食管癌患者外周血自然杀伤T 细胞及其表面受体NKG2A与NKG2D检测的临床意义

 【摘要】　目的　研究外周血中自然杀伤（NK）T细胞及其CD+8 NKT细胞亚群在食管癌患者与健康人中的表达水平及NKT细胞活性改变,探讨NKT细胞受体与临床病理分期的相关性及其临床意义。方法　采用流式细胞术分析53例食管癌患者及39名健康对照者外周血中NKT细胞及CD+8 NKT亚群,检测NKT细胞受体NKG2A和NKG2D的表达并结合临床病理因素作比较分析。结果　与健康对照组相比,食管癌患者外周血NKT细胞表达增加[（4.32±0.73）%,（5.97±1.29）%]（t＝3.562,P＜0.01）,NKT细胞表面NKG2D的表达水平降低[（17.56±5.92）%,（15.12±1.56）%]（t＝3.892,P＜0.05）,而NKG2A的表达水平升高[（4.02±1.41）%,（5.99±4.59）%]（t＝4.015,P＜0.05）,且其变化与食管癌的病情进展有关。结论　NKT细胞及其CD+8 NKT亚群在食管癌患者中表达增加,提示患者机体抗肿瘤效应的免疫反馈增强;NKT细胞表面活化性受体NKG2D表达减少与其表面抑制性受体NKG2A表达增加可能是致使NKT细胞活性降低及食管癌患者免疫逃逸的机制之一,且这种NKT细胞表面受体的变化和食管癌病情的发展有一定的相关性。     

食管癌、贲门癌患者外周血CD+8 NKT细胞活化受体NKG2D及其分泌性配体sMICA检测的临床意义

 目的 　探讨外周血CD+8 NKT细胞活化受体NKG2D及其分泌性配体sMICA检测在食管癌、贲门癌诊断及术后疗效评价中的临床意义。方法　对53例患者确诊后（29例手术患者术前14 d及术后14 d）及30名健康对照组采用流式细胞术对外周血CD+8 NKT细胞中活化受体NKG2D阳性细胞百分比测定,应用酶联免疫吸附法进行sMICA含量测定,并各自进行差异性分析,同时对两者进行依从性分析。结果　患者外周血CD+8 NKT细胞中NKG2D阳性细胞百分比为（77.632±8.972）%,明显低于对照组的（89.053±6.515）%（t＝-6.113,P＜0.05）;TNM分期Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期患者依次降低（F＝99.251,P＜0.01）;有区域淋巴结转移者均低于无区域淋巴结转移者（t＝-10.384,P＜0.01）;鳞状细胞癌高于腺癌（t＝9.899,P＜0.01）;术前均低于术后（t＝-4.319,P＜0.01）。患者血清sMICA的含量为（326.28±85.407）pg／ml,明显高于对照组的（210.00±22.560）pg／ml（t＝7.292,P＜0.01）;Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期患者依次增高（F＝63.355,P＜0.01）;有区域淋巴结转移者均高于无区域淋巴结转移者（t＝7.770,P＜0.01）;鳞状细胞癌低于腺癌（t＝-7.593,P＜0.01）;术前均高于术后（t＝7.027,P＜0.01）。血清sMICA对外周血CD+8 NKT细胞活化受体NKG2D有抑制作用（F＝142.773,P＜0.05）,决定系数R2＝0.7368。结论　外周血CD+8 NKT细胞活化受体NKG2D及其分泌性配体sMICA含量的测定有助于食管癌、贲门癌分期的临床辅助诊断,对判断其生物学行为及预后有重要临床意义,并可作为患者手术治疗效果指标。     

CD8~+NKT细胞表面活化性受体NKG2D在肺癌患者外周血中的表达及临床意义

背景与目的 NKT细胞活化性受体NKG2D及sMICA是近来肿瘤免疫研究领域的热点之一。本研究旨在观察肺癌患者外周血中CD8+NKT细胞受体NKG2D表达水平的变化,并对NKG2D及sMICA进行相关性分析,探讨它们在肺癌免疫监视中的作用及临床意义。方法选择82例初发未治疗的肺癌患者,采用流式细胞术检测外周血CD8+NKT细胞活化性受体NKG2D的表达,并以45例健康人作对照,采用酶联免疫吸附法检测肺癌患者血清中sMICA的表达,分析NKG2D与肺癌临床生物学特征的关系。结果肺癌患者外周血中CD8+NKT细胞表面活化性受体NKG2D水平均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.001)。随TNM分期的增加,NKG2D的表达率逐渐降低。其中IV期肺癌患者NKG2D的表达明显低于I期-II期及III期患者该受体的表达,差异有统计学意义(P<0.001)。肺Ca患者中吸烟人群外周血中CD8+NKT细胞受体NKG2D的表达较非吸烟者低,差异有统计学意义(P<0.05)。CD8+NKT细胞受体NKG2D与sMICA呈负相关(r=-0.598,P<0.001)。结论肺癌患者CD8+NKT细胞表面受体NKG2D在外周血中低表...     

乳腺癌患者外周血NKG2A、NKG2D检测的临床意义

背景与目的:机体自身免疫功能与肿瘤的发生、发展有密切的关系.自然杀伤(natural killer,NK)细胞在天然免疫和获得性免疫中均发挥重要作用.目前已发现多种NK细胞表面受体,根据功能可分为抑制性受体和活化性受体二大类.抑制性受体NKG2A和活化性受体NKG2D对NK细胞的杀瘤功能发挥着相反的调节作用,在发生肿瘤的情况下,二者是如何表达以及与肿瘤免疫逃逸的关系尚不明确.本研究旨在探讨乳腺癌与乳腺良性疾病患者外周血NK细胞表面受体NKG2A与NKG2D的平衡状态,分析宿主NK细胞受体与肿瘤免疫逃逸的关系.方法:应用流式细胞术对37例乳腺癌患者和30例乳腺良性疾病患者血样标本行NKG2A、NKG2D检测,同时检测患者细胞免疫功能.结果:乳腺癌患者与乳腺良性疾病患者相比,NKG2A明显上调,NKG2D表达降低;CD3+、CD4+、CD56+细胞百分比更低(p＜0.05).在乳腺癌患者中,细胞免疫功能低下组及腋淋巴结转移数≥4枚组中,NKG2D表达更低(P＜0.05).Ⅲ+Ⅳ期及C-erbB2高表达乳腺癌患者,NKG2A表达更高(P＜0.05).NKG2A、NKG2D表达率在乳腺癌不同病理类型及组织学分级之间的差异均无统计学意义(P＞0.05).结论:外周血NKG2A、NKG2D的测定对于了解肿瘤患者机体免疫功能的状态、估计病情及判断预后具有一定的临床价值.     

晚期消化道恶性肿瘤NKG2A、NKG2D、sMICA的表达及其相关性研究

 目的　分析晚期消化道恶性肿瘤患者外周血NK细胞受体NKG2A、NKG2D及NKG2D配体sMICA的表达及其相关性,探讨其对恶性肿瘤患者免疫监视的意义。方法　选取263例晚期消化道恶性肿瘤患者为试验组,66例健康志愿者作为对照组,采用流式细胞术（FCM）检测两组NKG2A、NKG2D的表达,酶联免疫吸附法（ELISA）检测两组sMICA的表达。结果　试验组患者血清sMICA及NKG2A高于健康对照组[sMICA：（266.65±107.60） pg／ml比（148.01±94.11） pg／ml;NKG2A（37.17±20.54）％比（27.75±6.52）%,均P ＜0.01]。NKG2D低于健康对照组[（83.92±10.46）%比（88.21±6.26）%,均P ＜0.01]。Spearman相关性分析结果表明,试验组NKG2D与sMICA呈负相关r＝-0.149,P ＝0.016。NKG2D与NKG2A、NKG2A与sMICA之间均无明显的线性相关关系（均P ＞0.05）。结论　检测外周血NK细胞受体NKG2A、NKG2D及NKG2D配体sMICA的表达水平,可监测消化道恶性肿瘤患者免疫功能状态,为恶性肿瘤的免疫治疗提供理论依据。     

肺癌患者外周血NKG2A和NKG2D表达及其临床意义的研究

目的:通过研究肺癌患者外周血中自然杀伤细胞(NK)表面抑制性受体NKG2A和活化性受体NKG2D表达,分析探讨NKG2A与NKG2D表达失衡与肿瘤免疫逃逸的关系及其临床意义.方法:采用流式细胞术检测101例肺癌患者(肺癌组)和81例健康对照者(对照组)外周血中NK细胞含量及其表面受体NKG2A、NKG2D表达情况,分析...     

肺癌患者调节性T细胞与NK细胞活化受体NKG2D的相关性及其临床意义

目的 分析肺癌患者外周血中CD+4 CDHi25 CDLo127调节性T细胞及自然杀伤细胞(NK细胞)活化受体NKG2D的表达水平之间的关系,探讨其在肿瘤免疫逃逸机制中的作用及临床意义.方法 选择70例肺癌患者,均经病理确诊.采用流式细胞术(FCM)检测患者外周血中CD+4 CDHi25 CDLo127调节性T细胞、NK细胞及NKG2D表达水平,并以50名健康人为对照.结果 肺癌患者外周血中CD+4 CDHi25 CDLo127调节性T细胞比例较健康对照组明显升高[(8.4±4.1)％与(6.7±1.7)％],差异有统计学意义(t=3.09,P＜0.05);肺癌组NK细胞比例与健康对照组比较[(15.6±8.3)％与(17.2±4.2)％],差异无统计学意义(t=-1.33,P＞0.05);肺癌组NKG2D较健康对照组明显降低[(83.3±4.9)％与(87.4±2.9)％],差异有统计学意义(t=3.16,P＜ 0.05).CD+4 CDHi25 CDLo127调节性T细胞与NKG2D呈负相关性(r=-0.302,P＜0.05).结论 在肺癌患者外周血中调节性T细胞可能通过下调NKG2D,参与肿瘤免疫逃逸机制,二者可作为评估肺癌患者免疫功能状态及预后的参考指标.     

NKG2D/NKG2DL轴与肿瘤免疫治疗

自然杀伤（NK）细胞是固有免疫系统中发挥细胞毒性作用的淋巴细胞，而NKG2D是NK细胞最重要的活化性受体之一，它通过识别靶细胞表面的配体NKG2DL来传递活化信号并激活免疫细胞对靶细胞发挥杀伤作用，在肿瘤免疫治疗中发挥重要作用。肿瘤微环境（TME）内存在多种机制调节NKG2D和NKG2DL的表达，从而影响免疫系统对肿瘤细胞的清除并导致肿瘤逃逸。NKG2D的强激活作用及其配体NKG2DL在肿瘤细胞上的选择性表达，使NKG2D/NKG2DL轴成为肿瘤免疫治疗的潜在靶点。本文围绕NKG2D/NKG2DL 轴介导的免疫监视与逃逸的双重作用，揭示重塑TME 对肿瘤免疫的重要性；并就干预NKG2D/NKG2DL轴在肿瘤免疫治疗中的研究进展进行综述，为基于NKG2D/NKG2DL开发免疫治疗药物提供可靠依据和新思路。     

肺癌患者外周血中CD+8 CD-28及CD+4 CDhigh25 CDlow127调节性T细胞的表达及其临床意义

 目的　观察肺癌患者外周血CD+8CD+28、CD+8CD-28及CD+4CDhigh25CDlow127调节性T（Treg）细胞的表达水平,并对CD+8CD-28和CD+4CDhigh25CDlow127 Treg细胞行相关性分析,探讨其在肺癌免疫中的作用及临床意义。方法　采用流式细胞术检测60例初治肺癌患者外周血CD+8CD+28、CD+8CD-28及CD+4CDhigh25CDlow127 Treg细胞的表达率,以60名健康体检者作为对照,分析各指标与肺癌生物学及临床特征之间的关系。结果　肺癌组CD+8CD-28 T细胞［（58.430±15.749）%］和CD+4CDhigh25CDlow127 Treg细胞［（7.365±2.025）%］表达均分别显著高于对照组的（41.057±15.436）%、（6.648±1.669）%,差异有统计学意义（t＝6.102,P＜0.05;t＝2.115,P＜0.05）。肺癌组CD+8CD+28 T细胞表达［（41.570±15.739）%］低于对照组［（58.700±15.298）%］,差异有统计学意义（t＝-6.043,P＜0.05）。上述三个指标的表达与性别、年龄及病理学类型无关（P＞0.05）。随着TNM分期增加,CD+4CDhigh25CDlow127 Treg细胞表达逐渐升高,其中Ⅳ期和ⅢA期之间差异有统计学意义（t＝3.898,P＜0.05）。而CD+8CD-28、CD+8CD+28 T细胞的表达与临床分期无关（P＞0.05）。CD+8CD-28与CD+4CDhigh25CDlow127Treg细胞的表达无线性相关（r＝-0.169,P＞0.05）。结论　CD+8CD-28、CD+4CD25high CD127low Treg细胞在肺癌患者外周血呈高表达,CD+8CD+28T细胞呈低表达,这可能是肺癌患者免疫功能低下的原因之一。CD+8CD-28与CD+4CDhigh25 CDlow127 Treg细胞之间无相关性,但两者联合检测可对了解肺癌患者免疫功能,并为肺癌寻找特异性免疫治疗及预后评价提供新的参考。     

NKG2D 介导CIK 细胞对食管癌EC9706细胞杀伤作用的体外研究*

目的:研究细胞因子诱导的杀伤细胞（Cytokine-induced killer cells ,CIK）对食管癌EC9706细胞株的体外杀伤活性。方法:流式细胞仪检测EC9706细胞NKG2D 配体的表达;体外分离健康者外周血单个核细胞,干扰素-γ 、白细胞介素-2、CD3 单抗诱导培养,流式细胞仪检测 0、14天的细胞 CD3+CD56+、NKG2D 的表达,乳酸脱氢酶释放法测定培养14天的 CIK 细胞在效靶比 10 :1、2 0 :1、3 0 :1、4 0 :1、5 0 :1 时对EC9706细胞的杀伤活性;效靶比3 0 :1 时,观察NKG2D 单抗封闭CIK 细胞表面NKG2D 分子后对CIK细胞杀伤活性的影响。结果:EC9706细胞表达MICA、ULBP2,不表达MICB、ULBP1、ULBP3。0、14天细胞表面NKG2D 表达率分别为（26.30± 1.12）% 、（67.13± 1.34）% ,差异有统计学意义（P<0.05）;CD3+CD56+细胞分别为（0.68± 0.07）% ,（56.55± 2.01）% ,差异有统计学意义（P<0.05）;效靶比1 0 :1、2 0 :1、3 0 :1、4 0 :1、5 0 :1 时CIK 细胞对EC9706细胞的杀伤活性分别为（28.81± 0.47）% 、（37.78±0.22）%、（44.31± 1.06）%、（47.25± 0.47）%、（57.62± 0.94）%;随着效靶比增高,CIK 细胞对 EC9706细胞的杀伤活性明显增强（P<0.05）;效靶比3 0 :1 时NKG2D 单抗封闭CIK 细胞表面NKG2D 分子后,CIK 细胞对EC9706细胞的杀伤活性为（30.29± 1.45）% ,与阻断前（44.31± 1.06）% 相比差异有统计学意义（P<0.05）。 结论:体外CIK 细胞培养增殖过程中,NKG2D 分子表达逐渐上调,CD3+CD56+细胞逐渐增多,CIK 细胞杀伤EC9706细胞通过NKG2D 发挥作用。      

非小细胞肺癌EGFR基因突变异质性研究进展

 表皮生长因子受体（EGFR）酪氨酸激酶抑制剂（TKIs）在EGFR基因活化突变阳性晚期非小细胞肺癌（NSCLC）患者中疗效显著,然而,同样是EGFR活化突变阳性的NSCLC患者接受EGFR-TKIs治疗后,疗效仍有明显差异;同一个患者的不同瘤灶也会对EGFR-TKIs出现不同的反应,这些现象可能与EGFR基因突变异质性有关,同一瘤灶的不同部分、同一患者的不同瘤灶、以及同一瘤灶治疗前后EGFR突变状态都有可能不一致。本文将从这三个方面对EGFR突变异质性研究进展作一综述。     

CD3+ CD4+ and CD3+ CD8+ Lymphocyte Subgroups and their Surface Receptors NKG2D and NKG2A in Patients with Nonsmall Cell Lung Cancer

Background: To explore the prevalence of lymphocyte subgroups CD3+ CD4+ and CD3+ CD8+ and their surfacereceptors NKG2D and NKG2A in patients with non-small cell lung cancer (NSCLC). Materials and Methods: Atotal of 40 patients with NSCLC were divided into different groups according to different clinical factors (TNMstaging, pathological patterns and genders) for assessment of relations with CD3+ CD4+ and CD3+ CD8+ and thesurface receptors NKG2D and NKG2A of T lymphocytes in peripheral blood by flow cytometry. Results: Patientsin the advanced group had evidently lower levels of CD3+ CD4+ but markedly higher levels of CD3+ CD8+ inperipheral blood than those with early lesions (p<0.05). In addition, NSCLC patients in the advanced group hadobviously higher CD3+ CD4+ NKG2D and CD3+ CD8+ NKG2A expression rates but lower CD3+ CD4+ NKG2A andCD3+ CD8+ NKG2D expression rates (p<0.05). However, there were no significant differences between NSCLCpatients with different genders and pathological patterns in expression levels of lymphocyte subgroups CD3+CD4+ and CD3+ CD8+ and their surface receptors NKG2D and NKG2A. Conclusions: Unbalanced expressionof surface receptors NKG2D and NKG2A in CD3+ CD4+ and CD3+ CD8+ lymphocytes may be associated witha poor prognosis, greater malignancy and immunological evasion by advanced cancers, related to progressionof lung cancer.     

Analysis of the Expression of Surface Receptors on NK Cells and NKG2D on Immunocytes in Peripheral Blood of Patients with Nasopharyngeal Carcinoma

Background: The aberrant expression of surface receptors on immunocytes may represent potential markers of tumorescape for nasopharyngeal carcinoma (NPC). The aim of this study was to investigate the expression of representativereceptors on natural killer (NK) cells and NK group 2, member D (NKG2D) on immunocytes in the peripheral bloodof patients with NPC. Methods: Patients (n = 64) with NPC prior to initiation of treatment were defined as the studygroup. Healthy volunteers (n = 31) served as the control group. The expression of NK cells and NKT cells; the triggeringreceptors NKp30, NKp44, and NKp46 on NK cells; the activating receptor NKG2D on NK cells, CD4+ T cells, andCD8+ T cells; and the inhibitory receptors CD158b and CD159a on NK cells were analyzed by flow cytometry in thetwo groups. Results: Here, our study showed that no differences were observed in terms of the numbers of NK cells orNKT cells, or the expression of CD158b and CD159a on the surface of NK cells between the two groups. Nevertheless,the expression levels of NKp30 and NKp46 on NK cells in the NPC patients were significantly lower than in the healthyindividuals (P < 0.05). No differences existed in the expression of NKG2D on NK cells, but NKG2D on CD8+ T cellsshowed a markedly lower expression in the study group (P < 0.001). Conclusions: Our findings may reflect a possiblemechanism of immune evasion for NPC. The enhancement of immunotherapy concerning NKp30, NKp46, and NKG2Dmay be an innovative treatment strategy for patients with NPC.     

高原藏族肺癌患者自然杀伤细胞活化性受体NKG2D表达的研究

目的研究高原藏族肺癌患者外周血NK细胞表面活化性受体NKG2D的表达,并分析宿主NK细胞受体NKG2D在肺癌中的作用及其与肿瘤免疫逃逸的关系。方法对43例高原藏族肺癌患者及30例健康人,应用流式细胞术检测外周血NK细胞NKG2D的表达状况。结果高原藏族肺癌患者外周血NK细胞NKG2D的表达水平分别为（13.56±4.52）%,明显低于正常组（33.00±9.14）%,两组之间比较差异有统计学意义（P〈0.05）。结论高原藏族肺癌的免疫逃逸可能与NKG2D表达下调有关。高原藏族肺癌患者外周血NK细胞活性降低,其活化性受体NKG2D表达的下降是NK细胞活性下降的原因之一。     

晚期肺癌患者外周血Treg细胞与NK细胞及其活化受体检测临床意义的探讨

目的:观察CD4+CD25highCD127low调节性T细胞(Treg细胞)、NK细胞及其活化受体(NKG2D)在初诊晚期肺癌患者外周血中的变化,探讨它们在肺癌发病中的作用及临床意义。方法:流式细胞术检测90例初诊晚期肺癌患者及45位健康人外周静脉血CD4+CD25highCD127lowTreg细胞、NK细胞及NKG2D的水平,并就其中27例患者化疗前后数据对比。结果:与对照组比较,肺癌组CD4+CD25highCD127lowTreg细胞比例明显升高,t=3.500,P=0.001;NK细胞比例及NKG2D的表达明显降低,t值分别为-3.534和-5.228,P值均为0.001。Ⅳ期患者CD4+CD25highCD127lowTreg细胞比例较ⅢA期患者明显升高,F=3.657,P=0.030。化疗后患者NK细胞及NKG2D较化疗前明显降低,t值分别为3.176和2.771,P值分别为0.004和0.01。化疗前后患者CD4+CD25highCD127lowTreg细胞水平差异无统计学意义,t=1.419,P=0.168。肺癌患者外周血CD4+CD25highCD127lowTreg细胞比例与NK细胞比...