水平。方法采用SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR和相对定量分析法检测31例急性髓细胞性白血病患者（M1型6例，M2型15例，M3型10例）和30例正常人外周血的单个核细胞的TCRξ链表达情况，以β2微球蛋白基因（β2M）作为内参，根据相对定量公式2^-△△α计算急性髓细胞性白血病患者与正常人TCRξ链表达差异倍数。结果与正常人相比，急性髓细胞性白血病患者TCRξ链表达特点可以分为表达缺失（16％）、表达下降（26％）和表达上升（58％）三种情况。而三种不同亚型急性髓细胞性白血病之间的TCRξ链表达模式相似。结论本研究成功建立了SYBR Green Ⅰ荧光实时定量PCR和相关定量分析TCRξ链表达水平技术，并首先报道了急性髓细胞性自血病病人TCRξ链表达水平的变化。     

实时定量PCR分析B-ALL病人TCRζ链表达特点

分析T细胞信号传导分子TCRζ链基因在B细胞-急性淋巴细胞白血病(B-ALL)病人外周血中的表达水平.方法:采用SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR和相对定量检测15例初发B-ALL、5例完全缓解期(CR)患者和30例正常人外周血的单个核细胞的TCRζ链表达情况,以β2微球蛋白基因(β2M)作为内参,根据相对定量公式(2-△△Ct)分别计算B-ALL初发患者、CR期患者与正常人TCRζ链表达差异倍数等.结果:根据相对定量公式分析显示:与正常人相比,B-ALL初发患者外周血TCRζ链表达存在3种情况,即不表达(20%)、表达下降(53%)和表达上升(27%).TCRζ链表达水平在所有初发B-ALL病人均低于CR期病人.结论:本研究首先报道B-ALL病人中TCRRζ链表达水平的变化特点,TCRζ链基因表达水平以降低为主,可能与T细胞免疫缺陷有一定关系.     

SYBR Green实时定量PCR检测急性髓系白血病患者BAALC基因表达

目的:观察SYBR Green相对定量逆转录聚合酶链反应(RQ-PCR)方法检测急性髓系白血病(AML)患者外周血单个核细胞(PBMC)中脑和急性白血病细胞胞质(BAALC)基因mRNA的表达水平。方法:分离12例初发AML患者和5名健康成年人PBMC,以白血病细胞株K562为阳性对照,提取细胞总RNA并逆转录为cDNA,SYBR Green相对定量RQ-PCR检测BAALC基因表达水平。结果:健康成年人PBMC中检测不到BAALC mRNA的表达,12例AML患者中,有8例BAALC mRNA高表达,与K562比较,其相对值为K562的0.8~5.6倍。结论:用SYBR Green相对定量RQ-PCR可以检测到AML患者PBMC中BAALC基因的表达,该方法稳定、敏感、可靠。     

淋巴细胞肿瘤病人外周血单个核细胞中Elf-1基因表达特点

目的　了解T细胞特异性转录因子Elf-1基因在T细胞和B细胞肿瘤病人中的表达特点。方法　采用SYBR GreenⅠ荧光定量PCR和相对定量分析法检测20例健康人外周血及49例淋巴细胞肿瘤病人[急性T淋巴细胞白血病（T-ALL）7例、T细胞非霍奇金淋巴瘤（T-NHL）6例、急性B淋巴细胞白血病（B-ALL）10例、慢性B淋巴细胞白血病（B-CLL）7例和B细胞非霍奇金淋巴瘤（B-NHL）19例]外周血单个核细胞中Elf-1基因表达情况,以β2微球蛋白基因（β2M)作为内参,采用公式2-△Ct×100%计算Elf-1基因表达水平。结果　与健康对照组（2.044±1.321%）相比,T细胞肿瘤组（12.050±10.334%）与B细胞肿瘤组（14.144±21.576%）患者外周血Elf-1基因表达均明显上升（P<0. 01,P<0. 01）。T细胞肿瘤组Elf-1基因表达水平与B细胞肿瘤组的差异无统计学意义（P>0.05）。但五种类型淋巴细胞肿瘤Elf-1基因表达水平有所不同,其中以B-ALL最高,T-ALL次之,而B-NHL组的Elf-1基因表达水平最低。结论　Elf-1基因在T细胞和B细胞肿瘤病人外周血单个核细胞中均呈高表达状态,其表达上调可能与机体T细胞免疫缺陷相关。     

铅接触及铅中毒工人外周血T细胞CD3ζ基因的表达特点

目的 了解铅接触及铅中毒工人外周血中T细胞信号传导分子CD3 ζ基因表达水平,为铅接触和铅中毒工人免疫系统损害的机制提供资料.方法 利用SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR分别检测10例铅接触工人、6例铅中毒工人和20例正常人外周血单个核细胞的CD3 ζ基因表达情况,以β2微球蛋白基因(β2M)作为内参,根据相对定量公式(2-△Ct)计算铅接触、铅中毒工人与正常人CD3 ζ基因表达水平差异.结果 正常人、铅接触和铅中毒工人外周血CD3 ζ基因表达水平分别为(3.01±2.11)、(11.4±13.3)和(2.42±3.01).与正常人相比,铅接触工人外周血CD3 ζ基因表达上升(P<0.05).与铅接触工人相比,铅中毒工人CD3 ζ基因表达下降(P<0.05).结论 铅接触及铅中毒工人中外周血T细胞CD3 ζ基因表达异常,提示机体接触铅后T细胞活化过程存在障碍.     

急性髓性白血病病人外周血中RIZ1的表达变化与启动子区甲基化相关性的研究

目的:研究急性髓性白血病病人外周血中肿瘤抑制基因RIZ1的表达状况和该基因启动子区甲基化状态及两者之间的关系.方法:以37例初发急性髓性白血病病人和15例正常人外周血标本为研究对象.RT-PCR检测RIZ1 mRNA水平,甲基化特异性PCR(MSP)检测RIZ1基因启动子区甲基化状态.结果:急性髓性白血病病人标本与正常人标本比较,RIZ1基因的表达下降,差异具有统计学意义(P<0.05).急性髓性白血病标本中RIZ1基因启动子区甲基化率为29.7%(11/37).存在甲基化的急性髓性白血病病人外周血标本中,RIZ1基因表达缺失或降低.结论:RIZ1基因表达下降与急性髓性白血病的发生有关, 其部分机制在于基因启动子区甲基化.     

急性白血病患者Wilms肿瘤基因(WT1)表达及其临床意义

目的 检测急性白血病患者WT1 mRNA转录水平,探讨WT1基因与白血病病程的关系.方法 应用荧光定量PCR(FQ-PCR)方法对57例白血病病人和10例正常健康人的外周血或骨髓标本进行WT1基因的检测.结果 45例初发急性白血病(AL)中35例WT1 mRNA阳性(阳性率77.8%),其中27例初发急性髓细胞白血病(AML)中24例阳性(88.9%),18例初发急性淋巴细胞白血病(ALL)中11例阳性(61.1%).10例正常人没有检测到WT1 mRNA.结论 急性白血病WT1 mRNA呈高表达.在缺乏特异性克隆标志白血病中监测WT1 mRNA是有价值的.     

荧光定量RT-PCR检测急性白血病患者外周血WT1基因的表达

目的　了解急性白血病患者外周血WT1基因的表达水平。方法　建立荧光定量RT -PCR方法 ,用PEABI 770 0PCR仪检测 114例急性白血病患者、2 6例非白血病患者和3 6例正常人外周血中WT1基因的表达水平。结果　 2 2例急性髓系白血病 (AML)和 15例急性淋巴细胞白血病 (ALL)初发患者WT1基因的表达量为 10 5～ 10 6拷贝 / μgRNA ,取得部分缓解的 2 6例AML和 19例ALL患者的表达水平为 10 2～ 10 4拷贝 / μgRNA ,而取得完全缓解的 17例AML和 13例ALL患者的表达水平为 0～ 10 2拷贝 / μgRNA。 结论　WT1基因在白血病外周血中有高水平的表达 ,可作为急性白血病疗效考核及监测微残留病的指标。     

实时荧光定量PCR检测急性髓细胞白血病患者MDR1基因表达及临床意义

目的 定量分析急性髓细胞白血病(AML)患者MDR1基因的表达水平及其与临床特征及疗效的关系.方法 构建实时荧光定量PCR检测MDR1基因表达的技术,并定量检测43例AML患者MDR1基因的表达水平及分析其与血象、免疫分型及临床疗效的关系.结果 建立的实时荧光定量PCR方法的标准曲线相关系数＞0.99.AML患者MDR 1基因表达水平较正常对照组显著升高(P＜0.001),FAB分型中M2,M5型患者MDR1基因表达水平显著高于M3型患者(P＜0.05及P＜0.025).MDR 1基因的表达量与AML发病时外周血白细胞计数、血红蛋白、血小板无相关关系;而伴有CD34表达阳性AML患者MDR1基因表达水平显著高于阴性患者(P＜0.01);MDR 1基因高表达的初治AML患者诱导化疗的CR率显著低于低表达病例(P＜0.01).结论 实时荧光定量PCR技术检测急性白血病患者MDR 1基因表达量可更准确判断AML患者的预后及早期预测难治和复发.     

荧光染料SYBR GreenⅠ及EB在定量PCR中敏感性比较

目的比较荧光染料SYBR Green I及EB在定量PCR诊断中检测DNA的敏感性.方法分别用琼脂糖凝胶电泳SYBR Green I染色及EB染色,检测26例21-三体综合征患者及20例正常人DNA PCR扩增产物,并进行光密度分析比较.结果SYBR Green I染色于24个循环PCR产物带型清楚,可准确定量检测;EB染色则在28个循环才能进行定量分析.结论荧光染料SYBR Green I染色较EB染色测量DNA敏感、快捷,在定量PCR技术中值得推广应用.