SIRT1对大鼠急性脊髓损伤炎症反应的影响

目的 观察大鼠急性脊髓损伤后SIRT1对局部组织炎症反应的影响.方法 采用改良Allen′s法,建立大鼠脊髓钝挫伤模型(T10),100只SD大鼠被随机分成4组:假手术组(n=4,SHAM),模型组(n=32,SCI),白藜芦醇组(n=32,RES),对照剂组(n=32,SOL).脊髓损伤术后立即给予腹腔注射白藜芦醇(RES)100 mg/kg和聚乙二醇硬脂酸酯15(SOL)100 mg/kg,在脊髓损伤后4 h,8 h,24 h,36 h取材,用QT-PCR的方法检测4组中SIRT1的动态表达情况,采用酶联免疫吸附法(ELISA试剂盒)测定脊髓损伤后4 h,8 h,12 h,24 h,36 h各组组织中炎症因子(IL-1β,IL-6,IL-10,TNF-α)水平.结果 RES组SIRT1表达在4 h明显增加,在8 h达到高峰,与其他两组(SCI组,SOL组)比较差异有统计学意义(P<0.01).SCI组大鼠损伤脊髓组织在损伤后4 h各炎症性细胞因子表达即明显升高,其中TNF-α和IL-6于损伤后8 h达峰值,IL-10在观察时间内呈持续性增高,IL-1β在24 h达峰值.SOL组各炎症因子的变化规律与SCI组基本一致,RES组与前两组相比,浓度差异均有统计学意义(P<0.01).结论 SIRT1对大鼠急性脊髓损伤后炎症反应有明显抑制作用.     

脊髓损伤后组织基因表达谱的变化

目的通过基因芯片全面了解组织损伤后基因表达变化情况,研究脊髓损伤后组织基因表达谱的变化。方法健康成年SD大鼠9只,体质量300～400g,雌雄不拘,随机数字法分为无损伤组及损伤2、48h组,每组3只。以打击法制成大鼠脊髓闭合性损伤的动物模型,利用表达谱基因芯片技术,检测正常及伤后2,48h脊髓组织基因表达谱,寻找伤后发生显著差异性表达的基因。结果有45条基因在脊髓损伤后2h发生了显著差异性表达,其中22条表达升高,23条表达下降;183条基因在伤后48h发生显著变化,包括61条表达升高,122条表达下降。结论脊髓损伤后不同时期,多条基因发生了表达变化,提示继发性脊髓损伤是一个多因素参与的过程。     

脊髓损伤后炎症性细胞因子表达的变化及甲基强的松龙的影响

目的 观察大鼠脊髓损伤(SCI)后,甲基强的松龙(MP)对炎症性细胞因子白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α) mRNA表达及运动功能恢复的影响。方法 采用改良 Allen氏法建立大鼠脊髓(T9、T10)中度损伤模型,56只SD大鼠随机分为假手术组(n=4)、SCI组(n=24)、生理盐水组(n=14)和 MP组(n=14),分别于损伤后 1 h、4 h、12 h、24 h、72 h和7 d取材,利用半定量RT PCR方法观察损伤段脊髓组织中上述 3 种细胞因子 mRNA表达的变化规律;于 SCI后30 min经尾静脉给予MP(30 mg/kg),利用半定量RT-PCR方法检测 SCI后 4 h时 MP对各炎症性细胞因子 mRNA表达的影响;利用BBB评分检测MP对大鼠SCI后运动功能恢复的影响。结果 假手术组动物脊髓组织中炎症性细胞因子mRNA仅有微弱表达。SCI后1h,各炎症性细胞因子mRNA表达明显升高,其中 IL-1β,IL-6表达于损伤后 12 h达峰值,TNF-α于损伤后 4 h达峰值,至损伤后72 h仍高于假手术组( P <0.05)。SCI后4 h时,MP组大鼠 IL-1β和TNF-αmRNA的表达明显受到抑制,但MP并未对运动功能的恢复产生有益的影响。结论 MP可明显抑制SCI后的炎症反应。     

脊髓损伤后组织基因表达谱的变化

目的 通过基因芯片全面了解组织损伤后基因表达变化情况，研究脊髓损伤后组织基因表达谱的变化。方法 健康成年SD大鼠9只，体质量300—400R，雌雄不拘，随机数字法分为无损伤组及损伤2、48h组，每组3只。以打击法制成大鼠脊髓闭合性损伤的动物模型，利用表达谱基因芯片技术，检测正常及伤后2，48h脊髓组织基因表达谱，寻找伤后发生显著差异性表达的基因。结果 有45条基因在脊髓损伤后2h发生了显著差异性表达，其中22条表达升高，23条表达下降；183条基因在伤后48h发生显著变化。包括61条表达升高，122条表达下降。结论 脊髓损伤后不同时期，多条基因发生了表达变化，提示继发性脊髓损伤是一个多因素参与的过程。     

亚低温对急性脊髓损伤后炎症性细胞因子表达的影响

目的 观察大鼠脊髓损伤(SCI)后亚低温对炎症性细胞因子白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA表达及运动功能恢复的影响.方法 采用改良Allen法建立大鼠脊髓 (T9、T10)中度损伤模型,56只SD大鼠随机分为假手术组(n=4)、SCI组(n=24)、常温组(n=14)和亚低温组(n=14),分别于损伤后1 h、4 h、12 h、24 h、72 h和7 d取材,利用半定量 RT-PCR方法观察损伤段脊髓组织中上述三种细胞因子mRNA 表达的变化规律;于SCI后即刻行亚低温治疗4 h,利用半定量 RT-PCR方法检测SCI后4 h时亚低温对各炎症性细胞因子mRNA表达的影响;利用 Tarlor评分检测亚低温对大鼠SCI后运动功能恢复的影响.结果 假手术组动物脊髓组织中炎症性细胞因子mRNA仅有微弱表达.SCI后1 h时,各炎症性细胞因子mRNA表达明显升高,其中IL-1β和IL-6表达于损伤后12 h达峰值,TNF-α于损伤后4 h达峰值,至损伤后72 h仍高于假手术组(P<0.05).SCI后4 h时,亚低温组大鼠IL-1β和 TNF-α mRNA 的表达明显受到抑制,但亚低温对运动功能的恢复产生显著的有益影响.结论 亚低温可明显抑制SCI后的炎症反应,对运动功能的恢复产生显著的有益影响.     

应用cDNA微阵列分析脊髓损伤后基因表达的差异

背景:基因芯片可以大规模地平行检测分析上千个基因的表达模式,克服了传统的一次实验仅能对单个或数个基因表达水平进行分析的局限.目的:应用含有1 176条人类全长基因的cDNA表达谱芯片,对大鼠急性脊髓损伤模型中基因表达水平的变化进行动态观察.方法:雌性SD大鼠70只随机分成正常对照组、手术对照组、损伤4 h,24 h,3 d,7 d,10 d组7组.损伤组切除T7、T8的椎板,并用钢棒从高处自由落下致脊髓损伤.手术对照组仅进行T7、T8椎板切除.正常组和各损伤组于伤后各时间段,手术对照组于术后3 d取T6～T10段脊髓,提取总RNA,运用AtlasImageTM 2.01软件(Clontech)对放射自显影基因表达谱进行分析,各个处理组与正常组相比,灰度值差异超过3倍的基因定为有表达差异.结果与结论:结果显示共有显著表达差异基因81条,其中表达上调的基因有46条,表达下调的基因有35条,并在国内外首次观察到神经激肽B、神经肽Y、垂体后叶加压素V2受体等数个基因在脊髓损伤中的变化.结果表明利用基因芯片技术结合实验动物模型能大规模、高通量地观察急性脊髓损伤继发性损伤的基因表达谱,筛选疾病相关基因,对进一步阐明疾病在基因水平上的发病机制,有重要的意义.     

“三通针法”对脊髓损伤大鼠p75神经营养素受体表达的影响北大核心CSCD

目的探讨"三通针法"治疗对大鼠脊髓损伤后p75神经营养素受体(p75NTR)m RNA及蛋白表达的影响。方法 72只Sprague-Dawley雌性大鼠随机分成假手术组(A,n=8)和造模组(n=64)。造模组大鼠采用改良Allen重物打击法制作脊髓损伤大鼠模型,造模成功后存活48只大鼠,随机分为模型组(B,n=12)、电针组(C,n=12)、阻断剂NEP1-40组(D,n=12)、电针+阻断剂NEP1-40组(E,n=12)。电针治疗取大椎、腰阳关及双侧次髎、足三里,选择疏密波,持续时间20 min,每天1次。分别于治疗后7 d、14 d提取损伤处脊髓组织,采用实时荧光定量PCR、原位杂交、Western blotting方法分别检测p75NTR m RNA及蛋白的表达,采用BBB评分评估大鼠后肢活动功能。结果 BBB评分显示,治疗后各组评分均较B组提高,且E组BBB评分分别高于C组和D组(P<0.05),各组14 d评分均高于7 d(t>2.623,P<0.05)。脊髓损伤后,各治疗组与B组比较,脊髓组织中p75NTR m RNA及蛋白的表达均降低(P<0.05);C组、D组和E组之间无显著性差异(P>0.05)。结论 "三通针法"电针能改善脊髓损伤大鼠后肢运动功能,抑制脊髓损伤后p75NTR的表达活动,这可能是电针治疗脊髓损伤的机制之一。     

亚低温对急性脊髓损伤后肿瘤坏死因子-α表达及运动功能恢复的影响

目的 观察大鼠脊髓损伤(SCI)后亚低温对肿瘤坏死因子-α (TNF-α)mRNA表达及运动功能恢复的影响,探讨其可能的作用机制.方法 72只SD大鼠随机分为对照组(n=24)、常温组(n=24)和亚低温组(n=24),每组再分为六个亚组,每亚组4只,参照改良Allen法建立大鼠脊髓(T9)中度损伤模型,亚低温组给予亚低温治疗5 h,而对照组不做亚低温处理.分别于损伤后6 h、12 h、24 h、72 h、1周和4周,利用 Tarlov评分检测亚低温对大鼠SCI后运动功能恢复的影响;然后将大鼠处死,利用半定量 RT-PCR方法观察损伤段脊髓组织中TNF-α mRNA表达的变化.结果 亚低温组TNF-α mRNA表达SCI后6~72 h明显少于常温组(P<0.05),而运动功能评分每个时间点都明显高于常温组(P<0.05).结论 亚低温可明显抑制SCI后TNF-α的表达,具有良好的恢复运动功能的作用.     

骨髓间充质干细胞移植对大鼠脊髓损伤后生长相关蛋白43基因表达的影响

目的:分析骨髓间充质干细胞移植对大鼠脊髓损伤后生长相关蛋白43表达的影响。方法:实验于2002-06/2003-06在中国医科大学实验动物中心完成。选取3月龄Wistar大鼠64只,随机选取4只大鼠作骨髓间充质细胞的分离与培养。其余60只随机分成3组:细胞移植组(n=24),磷酸盐缓冲液组(n=24),空白对照组(n=12)。骨髓间充质干细胞提取自成鼠的股骨骨髓,经过培养、鉴定及传代,细胞传3代,待细胞大约长至50%汇合时,吸弃培养基,置于37℃,体积分数为0.05的CO2培养箱中培育30min,调整细胞密度以备移植。将大鼠麻醉后,无菌条件下用改良Allen打击装置,制作大鼠脊髓损伤动物模型,脊髓损伤后第7天,细胞移植组以微量注射器缓慢注入含间充质干细胞(106/mL)的培养液5μL,磷酸盐缓冲液组注入等量磷酸盐缓冲液5μL,空白对照组未制作脊髓损伤,分别于移植术后1、3、5d以及术后7、14、28d麻醉处死大鼠,细胞移植组与磷酸盐缓冲液组取出损伤节段的脊髓(4只/时点),空白对照组于同一节段取出相应脊髓(2只/时点)。应用反转录-聚合酶链反应和免疫组化法观察间充质干细胞移植后大鼠脊髓损伤区生长相关蛋白43基因表达的变化。结果:各组实验动物均全部进入结果分析,无脱落。①生长相关蛋白43mRNA的表达:生长相关蛋白43mRNA在正常大鼠脊髓组织中呈弱表达。间充质干细胞移植术后第1、3、7天时间点,细胞移植组生长相关蛋白43mRNA逐渐增高表达,与磷酸盐缓冲液组比较差别有统计学意义(P<0.05)。②生长相关蛋白43的表达:生长相关蛋白43在正常大鼠脊髓组织中有一定表达,间充质干细胞移植术后第7、14、28天,细胞移植组生长相关蛋白43持续高水平表达,与磷酸盐缓冲液组比较差别有统计学意义(P<0.05)。结论:间充质干细胞在移植后通过上调生长相关蛋白43基因的表达从而促进轴突的再生,可能是治疗脊髓损伤的重要机制。     

miR-20a-3p靶向STAT3调控大鼠脊髓损伤轴突修复

目的探索Wistar大鼠脊髓损伤后损伤局部微环境发生改变的分子生物学机制,寻找起关键调控作用的微RNA。方法 15只雌性Wistar大鼠随机分为对照组(n=3)和脊髓损伤组(n=12)。脊髓损伤组根据取材时间分为4 h、3d、7 d、14 d四个组,每组3只。使用Microarray 3.0芯片检测脊髓损伤大鼠损伤局部发生改变的微RNA,运用生物信息学方法论证发挥关键调控作用的微RNA,进行靶基因预测。运用逆转录实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)技术检测miR-20a-3p表达。采用Western blotting技术检测信号传导子和转录激活子(STAT)3表达量,并分析各组中靶蛋白与目标微RNA表达变化趋势相关性。在神经元中抑制关键候选微RNA,并使用免疫荧光观察靶蛋白表达与轴突生长的关系。结果脊髓损伤标本中miR-20a-3p特征性上调明显。生物信息分析结果显示,STAT3可为miR-20a-3p的靶基因,与其趋势相反。细胞实验结果显示,miR-20a-3p抑制组与对照组相比轴突延长。Western blotting结果显示,与对照组相比,miR-20a-3p抑制组STAT3蛋白表达显著上调。结论脊髓损伤后miR-20a-3p通过调节其序列互补靶基因STAT3表达量来影响神经元轴突的生长。miR-20a-3p上调导致STAT3下调,抑制miR-20a-3p,可促进神经元轴突的再生。     

经皮电刺激对大鼠脊髓损伤后神经胶质酸性蛋白和神经生长因子表达的影响

目的:探讨经皮电刺激(TES)对大鼠脊髓损伤(SCI)后神经胶质酸性蛋白(GFAP)和神经生长因子(NGF)表达的影响。方法:选用成年雄性SD大鼠72只,随机分为3组:正常组(A组)、TES组(B组)和模型组(C组)。A组8只,B、C组各32只。用Allen法,复制T9脊髓不完全损伤动物模型。B组损伤后给予损伤部位上2cm位置的皮肤及右下肢小腿位置的皮肤TES治疗7d。BBB评分后,运用免疫组织化学染色和蛋白质印迹来检测GFAP、NGF的表达变化。结果:BBB评分显示,B组与C组相比,评分增加幅度大(P<0.05),SCI各组BBB评分均明显小于A组(P<0.05)。免疫组化和Western印迹检测结果显示在实验观察的7d中,B组与C组相比,GFAP的表达减少,在第5天达到最低值(P<0.05);NGF的表达一直在增加(P<0.05)。结论:在SCI后1—7d内,TES能抑制GFAP的表达,促进内源性NGF的合成,可能创造有利于神经再生的微环境,减少胶质瘢痕的形成。     

MMP-9抑制剂对大鼠肝脏缺血再灌注模型的影响分析

目的探讨基质金属蛋白酶-9(MMP-9)抑制剂对大鼠肝脏缺血再灌注模型的影响。方法选择36只健康雄性Wistar大鼠,将其随机分成3组,对照组(大鼠未进行任何处理不建立肝脏缺血再灌注模型)12只,模型组(肝脏缺血再灌注模型组建立前采用生理盐水处理)12只大鼠,实验组(肝脏缺血再灌注模型建立前采用盐酸多西环素处理)12只。检测各组大鼠肝脏缺血再灌注1 h、6 h、24 h血清天冬氨酸氨基转移酶(AST)与丙氨酸氨基转移酶(ALT)含量;观察评价肝脏组织损伤情况,肝脏组织的淤血、空泡样变、坏死程度以及MMP-9水平。结果模型组与实验组再灌注1 h、6 h、24 h的血清ALT与AST水平、肝组织病理评分均显著高于对照组(P <0.05)实验组低于模型组(P <0.05),模型组和实验组在肝脏缺血再灌注6 h时血清ALT与AST水平最高(P <0.05)。模型组与实验组再灌注1 h、6h、24 h的肝组织MMP-9相对表达水平均显著低于对照组(P <0.05),实验组高于模型组(P <0.05)。结论 MMP-9抑制剂能抑制大鼠肝脏缺血再灌注损伤,促进恢复大鼠的肝功能,缓解肝组织病变状况。     

大鼠急性脊髓损伤后神经胶质酸性蛋白的表达意义

目的:探讨脊髓损伤后神经胶质酸性蛋白(GFAP)的表达及对后肢功能恢复的影响。方法:健康的SD大鼠30只,Allen’s法打击T9～T10脊髓节段,用BBB法评估后肢的运动功能,免疫组化染色和图像分析法观察GFAP的表达。结果:BBB评分和行为观察,发现大鼠脊髓损伤后有自行恢复率68%:对照组显示GFAP在脊髓各个部位均有表达;实验组脊髓损伤1d后,损伤区域GFAP表达增加,可达损伤区附近、软脊髓膜下的白质和脊髓中央管均有GFAP的表达,脊髓损伤3～5 d后,脊髓损伤区域和邻近的周边区域GFAP的表达显著增加,并逐渐达到高峰,随着时间的推移GFAP的表达逐渐下降,GFAP的表达于损伤2周后逐渐恢复到对照组水平(P>0.05)。结论:大鼠脊髓损伤可诱导星形胶质细胞增生,脊髓损伤后的微环境适合胶质细胞增生,对中枢系统损伤修复产生影响。     

脊髓损伤后大鼠行为学改变及早期腓肠肌的变化

目的探索脊髓损伤后大鼠行为学改变及早期腓肠肌变化。方法108 只Wistar 大鼠,其中38 只为假手术组(n=38),其余制作脊髓切除模型,分为损伤组(n=38)和康复训练组(n=32)。应用BBB 法评价大鼠脊髓损伤后不同时间点的行为学变化;通过免疫组织化学法观察腓肠肌的变化。结果康复训练组BBB 评分从术后3 周开始高于损伤组,但两组得分始终未超过10 分。Dystrophin 免疫荧光染色显示,脊髓损伤后损伤组和康复训练组腓肠肌肌纤维横截面积均减小,但康复训练组萎缩程度较轻。结论脊髓损伤后大鼠后肢运动功能可出现一定的自发性恢复,康复训练有利于脊髓损伤大鼠运动功能的恢复,并能减缓后肢肌肉萎缩。     

原花青素对急性脊髓损伤大鼠核因子-кB和白细胞介素-6 表达的影响

目的观察原花青素对脊髓损伤后大鼠核因子-кB (NF-кB)、白细胞介素-6 (IL-6)表达变化的影响。方法36 只健康成年Sprague-Dawley 大鼠均分为3 组：原花青素治疗组(A组)、甲基泼尼松龙治疗组(B 组)和对照组(C 组)。采用Allen 法复制大鼠T9急性脊髓损伤模型,于术后1 d、3 d 和7 d 对各组大鼠行后肢运动功能BBB评分和斜板试验;免疫组织化学染色检测脊髓NF-кB和IL-6 的表达。结果术后3 d、7 d,A组、B组大鼠BBB评分和斜板试验成绩均优于C组(P<0.05)。A组术后各时间点NF-кB表达均明显低于C组(P<0.01),B组术后3 d、7 d 的NF-кB表达强度明显低于C组(P<0.01)。术后各时间点,A、B两组IL-6 表达均低于C组(P<0.05)。结论原花青素可抑制脊髓损伤后大鼠脊髓组织NF-кB、IL-6 的表达,有效抑制炎症反应,从而促进大鼠后肢运动功能的恢复。     

丙酮酸乙酯对烫伤延迟复苏大鼠多器官功能及死亡率的影响

目的观察丙酮酸乙酯（EP）对烫伤延迟复苏动物多器官功能及死亡率的影响，探讨其保护作用的机制。方法采用雄性Wistar大鼠30％总体表面积Ⅲ度烫伤模型。实验分为两部分进行：①死亡率观察：130只大鼠按照随机数字表法分为假烫伤组（n=10）、烫伤组（n=60。伤后6h腹腔注射生理盐水40ml／kg进行复苏，然后按照不同时间点腹腔注射等量生理盐水）和EP组（n=60。伤后6h腹腔注射生理盐水40ml／kg进行复苏，按不同时间点腹腔注射EP液40mg／kg。每日2次．间隔12h。给药3d）。除假烫伤组外，各组又分为伤前2h（n=20）、伤后2h（n=20）和伤后12h（n=20）给药3个亚组。观察不同时间点各组动物7d死亡率。②器官功能观察：70只大鼠随机分为假烫伤组（n=10）、烫伤组（n=30）和EP组（n=30，伤后2h给药），并分别于伤后12、24和72h活杀，检测器官功能指标改变。结果与烫伤组相比，伤后12hEP组动物死亡率显著降低（35．0％比75．0％，P〈0．05）。伤后2hEP组血清丙氨酸转氨酶、天冬氨酸转氨酶、尿素氯、肌酐、肌酸激酶水平及肺组织髓过氧化物酶活性均明显下降（P〈0．05或P〈0．01）。结论EP能明显改善严重烫伤延迟复苏大鼠的预后，并对重要器官功能具有显著保护作用。     

大潮气量通气诱导幼猪呼吸机所致肺损伤并长期存活模型的建立

目的 建立幼猪呼吸机所致肺损伤模型并使其长期存活.方法 取健康幼猪21头,随机(随机数字法)分成预实验组(A组)9头、损伤组(B组)及对照组(C组)各6头.各组动物均予经口气管插管,颈内动脉及颈外静脉置管.预实验组予以60～80 mL/kg潮气量机械通气,损伤组子潮气量50 mL/kg,每小时行动脉血气分析,至动物死亡或血氧分压/吸人氧浓度(PaO2/FiO2)＜300mmHg(1 mmHg=0.133 kPa)停止通气,对照组自由呼吸.取不同时点(A,B组0 h-成模时;C组0～6 h)监测生命体征及各项呼吸力学、血气参数、血流动力学参数.实验数据行t检验或单因素ANOVA分析.实验结束后取左侧肺组织行病理检测.结果 大潮气量通气约6 h后,A,B组PaO2/FiO2值出现显著下降,与对照组相比较,差异具有统计学意义(P＜0.05),肺形态学达急性肺损伤标准;给予50 mL/kg潮气量通气,动物可长期存活.结论 使用50 mL/kg大潮气量机械通气,成功建立幼猪呼吸机所致肺损伤模型,可长期存活.

Abstract：

Objective To establish a long-term surviving model of ventilator induced lung injury ( VILI) in piglets with large tidal volume ventilation. Methods A total of 21 piglets were randomly( random number) divided into trial experiment group (group A,n =9), injury group ( group B,n =6) and control group ( group C, n = 6). Each piglet was intubated orotracheally and intravascular cannulae were inserted both into carotid artery and external jugular vein. The tidal volume in 60 - 80 ml/kg was given to rats of group A and 50 ml/kg to rats of group B, and free breath to rats of group C. Vital signs, pneumatic mechanics, blood-gas analysis and hemodynamics were monitored every hour ( group A and group B from just after the model established 0 h, group C from 0 ～6 h). The t test or ANOVA test was used for statistical analysis. Left lung tissue was sent to biopsy after experiment. Results About 6 hours after mechanical ventilation with large tidal volume, PaO2/FiO2 lower significantly both in A and B group in comparison with control group (P ＜0.05 ) and histological changes hit the ALl criteria. Piglets ventilated with 50 ml/kg of tidal volume could survive for long-term. Conclusions The model of VILI in piglets made with 50 ml/kg of tidal volume ventilation was established successfully and survived for long-term.     

神经干细胞移植影响脊髓全横断大鼠大脑运动皮质相关凋亡基因的表达

背景:多项研究已证实神经干细胞能促进脊髓损伤大鼠神经功能的恢复,但其分子机制还不清楚.目的:观察神经干细胞移植对脊髓全横断损伤大鼠大脑运动皮质相关凋亡基因Bax,Bcl-2和Caspase-3 mRNA表达的影响.设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2007-07/2008-12在昆明医学院神经科学研究所完成.材料:孕14-15 d绿色荧光蛋白转基因鼠5只,取其胚胎用于神经干细胞培养.清洁级健康成年雌性SD大鼠88只,随机分成3组:假手术组8只、模型组40只、细胞移植组40只.方法:模型组、细胞移植组大鼠建立T_9脊髓全横断脊髓损伤模型,假手术组只行T_8椎板切除.用DMEM/F12调整胎鼠神经干细胞密度为2×10~(10)L~(-1),吸取细胞悬液15 μL滴加到约2 mm~3大小的明胶薄片上,细胞移植组将此明胶薄片植入大鼠脊髓两横断面之间的间隙处.分别于细胞移植后3,7,14,21,28 d取材进行指标检测.主要观察指标:RT-PCR法检测大脑运动皮质Bax,Bcl-2和Caspase-3 mRNA表达的变化.结果:与假手术组比较,模型组各时间点Bax的表达均无明显差异(P>0.05),术后14,28 d Bcl-2的表达明显减少(P<0.05),术后3 d Caspase-3的表达明显升高(P<0.05).与模型组比较,细胞移植组在神经干细胞移植后3 d Bax的表达明显减少(P<0.05),移植后14,21 d Bcl-2的表达明显增高(P相似文献   

The selective guanylate cyclase inhibitor ODQ reduces multiple organ injury in rodent models of Gram-positive and Gram-negative shock

OBJECTIVE: An enhanced formation of endogenous nitric oxide contributes to the circulatory failure caused by endotoxin (lipopolysaccharide). Many of the biological actions of nitric oxide are mediated by the guanylate cyclase/cyclic guanosine 3prime;,5'-monophosphate system. We recently discovered that two cell wall components, namely lipoteichoic acid and peptidoglycan of the Gram-positive bacterium Staphylococcus aureus, synergize to cause shock and multiple organ dysfunction syndrome in the rat. Here we investigate the effects of a selective guanylate cyclase inhibitor, 1H-(1,2,4)oxadiazole(4,3-alpha)quinoxaline-1-one (ODQ), on the circulatory failure and multiple organ dysfunction syndrome (kidney, liver, lung) caused by a) coadministration of lipoteichoic acid and peptidoglycan (Gram-positive shock) or b) lipopolysaccharide (Gram-negative shock) in the anesthetized rat. Furthermore, we investigated whether ODQ scavenges superoxide anions and/or hydroxyl radicals. DESIGN: The in vivo portion of the study was a prospective, randomized, controlled animal study. The in vitro portion included a) cultured ventricular myoblasts of the rat, H9c2(2-1) cells, and b) a cell free superoxide anion assay system. SETTING: University-based research laboratory. SUBJECTS: Seventy-five anesthetized, male Wistar rats were used for the in vivo study. INTERVENTIONS: For the in vivo portion of the study, after surgical preparation, anesthetized rats were observed for 6 hrs. All rats were pretreated and received an intravenous infusion of saline (1.5 mL.kg-1.hr-1), which was maintained throughout the experiment. The rats were assigned to nine groups. Group 1 contained control rats (sham) subjected to 2 mL/kg saline intraperitoneally, 2 hrs before the experiment (n = 7). Group 2 contained control rats (sham) that received 2 mg/kg ODQ intraperitoneally, 2 hrs before the experiment (n = 9). Group 3 contained control rats (sham) that received 2 mL/kg dimethyl sulfoxide, 30% v/v in saline intraperitoneally, as a vehicle for ODQ, 2 hrs before the experiment (n = 6). In group 4 rats, Gram-positive shock was induced by coadministration of lipoteichoic acid (3 mg/kg intravenously) and peptidoglycan (10 mg/kg intravenously) (n = 10). In group 5, rats were pretreated with ODQ (as described previously) before lipoteichoic acid/peptidoglycan (n = 9). In group 6, rats were pretreated with dimethyl sulfoxide (as described previously) before lipoteichoic acid/peptidoglycan (n = 7). In group 7, Gram-negative shock was induced by lipopolysaccharide (6 mg/kg intravenously) (n = 11). In group 8, rats were pretreated with ODQ (as described previously) before lipopolysaccharide (n = 8). In group 9, rats were pretreated with dimethyl sulfoxide (as described previously) before lipopolysaccharide (n = 8). For the in vitro portion of the study, rat cells were preincubated with vehicle (saline and/or dimethyl sulfoxide) and ODQ (0.1 microM to 1 mM) for 2 hrs. The cells then were exposed to H2O2 (1 mM) for 4 hrs at 37 degrees C, after which time cell viability was determined by measuring the mitochondrial-dependent reduction of 3-(4,5-di-methyliazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide to blue formazan. Next, an aqueous solution was incubated with ODQ (as described previously), and superoxide anions were produced by using a hypoxanthine/xanthine-oxidase assay. The chemiluminescence assay was used to evaluate any potential antioxidative effects of ODQ. MEASUREMENTS AND MAIN RESULTS: In vivo, administration of lipoteichoic acid/peptidoglycan or lipopolysaccharide resulted within 6 hrs in hypotension, acute renal dysfunction, hepatocellular injury, and lung injury. Pretreatment of rats with ODQ attenuated the renal dysfunction, lung injury, and hepatocellular injury caused by lipoteichoic acid/peptidoglycan or lipopolysaccharide. In vitro, administration of H2O2 (for 4 hrs) to rat cardiomyoblasts decreased mitochondrial respiration attributable to generation of hydroxyl radicals. Pretreatment of cells with ODQ did not abolish this cell injury. In addition, ODQ did not scavenge superoxide anions. CONCLUSIONS: These results imply that ODQ, an inhibitor of guanylate cyclase, reduces the multiple organ injury and dysfunction caused by wall fragments of Gram-positive or Gram-negative bacteria in the anesthetized rat. The observed protective effects of ODQ are not attributable to the ability of ODQ to reduce the formation or the effects of superoxide anions or hydroxyl radicals.     

缺血性脑损伤神经再塑过程中神经细胞黏附分子的表达

目的：研究大鼠缺血性脑损伤后神经细胞黏附分子的表达对神经可塑性的影响。方法：Wistar大鼠26只，分为空白对照组（n=3）、假手术组（n=3）和损伤组（n=20）。对损伤组大鼠，使用线栓模型造成右侧大脑中动脉阻断（MCAO）。再灌1d(n=5)、2d(n=5)、3d(n=5)和7d(n=5)，用免疫组织化学的方法，测定脑片神经细胞黏附分子的表达。结果：损伤组4个时间点颞叶皮质都有神经细胞黏附分子表达的增加，以术后2d、3d明显，7d仍有较大量的表达。结论：在短暂缺血性脑损伤后，神经细胞黏附分子表达的增加可能与神经可塑性有关。