c-myc反义基因对人高转移肺癌细胞增殖和黏附活性的抑制作用

目的观察c-myc反义基因抑制人高转移性肺癌PG细胞增殖,下调侵袭黏附性的作用和机制.方法合成c-myc反义寡核苷酸,经脂质体包裹,转导入c-myc高表达的PG细胞中.RT-PCR方法检测c-myc mRNA表达水平的变化,流式细胞术检测c-myc蛋白的表达.MTT法检测细胞增殖活性,黏附实验检测PG细胞的黏附性.结果c-myc反义基因(＞0.625μmol/L)对PG细胞c-myc mRNA、蛋白表达和细胞增殖活性具有明显的抑制作用,其处理PG细胞72 h后,20～80 min不同时间的细胞黏附百分率,从50.0%,81.27%和90.0%分别显著下降到31.5%,37.5%和30.0%(P＜0.05),下降呈时间依赖效应.结论c-myc反义基因抑制PG细胞c-myc mRNA和蛋白表达水平,同时下调增殖活性和侵袭黏附性.     

siRNA对人结肠癌细胞黏附力和侵袭性的抑制作用

目的: 探讨VEGFR3对人结肠癌细胞黏附力和侵袭性的影响。方法:构建携靶向 VEGFR3基因siRNA(small interfering RNA)表达载体，转染人结肠癌LoVo细胞， 半定量RTPCR和Western blotting检测转染前后LoVo细胞VEGFR3mRNA和蛋白表达的变化，基质黏附实验检测细胞转染后的黏附能力，细胞侵袭实验检测转染后肿瘤细胞侵袭性的改变。结果:携靶向 VEGFR3 基因siRNA的表达载体成功构建，RTPCR检测转染siRNA后LoVo细胞 VEGFR3mRNA表达水平降低；Western blotting检测转染siRNA后72 h LoVo细胞VEGFR3蛋白表达下降，其表达相对值由(1.26±0.19)降至(0.39±012)(P<0.05)。转染siRNA 72 h后LoVo细胞的黏附能力显著下降\[（0.626±0.047）vs (0.407±0.029), P＜0.05\]；LoVo细胞穿膜细胞数(6.38±3.25)明显低于空白对照组(24.82±3.44)、非特异性对照组(23.58±3.73) (P＜0.05)。结论:siRNA能够在LoVo细胞中引发RNA干扰效应，下调VEGFR3基因的表达，进而抑制LoVo细胞的黏附能力和侵袭性。     

苯丁酸钠对甲状腺滤泡癌细胞侵袭能力及MMP-9和TIMP-1表达的影响

目的:探讨苯丁酸钠(sodium phenylbutyrate,NaBP)对甲状腺滤泡癌细胞CGTHW1的侵袭能力及基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase9, MMP9)和金属蛋白酶组织抑制剂1(tissue inhibitor of metalloproteinase,TIMP1)表达的影响 。方法：培养CGTHW1细胞,通过Transwell侵袭实验观察苯丁酸钠对CGTHW1细胞侵袭能力的影响,采用免疫细胞化学SP法及RTPCR观察苯丁酸钠对CGTHW1细胞中MMP9和TIMP1蛋白及mRNA表达的影响 。结果： 4 mmol/L苯丁酸钠作72 h, CGTHW1 细胞的侵袭细胞数显著减少\[（29.8±1.77）vs（11.00±2.59）,(P<0．01)\]。免疫细胞化学和RTPCR 检测结果显示,4 、6 mmol/L 苯丁酸钠显著抑制CGTHW1细胞中MMP9、TIMP1蛋白及mRNA的表达 (P<0．05)。结论：苯丁酸钠可通过下调MMP9和TIMP1的表达进而降低甲状腺滤泡癌CGTHW1细胞的侵袭能力。     

基因对胃癌MGC 803细胞的抑制作用及其可能的机制

目的:研究沉默乳腺癌相关抗原1（breast cancerassociated antigen 1,BRCAA1)基因对胃癌细胞株MGC803的抑制作用及其可能的机制。方法：构建BRCAA1基因shRNA载体，将构建的shRNABRCAA1质粒与阴性对照质粒shRNAN转染胃癌MGC803细胞，24 h后用荧光显微镜观察转染效率，实时定量PCR检测 BRCAA1和GAPDH基因mRNA表达水平。MTT法检测转染后24、48与72 h的细胞增殖水平，AnnxinV PE/7AAD检测转染24 h后的细胞凋亡水平，Western blotting检测转染48 h后细胞的凋亡相关蛋白表达水平。结果：BRCAA1 siRNA表达质粒转染MGC803细胞24 h 的转染效率为（81.2±2.6）％ 。转染后48 h MGC803细胞的BRCAA1 mRNA水平下降了61.4％，MGC803细胞增殖的抑制率达45.0%，转染siRNA细胞的凋亡率明显高于未转染细胞和对照质粒转染细胞\[（14.4±１.6）% vs（5.4±2.0）％，（4.4±2.5）％，P<0.05\]。转染siRNA细胞的凋亡相关蛋白Rb与Bax的表达量显著增加（P<0.05），Bcl2的表达量显著减少（P<0.05）。结论：BRCAA1基因的沉默可有效抑制人胃癌MGC803细胞的增殖和诱导细胞凋亡，其机制与其促进Rb和Bax蛋白表达、抑制Bcl2蛋白表达有关。     

靶向XIAP的siRNA抑制结肠癌LoVo细胞体内外的增殖

目的：研究siRNA干扰X连锁凋亡抑制蛋白（Xlinked inhibitor of apoptosis protein, XIAP）基因表达对结肠癌细胞LoVo体内外增殖的影响。方法：构建XIAP真核表达干扰载体pSil2.1shXIAP1和pSil2.1shXIAP2,脂质体转染结肠癌细胞株LoVo,G418筛选出稳定转染LoVoshXIAP2细胞。RTPCR和Western blotting方法检测XIAP mRNA和蛋白的表达。MTT法和平板克隆形成实验检测LoVo细胞的增殖;流式细胞仪检测细胞的凋亡;裸鼠移植瘤模型观察XIAP表达下调对结肠癌体内增殖活性的影响。结果：LoVoshXIAP2细胞中XIAP mRNA和蛋白表达水平均显著下调。相对于对照组细胞,LoVoshXIAP2细胞的增殖和克隆形成率显著降低(P<0.01）,凋亡率显著增加（P<0.01）。 LoVoshXIAP2移植瘤组织中XIAP蛋白表达明显下调,LoVoshXIAP2移植瘤生长显著抑制（均P<0.05）。结论：pSil2.1shXIAP2能够抑制结肠癌LoVo细胞中XIAP蛋白的表达,抑制LoVo细胞体内外的增殖,有望成为结肠癌免疫治疗的新手段。     

脂质体介导反义C-FLIP对BGC823细胞凋亡的影响

目的：探讨脂质体介导下c-FLIP（Cellular—FLICE Inhibitory Protein）反义寡核苷酸对胃癌细胞系BGC823的作用。方法：RT—PCR和Western Blot方法检测c-FLIPL、c—FLIPs的mRNA和蛋白的表达；MTT法检测细胞抑制率：原位末端标记法、流式细胞术检测细胞凋亡：Western Blot检测蛋白表达变化。结果：c-FLIP基因编码的2种mRNA和蛋白在Hela、BGC823细胞中呈阳性表达。MTT显示脂质体介导反义寡核苷酸可显著抑制BGC823细胞增殖：反义寡核苷酸作用细胞36h后．TUNEL检测可见明显阳性染色，流式细胞分析发现在G1峰前出现凋亡峰；Western Blot可见c-FLIPL和c-FLIPs蛋白表达显著下降。结论：c-FLIPL、c—FLIPs mRNA和蛋白在Hela、BGC823细胞中表达。脂质体介导c-FLIP反义寡核苷酸转染BGC823细胞后抑制目的蛋白表达，抑制细胞生长、促进凋亡．其作用呈剂量依赖性。研究靶向c-FLIP的反义基因治疗药物可能为胃癌的临床治疗提供新的方法和思路。     

RNAi下调AKT1、PI3K P85表达抑制乳腺癌MCF-7细胞的增殖

目的：探讨RNAi（RNA interference）技术抑制乳腺癌MCF7细胞中AKT1和PI3K P85亚基的表达对MCF7细胞增殖和侵袭等的影响。方法：将包含AKT1、PI3K P85两种siRNA开放阅读框的短发夹RNA（shRNA）重组腺病毒质粒表达载体rAd5siAKT1siPI3K转染至乳腺癌MCF7细胞。应用realtime PCR和Western blotting检测转染后目的基因mRNA和蛋白的表达水平,并用Western blotting检测目的基因被沉默后PCNA、cyclin D1和P53的表达情况。应用MTT法、流式细胞术、2D和3D Matrigel实验检测MCF7细胞转染前后的细胞增殖周期和侵袭能力。结果：重组腺病毒质粒表达载体rAd5siAKT1siPI3K介导的靶向〖STBX〗AKT1, PI3K P85 shRNA可以有效抑制目的基因AKT1和PI3 Kp85的mRNA和蛋白表达;下游相关因子PCNA、cyclin D1的表达亦下调,P53表达则上调。MTT法结果显示rAd5siAKT1siPI3K组细胞生长抑制率>50%,与未转染组和rAd5siCtrl转染组比较,出现明显的G1/G0细胞周期阻滞;2D和3D Matrigel实验显示,未转染组和rAd5siCtrl转染组细胞呈正常形态,而rAd5siAKT1siPI3K 转染组细胞贴壁生长能力明显减低,细胞团块明显缩小。结论：靶向AKT1、PI3K P85亚基的shRNA技术可以抑制MCF7细胞中AKT1、PI3K P85亚基的表达,抑制MCF7细胞的体外增殖。     

Tiam 1反义寡核苷酸转染对胃癌细胞体内外侵袭转移能力的影响

背景与目的:作为细胞骨架结构调节因子,T淋巴瘤侵袭转移诱导因子1(Tiam 1)与胃肠道肿瘤侵袭转移密切相关。本研究应用反义寡核苷酸(ASODN)转染技术,特异抑制胃癌细胞中Tiam1表达,进而观察对胃癌细胞体内、外侵袭转移能力的影响。方法:采用层粘连蛋白黏附法,由胃癌MKN-45细胞株(M0)中筛选获得高侵袭转移亚株(MH)。以脂质体介导将Tiam 1 ASODN转染至MH细胞中,并应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)及定量细胞ELISA技术分别检测Tiam 1 mRNA和蛋白的表达。应用Boyden小室及裸鼠接种法分别观察ASODN转染后MH细胞在体内、外侵袭转移能力方面的改变。结果:应用0.43μmol/L Tiam 1 ASODN转染能特异性抑制胃癌MH细胞中Tiam1 mRNA和蛋白表达(0.162±0.018,0.982±0.119),与脂质体转染组(0.789±0.054,1.237±0.108)、正义寡核苷酸(SODN)-脂质体转染组(0.754±0.039,1.234±0.103)、未转染组(0.801±0.065,1.290±0.182)相比,分别约为后三者的20.2%~21.5%、76.1%~79.6%(P<0.05)。ASODN转染组细胞的体外侵袭、移行能力(10±3、21±9)较SODN转染组(27±10、56±13)、未转染组(26±6、53±12)明显受抑制(P<0.05),同时ASODN转染组细胞在裸鼠体内的肺转移率(1/5=20%)也较SODN转染组(4/5=80%)、未转染组(4/5=80%)显著下降(P<0.05)。结论:特异性ASODN转染可有效抑制Tiam1在胃癌细胞中的表达并削弱其体内、外侵袭转移能力。     

骨髓间充质干细胞表达外源性IL-12对胶质瘤C6细胞增殖的影响

目的:探讨以骨髓间充质干细胞（mesenchymal stem cells,MSCs） 为基因治疗载体表达外源性IL12对胶质瘤C6细胞增殖的影响。方法：分离培养大鼠MSCs, 腺病毒介导IL12基因转染大鼠MSCs(AdIL12MSCs),RTPCR 及Western Blotting检测AdIL12MSCs中IL12基因mRNA及蛋白表达。MTT法检测AdIL12MSCs分泌的外源性IL12对C6胶质瘤细胞增殖活性 的影响,光镜下观察外源性IL12对C6细胞形态的影响。结果：腺病毒介导IL12基因成功转染MSCs形成AdIL12MSC,其IL12基因在mRNA及蛋白水平均有明显表达。AdIL12MSC分泌的外源性IL12显著抑制胶质瘤C6细胞的增殖（P<0.05）。结论：转染IL12的MSCs(AdIL12MSC)能够在mRNA及蛋白水平表达外源性IL12基因,显著抑制胶质瘤C6细胞的增殖。     

仙人掌原液毒性的初步研究

背景与目的： 研究仙人掌原液的毒性。 材料与方法： 小鼠急性毒性试验、Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠精子畸形试验、大鼠30 d喂养试验。 结果： 仙人掌原液雌、雄小鼠LD50均大于20.0 g/kg,属无毒物质;Ames试验、微核试验和精子畸形试验结果均为阴性;大鼠30 d喂养试验结果显示该样品30 d喂养对大鼠各项观察指标未见毒性作用。结论： 在本次实验条件下,仙人掌原液为无毒物质,未显示有遗传毒性和亚急性毒性作用。     

食管平滑肌瘤10例临床治疗体会

我院１９７５年６月～１９９０年７月共收治食管平滑肌瘤１０例，占同期食管肿瘤总数的０．１９２％（１０／１０９２）。位于食管上段２例，中段５例，下段３例。Ｘ线食管钡餐造影是诊断本病的主要方法。行食管粘膜外肿瘤摘除９例，食管部分切除１例，效果良好。本文就其诊断与手术治疗进行了讨论。     

中晚期贲门癌148例的外科治疗

目的　总结贲门癌手术治疗影响生存率的因素 ,提供今后工作参考。方法　对 14 8例经手术治疗的贲门癌患者进行术后并发症、绝对生存率的X2 检验。结果　本组切除率为 94.5 9% ,近半胃切除占 72 .14 % ,1、3、5年生存率分别为 67.9%、45 %和 2 4.3 %。病期、外侵程度和淋巴结转移等因素对 5年生存率有显著影响 (P <0 .0 1)。术后并发症以吻合口瘘及肺癌并发症为多见 ,其发生率为 3 .6% ,手术死亡率 1.4%。结论　提高生存率的关键在于早期诊断 ,根治手术和术后积极综合治疗。     

胆囊癌29例分析

目的探索胆囊癌的防治方法。方法分析29例胆囊癌病人临床资料、治疗方法及结果。结果术前诊断明确者21例，剖腹探查发现已属晚期，9例为Ⅳ期行根治术，12例为Ⅴ期未行根治术，均于术后1年内死亡。术前怀疑胆囊癌者5例，剖腹探查冰冻切片证实为Ⅴ期及Ⅳ期者各1例，Ⅴ期未行根治术，Ⅳ期行根治术，均于术后1年内死亡；Ⅲ期者3例，行胆囊癌根治术分别于术后10月、13月、17月死亡。2例术中冰冻切片发现的Ⅱ期胆囊癌，行胆囊癌根治术，分别于术后23月、26月死亡。1例意外胆囊癌属Ⅰ期胆囊癌，术后5年半死亡。结论要减少胆囊癌危害，重在及时治疗胆囊结石。     

仙人掌原毒性的初步研究

背景与目的:研究仙人掌原液的毒性。材料与方法:小鼠急性毒性试验、Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠精子畸形试验、大鼠30 d喂养试验。结果:仙人掌原液雌、雄小鼠LD50均大于20.0 g／kg,属无毒物质;Ames试验、微核试验和精子畸形试验结果均为阴性;大鼠30 d喂养试验结果显示该样品30 d喂养对大鼠各项观察指标未见毒性作用。结论:在本次实验条件下,仙人掌原液为无毒物质,未显示有遗传毒性和亚急性毒性作用。     

Management of intracranial metastases of differentiated carcinoma of thyroid

Summary Brain metastases in differentiated carinoma of the thyroid is a rare occurrence. We treated five documented cases of carcinoma of thyroid with brain metastases out of 400 cases of thyroid cancer treated between 1972 to 1993. 4 were females out of which one was pregnant during the appearance of brain metastases. All cases were treated with thyroidectomy, and radioiodine as primary therapy. Brain metastases developed 6 months to 11 years following treatment of the primary and were treated with radiotherapy and suppressive levothyroxine. We observed the beneficial effect of suppressive thyroxine and the poor prognosis associated with pregnancy and withdrawl of thyroid replacement therapy. 3 of the 5 patients are alive 12–23 months after treatment for brain metastases, while 2 patients died at 4 months and 7 years post brain metastases due to pulmonary and hepatic failure, respectively.     

胆囊腺瘤癌变的相关因素分析

目的:探讨胆囊腺瘤癌变与临床因素的相关性。方法:应用ROC曲线,计算胆囊腺瘤癌变的肿瘤大小临界值。应用χ2独立性检验,计算胆囊腺瘤癌变与临床因素的相关性、临床表现与肿瘤位置的相关性。结果:肿瘤良恶性临界值为2.27 cm。胆囊腺瘤癌变与患者的性别、年龄、是否合并结石无明显相关性（P＞0.05）,而与肿瘤大小、肿瘤数目、形态、超声下是否有血流(P＜0.05)等临床病理特征有明显相关性。临床症状与肿瘤是否位于胆囊颈部有明显相关性(P＜0.05)。结论:胆囊腺瘤在超声扫描下表现为单发、无蒂、有血流、直径大于2.27 cm,应高度怀疑已有恶变。肿瘤位于胆囊颈部可引起右上腹胀痛、疼痛向右背部放射、恶心呕吐等临床表现。     

乳腺叶状囊肉瘤320例诊治分析

目的探讨乳腺叶状囊肉瘤临床诊断和治疗方法。方法回顾分析经手术病理确诊为乳腺叶状囊肉瘤的320例患者的诊断和治疗情况。结果行乳腺X片检查121例,B超检查25例,近红外检查21例,针吸细胞学检查42例;15例(12.4%)乳腺X片检查及3例(14.3%)近红外检查诊断为乳腺叶状囊肉瘤。临床诊断正确率为17.5%(56/320),误诊率为82.5%(264/320)。随访253例患者,其中局部复发45例(17.8%),远处转移死亡13例(5.1%)。结论乳腺叶状囊肉瘤诊断需常规病理检查,治疗宜行局部广泛切除或全乳切除。     

恶性肿瘤肝转移假性肝硬化发生机制及诊疗的研究进展

随着对恶性肿瘤的深入研究,越来越多的肿瘤患者接受到更规范更多线的治疗.更多线的化疗及靶向治疗,使一部分恶性肿瘤肝转移患者的肝脏发生类似肝硬化的形态学及临床改变,称之为假性肝硬化.由于假性肝硬化罕见,对于它的认识多来自于个案报道.因此,本文通过综述国内外关于假性肝硬化的个案报道及相关研究,对其发生机制、影像学及临床表现和...