不同品系淡色库蚊各发育阶段的非特异性酯酶和乙酰胆碱酯酶活力变化

研究并探讨非特异性酯酶（NSE）和乙酰胆碱酯酶（AChE）活力在不同品系淡色库蚊（Cules pipiens pallens）各发育阶段的变化，为应用生物化学方法检测蚊虫抗药性及科学合理地进行蚊虫化学防治提供依据。用微量滴定板法测定单个蚊虫NSE和AChE活力，结果显示，敏感品系、DDVP抗性品系和残杀威抗性品系淡色库蚊NSE活力水平在不同发育阶段有变化，I－Ⅲ龄幼虫较低，Ⅳ龄幼虫、蛹和3日龄雌成蚊较高，在各发育阶段均是DDVP抗性品系NSE活力最高，残杀威抗性品系次之，敏感品系最低，其中Ⅳ龄幼虫、蛹和3日龄雌成蚊阶段三个品系间NSE活力差别更明显；三个品系淡色库蚊AChE活力在I－Ⅳ龄幼虫和蛹期较低，3日龄雌成蚊较高，三个品系间AChE活力稍有差异，从高到低依次为残杀威抗性品系、DDVP抗性品系和敏感品系。测定蚊虫NSE活力判断抗药性可选择Ⅳ龄幼虫、蛹和3日龄未吸血雌成蚊；测定蚊虫AChE不敏感性判断抗药性可选择3日龄未吸血雌成蚊；蚊虫化学防治中应选择低龄幼虫阶段施药。     

非特异性酯酶在淡色库蚊对不同杀虫剂抗性中的作用研究

目的：探讨非特异性酯酶（Non-specific esterase,NSE)在谈色库蚊对不同杀虫剂抗性中的作用。方法：以β－乙酸萘酯为底物,坚固蓝B盐为显色剂,测定室内5个品系淡色库蚊的NSE活力。结果：5个品系淡色库蚊中以抗DDVP品系NSE活力水平最高,其次为抗DDVP降解品系和抗残杀威品系,抗氯氰菊酯品系较低,与敏感品系相近。结论：NSE在淡色库蚊对有机磷类杀虫剂的抗性中起重要作用,也是对氨基甲酸酯类杀虫剂产生的机制之一,与对拟除虫菊类杀虫剂的抗性关系不大。     

非特异性酯酶在淡色库蚊对不同杀虫剂抗性中的作用研究

目的　探讨非特异性酯酶（Non-specific esterase,NSE）在淡色库蚊对不同杀虫剂抗性中的作用。方法　以β-乙酸萘酯为底物,坚固蓝B盐为显色剂,测定室内5个品系淡色库蚊的NSE活力。结果　5个品系淡色库蚊中以抗DDVP品系NSE活力水平最高,其次为抗DDVP降解品系和抗残杀威品系。抗氯氰菊酯品系较低,与敏感品系相近。结论　NSE在淡色库蚊对有机磷类杀虫剂的抗性中起重要作用,也是对氨基甲酸酯类杀虫剂产生抗性的机制之一,与对拟除虫菊酯类杀虫剂的抗性关系不大。     

不同品系及不同性别淡色库蚊非特异性酯酶活性比较

目的探讨不同品系及不同性别淡色库蚊非特异性酯酶（NSE）活性的差异,为应用生物化学方法检测蚊虫抗药性提供依据。方法以β-乙酸萘酯为底物,坚固蓝B盐为显色剂,测定单个蚊虫NSE活性。结果抗敌敌畏（Rd）和抗残杀威（Rp）品系淡色库蚊NSE活性水平明显高于敏感（S）品系,抗氯氰菊酯（Rc）品系淡色库蚊NSE活性水平与S品系相近。S、Rd、Rp、Rc4种品系淡色库蚊3日龄雌雄成虫NSE活性均为雌性大于雄性。结论测定NSE活性可判断蚊虫抗药性状况,不同性别蚊虫应分别制定判断标准。     

淡色库蚊DDVP抗性与酯酶活性的相关性

目的检测抗DDVP品系各世代的抗性指数及蚊体内酯酶(esterase)的活性,探讨蚊虫抗性与酯酶的关系。方法生物测定法,微滴定板法。结果淡色库蚊经过43代选育,抗性指数达12.17倍,蚊体内非特异性酯酶(nonpecificesterase,NSE)的活力随世代增加抗性增高而增强。OD≥0.9的个体频率逐渐增高,与生物测试法基本一致。乙酰胆碱酯酶(AChE)的平均抑制率随世代的增加、抗性增高而变低,而抑制率<30％的个体频率随世代增加而增加,呈相关关系。结论DDVP抗性与酯酶NSE和AChE的活性呈一定的相关关系。     

温度对酯酶测定法检测淡色库蚊对DDVP的抗药性的影响

目的：用室内多年选育的抗DDVP淡色库蚊抗性株在室内和现场进行试验，以比较WHO标准法和微板测定法在检测蚊虫对DDVP抗药性的差别。方法：微板测定法、生理测定法。结果：用两种方法在温度为23－32℃范围内分别对淡色库蚊进行DDVP抗药性检测，WHO法结果与温度无关，而NSE法结果与温度有关。为消除温度对检测的影响，在缩短孵育时间后，在27－31℃对野外淡色库蚊对DDVP抗性测定，NSE法测定为WHO法结果相同。结论：NSE法检测蚊虫的DDVP抗药性可随外界温度升高而增加，实际应用时应缩短孵育时间加以纠正。     

微板法测定抗药性酯酶检测淡色库蚊抗药性的研究

目的 研究简捷灵敏的蚊虫抗药性早期测报技术。方法 以β-乙酸萘酯为底物，坚固蓝B盐为显色剂，用酯酶微板法测定实验室和现场单个淡色库蚊体内非特异性酯酶活力。结果 实验室5个品系淡色库蚊以抗DDVP品系非特异性酯酶活力水平最高，其次为抗残杀威品系和抗DDVP降解品系，抗氯氰菊酯品系较低，与敏感品系相近；3个现场淡色库蚊种群对DDVP抗性为4．15～9．36倍，对残杀威抗性为1．02～3．8l倍，其非特异性酯酶活力水平均较高。结论 酯酶微板法测定非特异性酯酶能够检测蚊虫对有机磷和氨基甲酸酯类杀虫剂的抗性水平，能够早期预测抗性发展趋势，便于制订抗药性克服对策。     

微板法测定淡色库蚊体内非特异性酯酶检测其对杀虫剂抗性的研究

目的　探讨简捷灵敏的蚊虫抗药性早期测报技术。方法　以 β -乙酸萘酯为底物 ,坚固蓝B盐为显色剂 ,用微板法测定实验室和现场单个淡色库蚊体内非特异性酯酶活力。结果　实验室五个品系淡色库蚊以抗DDVP品系非特异性酯酶活力水平最高 ,其次为抗残杀威品系和抗DDVP降解品系 ,抗氯氰菊酯品系较低 ,与敏感品系相近 ;三个现场淡色库蚊种群对DDVP抗性为 4 15～ 9 36倍 ,对残杀威抗性为 1 0 2～ 3 81倍 ,其非特异性酯酶活力水平均较高。结论　微板法测定非特异性酯酶能够检测蚊虫对有机磷和氨基甲酸酯类杀虫剂的抗性水平。方法简便快速 ,结果客观准确 ,可重复性强 ;可测出抗性频率 ,早期发现抗性的存在 ;可测知抗性机制 ,便于制订抗药性克服对策     

用微量板法测定淡色库蚊非特异性酯酶判别抗药性

抗药性检测是抗性治理工作的基础 ,是预防抗性产生和发展的前提[1] 。我们根据抗性产生的生化机制 ,利用微量滴定板法对实验室和现场淡色库蚊进行了单个蚊虫非特异性酯酶测定 ,以判断其抗性。材料与方法1　供试蚊虫敏感 (Ｓ)品系 :室内常规饲养的淡色库蚊。抗性品系 :在室内分别用ＤＤＶＰ、残杀威、氯氰菊酯逐代汰选的抗ＤＤＶＰ(Ｒｄ)、抗残杀威 (Ｒｐ)、抗氯氰菊酯 (Ｒｃ)品系淡色库蚊。Ｒｄ降解品系 :Ｒｄ品系淡色库蚊连续 2 0代未用药物选育 ,进行常规饲养 ,其抗性自然减退的种群。现场种群 :分别在济宁市的李营、唐口、长沟三地采集的…     

酯酶滤纸法检测淡色库蚊抗药性的研究

为探讨简捷灵敏的蚊虫抗药性早期测报技术,以α-乙酸萘酯为底物,坚硬固蓝B盐为显色剂,用滤纸法测定实验室和现场淡色库蚊（Cx.pipien pallens)酯酶活力,结果显示三个抗性品系淡色库蚊以抗DDVP品系抗性个体频率最高,其次为抗残杀威品系,抗氯氰菊酯品系较低,与敏感品系相近;三个现场淡色库蚊均对DDVP和残杀威产生不同程度抗性,其抗性个体频率均较高,表明酯酶滤纸法可用于检测蚊虫对有机磷和氨基甲酸酯类杀虫剂的抗性水平,该方法操作简便快速,观察结果直观灵敏,具有实用价值。     

对溴氰菊酯抗性和敏感淡色库蚊不同发育阶段的抗性水平

对室内选育的淡色库蚊（对溴氰菊酯抗性品系和敏感品系）用浸渍法测定了Ⅱ龄、Ⅲ龄和Ⅳ龄幼虫，用接触筒法测定了早期、中期和晚期成虫；并观察了增效醚（ＰＢ）、磷酸三苯酯（ＴＰＰ）和杀虫脒与溴氰菊酯混用后的增效效果。结果表明：（１）淡色库蚊各发育阶段对溴氰菊酯的抗性水平，在敏感品系由高至低依次为中期、晚期、早期成虫、Ⅳ龄、Ⅲ龄和Ⅱ龄幼虫；在抗性品系则为早期、中期、晚期成虫、Ⅳ龄、Ⅲ龄和Ⅱ龄幼虫。（２）ＰＢ和杀虫脒均有明显增效作用，提示抗性可能与氧化代谢增强和靶标部位不敏感有关。其中似乎幼虫阶段以氧化代谢增强为主要抗性机制；在成虫阶段，氧化代谢增强和靶标部位不敏感性均在抗性中起重要作用     

淡色库蚊酯酶活性频率与有机磷酯剂抗性关系

本文报告了采用生物测定法（ＬＣ５０）和改进的Ｐａｓｔｅｕｒ＆Ｇｅｏｒｇｈｉｏｕ（１９８１）滤纸片法测定的淡色库蚊对有机磷酯剂的抗药性．结果证实：１．我国淡色库蚊对有机磷醋剂的抗药性，酯酶Ａ和酯酶Ｂ都在其中起了重要作用．２．α－醋酸萘酯为酯酶Ａ和Ｂ的共同底物．因此，用α－醋酸萘酯为底物的方法检测单个蚊虫对有机磷酯的抗药性是成功的．３．从全国１１个城市检测结果分析，淡色库蚊对有机磷酯的抗药性同酯酶的聚集频率是一致的，而与生物测定法检出的ＬＣ５０与酯酶活性频率的聚集度不完全平行，特别是在中低度抗性时如此。因此，淡色库蚊对有机磷酯的抗性在高抗性区可用测定酯酶的频率来代替毒效生物测定法，而在低抗性区则不能。     

微板法测定抗药性醋酶检测淡色库蚊抗药性的研究

目的 研究简捷灵敏的蚊虫抗药性早期测报技术。方法 以β-乙酸萘酯为底物,坚固蓝B盐为显色剂,用酯酶微板法测定实验室和现场单个淡色库蚊体内非特异性酯酶活力。结果 实验室5个品系淡色库蚊以抗DDVP品系非特异性酯酶活力水平最高,其次为抗残杀威品系和抗DDVP降解品系,抗氯氰菊酯品系较低,与敏感品系相近;3个现场淡色库蚊种群对DDVP抗性为4.15～9.36倍,对残杀威抗性为1.02～3.81倍,其非特异性酯酶活力水平均较高。结论 酯酶微板法测定非特异性酯酶能够检测蚊虫对有机磷和氨基甲酸酯类杀虫剂的抗性水平,能够早期预测抗性发展趋势,便于制订抗药性克服对策。     

淡色库蚊对溴氰菊酯抗性的遗传分析

目的：对室内选育的淡色库蚊抗溴氰菊酯品系（抗性系数５１８）进行遗传分析。方法：采用ＬＣ－Ｐ值分析法研究淡色库蚊溴氰菊酯抗性的形式遗传。采用抑制剂增效试验探讨抗性机制。结果：正交和反交Ｆ１代的抗性系数分别为１５４．８和１５９．２。Ｆ１代的ＬＣ－Ｐ线靠近抗性亲本一方，Ｄ＝０．６２５；ＢＣ代在死亡率５０％处、Ｆ２代在死亡率２５％和７５％处未出现明显平坡，ＢＣ和Ｆ２的实测曲线和理论曲线均存在较大差异，Ｐ均＜０．０１；ＰＢ、ＤＥＦ和ＴＰＰ对抗性品系的增效比分别为２７．１３、１．２２和１．０５。结论：淡色库蚊对溴氰菊酯的抗性为多基因遗传，其主要基因为不完全显性，多功能氧化酶是抗性的主要因子。     

淡色库蚊对溴氰菊酸抗药性品系cDNA表达文库的构建和初步鉴定

目的构建淡色库蚊对溴氰菊酯抗药性品系cDNA表达文库.方法应用定向克隆技术将相应cDNA片段插入λExCell/NotⅠ/EcoRⅠ/CIP载体的NotⅠ和EcoRⅠ双酶切位点;并用PCR对插入片段大小进行分析.结果获得含4.72×105个重组子的cDNA表达文库,重组率为100%,插入片段大小平均约1.1kb.结论所建文库容量及插入片段大小适合进一步研究.     

淡色库蚊细胞色素P450抗性相关基因克隆与初步鉴定

[目的 ]探讨淡色库蚊细胞色素P45 0与溴氰菊酯抗药性的关系。 [方法 ]采用一对昆虫细胞色素P45 0简并引物 ,以反转录 聚合酶链反应从淡色库蚊扩增特异片段 ,T/A直接克隆法筛选阳性克隆 ,对新序列进行cDNA芯片和逆Northern分析。 [结果 ]从淡色库蚊对溴氰菊酯敏感品系和抗性品系获得 112个阳性克隆 ,其中 2 4个阳性克隆测序后显示为细胞色素P45 0新序列 ,由GenBank登录上网 ;经国际细胞色素P45 0命名委员会鉴定分别属CYP4家族CYP4C、CYP4D、CYP4H和CYP4J等 4个亚家族 ;2 4个CYP4cDNA片段中 ,来自敏感品系的 2个片段(NYDS3和NYDS5 )和来自抗性品系的 4个片段 (NYDR6、NYDR9、NYDR15和NYDR17)在两品系间存在差别 ,cDNA芯片信号亮度值均是抗性品系大于敏感品系 ,倍数在 3 .1～ 9.7范围内 ;NYDR17仅与抗性探针杂交 ;逆Northern再鉴定 ,获得了与cDNA芯片一致的结果。 [结论 ]淡色库蚊CYP4与溴氰菊酯抗性相关 ;在淡色库蚊溴氰菊酯抗性机理中 ,可能存在P45 0基因点突变而导致的特异表达。     

山东省淡色库蚊对杀虫剂的抗药性

目的 检测山东省各地淡色库蚊对常用化学杀虫剂的抗性状况,探讨抗性治理对策。方法 采用世界卫生组织生物测定方法,测定蚊幼虫的LC_(50)确定抗性水平,计算抗性系数。结果 对山东省10个地区近10年的淡色库蚊抗性测定表明,各地淡色库蚊对常用杀虫剂均产生了一定的抗性,对DDVP的抗性最高达21.18倍,对马拉硫磷的抗性高达5.39倍,对溴氰菊酯的抗性高达42倍。各地抗性水平有逐年增高的趋势。结论 山东各地淡色库蚊对常用杀虫剂均产生了一定的抗性,急需研究实施抗性治理对策。     

尖音库蚊淡色亚种细胞系的建立和特征

用尖音库蚊淡色亚种(Culer pipiens pallens)新孵Ⅰ龄幼虫建成蚊细胞系Cpp512.取蚊卵消毒,孵出幼虫,剪成碎片,接种于含15％FBS的改良TC199培养基中,2周左右由幼虫组织长出的细胞形成单层。现已传至53代。细胞形态以梭形为主。细胞对数期群体倍增时间(PDT)为21h。BrdU掺入法测得细胞周期时间为18h。透射电镜检查未见病毒或支原体污染。染色体检查以二倍体核型为主,多倍体亦存在。     

山东省城镇主要蚊虫对杀虫剂抗药性现状

山东省城镇主要蚊种淡色库蚊对ＤＤＴ、ＤＤＶＰ、马拉硫磷、溴氰菊酯和氯菊酯抗药性调查结果表明：淡色库蚊幼虫对所测试的上述５种杀虫剂均产生了不同程度的抗药性，其抗性指数分别为１．５８～２８．４５、４，８７～２４．９２、２．９１～５．５１、９．９４～４４．２１和２．９８～１２．９９。白纹伊蚊和三带喙库蚊对所测试的上述杀虫剂抗性程度较低。蚊虫对不同药物的抗性在地区之间有明显差异。