LIN28A和LAMP1在膀胱癌细胞系中的表达及意义

目的:探讨LIN28A和LAMP1在膀胱癌细胞系中表达情况,以及两者之间的关系,推测其可能临床意义及对肿瘤进展的影响。方法:采用RT-PCR检测膀胱癌细胞系LIN28A、LIN28B和LAMP1表达,免疫荧光检测LIN28A和LAMP1二者蛋白表达定位;LIN28A敲减后通过qRT-PCR检测LAMP1的mRNA表达变化。结果:5个癌细胞系T24、UM-UC3、J82、5637和SW780和正常移行上皮细胞系SV-HUC-1均表达LIN28A,其中J82也表达LIN28B;5个癌细胞系均表达LAMP1,SV-HUC-1不表达LAMP1;LIN28A和LAMP1蛋白均定位在胞浆;LIN28A敲减后对LAMP1的mRNA表达变化无明显影响,相应蛋白变化需要进一步验证。结论:4个膀胱癌细胞系T24、5637、UM-UC3和SW780可以用于LIN28A与肿瘤相关的机制研究,而J82可用于LIN28B的机制研究。LIN28A对肿瘤细胞和干细胞的调控方面可能具有相似性,敲减后对其靶点mRNA表达量无明显影响,LAMP1蛋白可能对肿瘤细胞侵袭转移具有抑制作用。     

LAMP1在膀胱癌细胞中的表达及对肿瘤细胞迁移的影响

目的:探讨溶酶体膜相关蛋白LAMP1(Lysosomal-associated membrane proteins 1,CD107a)在膀胱癌细胞系和正常膀胱上皮细胞系中表达情况,检测其与膀胱癌细胞迁移关系,推测其对膀胱癌进展的影响。方法:采用RT-PCR检测正常膀胱上皮细胞系和膀胱癌细胞系LAMP1表达;免疫荧光明确其蛋白表达定位;采用RNAi方法对LAMP1敲减,然后通过划痕实验检测其对肿瘤细胞迁移影响。结果:膀胱癌细胞系5637和UMUC3均表达LAMP1,正常移行上皮细胞系SV-HUC-1不表达;LAMP1蛋白定位在肿瘤细胞胞浆中;LAMP1敲减后膀胱癌细胞迁移减慢。结论:LAMP1参与膀胱癌发生发展过程,促进癌细胞迁移。     

Survivin启动子驱动LRIG1基因表达的重组腺病毒对人膀胱癌细胞T24侵袭能力的影响

目的以Survivin启动子驱动LRIG1基因表达的重组腺病毒Ad-Surp-LRIG1转染人膀胱癌细胞系T24细胞,观察其对T24细胞侵袭能力的影响。方法 Ad-Surp-LRIG1转染T24细胞,用RT-PCR和Westernblot检测细胞中LRIG1的表达水平,并采用Transwell小室测定转染后细胞侵袭能力的变化。结果 Ad-Surp-LRIG1转染人膀胱癌T24细胞后,与对照组和空白对照组相比,体外侵袭实验显示实验组细胞的侵袭能力明显下降。LRIG1的mRNA和蛋白表达水平明显升高,而EGFR的mRNA和蛋白表达水平则显著降低(P<0.01)。结论 Survivin启动子驱动LRIG1基因表达的重组腺病毒Ad-Surp-LRIG1能够在T24细胞中有效表达,并显著抑制T24细胞的侵袭能力。     

SRPK1基因对膀胱癌细胞生物学行为的影响及机制研究

目的观察丝氨酸/精氨酸蛋白特异性激酶1(SRPK1)对膀胱癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响, 并进一步探究其分子机制。方法利用Oncomine癌症数据库分析SRPK1基因在膀胱癌组织及正常膀胱组织中的表达;构建SRPK1特异的慢病毒干扰质粒(sh1和sh2)和阴性对照质粒(NC), 包装慢病毒颗粒, 分别感染T24细胞和5637细胞。设空白对照组(T24和5637)、阴性对照组(T24/NC和5637/NC)、干扰组1(T24/sh1和5637/sh1)和干扰组2(T24/sh2和5637/sh2);采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blot检测各组细胞中SRPK1 mRNA和蛋白水平的表达变化;采用CCK-8法检测各组细胞增殖能力的变化;采用Transwell细胞迁移和侵袭实验检测各组细胞迁移和侵袭能力的变化;采用Western blot检测各组细胞上皮间质转化(EMT)及AKT通路相关蛋白表达变化。结果 Oncomine癌症数据库中SRPK1 mRNA在膀胱癌组织中的表达明显高于正常膀胱组织(P<0.001)。通过qRT-PCR和Western blot检...     

MiR-519d靶向调控OCT4抑制膀胱癌细胞系5637增殖

目的:探讨miR-519d对膀胱癌细胞系5637增殖的影响及分子机制。方法:通过转染miRNA mimics在膀胱癌细胞系5637中过表达miR-519d,分别利用MTS及细胞集落形成试验,检测膀胱癌细胞系5637增殖能力的改变。通过双荧光素酶报道实验和Western Blot方法验证miR-519d对OCT4的靶向调控。利用OCT4特异性干扰RNA证实miR-519d通过靶向调控OCT4抑制膀胱癌细胞系5673增殖。结果:在膀胱癌细胞系过表达miR-519d后,细胞活性、增殖能力明显下降;双荧光素酶报道实验结果表明,相对于各对照组,共转染OCT4 3'UTR载体与miR-519d组荧光素酶相对活性明显降低(P0.05)。过表达miR-519d后5637细胞中OCT4蛋白表达下调。利用siRNA特异性下调OCT4表达后,5637细胞活性及增殖能力同样受到抑制。结论:miR-519d能靶向结合OCT4 3'UTR序列,通过下调OCT4的表达抑制膀胱癌细胞系5637的增殖。     

环氧合酶-2反义核酸对膀胱癌细胞恶性表型的抑制作用

目的探讨环氧合酶-2(COX-2)反义核酸对膀胱癌细胞恶性表型的抑制作用。方法采用脂质体介导方法,分别构建转染COX-2反义真核表达载体和空载体的膀胱癌细胞系5637-AS细胞和5637-P细胞,RT-PCR及W estern b lot分析转染细胞COX-2 mRNA及蛋白表达水平。MTT比色实验、Boyden侵袭小室法和裸鼠成瘤实验分别检测转染细胞体外增殖速度、体外侵袭力和体内成瘤性。结果RT-PCR结果显示,5637-AS细胞COX-2/磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)mRNA比值(0.65)明显低于5637(0.92)和5637-P细胞(0.90);W estern b lot提示5637-AS细胞COX-2/β-actin比值(0.29)明显低于5637细胞(0.46)和5637-P细胞(0.44)。MTT比色实验显示5637-AS细胞较5637-P、5637细胞生长速度减慢,三者倍增时间分别为3.6 d、2.9 d和2.9 d。体外侵袭实验结果表明,5637-AS侵袭细胞数显著低于5637细胞及5637-P细胞(18.20±5.97比45.40±8.12,18.20±5.97比44.10±6.47,P<0.01)。裸鼠成瘤实验中,5637-P、5637细胞接种裸鼠后第5天肿瘤长出,而5637-AS细胞第7天肿瘤长出;30 d后5637-AS细胞接种组瘤体重量(392.15 mg±33.58 mg)明显小于5637细胞(738.26 mg±66.32 mg),和5637-P细胞接种组(698.53 mg±88.76 mg),P<0.01。结论膀胱癌细胞中COX-2过表达与细胞的恶性表型相关,反义技术抑制COX-2表达可以逆转膀胱癌细胞的恶性表型。     

胃癌SUN-16细胞中miR-429影响ZEB1/2蛋白表达的方式及机制研究

目的:探讨胃癌细胞中miR-429影响ZEB1/2蛋白表达的方式及机制。方法:体外培养胃癌SUN-16细胞,分别转染miR-429表达和反义质粒,Western blot法检测胃癌细胞ZEB1/2表达;定量RT-PCR法检测胃癌细胞miR-429表达;荧光素酶报告基因检测法分析胃癌细胞内ZEB1/2 3'UTR荧光素表达强度。结果:SUN-16-miR-429组细胞miR-429表达较对照组明显增高,ZEB1/2 mRNA3'-UTR荧光素表达强度明显低于对照组;而SUN-16-as-miR-429组细胞miR-429表达较对照组降低,ZEB1/2 mRNA 3'-UTR荧光素表达强度明显高于对照组(P 0.05)。胃癌细胞中miR-429与ZEB mRNA的3'-UTR特异性结合能够抑制ZEB1/2蛋白翻译及表达。结论:miR-429在胃癌发生、进展过程中发挥重要作用,主要通过自身或与其它关键调节因子,如ZEB1/2协同作用而实现。     

siRNA抑制CDH13表达对膀胱癌5637细胞增殖和侵袭的影响

目的 探讨通过siRNA 抑制CDH13表达对膀胱癌5637细胞增殖和侵袭的影响。方法 以膀胱癌5637细胞为研究对象,用siRNA抑制CDH13表达,用western blot检测干扰后CDH13的表达水平,用MTT法检测细胞增殖,Transwell 法检测细胞侵袭能力。结果 westernblot 检测结果显示干扰组CDH13表达显著减少;干扰组5637细胞增殖明显加快,与空白对照组和阴性对照组相比差异有统计学意义（P﹤0.05）;siRNA抑制CDH13表达后细胞的侵袭能力明显增强,与空白对照组和阴性对照组相比差异有统计学意义（P﹤0.05）。结论 siRNA能够特异性地抑制CDH13在膀胱癌5637细胞中的表达,CDH13表达减少后细胞增殖加快、侵袭能力增强; CDH13表达减少是膀胱癌发生发展的一个重要促进因素。     

CDH13表达下调对膀胱癌细胞迁移和侵袭及PI3K/Akt表达的影响

目的：研究膀胱癌5637细胞中CDH13表达下调后对细胞迁移、侵袭和PI3K/Akt表达的影响以及它们间的关系。方法应用 RNA 干扰技术抑制人膀胱癌5637细胞株中 CDH13的表达,划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell 小室法检测细胞侵袭能力,Western blot 检测CDH13、PI3K及 Akt的表达水平。结果膀胱癌5637细胞中CDH13表达下调后细胞迁移和侵袭能力增强,PI3K及 Akt 的表达增加。结论膀胱癌细胞中 CDH13表达下调可能通过激活PI3K/Akt通路促进肿瘤细胞的迁移和侵袭。     

小干扰RNA沉默Y盒结合蛋白-1基因对肺腺癌A549细胞株表皮生长因子受体表达的影响

目的 观察Y盒结合蛋白-1(YB-1)小干扰RNA (siRNA)对肺腺癌A549细胞株表皮生长因子受体(EGFR)的影响.方法 针对YB-1 mRNA设计特异性siRNA及Control siRNA序列转染至A549细胞株,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot检测空白组、单纯Lipofectamine 2000处理组、Control siRNA组及YB-1 siRNA组细胞中YB-1和EGFR在mRNA和蛋白水平的表达;通过噻唑蓝(MTT)、侵袭实验观察各组细胞的生物学行为变化.结果 RT-PCR和Western blot结果显示实验组YB-1与EGFR的mRNA和蛋白表达降低(分别为0.3820±0.0094、0.4690±0.0032和0.1820±0.0073、0.4210±0.0049),与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05).MTT检测转染72 h后YB-1 siRNA组吸光度值为1.34 ±0.11,同时转染48 h后YB-1 siRNA组侵袭能力较对照组明显降低(P＜0.05).结论 YB-1 siRNA能抑制肺腺癌A549细胞株中EGFR的表达,影响肿瘤增殖和侵袭能力.