肺癌患者外周血CD+8 自然杀伤T细胞表面受体NKG2D和NKG2A表达的临床意义

 【摘要】　目的　检测肺癌患者外周血CD+8 自然杀伤（NK）T细胞表面受体NKG2D和NKG2A的表达,探讨二者表达失衡与肺癌免疫逃逸的关系。方法　选择95例原发未治疗的肺癌患者,采用流式细胞术检测CD+8 NKT细胞表面受体NKG2D和NKG2A的表达,以50名健康人为对照。结果　肺癌组CD+8 NKT细胞NKG2D+表达率[（77.07±5.77）%]明显低于对照组[（84.13±4.49）%],差异有统计学意义（t＝8.14,P＜0.05）;在TNM分期中,Ⅰ～ⅢA、ⅢB、Ⅳ期患者CD+8 NKT细胞NKG2D+表达率依次为（81.07±5.02）%、（76.95±4.70）%、（72.80±5.16）%,差异有统计学意义（F＝18.74,P＜0.05）。肺癌组CD+8 NKT细胞NKG2A+表达率[（33.58±8.82）%]明显高于对照组[（25.31±8.38）%],差异有统计学意义（t＝-5.46,P＜0.05）;在TNM分期中,Ⅰ～ⅢA、ⅢB、Ⅳ期患者CD+8 NKT细胞NKG2A+的表达率依次为（25.10±6.93）%、（33.24±3.76）%、（43.64±6.10）%,差异有统计学意义（F＝75.73,P＜0.05）。结论　肺癌患者CD+8 NKT细胞表面NKG2A和NKG2D表达失衡可能抑制该细胞的杀伤功能,而这可能是肿瘤免疫逃逸的机制之一。     

食管癌、贲门癌患者外周血CD+8 NKT细胞活化受体NKG2D及其分泌性配体sMICA检测的临床意义

 目的 　探讨外周血CD+8 NKT细胞活化受体NKG2D及其分泌性配体sMICA检测在食管癌、贲门癌诊断及术后疗效评价中的临床意义。方法　对53例患者确诊后（29例手术患者术前14 d及术后14 d）及30名健康对照组采用流式细胞术对外周血CD+8 NKT细胞中活化受体NKG2D阳性细胞百分比测定,应用酶联免疫吸附法进行sMICA含量测定,并各自进行差异性分析,同时对两者进行依从性分析。结果　患者外周血CD+8 NKT细胞中NKG2D阳性细胞百分比为（77.632±8.972）%,明显低于对照组的（89.053±6.515）%（t＝-6.113,P＜0.05）;TNM分期Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期患者依次降低（F＝99.251,P＜0.01）;有区域淋巴结转移者均低于无区域淋巴结转移者（t＝-10.384,P＜0.01）;鳞状细胞癌高于腺癌（t＝9.899,P＜0.01）;术前均低于术后（t＝-4.319,P＜0.01）。患者血清sMICA的含量为（326.28±85.407）pg／ml,明显高于对照组的（210.00±22.560）pg／ml（t＝7.292,P＜0.01）;Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期患者依次增高（F＝63.355,P＜0.01）;有区域淋巴结转移者均高于无区域淋巴结转移者（t＝7.770,P＜0.01）;鳞状细胞癌低于腺癌（t＝-7.593,P＜0.01）;术前均高于术后（t＝7.027,P＜0.01）。血清sMICA对外周血CD+8 NKT细胞活化受体NKG2D有抑制作用（F＝142.773,P＜0.05）,决定系数R2＝0.7368。结论　外周血CD+8 NKT细胞活化受体NKG2D及其分泌性配体sMICA含量的测定有助于食管癌、贲门癌分期的临床辅助诊断,对判断其生物学行为及预后有重要临床意义,并可作为患者手术治疗效果指标。     

CD8~+NKT细胞表面活化性受体NKG2D在肺癌患者外周血中的表达及临床意义

背景与目的 NKT细胞活化性受体NKG2D及sMICA是近来肿瘤免疫研究领域的热点之一。本研究旨在观察肺癌患者外周血中CD8+NKT细胞受体NKG2D表达水平的变化,并对NKG2D及sMICA进行相关性分析,探讨它们在肺癌免疫监视中的作用及临床意义。方法选择82例初发未治疗的肺癌患者,采用流式细胞术检测外周血CD8+NKT细胞活化性受体NKG2D的表达,并以45例健康人作对照,采用酶联免疫吸附法检测肺癌患者血清中sMICA的表达,分析NKG2D与肺癌临床生物学特征的关系。结果肺癌患者外周血中CD8+NKT细胞表面活化性受体NKG2D水平均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.001)。随TNM分期的增加,NKG2D的表达率逐渐降低。其中IV期肺癌患者NKG2D的表达明显低于I期-II期及III期患者该受体的表达,差异有统计学意义(P<0.001)。肺Ca患者中吸烟人群外周血中CD8+NKT细胞受体NKG2D的表达较非吸烟者低,差异有统计学意义(P<0.05)。CD8+NKT细胞受体NKG2D与sMICA呈负相关(r=-0.598,P<0.001)。结论肺癌患者CD8+NKT细胞表面受体NKG2D在外周血中低表...     

乳腺癌患者外周血NKG2A、NKG2D检测的临床意义

背景与目的:机体自身免疫功能与肿瘤的发生、发展有密切的关系.自然杀伤(natural killer,NK)细胞在天然免疫和获得性免疫中均发挥重要作用.目前已发现多种NK细胞表面受体,根据功能可分为抑制性受体和活化性受体二大类.抑制性受体NKG2A和活化性受体NKG2D对NK细胞的杀瘤功能发挥着相反的调节作用,在发生肿瘤的情况下,二者是如何表达以及与肿瘤免疫逃逸的关系尚不明确.本研究旨在探讨乳腺癌与乳腺良性疾病患者外周血NK细胞表面受体NKG2A与NKG2D的平衡状态,分析宿主NK细胞受体与肿瘤免疫逃逸的关系.方法:应用流式细胞术对37例乳腺癌患者和30例乳腺良性疾病患者血样标本行NKG2A、NKG2D检测,同时检测患者细胞免疫功能.结果:乳腺癌患者与乳腺良性疾病患者相比,NKG2A明显上调,NKG2D表达降低;CD3+、CD4+、CD56+细胞百分比更低(p＜0.05).在乳腺癌患者中,细胞免疫功能低下组及腋淋巴结转移数≥4枚组中,NKG2D表达更低(P＜0.05).Ⅲ+Ⅳ期及C-erbB2高表达乳腺癌患者,NKG2A表达更高(P＜0.05).NKG2A、NKG2D表达率在乳腺癌不同病理类型及组织学分级之间的差异均无统计学意义(P＞0.05).结论:外周血NKG2A、NKG2D的测定对于了解肿瘤患者机体免疫功能的状态、估计病情及判断预后具有一定的临床价值.     

晚期消化道恶性肿瘤NKG2A、NKG2D、sMICA的表达及其相关性研究

 目的　分析晚期消化道恶性肿瘤患者外周血NK细胞受体NKG2A、NKG2D及NKG2D配体sMICA的表达及其相关性,探讨其对恶性肿瘤患者免疫监视的意义。方法　选取263例晚期消化道恶性肿瘤患者为试验组,66例健康志愿者作为对照组,采用流式细胞术（FCM）检测两组NKG2A、NKG2D的表达,酶联免疫吸附法（ELISA）检测两组sMICA的表达。结果　试验组患者血清sMICA及NKG2A高于健康对照组[sMICA：（266.65±107.60） pg／ml比（148.01±94.11） pg／ml;NKG2A（37.17±20.54）％比（27.75±6.52）%,均P ＜0.01]。NKG2D低于健康对照组[（83.92±10.46）%比（88.21±6.26）%,均P ＜0.01]。Spearman相关性分析结果表明,试验组NKG2D与sMICA呈负相关r＝-0.149,P ＝0.016。NKG2D与NKG2A、NKG2A与sMICA之间均无明显的线性相关关系（均P ＞0.05）。结论　检测外周血NK细胞受体NKG2A、NKG2D及NKG2D配体sMICA的表达水平,可监测消化道恶性肿瘤患者免疫功能状态,为恶性肿瘤的免疫治疗提供理论依据。     

肺癌患者外周血NKG2A和NKG2D表达及其临床意义的研究

目的:通过研究肺癌患者外周血中自然杀伤细胞(NK)表面抑制性受体NKG2A和活化性受体NKG2D表达,分析探讨NKG2A与NKG2D表达失衡与肿瘤免疫逃逸的关系及其临床意义.方法:采用流式细胞术检测101例肺癌患者(肺癌组)和81例健康对照者(对照组)外周血中NK细胞含量及其表面受体NKG2A、NKG2D表达情况,分析...     

NKG2D 介导CIK 细胞对食管癌EC9706细胞杀伤作用的体外研究*

目的:研究细胞因子诱导的杀伤细胞（Cytokine-induced killer cells ,CIK）对食管癌EC9706细胞株的体外杀伤活性。方法:流式细胞仪检测EC9706细胞NKG2D 配体的表达;体外分离健康者外周血单个核细胞,干扰素-γ 、白细胞介素-2、CD3 单抗诱导培养,流式细胞仪检测 0、14天的细胞 CD3+CD56+、NKG2D 的表达,乳酸脱氢酶释放法测定培养14天的 CIK 细胞在效靶比 10 :1、2 0 :1、3 0 :1、4 0 :1、5 0 :1 时对EC9706细胞的杀伤活性;效靶比3 0 :1 时,观察NKG2D 单抗封闭CIK 细胞表面NKG2D 分子后对CIK细胞杀伤活性的影响。结果:EC9706细胞表达MICA、ULBP2,不表达MICB、ULBP1、ULBP3。0、14天细胞表面NKG2D 表达率分别为（26.30± 1.12）% 、（67.13± 1.34）% ,差异有统计学意义（P<0.05）;CD3+CD56+细胞分别为（0.68± 0.07）% ,（56.55± 2.01）% ,差异有统计学意义（P<0.05）;效靶比1 0 :1、2 0 :1、3 0 :1、4 0 :1、5 0 :1 时CIK 细胞对EC9706细胞的杀伤活性分别为（28.81± 0.47）% 、（37.78±0.22）%、（44.31± 1.06）%、（47.25± 0.47）%、（57.62± 0.94）%;随着效靶比增高,CIK 细胞对 EC9706细胞的杀伤活性明显增强（P<0.05）;效靶比3 0 :1 时NKG2D 单抗封闭CIK 细胞表面NKG2D 分子后,CIK 细胞对EC9706细胞的杀伤活性为（30.29± 1.45）% ,与阻断前（44.31± 1.06）% 相比差异有统计学意义（P<0.05）。 结论:体外CIK 细胞培养增殖过程中,NKG2D 分子表达逐渐上调,CD3+CD56+细胞逐渐增多,CIK 细胞杀伤EC9706细胞通过NKG2D 发挥作用。      

IL-15上调NKG2D表达对CIK细胞杀伤活性的增强效应

目的观察IL-15对细胞因子诱导的杀伤细胞( Cytokine-induced killer cells,CIK)NKG2D受体表达及其对食管癌EC9706细胞杀伤活性的影响。方法体外分离外周血单个核细胞,分为两组。对照组：干扰素-γ、白细胞介素-2、CD3单抗诱导培养CIK细胞。IL-15组：加用IL-15培养。流式细胞仪检测细胞免疫表型及CD3+细胞、CD56+细胞表面NKG2D的表达,LDH法测定第14天细胞在效靶比20∶1、30∶1时对EC9706细胞的杀伤活性;效靶比30∶1时,观察NKG2D单抗封闭细胞表面NKG2D分子后对两组细胞杀伤活性的影响。结果随着培养时间的延长,CIK群体细胞及CD56+细胞表面NKG2D表达逐渐增强,IL-15组与对照组相比差异有统计学意义(P＜0.05);效靶比20∶1、30∶1时,IL-15组细胞对EC9706细胞的杀伤活性均较对照组明显增强,差异均有统计学意义(P＜0.05);效靶比30∶1时NKG2D单抗封闭CIK细胞表面NKG2D分子后,对照组细胞、IL-15组细胞对EC9706细胞的杀伤活性均较阻断前明显下降,差异均有统计学意义 (P＜0.05)。结论IL-15上调CIK细胞表面NKG2D分子表达,增强CIK细胞对EC9706细胞的杀伤活性,CIK细胞通过NKG2D发挥作用。     

IL-2+IL-15组合培养方案对乳腺癌患者外周血中NK细胞体外扩增的效果

目的：观察IL-2+IL-15组合体外培养方案对于NK、NKT和T细胞亚群的比例、表型、杀伤肿瘤细胞活性与黏附活性的影响,并初步探讨其作用机制。方法：采集天津医科大学附属肿瘤医院生物治疗科2012年5月至2012年7月期间收治的5例乳腺癌患者的外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cell,PBMC）,用IL-2+IL-15 联合培养方案进行培养,观察培养15 d后细胞的扩增倍数和淋巴细胞亚群比例变化,流式细胞术检测细胞免疫表型、细胞表面受体的表达,LDH释放法和CD107a释放法检测不同细胞亚群对于HLA匹配或不匹配的靶肿瘤细胞系的杀伤活性,活细胞工作站检测总扩增产物对于不同靶肿瘤细胞系的黏附作用。结果：与扩增前相比,IL-2+IL-15培养方案扩增15 d后,NK细胞\[（36.74±1710）% vs （16.34±3.12）%,P<0.05\]、NKT细胞\[（24.88±12.34）% vs （4.06± 2.05）%,P<0.05\]比例显著增加,CD4+ T细胞和Treg细胞比例显著降低（P<0.05）,CD8+ T细胞比例显著升高（P<0.05）;NK细胞表面活化受体NKp30\[（ 92.38±7.19）% vs（32.14±17.64）%,P<0.05\]、NKp44\[（74.26±16.28）% vs（1.94±1.60）%,P＜0.05\]、NKG2D \[（ 98.58±128）% vs（6650±24.84）%,P<0.05\] 的表达率均显著升高,CD16表达率显著降低\[（ 85.12±7.66）% vs（95.60±253）%,P<0.05\]; NKT细胞、T细胞表面活化受体DNAM-1和NKG2D明显升高（P<0.05）。总扩增产物、NK细胞和NKT细胞对HLA不匹配的靶肿瘤细胞的杀伤率均显著高于HLA匹配靶细胞系的杀伤（P<0.05）;在共孵育至84 min时,与HLA匹配的靶肿瘤细胞系相比,总扩增产物细胞与HLA不匹配的靶细胞系黏附结合数目显著增多\[（ 4.80±0.53） vs （2.25±035）个,P<0.05\]。结论：IL-2+IL-15组合方案在扩增NK细胞的同时,也能够有效扩增NKT细胞,即可以扩增CD56+细胞群。并且,扩增产物主要以不受HLA限制的NK细胞杀伤活性为主来杀伤肿瘤细胞。     

肺癌患者调节性T细胞与NK细胞活化受体NKG2D的相关性及其临床意义

目的 分析肺癌患者外周血中CD+4 CDHi25 CDLo127调节性T细胞及自然杀伤细胞(NK细胞)活化受体NKG2D的表达水平之间的关系,探讨其在肿瘤免疫逃逸机制中的作用及临床意义.方法 选择70例肺癌患者,均经病理确诊.采用流式细胞术(FCM)检测患者外周血中CD+4 CDHi25 CDLo127调节性T细胞、NK细胞及NKG2D表达水平,并以50名健康人为对照.结果 肺癌患者外周血中CD+4 CDHi25 CDLo127调节性T细胞比例较健康对照组明显升高[(8.4±4.1)％与(6.7±1.7)％],差异有统计学意义(t=3.09,P＜0.05);肺癌组NK细胞比例与健康对照组比较[(15.6±8.3)％与(17.2±4.2)％],差异无统计学意义(t=-1.33,P＞0.05);肺癌组NKG2D较健康对照组明显降低[(83.3±4.9)％与(87.4±2.9)％],差异有统计学意义(t=3.16,P＜ 0.05).CD+4 CDHi25 CDLo127调节性T细胞与NKG2D呈负相关性(r=-0.302,P＜0.05).结论 在肺癌患者外周血中调节性T细胞可能通过下调NKG2D,参与肿瘤免疫逃逸机制,二者可作为评估肺癌患者免疫功能状态及预后的参考指标.     

食管癌患者自然杀伤细胞活化性受体NKG2D及其分泌性配体sMICA的检测

目的探讨宿主自然杀伤（NK）细胞受体NKG2D在抗食管癌中的作用及其与肿瘤免疫逃逸的关系。方法用流式细胞术检测50例食管癌、26名健康对照外周血NK细胞NKG2D的表达状况,用酶联免疫吸附（ELISA）法检测外周血中可溶性MHC-1类链相关分子A（sMICA）的含量表达。结果食管癌患者手术前后及健康对照外周血NK细胞NKG2D的表达水平分别为（87．25±3．06）％、（88．38±4．24）％、（92．46±1．46）％,两组比较,差异有统计学意义（P〈0．05）。相应配体sMICA在食管癌患者血清中的表达较健康人中增高,但差异无统计学意义（P〉0．05）;在食管癌患者中不同肿瘤大小、分化程度、手术分期及是否有淋巴结转移等中表达差异无统计学意义（P〉0．05）;但在晚期患者（Ⅲ、Ⅳ期）和有淋巴结转移者中较健康对照明显增高,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论食管癌患者外周血NK细胞活性降低,其活化性受体NKG2D表达的下降是NK细胞活性下降的原因之一。食管癌患者免疫逃逸可能与NKG2D表达下调及其配体sMICA的表达升高有关。     

Analysis of the Expression of Surface Receptors on NK Cells and NKG2D on Immunocytes in Peripheral Blood of Patients with Nasopharyngeal Carcinoma

Background: The aberrant expression of surface receptors on immunocytes may represent potential markers of tumorescape for nasopharyngeal carcinoma (NPC). The aim of this study was to investigate the expression of representativereceptors on natural killer (NK) cells and NK group 2, member D (NKG2D) on immunocytes in the peripheral bloodof patients with NPC. Methods: Patients (n = 64) with NPC prior to initiation of treatment were defined as the studygroup. Healthy volunteers (n = 31) served as the control group. The expression of NK cells and NKT cells; the triggeringreceptors NKp30, NKp44, and NKp46 on NK cells; the activating receptor NKG2D on NK cells, CD4+ T cells, andCD8+ T cells; and the inhibitory receptors CD158b and CD159a on NK cells were analyzed by flow cytometry in thetwo groups. Results: Here, our study showed that no differences were observed in terms of the numbers of NK cells orNKT cells, or the expression of CD158b and CD159a on the surface of NK cells between the two groups. Nevertheless,the expression levels of NKp30 and NKp46 on NK cells in the NPC patients were significantly lower than in the healthyindividuals (P < 0.05). No differences existed in the expression of NKG2D on NK cells, but NKG2D on CD8+ T cellsshowed a markedly lower expression in the study group (P < 0.001). Conclusions: Our findings may reflect a possiblemechanism of immune evasion for NPC. The enhancement of immunotherapy concerning NKp30, NKp46, and NKG2Dmay be an innovative treatment strategy for patients with NPC.     

食管癌患者自然杀伤细胞活化性受体NKG2D及其分泌性配体sMICA的检测

目的 探讨宿主自然杀伤(NK)细胞受体NKG2D在抗食管癌中的作用及其与肿瘤免疫逃逸的关系.方法 用流式细胞术检测50例食管癌、26名健康对照外周血NK细胞NKG2D的表达状况,用酶联免疫吸附(ELISA)法检测外周血中可溶性MHC-1类链相关分子A(sMICA)的含量表达.结果 食管癌患者手术前后及健康对照外周血NK细胞NKG2D的表达水平分别为(87.25±3.06)%、(88.38±4.24)%、(92.46±1.46)%,两组比较,差异有统计学意义(P<0.05).相应配体sMICA在食管癌患者血清中的表达较健康人中增高,但差异无统计学意义(P0.05);在食管癌患者中不同肿瘤大小、分化程度、手术分期及是否有淋巴结转移等中表达差异无统计学意义(P0.05);但在晚期患者(Ⅲ、Ⅳ期)和有淋巴结转移者中较健康对照明显增高,差异有统计学意义(P<0.05).结论 食管癌患者外周血NK细胞活性降低,其活化性受体NKG2D表达的下降是NK细胞活性下降的原因之一.食管癌患者免疫逃逸可能与NKG2D表达下凋及其配体sMICA的表达升高有关.     

依赖NKG2D的肿瘤免疫逃避

活化性受体NKG2D（natural—killer group 2,member D）和其配基在NK、γδ^＋T和CD8^＋T细胞介导的肿瘤免疫应答中扮演了重要角色。NKG2D识别肿瘤细胞表面的配体激活效应细胞,产生有效的抗肿瘤免疫应答。但是在完全具有免疫能力的机体内,表达NKG2D配基的肿瘤仍能够生长发育,因此,在患肿瘤小鼠和肿瘤病人中一定存在着依赖NKG2D的免疫逃避机制。本文就依赖于NKG2D的免疫逃避作一详细综述,主要包括：干涉NKG2D受体的免疫逃避、干涉NKG2D配基的免疫逃避、细胞因子破坏NKG2D受体和配基的免疫逃避、抑制性细胞参与NKG2D介导的免疫逃避。这些研究为抗肿瘤治疗提供了新的途径。     

The Putative Role of Natural Killer Cells in Patients with Hepatitis C Virus-Related Hepatocellular Carcinoma

Background: Natural Killer (NK) cells have crucial roles in immune responses against malignant transformation including hepatocellular carcinoma (HCC). The NKG2D receptor has a critical role in the NK recognition of target cells. Aim: We assessed NKG2D receptor expression as a diagnostic biomarker for HCC detection and progression in Egyptian patients with hepatitis C virus (HCV)-related HCC. Methods: We classified 81 patients into three groups: chronic hepatitis (21), cirrhotic (30) and HCC (30) patients, with 36 individuals enrolled to the control group. We analyzed NK levels in peripheral blood and NKG2D receptor expression in NK cells using flow cytometry. Results: We observed a significant decrease in NKG2D (CD314) expression on circulating NK cells and frequency of NK cells expressing NKG2D (CD314) in HCC patients. Also, in patients, larger foci lesions significantly correlated with decreased NK cell numbers. Multiple foci numbers and patients with a Child score C significantly correlated with decreased circulating NK cells expressing NKG2D and decreased NKG2D expression. Conclusion: The percentage of NK cells in peripheral blood and NKG2D receptor expression could function as potential biomarkers for HCC detection and progression.