肝星状细胞中的TGFβ信号转导通路

肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)活化是肝纤维化形成的中心环节,转化生长因子β(transforming growth factorβ,TGFβ)启动了肝星状细胞的活化,TGFβ信号在HSC内主要通过ALK5/smad2/3途径在HSC内传递,而近年来的研究表明,ALK1/smad 1/5途径及非smad信号也起非常重要的作用.有必要对HSC中复杂的TGFβ信号进行研究,为有效抗TGFβ治疗肝纤维化提供依据.     

miR-556-3p通过调控PTEN/AKT信号通路影响肝细胞癌的转移活性

目的 通过探索miR-556-3p在肝癌细胞发生发展过程中的作用机制,以期为肝细胞癌的预防和治疗提供一个新思路。方法 取肝细胞癌组织和癌旁肝组织,采用PCR法检测miR-556-3p水平,采用免疫组化法检测磷酸酯酶与张力蛋白同源物(PTEN)表达,采用荧光素酶法检测细胞作用靶点,应用miR-556-3p mimic、miR-556-3p NC、PTEN cDNA和PTEN siRNA转染HepG2细胞,采用Western blotting法检测PTEN/AKT信号通路相关蛋白表达。采用CCK-8法检测细胞增殖能力,采用Transwell法检测细胞侵袭力,使用流式细胞术检测细胞凋亡。应用生物信息学法预测miR-556-3p对HepG2细胞PTEN/AKT通路的调控作用。结果 肝癌组织miR-556-3p水平显著低于癌旁组织(P<0.05),HepG2细胞miR-556-3p水平显著低于正常肝细胞(P<0.05);荧光素酶分析显示,PTEN是miR-556-3p的直接靶点;miR-556-3p处理的HepG2细胞增殖、侵袭和凋亡率显著低于miR NC处理组(P<0.05)...     

PI3K/AKt信号通路与肝细胞癌

PI3K/AKt信号通路与人类肿瘤的发生、发展密切相关。近年来研究表明,肝细胞癌(HCC)中存在PI3K/AKt信号通路异常。此文就PI3K/AKt信号通路的构成、转导途径及其在HCC中的作用作一综述。     

miR-29b通过PI3K/AKT信号通路抑制白血病细胞的增殖

目的探讨miR-29b对K562白血病细胞增殖与凋亡的影响及相关机制。方法利用Lipofectamine~(TM)2000脂质体将miR-29b mimics,miR-29b NC转入白血病细胞K562中,实时荧光定量PCR法检测miR-29b表达,MTT法检测细胞活力,EdU染色法检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞周期,Western印迹检测细胞中B淋巴细胞瘤(Bcl)-2、Bcl-2相关X蛋白(Bax),髓样细胞白血病(MCL)-1,细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)4,CDK6蛋白表达及磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)激活情况。结果与miR-29b NC组比较,miR-29b mimics组miR-29b表达上调(P<0.01),细胞活力及细胞增殖率降低(P<0.01),细胞周期阻滞在G1期(P<0.01),Bcl-2,MCL-1,CDK4,CDK6,PI3K及p-AKT表达量均明显下调(P<0.01),Bax表达量明显上调(P<0.01)。结论 miR-29b mimics能显著抑制白血病细胞K562增殖、诱导细胞凋亡,可能与阻断PI3K/AKT信号通路有关。     

基于PI3K/AKT/Bcl-2信号通路探讨加味柴胡当归汤抑制肝星状细胞纤维化的机制

目的 探究加味柴胡当归汤对肝星状细胞纤维化的抑制作用及其通过调控磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)/B细胞淋巴瘤(Bcl)-2信号通路抗肝纤维化的机制。方法 培养永生化的大鼠肝星状细胞(HSC-T6),设置正常对照组(不作干预)、模型组[血小板衍生生长因子(PDGF)-BB干预],中药组(PDGF-BB+含药血清干预),激动剂+中药组(PDGF-BB+HY-101625+含药血清干预),抑制剂+中药组(PDGF-BB+LY294002+含药血清干预),采取不同干预方式进行实验。使用CCK-8试剂盒和细胞凋亡试剂盒检测细胞增殖活性和凋亡水平;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原(COL-Ⅰ)、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、MMP组织抑制剂(TIMP)-1表达水平;进行Western印迹实验分析细胞中Bcl-2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸蛋白酶(Caspase)-3、Caspase-9、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)表达;利用qRT-聚合酶链反应(PCR)法测定细胞中PI3K、p-PI3K、AKT...     

阻断Wnt/β-catenin信号通路对活化肝星状细胞凋亡的影响

HSC的活化是肝纤维化的中心环节,参与HSC活化的多种因素如生长因子、细胞因子、氧化应激产物等,需通过HSC细胞内的信号转导才能发挥作用。Wnt／β-catenin信号通路是调控细胞生长、增殖和凋亡的关键通路,在胚胎发育和肿瘤发生中起着重要作用。近年来发现该信号通路与肺及肾纤维化的形成密切相关。     

健脾消癥方对肝癌细胞PI3K/AKT信号通路的影响

目的探讨健脾消癥方对H22肝癌细胞凋亡、增殖及磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)信号通路的影响。方法用不同浓度(0.5,1.0,2.0 mg/ml)的健脾消癥方处理H22细胞24、48、72 h,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期,Western印迹检测细胞周期蛋白(Cyclin)D1,Cyclin E,p21,p27表达及PI3K/AKT信号通路激活情况。结果与对照组比较,0.5,1.0,2.0 mg/ml健脾消癥方能显著提高细胞增殖抑制率,提高细胞早期及晚期凋亡率,使细胞周期阻滞在G1期,下调Cyclin D1及Cyclin E表达,上调p21和p27表达,同时下调PI3K及p-AKT表达,差异均有统计学意义(均P0.01)。结论健脾消癥方能显著抑制H22肝癌细胞增殖,并促进细胞凋亡,与阻断PI3K/AKT信号通路有关。     

蛇床子素通过抑制PI3K/AKT信号通路诱导K562细胞凋亡和增殖抑制

目的:研究蛇床子素对人慢性髓系白血病细胞K562增殖和凋亡的影响,并探讨其相关作用机制。方法:培养髓系白血病细胞K562,分别用不同浓度的蛇床子素处理(0、5、10、20μg/ml)。细胞培养48h后,利用MTT法检测K562细胞增殖;流式检测K562细胞凋亡;Western blot法检测PI3K、p-AKT、AKT、Bax、Bcl-2和Cleavage-Caspase3表达。结果:蛇床子素可以呈浓度依赖性的诱导K562细胞增殖抑制和凋亡,上调Bax和Cleavage-Caspase3表达,下调PI3K、p-AKT和Bcl-2,对AKT表达无明显影响。结论:蛇床子素可通过抑制PI3K/AKT信号通路而诱导K562细胞增殖抑制和凋亡。     

nesfatin-1在胰岛素抵抗骨骼肌细胞中对PI3K/AKT信号通路的影响

目的探讨过表达新型饱食分子蛋白(nesfatin-1)对L6骨骼肌胰岛素抵抗及磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)信号通路和下游糖原合成酶激酶(GSK)-3β、葡萄糖转运蛋白(GLUT)-4表达的影响。方法建立L6细胞胰岛素抵抗模型后,用过表达nesfatin-1的腺相关病毒(AAV)和空载对照腺相关病毒(PC)感染L6细胞,将细胞分为四组,分别为空载对照腺相关病毒组(PC组),PC+棕榈酸(PA)组,过表达nesfatin-1组,nesfatin-1+PA组,四组均加入100 nmol/L重组人胰岛素(Insulin),PC+PA组和nesfatin-1+PA组再加入250μmol/L PA处理24 h后收集培养基上清,用葡萄糖过氧化物酶方法测定上清液中葡萄糖含量,用Western印迹检测PI3K、AKT及其下游信号分子GSK-3β、GLUT-4的蛋白表达变化。结果与PC组比较,过表达nesfatin-1组p-AKT、GSK-3β、GLUT-4蛋白表达水平明显增高(P<0.05);与PC+PA组相比,nesfatin-1+PA组p-AKT、GSK-3β、GLUT-4蛋白表达水平明显增高(P<0.05);与nesfatin-1组相比,nesfatin-1+PA组p-AKT、GSK-3β、GLUT-4蛋白表达水平明显下降(P<0.05)。结论过表达nesfatin-1可显著增加骨骼肌细胞对葡萄糖的摄取,减轻胰岛素抵抗,并经PI3K-AKT通路上调下游GSK-3β、GLUT-4的表达。     

心钠素对大鼠肝星状细胞活化过程中TGF-β1/Smads信号通路的影响

目的 探讨心钠素(ANP)对大鼠肝星状细胞(HSC T6)活化过程中TGF-β1/Smads信号通路的影响.方法 待HSC T6细胞贴壁后,在细胞培养瓶中加入ANP 10μmol/L培养1h,采用免疫荧光法、利用激光共聚焦显微镜观察细胞内Smad4和pSmad2/3蛋白细胞内转位.将HSC T6细胞分成空白未活化组、空白活化组、ANP1 μmoL/L组、ANP 10 μmol/L组,继续培养1h,分别提取细胞质蛋白及核蛋白,以Western blotting法检测Smad4蛋白表达水平变化.ANP作用24 h,收集细胞培养液,以ELISA法检测Ⅰ型胶原、MMP-13分泌量.结果 空白未活化组、ANP 10 μmol/L组Smad4、pSmad2/3在胞质内表达,空白活化组在核内表达;ANP1、10 μmol/L组细胞质内Smad4蛋白表达量较空白活化组增多(P均＜0.05),并随ANP浓度的增大表达增强(P＜0.05),而细胞核内Smad4蛋白表达量变化趋势与细胞质蛋白相反(P均＜0.05).ANP作用HSC T6 24 h后,细胞上清液中Ⅰ型胶原的分泌量较空白对照组减少(P＜0.05),MMP-13分泌量无明显变化.结论 ANP可在一定程度上阻断大鼠HSC T6细胞活化过程中TGF-β1/Smads信号通路的传导,减少了Ⅰ型胶原的分泌量,起到了抗肝纤维化的作用.     

阻断Wnt-β-catenin信号通路对肝星状细胞活化的影响

目的探讨活化的肝星状细胞（HSC）内是否存在功能性的Wnt-β-catenin信号通路的激活，以及阻断该信号通路对HSC活化的影响。方法免疫细胞化学染色检测β-catenin在HSC-T6细胞内的表达。通过转染T细胞因子（T-cellfactor，TCF）依赖的荧光素酶报告质粒（pTOPFI。ASH）测定HSC—T6细胞内的Wnt-β-catenin信号。将TCF的显性负性突变体dnTCF表达质粒转染HSC-T6阻断Wnt-β-catenin信号的转导，用Western印迹法检测α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）及Ⅰ型胶原表达变化。结果HSC-T6细胞核内有β-catenin的表达；转染pTOPFLASH的细胞荧光素酶活性显著高于转染pFOPFLASH的对照组（P〈0．01）；与转染空质粒的对照组相比，转染dnTCF的HSC-T6细胞α-SMA及Ⅰ型胶原表达分别下降52．9％和37．5％（P〈0．05）。结论活化的HSC中存在Wnt-β-catenin信号通路的激活，阻断该信号通路可抑制活化HSC的功能。     

P13K/AKt信号通路与肝细胞癌

P13K/AKt信号通路与人类肿瘤的发生、发展密切相关.近年来研究表明,肝细胞癌(HCC)中存在P13K/AKt信号通路异常.此文就P13K/AKt信号通路的构成、转导途径及其在HCC中的作用作一综述.     

基因芯片研究甘草酸对大鼠肝星状细胞转化生长因子-β信号通路的影响

目的应用基因芯片技术探讨甘草酸对大鼠肝星状细胞（HSC）转化生长因子（TGF）-β信号转导通路相关基因表达的作用。方法体外分离、培养大鼠HSC，分为对照组、TGF-β1组（5ng／ml）、TGF-β1（5ng／ml）＋甘草酸（100μmol／L）组，10h后分别收集细胞抽提总RNA。应用针对于TGF-β/BMP信号转导通路的GEArray^TM Q基因芯片技术，筛选出甘草酸作用后HSC中TGF-β信号通路表达发生明显改变的相关基因。结果经TGF-β1作用后上调，再经甘草酸作用后下调的基因有16项，占16．7％（如Smad蛋白2，Smad蛋白3，Smad蛋白7，a1Ⅲ型前胶原，a2 Ⅰ型前胶原，纤溶酶原激活物抑制剂1）；经TGF-β1作用后下调，再经甘草酸作用后上调的基因有5项，占5．2％（如骨成型蛋白7，胰岛素生长因子结合蛋白3等）；经TGF-β1作用后上调，再经甘草酸作用后上调更显著的基因有2项，占2．1％（转化生长因子2型受体，转化生长因子受体3）。并用RT-PCR法验证了部分基因（Smad蛋白2，Smad蛋白3，Smad蛋白7）mRNA的表达与基因芯片中变化趋势的一致性。结论甘草酸可能通过干预大鼠HSC中TGF-β信号通路，减少胶原合成，促进细胞外基质降解而发挥抗纤维化的分子机制。     

蛋白激酶C及转化生长因子β1信号通路对肝星状细胞激活的影响

目的探讨蛋白激酶C（PKC）活性改变对HSC表达TGF β1的影响及在HSC激活中的作用。方法将肝星状细胞系rHSC-99分为3组：对照组（A组），PKC激动剂佛波酯0．5μmol／L组（B组），PKC抑制剂Calphostin C 100nmol／L组（C组）。加药后0、3、6、12h和24h分别检测各组细胞PKC活性的变化；作用24h后，采用Western blot和RT—PCR方法检测各组细胞TGF β1，Smad 4，Ⅰ、Ⅲ型胶原和α-平滑肌肌动蛋白的表达；采用MTT法检测细胞的增殖情况。结果 佛波酯作用后PKC的活性显著增强，而Calphostin C则抑制PKC的活性。PKC活性增强后，与对照组相比TGF β1及其下游信号分子Smad 4的表达分别升高了4．8倍和13．1倍（P〈0．01）；HSC的Ⅰ、Ⅲ型胶原和α-平滑肌肌动蛋白的表达分别升高了2．4倍、1．8倍和1．3倍（P〈0．01），并促进HSC的增殖；PKC活性被抑制后则能抑制以上作用。结论PKC活性的改变能调控HSC中TGF β1的表达，在HSC的激活中发挥调节作用。     

PAX6通过PI3K/AKT信号通路抑制mESCs增殖的研究

目的探讨PAX6对小鼠胚胎干细胞(embryonic stem cells,ESCs)增殖的影响及其机制。方法用过表达PAX6慢病毒重组质粒载体感染mESCs,上调mESCs中PAX6的表达;采用CCK8检测PAX6对mESCs增殖的影响;采用流式细胞仪检测PAX6对mESCs周期的影响;采用葡萄糖生化试剂盒和ATP检测试剂盒分别检测mESCs葡萄糖和ATP含量;Western blot检测PI3K/AKT信号通路相关蛋白p-PI3K、PI3K、p-AKT、AKT、p-P70S6K、P70S6K、GLUT1的表达。结果慢病毒重组质粒载体感染后,PAX6过表达组mESCs较对照组PAX6表达增加,细胞增殖受到抑制,并出现G1期阻滞(二倍体含量百分率55.54±1.00%vs 41.12±0.63%,P0.05);与对照组比较,PAX6过表达减少mESCs中ATP(277.7±14.3 vs 804.4±13.4 umol/gprot,P0.05)及葡萄糖含量(2.55±0.16 vs 5.16±0.15 mmol/L,P0.05);与对照组相比,PAX6过表达组、PAX6过表达+BKM120组和BKM120组的p-PI3K,p-AKT,p-P70S6K,GLUT1蛋白表达量显著降低。结论 PAX6可通过抑制PI3K/AKT信号通路的活性,减少mESCs中的ATP及葡萄糖含量,从而抑制mESCs的增殖。     

肝星状细胞活化相关信号通路在肝纤维化中的研究进展

肝纤维化是多种慢性肝损伤造成的细胞外基质(extracellular matrix, ECM)过度累积及降解不足的病理结果,如不加以干预会逐渐进展为肝硬化,甚至肝细胞癌。肝星状细胞(hepatic stellate cell, HSC)是ECM的主要来源,并且HSC在肝纤维化的起始、发展和消退过程中发挥关键作用。近年来,HSC活化涉及的信号传导通路成为研究热点,本文总结了HSC活化过程中的重要信号通路。     

微管相关蛋白1通过Wnt/β-catenin信号通路促进肝细胞癌的早期复发

正【据《Gut》2016年3月报道】题:微管相关蛋白1通过Wnt/β-catenin信号通路促进肝细胞癌的早期复发(作者Chen J等)肝细胞癌(HCC)是全球癌症死亡的第二大原因。HCC患者微管相关蛋白发生了变化。然而,这些变化背后的机制仍知之甚少。来自新加坡分子与细胞生物学研究所的Chen等研究了细胞分裂的调控者——微管相关蛋白(PRC)1在HCC发生和HCC早期复发中的作用。通过基因芯片、免疫印迹和免疫组化检测HCC样本中PRC1的表达。分子和细胞技术包括siRNA介导的和慢病毒载体介导的基因敲除,被用来阐明PRC1的功能和机制。PRC1的表达与HCC早期复发和较差的预后有关。在HCC中,PRC1通过增强癌     

诱导活化肝星状细胞凋亡主要信号通路的研究进展

肝纤维化是各种病因引起的肝脏慢性进行性的病理过程,肝纤维化时细胞外基质(ECM)合成大于降解导致ECM在肝内大量沉积。肝星状细胞(HSC)的激活、转化并产生分泌大量ECM是肝纤维化形成的关键环节。而通过诱导活化的HSC发生凋亡是逆转肝纤维化的重要手段之一。就主要的凋亡信号通路:死亡受体通路、线粒体通路、内质网通路、神经生长因子通路进行一一阐述。指出了对活化HSC的凋亡途径进行选择性的药物干预有望发挥抗肝纤维化的作用。