旋毛虫不同发育阶段同工酶的电泳分析

目的　通过对旋毛虫不同发育阶段同工酶酶谱变化的研究 ,以探讨其生物发育过程中的一些规律。　方法　应用聚丙烯酰胺凝胶电泳 (PAGE)和 UVP凝胶分析仪对猪型黑龙江株旋毛虫成虫、肌肉期幼虫和新生幼虫的酯酶同工酶(EST)、乳酸脱氢酶同工酶 (L DH)、苹果酸脱氢酶同工酶 (MDH)、延胡索酸酶同工酶 (MUF)进行分析。　结果　 3个发育时期的 MDH、EST酶谱基本相似 ;L DH的酶谱虽均有 1条带 ,但新生幼虫最深 ,肌肉期幼虫最浅 ;MUF酶谱新生幼虫最深 ,成虫较浅 ,肌肉期幼虫未见酶带。　结论　旋毛虫发育过程中 MDH、EST同工酶变化较小 ,但是 L DH、MUF同工酶存在较大差异     

不同地域二倍体型卫氏并殖吸虫同工酶及蛋白质的比较

目的比较观察不同地域的二倍体型卫氏并殖吸虫的生化特点。方法应用浓度梯度聚丙烯酰胺凝胶垂直板状电泳(CGPAGSE)和美国BioRedGelDoc2000凝胶成像分析系统对湖南、江西两地卫氏并殖吸虫成虫酯酶(EST)、苹果酸脱氢酶(MDH)、乳酸脱氢酶(LDH)、碱性磷酸酶(ALP)和蛋白质(PT)进行检测。结果两地虫株的EST几乎一致,MDH、LDH的酶带数、相对迁移率接近一致,仅见酶带蛋白含量及等级区带存在一定差异;ALP的酶带数、相对迁移率稍有差异,而酶带蛋白含量及等级区带的差别较明显;PT的蛋白带数目、相对迁移率、等级区带基本一致,而区带蛋白含量存在较明显差别。结论湖南、江西两地二倍体型卫氏并殖吸虫的同工酶及蛋白质呈多态特征,提示存在型内分化及不同生物型的可能性。     

不同地域二倍体型卫氏并殖吸虫同工酶及蛋白质的比较

目的比较观察不同地域的二倍体型卫氏并殖吸虫的生化特点。方法应用浓度梯度聚丙烯酰胺凝胶垂直板状电泳(CG-PAGSE)和美国Bio—Red Gel Doc 2000凝胶成像分析系统对湖南、江西两地卫氏并殖吸虫成虫酯酶(EST)、苹果酸脱氢酶(MDH)、乳酸脱氢酶(LDH)、碱性磷酸酶(ALP)和蛋白质(PT)进行检测。结果两地虫株的EST几乎一致，MDH、LDH的酶带数、相对迁移率接近一致，仅见酶带蛋白含量及等级区带存在一定差异；ALP的酶带数、相对迁移率稍有差异，而酶带蛋白含量及等级区带的差别较明显；PT的蛋白带数目、相对迁移率、等级区带基本一致，而区带蛋白含量存在较明显差别。结论湖南、江西两地二倍体型卫氏并殖吸虫的同工酶及蛋白质呈多态特征，提示存在型内分化及不同生物型的可能性。     

亲和层析法纯化华支睾吸虫抗原的研究

目的 探索华支睾吸虫特异性抗原的纯化方法。方法从华支睾吸虫病流行区的淡水鱼中分离华支睾吸虫囊蚴，接种动物，收集成虫，制备匀浆液（粗抗原），借助偶联华支睾吸虫病人血清抗体的Sepharose4B亲和层析柱，提取特异性抗原，用浓度梯度聚丙烯酰胺凝胶电泳（CG-PAGE）和免疫印迹方法鉴定纯化抗原的纯度和特异性。结果亲和层析法纯化抗原经CGPAGE显示5条蛋白带，免疫印迹试验鉴定均有抗原性，强阳性带蛋白分子质量单位为31ku，各区带蛋白与并殖吸虫、血吸虫血清抗体无交叉反应。粗抗原有16条蛋白带。结论经亲和层析法纯化的华支睾吸虫抗原特异性高。亲合层析是获取华支睾吸虫诊断用抗原的较佳方法。     

亲和层析法纯化华支睾吸虫抗原的研究

目的探索华支睾吸虫特异性抗原的纯化方法。方法从华支睾吸虫病流行区的淡水鱼中分离华支睾吸虫囊蚴,接种动物,收集成虫,制备匀浆液(粗抗原),借助偶联华支睾吸虫病人血清抗体的Sepharose4B亲和层析柱,提取特异性抗原,用浓度梯度聚丙烯酰胺凝胶电泳(CG-PAGE)和免疫印迹方法鉴定纯化抗原的纯度和特异性。结果亲和层析法纯化抗原经CG-PAGE显示5条蛋白带,免疫印迹试验鉴定均有抗原性,强阳性带蛋白分子质量单位为31ku,各区带蛋白与并殖吸虫、血吸虫血清抗体无交叉反应。粗抗原有16条蛋白带。结论经亲和层析法纯化的华支睾吸虫抗原特异性高。亲合层析是获取华支睾吸虫诊断用抗原的较佳方法。     

旋毛虫不同发育阶段同工酶的电泳分析

目的 通过对旋毛虫不同发育阶段同工酶酶谱变化的研究，以探讨其生物发育过程中的一些规律。方法 应用聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）和UVP凝胶分析仪对猪型黑龙江株旋毛虫成虫，肌肉期幼虫和新生幼虫的酯酶同工酶时期的MDH，EST酶谱基本相似。LDH的酶谱虽均有1条带，但新生幼虫最深，肌肉期幼虫最浅，MUF酶谱新生幼虫最深，成虫较浅，肌肉期幼虫未见酶带，结论 旋毛虫发育过程中MDH，EST同工酶变化较小，但是LDH、MUF同工酶存在较大差异。     

湖北地区肋壳钉螺与光壳钉螺种群间亲缘关系的探讨

应用聚丙烯酰胺凝胶垂直平板电泳对长江水系的湖北钟祥、蒲圻光亮钉螺和江陵、潜江、阳新助壳钉螺进行酯酶同工酶（EST）和苹果酸脱氢酶（MDH）电泳比较，结果显示：3地肋壳钉螺EST同工酶酶带数目、活性及Rf值完全一致；2地光亮钉螺与肋壳钉螺相比，酶谱特征也基本一致，EST同工酶仅1－3条弱带稍有差异；MDH同工酶仅蒲圻光亮钉螺与其它各地肋壳与光亮钉螺稍有差异，提示上述各地钉螺在种系进化上具有比较密切的亲缘关系。     

曼氏迭宫绦虫成虫与裂头蚴乳酸脱氢酶和酯酶同工酶的研究

本文应用聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)法分析了曼氏迭宫绦虫成虫与裂头蚴乳酸脱氢酶(LDH)和酯酶(EST)同工酶谱。结果表明,成虫LDH同工酶带和裂头蚴一样,仅有一条带,其位置差异不显著;成虫EST显示5条带,主带有2条;裂头蚴EST显示10条带,主带有3条。     

斯氏狸殖和丰宫并殖吸虫成虫乳酸脱氢酶同工酶等电聚焦电泳的比较研究

目的通过对云南省斯氏狸殖吸虫(Pagomogonimus skrjabini Chen.1959)和丰宫并殖吸虫(Paragonimus proliferus.1964)成虫乳酸脱氢酶(LDH)的比较研究,为吸虫的分类及定种提供科学依据方法采用丙烯酰胺凝胶圆盘等电聚焦电泳,对乳酸脱氨酶同工酶进行分离,并采用底物特一性染色法进行确定电泳结果。结果两虫种成虫乳酸脱氢酶同工酶谱分析,结果发现二者均显示5条酶带,其中斯氏狸殖吸虫的LDH有3条优势酶带(LDD_1、LDH_2、LDH_3)而丰宫并殖吸虫的LDH仅有2条优势酶带(LDH_1、LDH_2);对各成分的等电点及相对迂移率进行计算,发现丰宫并殖吸虫与斯氏狸殖吸虫间存在生化指标的差异,同时也发现两虫种间具有一共同性质的LDH_4。结论通过对两虫种同工酶谱的分析可知,它们之间具有一定的亲源性,但二者间又有同工酶谱的差异性,因此乳酸脱氢酶同工酶谱的分析可为并殖吸虫的分类提供生化依据和指标。     

不同发育期卫氏并殖吸虫的苹果酸脱氢酶同工酶的研究

本文用聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦(IEF)技术对卫氏并殖吸虫生活史3个发育阶段:囊蚴、童虫、成虫的苹果酸脱氢酶(MDH)同工酶谱进行研究。结果表明:从囊蚴到成虫MDH同工酶组份随着发育趋于复杂;在发育过程中,有些同工酶区带持续存在;随着宿主的转换有些区带消失或出现新的区带。定量分析显示同工酶活性随着生长和发育有所增减。结果提示:对发育过程中MDH酶谱的动态观察可部分地显示在遗传基因和寄生环境的双重影响下寄生虫所作出的适应性改变,是并殖吸虫发育生物学研究的有效手段之一。     

华支睾吸虫未脱脂和脱脂成虫抗原的免疫印迹分析

目的 寻找华支睾吸虫成虫抗原中具有特异性诊断价值的抗原组分。方法 应用SDS—PAGE和Westernblot分析华支睾吸虫成虫未脱脂、脱脂的可溶性抗原蛋白组分的血清学反应特征。结果 未脱脂成虫抗原有14条蛋白带可与华支睾吸虫病病人血清反应，其中分子质量单位为180、170、100、67、41、37、35、32、26ku是主带，180、170、37、35ku条带还可与日本血吸虫病、卫氏并殖吸虫病病人血清发生交叉反应。脱脂成虫抗原有10条蛋白带可与华支睾吸虫病病人血清反应，其中分子质量单位为180、100、67、37、35、24、20ku是主带，此外，180ku带可与日本血吸虫病和卫氏并殖吸虫病病人血清发生交叉反应，78ku带可以与血吸虫病病人血清发生交叉反应。结论 华支睾吸虫成虫抗原经脱脂处理后可减少与日本血吸虫病和卫氏并殖吸虫病病人血清交叉反应的蛋白组分数量。华支睾吸虫未脱脂和脱脂成虫抗原中主要的特异性抗原组分分别是100、67、41、32、26ku和100、67、37、35、24、20ku，这些组分抗原可用于华支睾吸虫病的免疫诊断。     

两型肝片吸虫同工酶等电点聚焦电泳比较研究

本文以等电点聚焦电泳对两型肝片吸虫过氧化物酶、苹果酸脱氢酶、酯酶同工酶进行了比较研究。结果显示,两型肝片吸虫过氧化物酶同工酶谱有显著性差别,苹果酸脱氢酶及酯酶同工酶谱也出现变异酶带。提示两型肝片吸虫已发生了一定程度的遗传分化。     

日本血吸虫不同发育阶段抗原与抗LSA兔血清的交叉反应分析

目的　为进一步阐明水蛭与日本血吸虫抗原交叉性机理提供依据。　方法　制备日本血吸虫子胞蚴抗原、尾蚴抗原、肝期童虫抗原、雌 (雄 )成虫抗原、虫卵抗原 ,采用Westernblot方法对制备的日本血吸虫不同发育阶段抗原与水蛭可溶性抗原 (LSA)免疫兔血清分别进行免疫印迹反应 ,分析其交叉性。　结果　LSA免疫兔血清能识别日本血吸虫不同发育阶段抗原 ,且所识别的抗原成分有明显差异 ,雌性成虫抗原和雄性成虫抗原分别有 3条和 2条蛋白组分可被LSA免疫血清识别 ,而不含抗虫卵和抗尾蚴抗体。　结论　在LSA成分中与血吸虫的共同成分主要存在于成虫中 ,LSA免疫血清中含有较多的抗雌性成虫抗体 ,而雄虫次之。     

华支睾吸虫富甘氨酸2a类抗原Cs4重组蛋白的免疫学特性与定位

目的 对华支睾吸虫富甘氨酸2a(glycine rich antigen 2a,GRA2a)类抗原Cs4重组蛋白(rCs4)进行免疫学特性分析,并对GKA2a类抗原进行组织定位.方法 使用蛋白质印迹(Western印迹)分析rCs4与华支睾吸虫病患者混合血清的免疫反应性,并分析GRA2a类抗原的分泌性.应用ELISA法检测rCs4免疫小鼠血清中抗rCs4特异性IgG水平,并动态检测华支睾吸虫感染兔0～44周的血清中抗rCs4特异性IgG水平.通过免疫荧光实验(immunofluorescence assay,IFA)对华支睾吸虫GRA2a类抗原进行组织定位.结果 纯化的rCsd可被华支睾吸虫病患者混合血清识别.rCs4单抗(mAb Cs4-31)与华支睾吸虫排泄分泌抗原和可溶性抗原在相对分子质量(Mr)26 000与55 000之间分别有13、15个反应条带,均呈阶梯状分布.ELISA检测rCs4免疫小鼠抗rCs4和ESA的IgG效价均达1:64 000,感染兔的抗rCs4特异性抗体平均水平自感染第4周开始上升,于第6周达到高峰,此后逐步递减,至第20周已呈较低水平.IFA检测发现GRA2a类抗原定位于华支睾吸虫成虫的表皮.结论 Cs4蛋白是华支睾吸虫在感染早期的分泌型蛋白,具较好的抗原性.GRA2a类抗原定位于华支睾吸虫成虫表皮.

Abstract：

Objective To study immunological characteristics of Cs4 recombinant protein(rCs4)of Clonorchis sinensis,one of the glycine rich antigen 2a(GRA2a)gene family member,and the histolocalization of GRA2a antigens. Methods The immunological reactivity of Clonorcihs sinensis Cs4 protein to pooled sera from clonorchiasis patients was investigated by using purified rCs4 in Western blotting.The secretory property of GRA2a antigens was also analyzed by Western blotting.The level of specific antibodies against rCs4 in the sera from mice immunized with rCs4,and the dynamic change of antibodies against rCs4 in the sera of C. sinensisinfected New Zealand rabbits(O-44 w post infection)were examined by ELISA.Immunofluorescence assay (IFA)was performed using the anti-rCs4 monoclonal antibody Cs4-31(mAb Cs4-31)to determine the localization of GRA2a antigens in C. sinensis adult worm.Results The purified rCs4 was recognized by pooled sera from clonorchiasis patients.13 and 15 bands appeared at the sites between M,26 000 and 55 000 after mAb Cs4-31 reacting with excretory-secretory antigen(ESA)and soluble adult worm antigen(AWA),respectively.The anti-rCs4 and anti-ESA serum antibody titers in mice immunized with rCs4 were 1:64 000.In C. sinensis infected rabbits,antibody level began to elevate at 4 w after infection,peaked at 6 w,and declined rapidly to a lower level at 20 w.IFA revealed that GRA2a antigens were localized in the tegument of C.sinensis adult worm.Conclusion The Cs4 protein was a secretory antigen appeared in the early stage of infection,and exhibited high antigenieity.GRA2a antigens were localized in tIle tegument of C. sinensis adult worm.     

斯氏狸殖吸虫成虫可溶性抗原蛋白质分析

目的分析和检测斯氏狸殖吸虫成虫可溶性抗原的特异抗原组分,为建立特异、敏感的免疫学诊断方法、研制抗斯氏狸殖吸虫药物和疫苗提供理论基础。方法用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、双向电泳(Two-dimension-al gel electrophoresis,2-DE)和免疫印迹(Western blot)等方法,对斯氏狸殖吸虫成虫可溶性抗原进行分析。结果SDS-PAGE分离出22条蛋白带,其中主带8条,分子质量单位为13~64 ku,未见65 ku以上条带。Western blot显示20条显色带,主带6条,分子质量单位分别为13、18、22、28、35和64 ku。2-DE电泳分离出斯氏狸殖吸虫成虫可溶性抗原48个多肽斑点,分子质量单位为14~70 ku,绝大部分分布于pI 3.10~7.14,少数分布于pI 8.78~9.85,在pI 7.14~8.78之间几乎未见多肽斑点。Western blot分析出其中的10个主要多肽斑点能被斯氏狸殖吸虫病患者血清识别,大部分为集中在酸性区域的小分子多肽。结论斯氏狸殖吸虫成虫可溶性抗原经SDS-PAGE电泳分离出的22条蛋白带中,有6条蛋白含量较高,能被斯氏狸殖吸虫病患者血清识别。2-DE电泳分离出的48个多肽斑点中,有10个含量较高,能被斯氏狸殖吸虫病患者血清识别,大部分为偏酸性的小分子多肽。     

华支睾吸虫15/16 ku蛋白的纯化与部分氨基酸顺序测定

目的进一步证明华支睾吸虫成虫15/16 ku蛋白(Cs15/16)用于诊断的免疫活性,同时测定其部分氨基酸顺序,便于今后对此蛋白的人工合成等分子生物学研究及其相关免疫学研究.方法用高效液相色谱技术(HPLC)自华支睾吸虫粗抗原(Clonorchis sinensis adultworm antigens,CAA)中提纯15/16 ku蛋白,用酶联免疫吸附实验(ELISA)测定其抗原活性,并使用蛋白质自动测序仪测定其N端部分氨基酸顺序.结果3个具有抗原活性的纯化样品(H3、H11及H13)中,H13的诊断效果接近CAA,敏感性达90%,特异性95%.分别测获3个纯样的N端15、14和20个氨基酸残基(aa),其中H11的N端14个aa与H13的前14个完全相同.结论进一步证明了Cs15/16为有效的诊断抗原,测获的部分氨基酸顺序可为更深入的研究提供参考.     

Comparative studies on several biochemical indices of Anopheles anthropophagus and Anopheles sinensis

Proteins, sugars and esterase isoenzymes of An. anthropophagus and An. sinensis were compared by IEF and two dimensional gel electrophoresis. The results show that there are some differences in the electrophoretic patterns between An. anthropophagus and An. sinensis. The glycoprotein, lipid protein, glycolipidprotein, protein, polysaccharide and esterase isoenzymes showed 10, 0, 6, 14, 2 and 13 bands in An. anthropophagus; 10, 1, 5, 16, 3 and 15 in An. sinensis. There exist 234 and 240 polypeptide spots in An. anthropophagus and in An. sinensis, respectively, altogether 27.8% of polypeptide spots being different.