压电胰岛素免疫传感器的实验研究

目的 构建一种新型压电胰岛素免疫传感器。方法 AT切向、基频10MHz的石英晶体用金属夹县和乳胶套圈固定形成检测池，抗人胰岛素单克隆抗体采用巯基化方法固定在金膜电板表面制成抗体敏感膜，构成压电胰岛素免疫传感器。结果 构建的压电胰岛素免疫传感器对胰岛素的响应特性良好，其线性检测范围为2．5—160．0mIU／L，C肽对胰岛素的检测基本无干扰，但胰岛素原与传感器存在轻微的交叉反应，传感器可再生后重复使用5次；60例临床标本检测结果与放射免疫检测法符合(P＞0．05)，两种方法的相关系数为0．92。结论 研制的压电胰岛素免疫传感器具有灵敏度高、特异性好、不需标记、操作简单、省时、能实时再现检测和重复使用等优点，对比实验表明其检测结果准确，能用于临床实验诊断，具有临床推广价值。     

压电石英晶体甲胎蛋白免疫传感器的实验研究

目的　构建一种新型压电甲胎蛋白 (AFP)免疫传感器。方法　AT切向、基频 10MHz的石英晶体用金属夹具和乳胶套圈固定组成检测池 ,抗人AFP单克隆抗体采用巯基化方法固定在金膜电极表面制成抗体敏感膜 ,构成压电AFP免疫传感器。结果　构建的压电AFP免疫传感器对AFP的响应特性良好 ,其线性检测范围为 2 0～ 10 0 0ng ml ,癌胚抗原(CEA)、前列腺特异抗原 (PSA)、人绒毛膜促性腺激素 (hCG)等对AFP的检测基本无干扰 ;传感器可再生后重复使用 5次 ;68例临床标本检测结果与放射免疫检测法符合 ,两种方法的相关系数为 0 92 ,P <0 0 1。结论　研制的压电AFP免疫传感器是一种灵敏度高、特异性好、不需标记、操作简单、省时、能重复使用和实时在线检测AFP的新方法 ,对比实验表明其检测结果准确 ,能用于临床实验诊断 ,具有临床推广价值。     

压电石英晶体微阵列免疫传感器检测IgG的实验研究

目的 构建一种新型压电石英晶体人免疫球蛋白(IgG)的免疫微阵列传感器。方法 抗IgG单克隆抗体采用蛋白A(SPA)法固定在AT切向、基频10MHz的石英晶体微阵列金膜电极表面制成抗体敏感膜，构成压电石英晶体IgG免疫微阵列传感器。结果 构建的IgG压电石英晶体免疫微阵列传感器对IgG的响应特性良好，其检测下线为0．5mIU／ml。结论 研制的压电石英晶体IgG免疫微阵列传感器具有灵敏度高、特异性好、成本低廉、操作简单、快速，能在线实时检测等优点，可用于临床实验诊断。     

压电石英晶体微阵列免疫传感器检测hCG的实验研究

目的　构建一种新型压电石英晶体人绒毛膜促性腺激素 (hCG)免疫微阵列传感器。方法　抗hCG β单克隆抗体采用蛋白A(SPA)法固定在 2× 5的AT切向、基频 1 0MHz的石英晶体微阵列金膜电极表面制成抗体敏感膜 ,构成压电石英晶体hCG免疫微阵列传感器。结果　构建的hCG压电石英晶体微阵列免疫传感器对hCG的响应特性良好 ,其检测线性范围为 2 .5～ 2 50mIU ml,TSH、FSH、LH对hCG的检测基本无干扰 ;60例临床标本检测结果与荧光免疫检测法符合 (P >0 .0 5) ,两种方法的相关系数为 0 .92。结论　研制的压电石英晶体hCG免疫微阵列传感器具有灵敏度高、特异性好、成本低廉、省时、操作简单、不需标记、能在线实时检测等优点 ,对比实验表明其检测结果准确 ,能用于临床实验诊断检测     

电化学发光免疫分析法检测血浆C肽的临床评价

目的：探讨电化学发光免疫分析法（ECLIA）测定血浆C肽的效果及临床应用价值。方法：采用电化学发光免疫分析法和酶联免疫分析法（ELISA）分别测定糖尿病病人的血浆C肽含量，并用电化学发光免疫分析法同时测定胰岛素含量，并对测定结果通过SPSS统计软件进行相关统计分析。结果：ECLIA测定C肽的平均批内与批间变异系数分别为2．13％，4．27％，平均回收率是98．9％，灵敏度为0．01ng／mL；ELISA法的平均批内与批间变异系数分别为10．8％，16．5％，平均回收率是91．9％，灵敏度为0．06ng／mL；ECLIA及ELISA法所测C肽含量与ECLIA法所测胰岛素含量均呈正相关（r=0．96，r=0．89，P均〈0．05）。结论：ECLIA法测C肽的各技术参数优于EUSA法，且操作简便，检测速度快，具有重要临床应用价值。     

用酶联免疫法替代放射免疫法检测胰岛素、C—肽及其在临床上的应用

目的：用酶联免疫的方法检测胰岛素、C－肽。方法：胰岛素采用双抗体夹心酶联免疫吸附实验进行检测；C－肽采用抗原竞争酶联免疫吸附实验进行检测。结果：通过对30份病人血清进行放免和酶免检测，两种方法具有良好的相关性，无显性差异；同一份标本重复试验，此两种试剂盒具有较高的精确度；通过对健康组、IGT组及2型糖尿病组病人胰岛素、C－肽结果分析，IGT组及2型糖尿病组病人均有不同程度的胰岛素抵抗。结论：酶免法检测胰岛素、C－肽具有操作简单、灵敏度高、特异性强、稳定性好、不需要特殊设备、检测快速、准确、对操作无损害，使病人及时得到诊断和治疗。     

慢性肾衰竭患者肾衰竭期及尿毒症期C肽、胰岛素测定结果分析

目的：研究C肽，胰岛素，C肽／胰岛素比值与肾脏病变之间的关系。方法：对45例慢性肾衰竭患者血中C肽、胰岛素进行检测并与正常对照组比较。结果：表明慢性肾衰竭时内环境可影响激素的合成和分泌速率，及其从肾脏的降解清除。结论：慢性肾衰竭患者中，肾衰竭期与尿毒症期的空腹C—P、Ins均明显高于对照组，且具有显著性差异（P〈0．05）。     

人胰岛素原C肽基因高效表达载体的构建

目的：构建一种快速、高效的人胰岛素原C肽基因的表达载体，为有效地提高重组C肽的产量奠定了基础。方法：以人胰岛素原C肽的基因序列为基础，运用DNA重组技术构建出含5个拷贝的头到尾连接的C肽基因片段的高效表达载体。结果：通过酶切鉴定和DNA测序分析证实，实验成功地构建了人胰岛素原C肽基因的表达载体pMAL—C2E—C5.结论：人胰岛素原C肽基因表达载体pMAL—C2E—C5的成功构建，为进一步研究在大肠杆菌中表达人C肽融合蛋白，继而获得高产的单体C肽奠定了基础。     

套管针采血对胰岛素和C肽测定结果的影响

目的：探讨套管针采血对胰岛素和C肽测定结果的影响。方法：采用自身前后对照试验，对60名受试者前、后分别用套管针直接、弃血2ml后和常规方法同时静脉穿刺采血，分别抽取空腹及口服葡萄糖（75g）后30、60、120、180min的静脉血，用放射免疫分析法测定其血清胰岛素和C肽浓度。结果：①套管针直接采血法测定血清胰岛素和C肽浓度与空腹无显著性的差异（P＞0．05），糖负荷后各时相点均有显著性差异（P＜0．01）；试验组与对照组的糖负荷后胰岛素对数值有非常显著的相关性（P＜0．01），C肽对数值亦有显著的相关性（P＜0．05）。②套管针采血时先弃血2ml的新方法测定结果与对照组无显著性差异，试验组与对照组胰岛素及C肽对数值有显著的相关性（P＜0．01）。结论：套管针封管后再采血对胰岛素和C肽测定结果存在显著的差异，这种差异对病人诊治存在一定影响；而弃血2ml后采血对其测定结果无显著影响。     

压电石英晶体传感器检测单链DNA的研究

目的：对石英晶体传感器检测单链DNA的可行性进行论证，并对其DNA固定方法进行研究。方法：利用聚乙烯亚胺(PEI)黏附和戊二醛(Glu)交联法，将单链DNA探针固定在基频为10MHz的AT切型石英晶体的镀金表面，制成压电石英晶体DNA传感器，用该DNA传感器进行互补单链DNA定量定性检测，并用1．2mol/L NaOH和1．2mol/L HCl对杂交后的传感器进行了再生。结果:在50-400ng/ml的范围内，响应信号与检测浓度成线性相关，并具有良好的特异性。杂交后的DNA传感器能反复再利用。结论：石英晶体传感器可以用于DNA的杂交检测。     

压电免疫传感器与ELISA、TPPA法在梅毒筛查试验中的对比研究

目的研制压电免疫传感芯片法快速检测梅毒特异性抗体。方法采用吸附-交联法将梅毒基因工程重组抗原固定在镀金石英晶体表面。运用压电免疫传感阵列检测技术快速检测梅毒特异性抗体。以压电免疫传感芯片为实验方法,以ELISA作对照方法,以TPPA作为确认方法进行对比研究。结果30份临床样本,实验方法与对照方法的灵敏度均为100％,特异度分别是85％和75％,一致率分别是90％和83．3％。压电蛋白芯片法与TPPA法检测数据之间存在相关关系,属半定量实验。结论运用压电免疫传感阵列对梅毒螺旋体抗体进行快速检测,具有灵敏度高、特异性好,检测速度快等优点,特别适用于野战条件下献血者血液快速筛查。     

适配子型压电石英晶体传感器探针固定方法的研究

目的 比较金膜表面两种探针固定法的优劣,选择适配子型压电传感器探针固定的最佳方法.方法 用巯基固定法及生物素-亲和素固定法将针对人IgE的适配子探针固定在压电传感器的金膜表面,对不同浓度IgE引起的频率变化进行检测.结果 与巯基法相比,生物素-亲和素法固定探针压电传感器频率下降更为明显,检出限低,线性范围宽,0.1～2.5 mg/L浓度范围内IgE浓度与频率变化呈明显的线性相关,相关系数0.994 5.结论 在压电基因传感器探针固定中效果良好的巯基法在适配子探针固定中并不适用,生物素-亲和素法在适配子压电传感器探针固定中有明显优势.     

用于AFP检测的电流型免疫传感器的研究

目的 研制一种新的检测AFP的电流型免疫传感器。方法 通过把抗体固定在电聚合邻苯二胺膜的铂电极上，夹心法连接HRP标记的AFP抗体，电流法检测HRP作用于底物对苯二酚后的产物产生的还原电流间接检测血清AFP浓度。结果 制得的传感器在5～400ng／ml范围内．电流和AFP浓度的对数成线性关系，相关系数为0．986．最低检测限为0．51ng／ml，初步临床实验结果良好。结论 研制的传感器具有保存时间长、灵敏度高、特异性好、重复性好、无放射性等优点．有望在临床检测中发挥作用。     

纳米金颗粒质量放大压电DNA传感器频移信号的研究

目的探讨纳米金颗粒质量放大压电DNA传感器频移信号的可行性,以进一步提高检测灵敏度。方法将巯基化的单链DNA探针固定于压电DNA传感器石英晶体金膜表面,封闭后加入合成的生物素化的互补靶DNA与之进行杂交反应,最后用5nm粒径的链亲和素标记的胶体金追加标记于杂交后的生物素化的靶DNA上,以增加石英晶振金膜表面的质量负载,从而降低石英晶振的响应频率,进一步放大频移信号。结果检测终浓度为10-8mol/L的阳性靶序列时杂交反应前后频移为(12.7±5.5)Hz,加入终浓度为9%的纳米金颗粒放大后总频移为(126±2.6)Hz,后者显著高于前者(P<0.01)。另外,对不同终浓度的阳性靶序列检测后发现,频移与其终浓度的lg值之间具有显著的线性关系,相关系数为0.974,而且最低检出限达到了10-12mol/L。结论实验结果表明该方法可以显著放大压电DNA传感器的频移信号,从而进一步提高压电DNA传感器检测的灵敏度。     

纳米微粒增敏的压电化学传感器

以TiO2 纳米微粒膜作为固载 β 环糊精的基体 ,可以实现 β 环糊精在压电石英晶体表面的超容量固载 ,固载容量为 4 μg cm2 。β 环糊精 TiO2 纳米微粒膜修饰的压电传感器对苯、甲苯、硝基苯、氯苯、o 二甲苯、m 二甲苯、p 二甲苯气体检测时响应时间为 1min ,检测浓度下限可低至 4 0ng ml。该方法为提高压电化学传感器的灵敏度和缩短响应时间提供了一种新方法     

声电子胰岛素免疫传感器固定化活性抗体膜的制备研究

选择５％聚乙烯醇为膜材料，与１０ｕ／ｍｌ胰岛素抗体混匀，在压电石英晶体上制备活性抗体膜。放免法检测结果表明，抗体膜具有良好的机械强度、透性和响应性能。抗体膜与不同浓度的胰岛素抗原结合，显示抗体膜上胰岛素结合量与胰岛素浓度呈线性相关。     

压电石英晶体传感器检测血浆纤维蛋白原方法的研究及应用

目的建立一种压电石英晶体传感器检测血浆纤维蛋白原(Fib)的方法.方法采用AT切向、基频10MHz的银膜石英晶体作为压电元件;观察血浆凝集过程中晶体振荡频率的变化,确定血浆凝集反应的起点和终点.结果 (1)检测池加入凝血酶原待频率稳定后,血浆标本加入反应体系后,晶体振荡快速下降,由于反应中形成的纤维蛋白原凝块的质量、体积与晶体接触的面积以及血清产生的量不同,造成频率瞬时的上升、下降,或频率稳定,直至反应结束频率平稳,加样后频率下降的起点为血浆凝集反应的起点,频率上升、下降,稳定的起始点为反应的终点,计算两点的时间即为反应时间,查标准曲线得纤维蛋白原的含量.(2)该方法的检测结果与STAGO磁珠检测法的相关性好(r＝0.957).结论压电石英晶体传感器检测血浆纤维蛋白原是一种实时在线检测的方法,在线观测凝集反应的终点,反应的起点和终点的判别方便、可靠、准确.且操作简单,快速,成本低廉,是一种敏感性高、重复性好的方法,并可用于临床检测.     

基于多壁碳纳米管-壳聚糖-硫堇纳米复合物修饰甲胎蛋白免疫传感器的研究

目的采用多壁碳纳米管-壳聚糖-硫堇(MWCNT-CS-THi)纳米复合物及半胱氨酸盐酸盐共修饰于玻碳电极表面固载抗体制得高灵敏甲胎蛋白免疫传感器。方法先在玻碳电极表面滴涂一层MWCNT-CS-THi纳米复合物,随后利用壳聚糖和硫堇分子中大量的正电荷氨基固定纳米金(GNPs)并吸附半胱氨酸盐酸盐(CH),最后用戊二醛(GA)交联甲胎蛋白特异性抗体制得电流型免疫传感器。结果在最佳实验条件下,该传感器响应的峰电流值与甲胎蛋白抗原(AFP)浓度在0.1～200.0ng/ml的范围内保持良好的线性关系,检测下限为0.07ng/ml。结论成功建立了甲胎蛋白免疫传感器,该方法制备简单,线性范围宽,检测下线低。