结核性胸膜炎中的IL-27对Th22细胞分化的影响

目的 探讨结核性胸腔积液IL-27对辅助性(Th) 22细胞定向分化过程的影响.方法 2014年6月至2015年6月在佛山市第一人民医院呼吸内科住院并且经胸腔镜取胸膜活检由病理学确诊的结核性胸膜炎患者20例,其中男11例,女9例,年龄25～60岁,平均35 5岁.从患者胸腔积液中的分离纯化出初始Th细胞,以含有抗-CD3+抗CD28单克隆抗体的基础培养条件为对照组,实验组则加入重组人IL-27、肿瘤坏死因子α(TNF-α) +IL-6或IL-27+ TNF-α+IL-6进行培养;在部分实验中,实验组为胸腔积液上清作为分化培养条件,加或不加入IL-27受体/Fc段嵌合体.培养7d后,使用流式细胞仪检测分化后的Th细胞表达IL-22以及特异性核转录因子芳香烃受体(AHR)的百分比.结果 对照组的Th22细胞比例为(2 2±0.9)％,AHR的比例为(4.2±0.8)％.与对照组相比,TNF-α+IL-6组的Th22细胞比例为(13.2±3.5)％、AHR的比例为(19.5±5.0)％,两者的比例显著上调(t=13.7、11.6,均P＜o.05).IL-27组的Th22细胞比例为(2.0±0.6)％、AHR的比例为(3.3±0.8)％,与对照组相比,两者的比例差异均无统计学意义(t =0.2、0.7,均P＞0.05).与TNF-α+ IL 6组相比,IL-27+TNF-α+IL 6组的Th22细胞比例为(6.0±2.0)％、AHR的比例为(8.4±2.6)％,两者的比例均显著下调(t =8.9、8.4,均P＜0.05);后续实验中,与对照组的Th22细胞比例(2.4±1 0)％以及AHR比例(4.2±1.1)％相比,胸腔积液上清组的Th22细胞比例(5.2±1.3)％以及AHR比例(6.5±1.6)％均显著上调(t=4.3、3.3,均P＜0.05).与胸腔积液上清组相比,胸腔积液上清+ IL-27受体/Fc段嵌合体组的Th22细胞比例(8.2±2.6)％以及AHR比例(13.8±2.0)％均进一步地显著上调(t=4.4、10.7,均P＜0.05).结论 IL-27本身不引起Th22细胞的分化,但对由TNF α+IL-6诱导的Th22细胞分化过程具有负向调节作用,在结核性胸膜炎微环境中能够抑制过强的Th22反应.     

Th22细胞在慢性粒细胞白血病患者中的临床研究

目的:研究慢性粒细胞白血病(CML)患者外周血中Th22细胞的比例、相关转录因子芳香烃受体(AHR)的表达水平及细胞因子IL-22的浓度,探讨Th22细胞在CML免疫机制中的作用。方法:应用流式细胞术检测Th22细胞在33例CML患者(初诊15例,伊马替尼治疗后的CML-CP 18例)外周血中的比例,实时荧光定量PCR技术检测CML患者Th22相关转录因子AHR mRNA的表达水平,ELISA法检测细胞因子IL-22的浓度。同时以15例正常者作为对照。结果:CML初诊患者外周血的Th22细胞比例(0.43%±0.23%)明显低于伊马替尼治疗后的CML-CP患者(3.19%±1.76%,P0.05)和对照者(2.58%±0.98%,P0.05)。CML初诊患者外周血单个核细胞的AHR基因转录水平(0.212 9±0.174 6)与伊马替尼治疗后的CML-CP患者(0.817 1±0.388 7,P0.05)和对照者(0.468 1±0.180 4,P0.05)比较均明显降低。伊马替尼治疗后的CML-CP患者外周血AHR mRNA表达水平较对照者显著升高(P0.05)。CML-CP患者的外周血IL-22浓度较对照者显著升高[(100.94±18.48)pg/ml∶(85.14±13.46)pg/ml,P0.05]。Th22细胞的比例与CML患者外周血白细胞计数及BCR-ABL%均呈负相关。结论:Th22细胞下调,Th22免疫功能受损可能有助于CML的发生和发展。     

自身免疫性肝炎小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬及溶酶体功能异常

目的:研究自身免疫性肝炎(autoimmune hepatitis,AIH)模型小鼠的腹腔巨噬细胞吞噬及溶酶体功能及其与AIH发病的关系.方法:80只C57BL/6小鼠平均分为AIH模型组及对照组,应用腹腔注射小鼠肝特异性抗原S-100与氟式佐剂乳化物建立AIH小鼠模型,提取AIH模型组和对照组小鼠腹腔巨噬细胞,应用荧光显微镜和流式细胞仪检测巨噬细胞对荧光标记大肠杆菌的吞噬率和吞噬指数,比较各组细胞Lysotracker荧光强度分析溶酶体含量.结果:AIH模型组小鼠腹腔巨噬细胞吞噬率(24.07%±10.21%vs 47.27%±15.57%,t=-7.899,P0.05)及吞噬指数(0.36±0.19 vs0.89±0.34,t=-6.793,P0.05)较对照组明显下降.AIH模型组巨噬细胞的溶酶体含量低于对照组(5.85±0.35 vs 15.39±0.72,t=-5.296,P0.05);FITC-E.coli被细胞吞噬后,绝大部分进入溶酶体并刺激巨噬细胞中的溶酶体增多,刺激后AIH模型小鼠巨噬细胞的溶酶体含量仍显著低于对照组(9.45±0.84vs 30.00±1.36,t=-7.889,P0.05).结论:AIH模型组小鼠腹腔巨噬细胞吞噬及溶酶体功能较对照组明显下降,这可能是AIH发病机制中的重要一环.     

落新妇甙对热缺血再灌注损伤肝脏肿瘤坏死因子α与白细胞介素-10表达的影响

目的 观察落新妇甙对热缺血再灌注(I/R)损伤肝脏Th1、Th2型细胞因子表达的影响. 方法 C57BL/6小鼠随机分为4组:假手术组、模型组,落新妇甙小剂量(10 mg/kg)干预组和大剂量(40mg,/kg)干预组.干预组小鼠于缺血前24h和1 h分别给予10mg/kg或40mg/kg的落新妇甙腹腔注射,建立70%部分肝I/R模型.收集肝组织标本,Western blot检测肝组织中肿瘤坏死因子(TNF)α,白细胞介素(IL)-10蛋白含量,RT-PCR检测肝组织TNF α、IL-10 mRNA的水平.多组间比较采用单因素方差分析,两两比较采用SNK法.结果 与I/R模型对照组比较,小、大剂量落新妇甙干预组肝组织中TNF α蛋白表达水平依次降低,与TNF α mRNA的半定量RT-PCR结果 相符(相对表达量分别为1.74±O.12与1.56±0.09、0.82±0.12,P值均<0.05);而IL-10蛋白表达水平依次升高,与IL-10 mRNA的半定量RT-PCR结果 相符(相对表达量分别为0.96±0.08与1.11±0.17、1.47±0.08,P值均<0.05).结论 落新妇甙干预能抑制I/R损伤肝组织中Th1型细胞因子TNFα的高表达,同时促进Th2型细胞因子IL-10的表达.     

自身免疫性肝炎小鼠模型差异表达基因的筛查及柴胡皂苷D对部分差异表达基因表达的影响

目的对自身免疫性肝炎(AIH)小鼠模型的差异表达基因进行基因芯片筛查,并观察柴胡皂苷D(SS-d)对部分差异表达基因表达的影响,探讨AIH的发病机制及SS-d对该病的治疗作用机制。方法健康、雌性SPF级C57BL/6小鼠40只[体质量(20±2)g],分为基因芯片组(n=8)和SS-d治疗组(n=32)。基因芯片组小鼠又分为正常对照组(n=4)和模型组(n=4),正常对照组常规饲养,模型组小鼠按15 mg/kg剂量给予尾静脉注射刀豆蛋白A(Con A),12 h后处死并提取肝组织,按Agilent芯片说明书进行差异表达基因的筛选,采用荧光定量PCR技术对部分差异表达基因进行验证。SS-d治疗组小鼠随机分为正常组(常规饲养)、模型组(按15 mg/kg剂量给予尾静脉注射Con A)、SS-d低剂量组和SS-d高剂量组(分别按2.5 mg/kg和5.0 mg/kg剂量给予腹腔注射SS-d预处理,8 h后按15 mg/kg剂量给予尾静脉注射Con A)(每组8只)。12 h后收集各组小鼠静脉血,ELISA法检测血清ALT、AST。无菌条件下提取小鼠肝组织,部分多聚甲醛固定后切片,并进行HE染色;部分肝组织用于提取RNA,采用荧光定量PCR技术检测部分差异表达基因(IFNγ、IL-4、IL-5、IL-13和IL-17)的mRNA水平变化。多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD-t法检验;两组间比较采用t检验。结果基因芯片组小鼠共筛查差异表达基因11512个,其中上调5189个,下调6323个,显著富集于138条信号通路;荧光定量PCR验证结果显示,与正常对照组比较,模型组小鼠IFNγmRNA和IL-17 mRNA的表达升高(P值均<0.01),而IL-4 mRNA、IL-5 mRNA和IL-13 mRNA的表达下调(P值均<0.01),与芯片筛查结果一致。在SS-d治疗组中,与正常对照组比较,模型组小鼠血清ALT、AST水平均升高(P值均<0.01);肝组织内可见大量淋巴细胞浸润;IFNγmRNA和IL-17 mRNA的表达水平明显升高(P值均<0.05),而IL-4 mRNA、IL-5 mRNA和IL-13 mRNA的表达水平明显降低(P值均<0.05)。与模型组比较,SS-d低剂量组和SS-d高剂量组小鼠血清ALT、AST水平均降低(P值均<0.05),肝组织内淋巴细胞浸润程度减轻;IFNγmRNA和IL-17 mRNA的表达水平均降低(P值均<0.05),IL-4 mRNA、IL-5 mRNA和IL-13 mRNA的表达水平均升高(P值均<0.05),上述基因的含量变化差异在SS-d高剂量组与SS-d低剂量组之间具有统计学意义(P<0.05)。结论AIH的发生发展系大量基因异常表达的共同作用结果。其中IFNγ、IL-4、IL-5、IL-13、IL-17与AIH的发病密切相关,同时也是SS-d发挥免疫调节及肝损伤保护作用的生物学靶点。     

病毒性心肌炎患者外周血miR-31与Th22细胞水平的相关性分析北大核心CSCD

目的检测病毒性心肌炎(VMC)患者外周血中微小RNA-31(miR-31)、辅助型T 22(Th22)细胞及其白介素-22(IL-22)的变化,探讨miR-31与Th22细胞水平的相关性。方法从2020年1月到2021年6月期间本院收治的VMC患者中选取125例作为VMC组,根据心功能指标(LVEF)划分为轻度组(52例)、中度组(52例)和重度组(21例),对照组为125名健康志愿者;收集外周血样本5 ml并分离单个核细胞,实时荧光定量(qRT-PCR)技术检测外周血中miR-31的表达水平,流式细胞仪检测Th22细胞水平,酶联免疫吸附实验检测IL-22表达水平,分析比较对照组与VMC组及不同病情组之间miR-31、Th22细胞及IL-22的表达水平的差异;分析VMC组外周血miR-31表达水平分别与Th22细胞水平、IL-22水平之间,及Th22细胞水平与IL-22水平之间的相关性。结果与对照组[(1.00±0.00)、(0.78±0.22)%、(21.69±3.50)pg/mL]相比,VMC组外周血中miR-31表达水平(1.45±0.32)、Th22细胞水平[(2.02±0.55)%]及IL-22[(33.34±7.44)pg/mL]水平升高(P<0.05);不同病情组VMC患者间外周血miR-31[(1.35±0.27)、(1.47±0.32)、(1.63±0.36)]、Th22细胞[(1.80±0.42)%、(2.02±0.51)%、(2.55±0.57)%]及IL-22的表达水平[(30.95±6.98)pg/mL、(33.96±7.00)pg/mL、(37.75±7.61)pg/mL]比较,差异均具有统计学意义(P<0.05),且重度组>中度组>轻度组;VMC组外周血miR-31、Th22细胞水平与IL-22表达水平均呈显著正相关(r=0.599,P<0.05;r=0.635,P<0.05);VMC组外周血miR-31表达水平与Th22细胞水平呈显著正相关(r=0.613,P<0.05)。结论VMC患者外周血的miR-31、Th22细胞及IL-22表达水平均显著升高,miR-31可能通过影响Th22介导的免疫调控在VMC的发生发展中起关键作用。     

系统性红斑狼疮患者外周血白细胞介素-17与辅助T细胞17的检测及其意义

目的 研究系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血白细胞介素(IL)-17蛋白和mRNA水平、辅助T细胞(Th17)细胞表达比例,探讨其临床意义.方法 用酶联免疫吸附试验检测SLE患者及对照者血浆中IL-17的蛋白水平;采用实时荧光定量反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测2组外周血中IL-17 mRNA表达水平;运用流式细胞术检测SLE患者外周血单个核细胞(PBMCs)中Th17细胞比例,进一步分析IL-17/Th17细胞与SLE临床实验室指标的相关性.计量资料组间比较采用t检验,相关性分析采用Spearman秩和相关分析.结果 SLE组患者血浆IL-17含量明显高于健康对照组,SLE组患者外周血IL-17 mRNA表达水平[(28.3±11.7)×10-5]高于对照组[(9.8±2.2)×10-5](P均＜0.01).SLE患者PBMCs中Th17细胞比例(2.5±1.5)%及IL-17荧光强度(1937±1022)显著高于对照组[(1.5±0.7)%,(1245±413)],且SLE活动期患者Th17细胞百分比高于非活动组,SLE肾病组Th17细胞比例较无肾病组明显升高(P均＜0.05).SLE患者血浆IL-17水平、Th17细胞数与SLE疾病活动性指数(SLEDAI)呈正相关(r=0.681,P＜0.01;r=0.426,P=0.034).结论 SLE患者体内IL-17蛋白分泌及基因表达水平存在明显异常,外周血Th17细胞比例亦显著升高,且与疾病活动性有明显相关,提示IL-17/Th17细胞可能在SLE发病中起着重要作用.     

Th22型免疫反应在动脉粥样硬化疾病中的动态变化

目的:探讨Th22型免疫反应与动脉粥样硬化(AS)之间的关系,为治疗AS提供新的理论依据。方法:8周龄C57BL/6J背景的载脂蛋白E缺陷型(Apo E~(-/-))小鼠为实验组(n=24),同龄C57BL/6J小鼠为对照组(n=24),两组小鼠均给予高脂饮食,分别于0周、4周、8周、12周处死,并采用油红O染色检测不同时间点主动脉根部斑块的进展,流式细胞术检测Th22细胞在两组小鼠脾脏中比例变化,实时荧光定量反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测主动脉中白细胞介素-22(IL-22)、白细胞介素-22受体1(IL-22R1)及其转录因子芳香烃受体(Ah R)、T盒21转录因子(T-bet)的信使核糖核酸(mRNA)表达量变化,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清中的IL-22含量变化。结果:实验组小鼠主动脉根部粥样斑块面积[主动脉根部斑块面积/主动脉管腔面积(%)]、Th22细胞[CD4+IL-22+/CD4~+(%)]数量、IL-22、IL-22R1、AhR、T-bet的mRNA在主动脉中的表达量以及IL-22在血清中的含量均高于同时间点对照组小鼠,且各时间点(0周除外)差异有统计学意义(P0.05)。实验组组内前后两时间点对比,主动脉粥样斑块面积及AhR、T-bet的mRNA表达量:4周与0周、8周与4周、12周与8周比较差异均有统计学意义;Th22细胞数量:4周与0周、8周与4周比较差异均有统计学意义,12周与8周比较差异无统计学意义;IL-22、IL-22R1的mRNA表达量及血清中IL-22含量:4周与0周比较差异有统计学意义,8周与4周、12周与8周比较差异无统计学意义。结论:亢进的Th22型免疫反应具有促进AS进程的作用,其机制有待进一步探讨。     

日本血吸虫感染小鼠肝髓样细胞触发受体-1的表达及其功能

目的观察日本血吸虫感染小鼠肝组织髓样细胞触发受体-1 (TREM-1)的动态表达,分析TREM-1与巨噬细胞M1极化的相关性。方法 34只C57BL/6小鼠随机分为对照组(10只)和感染组(24只),对照组小鼠不作任何处理,取肝组织;感染组每鼠经腹部皮肤接种日本血吸虫尾蚴(15±2)条,感染后第3、6、 9和12周,各取6只小鼠的肝组织。实时荧光定量PCR检测对照组、各时间点感染组小鼠肝组织中TREM-1和白细胞介素-1β(IL-1β) mRNA的相对转录水平;蛋白质免疫印迹(Western blotting)检测各鼠肝组织中TREM-1和诱导型一氧化氮合酶(i NOS)的蛋白相对表达水平;制备各鼠肝组织冰冻切片,免疫荧光染色技术检测肝组织巨噬细胞中TREM-1的表达情况。合成TREM-1 siRNA和阴性siRNA (NC siRNA),分别转染RAW264.7巨噬细胞,培养6 h后分为TREM-1 siRNA、 NC siRNA、 TREM-1 siRNA+日本血吸虫成虫抗原(SWA)和NC siRNA+SWA组,后两组加入终浓度为20μg/ml的SWA作用48 h,收集细胞,Western blotting检测细胞中TREM-1和i NOS蛋白的相对表达水平。多组之间TREM-1、 IL-1βmRNA相对转录水平,TREM-1和i NOS蛋白相对表达水平的比较使用单因素方差分析,两组之间的比较采用独立样本t检验。结果实时荧光定量PCR检测结果显示,感染后第3、 6、 9和12周,感染组小鼠肝组织中TREM-1 mRNA相对转录水平分别为14.28±6.26、183.41±37.37、 68.17±16.19和106.91±45.70 (F=6.668, P 0.01),其中感染后第6周感染组与对照组(1.00)比较差异有统计学意义(t=-4.881, P 0.01); IL-1βmRNA的相对转录水平分别为8.16±1.91、 56.12±10.68、 24.41±3.54和24.28±2.98 (F=16.943, P 0.01),各时间点感染组与对照组(1.00)比较差异均有统计学意义(t=-3.740, P 0.05; t=-5.159、-6.606和-7.799, P 0.01)。Western blotting检测结果显示,感染后第3、 6、 9和12周,感染组小鼠肝组织中TREM-1蛋白相对表达水平分别为1.24±0.38、 1.50±0.13、 1.13±0.28和1.17±0.60 (F=1.547, P 0.05),其中感染后第6周感染组与对照组(1.00)比较差异有统计学意义(t=-6.011, P 0.01); i NOS蛋白相对表达水平分别为5.27±3.66、 23.27±14.72、 10.16±4.97和2.69±1.65 (F=9.384, P 0.01),各时间点感染组与对照组(1.00)比较差异均有统计学意义(t=-2.893、-3.716、-4.537和-2.571, P 0.05)。免疫荧光染色结果显示,对照组小鼠肝组织中TREM-1 (绿色)和F4/80 (红色)的表达较少,感染组小鼠肝组织肉芽肿周围TREM-1和F4/80的表达增加,TREM-1和F4/80共定位的细胞(黄色)增多。Western blotting检测结果显示,NC siRNA+SWA、 TREM-1 siRNA、 TREM-1 siRNA+SWA组TREM-1蛋白相对表达水平分别为1.35±0.13、 0.58±0.09和1.09±0.03 (F=46.689, P 0.01),其中NC siRNA+SWA、 TREM-1siRNA组与NC siRNA组(1.00)比较差异有统计学意义(t=-4.716、 7.858, P 0.05), TREM-1 siRNA+SWA组与TREM-1 siRNA组比较差异有统计学意义(t=9.000, P 0.01)。NC siRNA+SWA、 TREM-1 siRNA、TREM-1 siRNA+SWA组i NOS蛋白相对表达水平分别为3.69±1.04、 0.77±0.12和2.74±0.86 (F=12.714, P 0.01),其中NC siRNA+SWA、 TREM-1 siRNA组与NC siRNA组(1.00)比较差异有统计学意义(t=-4.451、3.254, P 0.05), TREM-1 siRNA+SWA组与TREM-1 siRNA组差异无统计学意义(t=3.913, P 0.05)。结论日本血吸虫感染小鼠肝组织中TREM-1表达显著上调,抑制TREM-1的表达能够抑制SWA作用的巨噬细胞i NOS的表达。     

Th22细胞和IL-22在结核病人外周血中的变化及临床意义

目的探讨Th22细胞和IL-22在结核病人外周血中的变化及其临床意义。方法选取2015年1月至2017年5月到我院初次就诊的结核病患者作为研究对象,将其分为空洞型肺结核组(n=34)、浸润性肺结核组(n=39)和结核性胸膜炎组(n=36),另选择同期到我院体检的健康者作为对照组(n=35),采用流式细胞术检测四组外周血Th22细胞比例,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测四组IL-22表达水平,分析各组Th22细胞比例和IL-22表达水平的变化,并进行二者的相关性分析。结果空洞型肺结核组、浸润性肺结核组、结核性胸膜炎组患者的外周血Th22细胞比例和IL-22表达水平均明显高于对照组,差异均具有统计学意义(均P 0. 05),空洞型肺结核组、浸润性肺结核组和结核性胸膜炎组三组间外周血Th22细胞比例及IL-22表达水平相比,差异均无统计学意义(均P 0. 05)。结核性胸膜炎组外周血Th22细胞比例与IL-22表达水平呈显著正相关(r=0. 683,P 0. 05),空洞型肺结核组、浸润性肺结核组及对照组外周血Th22细胞比例与IL-22表达水平之间无明显的相关性(均P 0. 05)。结论结核病人外周血中Th22细胞及IL-22水平显著升高,提示Th22细胞及IL-22可能参与了结核病的发病过程。     

Th17细胞相关因子在慢性乙型肝炎肝组织中的表达

背景:Th17细胞是一类不同于Th1和Th2细胞的辅助性T细胞亚群,在慢性炎症和免疫相关疾病中发挥重要作用。目的:研究Th17细胞及其相关因子在慢性乙型肝炎(CHB)发病机制中的作用。方法:以实时PCR检测CHB患者和对照组肝组织中诱导Th17细胞分化的核转录因子RORγt以及细胞因子白细胞介素-17(IL-17)、IL-21、IL-23、IL-1β、IL-6的mRNA表达情况,以免疫组化染色检测CHB患者肝组织中IL-17蛋白表达并分析其与肝脏炎症和纤维化程度的相关性。结果:CHB患者肝组织中 RORγt、IL-17、IL-21、IL-23、IL-1β、IL-6 mRNA表达水平均明显高于对照组,差异有统计学意义(P0.05);IL-17蛋白表达阳性细胞数与肝脏炎症分级(r_s=0.801,P0.05)和纤维化分期(r_s=0.797,P0.05)呈正相关。结论:CHB患者肝组织中存在Th17细胞相关因子过表达,IL-17蛋白表达阳性细胞数与肝脏炎症和纤维化程度相关,提示Th17细胞在CHB的免疫发病机制中可能起重要作用。     

HO-1 mRNA在砷暴露肝损伤小鼠肝组织中的表达

目的:探讨血红素氧化酶-1 mRNA(HO-1mRNA)在砷暴露肝损伤小鼠肝组织中表达的意义.方法:40R♂小鼠被随机分成对照组和亚砷酸钠组(iAs3 组).10 mo后处死小鼠,肝功能检查血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、球蛋白(GLB);部分肝组织作HE染色观察病理变化;TRIzol-酚-氯仿一步法提取肝组织总RNA,紫外分光光度法测定总RNA及纯度,实时荧光定量PCR法测定肝组织中HO-1 mRNA的表达,以18S基因作为质控.结果:iA3 组小鼠血清ALT、AST、GLB值高于对照组(61.5±5.5 U/L V5 38.0±5.6 U/L,530.9±39.0 U/L vs 118.3±9.1 U/L.27.15±4.1g/L vs 20.9±0.6 edL,均P<0.05);肝组织病理检查有明显的炎症细胞浸润和肝细胞坏死,纤维组织增生;小鼠肝组织HO-1 mRNA基因表达在iAs3 组增高,与对照组比较有统计学意义(t=5.393,P<0.05).结论:小鼠亚砷酸钠长期暴露诱导的HO-1高表达,可能参与了肝损伤肝纤维化发生机制.     

Th17细胞及其细胞因子与乙型肝炎后肝硬化肝组织炎症活动度相关性的研究

最新研究显示Th17细胞可能参与了非病毒特异性肝损伤的调控,然而至今尚无研究报道其是否参与了乙型肝炎后肝硬化的肝损伤。目的:探讨Th17细胞及其细胞因子与乙型肝炎后肝硬化肝组织炎症活动度的关系。方法:收集12例肝组织发生亚大块及以上坏死、12例肝组织炎症活动度为G2～G4的乙型肝炎后肝硬化患者以及11例健康人的肝组织和外周血标本,以免疫组化方法检测肝组织IL-17的表达和分布,实时荧光定量PCR检测肝组织Th17型细胞因子IL-17 mRNA和Th17细胞特异性转录因子RORγt mRNA的表达,ELISA方法检测血清IL-17水平。结果:亚大块坏死组肝组织IL-17阳性细胞浸润区域较G2～G4炎症组广泛,健康对照组仅有少量IL-17阳性细胞浸润。亚大块坏死组肝组织IL-17、RORγt mRNA表达和血清IL-17水平均明显高于G2～G4炎症组(P=0.0226,P=0.0531,P=0.0171).G2～G4炎症组又高于健康对照组(P=0.0289,P=0.0005,P=0.0160)。肝内IL-17 mRNA表达和血清IL-7水平与肝组织炎症活动度呈正相关(r_s=0.686,P0.0001;r_s=0.767,P0.0001)。结论:肝内和血清Th17型细胞因子IL-17水平与乙型肝炎后肝硬化肝组织炎症的严重程度呈正相关,Th17细胞及其细胞因子参与了乙型肝炎后肝硬化的肝损伤。     

老年人氧化型低密度脂蛋白与辅助性T细胞及其细胞因子的相关性

目的探讨老年人氧化型LDL(ox-LDL)与辅助性T细胞(Th)17及其细胞因子的相关性。方法选择2014年11月~2015年9月年龄≥60岁的老年人341例为老年组,年龄60岁体检者107例为中年组。再依据ox-LDL水平三分位将老年人分为低水平组112例、中水平组115例和高水平组114例。检测血浆ox-LDL水平、外周血Th17细胞频率、白细胞介素(IL)17、TNF-α、IL-6及维甲酸相关孤独受体γt(RORγt)mRNA表达水平。结果与中年组比较,老年组Th17细胞频率、IL-17、ox-LDL及RORγt mRNA表达水平明显升高[(1.0±0.5)%vs(0.9±0.4)%,(29.8±12.3)ng/Lvs(26.6±12.6)ng/L,(379.3±101.6)μg/Lvs(302.8±94.0)μg/L,14.3±5.5vs 12.5±5.8,P0.05,P0.01],服用他汀类药物比例明显降低(11.4%vs 26.2%,P=0.002)。低、中、高水平各组TC、LDL-C、空腹血糖、Th17细胞频率、IL-17、IL-6、TNF-α及RORγt mRNA表达水平比较,差异有统计学意义(P0.05,P0.01)。多元线性逐步回归分析结果显示,ox-LDL是Th17细胞频率、IL-17、IL6、TNF-α及RORγt mRNA表达水平的独立影响因素(P0.05,P0.01)。结论老年人ox-LDL水平与外周血Th17细胞频率及其相关细胞因子密切相关。     

普拉梭菌及其上清液对葡聚糖酸钠诱导的结肠炎小鼠Treg/Th17平衡的影响

目的探讨普拉梭菌(Faecalibacterium prausnitzii,F.prausnitzii)及其上清液对葡聚糖酸钠(DSS)诱导的结肠炎小鼠Treg/Th17平衡的影响。方法将40只雄性C57BL/6J小鼠随机分为正常组、结肠炎对照组、F.prausnitzii活菌干预组、F.prausnitzii上清干预组,每组10只,正常组正常饮水,其余各组均饮用质量浓度为25 g/L的葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导结肠炎模型,同时分别用磷酸缓冲盐溶液(PBS)、F.prausnitzii、F.prausnitzii上清灌胃。流式细胞术检测各组小鼠脾脏中的Treg、Th17比例,并计算各组Treg/Th17比值;ELISA法检测外周血清中IL-10、IL-17水平;RT-PCR检测结肠组织中Foxp3、ROR-γt mRNA的表达。结果与结肠炎对照组相比,F.prausnitzii活菌干预组和F.prausnitzii上清干预组的Treg细胞比例上升,Th17细胞比例下降,Treg/Th17比值升高;且血清中IL-10水平升高,IL-17水平降低(P0.05)。与结肠炎对照组相比,F.prausnitzii上清干预组Foxp3 mRNA表达上升(P0.05),但F.prausnitzii活菌干预组Foxp3 mRNA表达差异无统计学意义(P0.05);两干预组肠组织中ROR-γt mRNA表达较结肠炎对照组下降(P0.05)。结论 F.prausnitzii及其上清液可调控T细胞亚群,其机制可能为通过提高Foxp3 mRNA表达,抑制ROR-γt mRNA的表达调节Treg/Th17的平衡。     

过氧化物酶体增殖物激活受体-γ对干燥综合征非肥胖型糖尿病小鼠的抗炎作用

目的 探讨过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)-γ对干燥综合征(SS)动物模型非肥胖型糖尿病(NOD)小鼠的抗炎作用.方法 8周龄NOD小鼠20只,随机分为2组,每组10只.实验组自9周龄给予罗格列酮按40 mg/kg剂量隔天灌胃.分别在12周龄和15周龄时随机处死罗格列酮组和对照组各1只小鼠,17周龄时处死全部小鼠,留取外周血和唇腺组织.用苏木素-伊红(HE)染色评价唇腺的病理学改变.酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定外周血中白细胞介素(IL)-1β、IL-4、IL-6和肿瘤坏死因子(TNF)-α的含量.实时荧光定量反转录-聚合酶链反应(real-time PCR)检测唇腺组织中IL-1β、IL-4、IL-6和TNF-α mRNA的表达量.计量资料两样本间比较采用t检验.结果 罗格列酮组小鼠唇腺组织中单核细胞浸润较对照组均减轻,腺体破坏少.17周龄时罗格列酮组与对照组比较,外周血IL-6[(26±7)与(37±11),t=-2.298]和TNF-α[(57±22)与(79±21),t=-2.188]的含量明显减少(P<0.05);IL-4[(26±13)与(12±4),t=2.438]的含量明显增加(P<0.05);唇腺组织中TNF-α mRNA的表达水平明显降低;而IL-4 mRNA的表达水平明显升高(P<0.05).结论 PPAR-γ对NOD小鼠干燥综合征有疗效,其作用机制可能与其下调SS体内Th1细胞因子、使Th1/Th2平衡向Th2方向转化相关.

Abstract：

Objective To investigate the anti-inflammatory effect of peroxisome proliferator-activated receptor-γ(PPAR-γ)in non-obese diabetic mice(NOD mice)with Sj(o)gren's syndrome(SS)．Methods Twenty 8-weeks-old female NOD mice were randomly divided into 2 groups．Rosiglitazone and normal saline were administered for the rosiglitazone group and control group respectively．At age of 12 weeks and 15 weeks,one mouse in the rosiglitazone group and the control group were killed respectively,and the others were sacrificed at the age of 17 weeks．Blood were obtained by cardiac puncture,and minor salivary glands (MSG) were resected．The histopathological changes waere examined by H&E staining．The level of IL-1β,IL-4,IL-6 and TNF-α in serum were measured by ELISA．Real-time PCR waft used to evaluate the mRNA expression level of IL-1β,IL-4,IL-6 and TNF-α in MSG．Student's t-test was used to assess the differences．Results Compared with the control group,the mice in the rosiglitazone group showed that：①histopatho-logical change was significantly ameliorated．②At the age of 17 weeks,IL-6[(26±7)vs(37±11),t=-2．298] and TNF-α[(57±22)vs(79±21),t=-2．188] were expressed significantly lower and IL-4[(26±13)vs(12±4),t=2．438 ] was expressed significantly higher in serum(P<0．05)．③The expression of TNF-αwas significantly decreased and the expression of IL-4 was significantly increased in MSG (P<0．05)．Conclusion PPAR-γ can ameliorate SS on NOD mice effectively．The mechanism may be related to reduction of Th1 cytokines,and the Th1/Th2 balance is changed into Th2 predominant．     

支气管哮喘患者外周血组蛋白去乙酰化酶9的表达及其意义

目的 探讨支气管哮喘(简称哮喘)患者外周血组蛋白去乙酰化酶9 (Histone Deacetylase 9,HDAC9)的表达特征及其与Th2、Th17、调节性T细胞的关系.方法 选择2010年3月至2011年6月上海瑞金医院呼吸科47例慢性持续期哮喘患者,分为间歇期哮喘组、轻度哮喘组和中重度哮喘组,各组均行肺功能检查和哮喘控制问卷调查哮喘控制情况.并选取20名健康人作为健康对照组.通过分离外周血单个核细胞(PBMCs),Trizol法抽提RNA,采用荧光实时定量方法检测转录因子GATA3、IL-4、HDAC9mRNA表达水平.ELISA检测血浆中Th17细胞分泌的主要细胞因子IL-17以及调节性T细胞分泌的主要细胞因子——转化生长因子( TGF)-β表达水平.结果 哮喘组PBMCs中GATA3、IL-4mRNA总体相对表达水平分别为28.12±7.57、743.6±312.8高于健康对照组相对表达水平(分别为0.56±0.22、0.7±0.8),差异有统计学意义(U值分别为16.00和37.00,P ＜0.01),HDAC9 mRNA在间歇期、轻度、中重度哮喘患者中的表达水平分别为3.20±0.50、89.6±18.0和323.0±65.3,呈逐渐上升趋势,各组间差异有统计学意义(H=11.32,P＜0.05).同时,哮喘患者总体血浆细胞因子IL-17表达水平为83±55,高于健康对照组的34±22(U=153.50,P＜0.01),而TGF-β表达水平下降趋势,组间无统计学差异.HDAC9 mRNA表达水平与GATA3 mRNA表达水平呈正相关(r =0.482,P＜0.05),与IL-4 mRNA表达水平呈正相关(r=0.432,P＜0.05),与IL-17水平呈现正相关(r=0.538,P＜0.05),与TGF-β表达水平呈负相关(r=-0.417,P＜0.05).在中重度哮喘患者中,HDAC9mRNA水平与肺功能FEV1占预计值％呈负相关(r=-0.657,P＜0.05).结论 哮喘患者PBMCs中HDAC9mRNA表达水平随病情严重程度逐渐升高,其升高不仅与哮喘发病相关的Th2细胞特征性转录因子GATA3、细胞因子IL-4 mRNA表达水平以及Th17、Treg分泌的细胞因子水平密切相关,且与哮喘患者FEV1占预计值％密切相关.     

老年缺血性脑卒中患者氧化型低密度脂蛋白与辅助性T细胞和调节性T细胞轴的关系

目的探讨老年缺血性脑卒中患者氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)与辅助性T细胞(Th17)/调节性T细胞(Treg)轴功能平衡的关系。方法选择老年缺血性脑卒中患者141例,其中缺血性脑卒中初次发作79例(初发组),复发62例(复发组),另外选择无缺血性脑卒中老年人76例(对照组)。检测各组血浆ox-LDL水平和外周血Th17/Treg频率及相关效应因子表达水平。结果与对照组比较,初发组ox-LDL、白细胞介素(IL)-17及TNF-α显著升高,Treg、Foxp3mRNA及IL-10显著降低;复发组ox-LDL、Th17、Th17/Treg、RORγt mRNA、IL-17、IL-6、IL-23及TNF-α显著升高,Treg、Foxp3mRNA及IL-10显著降低(P0.05)。相关及回归分析显示,ox-LDL与Th17、Th17/Treg、RORγt mRNA、IL-17、IL-6、IL-23及TNF-α呈显著正相关(r=0.482,r=0.528,r=0.419,r=0.439,r=0.233,r=0.262,r=0.459,P0.05);ox-LDL与Treg、Foxp3mRNA及IL-10呈负相关(r=-0.466,r=-0.478,r=-0.406,P0.05)。ox-LDL是影响Th17/Treg轴相关指标的独立因素(P0.01)。结论ox-LDL升高是老年缺血性脑卒中患者Th17/Treg轴功能平衡失调的重要影响因素。     

外周血Th22和Th17细胞在急性心肌梗死患者中变化及临床意义

目的:探讨急性心肌梗死(AMI)患者外周血Th22和Th17细胞,及其细胞因子白细胞介素(IL)-22和IL-17的变化及临床意义。方法:冠心病患者(CHD)34例,其中AMI患者19例(AMI组)、稳定型心绞痛(SAP)患者15例(SAP组),另取15例冠状动脉造影正常者作为健康对照组(HC组);采用流式细胞技术检测各组外周血Th22和Th17细胞在CD4+T细胞中的比例;ELISA法检测血浆IL-22和IL-17浓度。结果:AMI组外周血Th22细胞(2.43±1.77)%、Th17细胞(2.80±1.15)%,均显著高于SAP组(0.92±0.26)%,(1.59±0.49)%及HC组(0.84±0.19)%、(1.35±0.32)%(均P0.05),SAP组与HC组差异无统计学意义。AMI组血浆IL-22(33.74±7.25)pg/ml、IL-17(24.95±8.86)pg/ml浓度均显著高于SAP组(26.95±3.19)pg/ml,(18.86±5.65)pg/ml及HC组(24.17±2.55)pg/ml、(14.63±2.57)pg/ml(均P0.05),SAP与HC组差异无统计学意义。AMI组患者的Th22细胞比例与Th17细胞比例(r=0.525,P0.05)、IL-22浓度(r=0.771,P0.01)均呈显著正相关,AMI组的Th17细胞比例与IL-17浓度也呈显著正相关(r=0.627,P0.01)。结论:外周血Th22、Th17细胞及其相关细胞因子在AMI的发生中起重要作用。     

肝癌患者中辅助性T细胞22及其细胞因子水平变化特点及临床意义

目的探讨原发性肝癌患者中辅助性T细胞22(Th22细胞)及其细胞因子水平及临床意义。方法选取2017年1月至2018年3月在西安交通大学第一附属医院消化内科治疗的原发性肝癌患者80例(肝癌组),同时选取西安交通大学第一附属医院健康体检者80例作为对照组,检测两组Th22细胞、白细胞介素-22(IL-22)水平,比较两组Th22、IL-22水平,分析不同病理特征患者Th22、IL-22水平差异,并分析Th22、IL-22两者线性相关性。结果肝癌组外周血Th22、IL-22分别为(7. 21±1. 41)%和(810. 45±104. 55) pg/m L,明显高于对照组(P 0. 05);肿瘤直径≥5 cm患者外周血Th22细胞和IL-22分别为(8. 01±1. 24)%和(840. 44±106. 41) pg/m L,明显高于肿瘤直径5 cm患者(P 0. 05);有HBV感染患者外周血Th22细胞为(7. 84±1. 51)%,明显高于无HBV感染患者(P 0. 05);外周血Th22细胞与IL-22呈正相关(r=0. 515,P=0. 000);外周血Th22细胞、IL-22与肿瘤直径呈正相关(r=0. 366、0. 351,P=0. 000、0. 000)。结论肝癌患者中Th22细胞及其细胞因子水平明显升高,与HBV感染、肿瘤直径有一定关系,值得进一步研究。