OX40在急性肝衰竭大鼠肝组织中的表达及意义

目的观察共刺激分子(costimulatory molecule)OX40在急性肝衰竭(acute liver failure,ALF)大鼠肝组织中表达的变化,探讨OX40在急性肝衰竭发病机制中的作用。方法雄性SD大鼠,随机分为正常对照组、急性肝衰竭(ALF)模型组。急性肝衰竭组:腹腔同时注射D-氨基半乳糖(D-GalN)800mg/kg和脂多糖(LPS)8微克/只,在D-GalN和LPS注射后6、12、24、48h 4个时间点留取大鼠血及肝脏标本。全自动生化仪检测血清ALT、AST水平。苏木素-伊红(HE)染色下观察肝组织变化。RT-PCR法检测大鼠肝组织OX40mRNA表达。Western blot法检测肝组织OX40蛋白表达。结果肝衰竭组血清ALT和AST水平在12h升高最明显,24h开始下降。肝衰竭组肝组织OX40mRNA水平至12h达峰值,之后逐渐下降,与对照组比较,各时间点差异具有统计学意义(F=29.970,162.975,62.476,25.124,P<0.05)。肝衰竭组OX40蛋白的表达于12h达到最大值,与对照组相比,差异有统计学意义(F=17.240,169.298,88.289,74.984,P<0.05)。结论 OX40在急性肝衰竭过程中呈上升趋势,于12h达高峰,提示OX40可能在急性肝衰竭过程中发挥重要作用。     

大黄素对急性肝衰竭大鼠肝功能的影响

目的探讨大黄素对急性肝衰竭（ALF）大鼠肝功能的影响。方法sD大鼠随机分三组：健康对照组、模型（ALF）组、大黄素组。D-氨基半乳糖（D—Gal）诱导大鼠急性肝功能衰竭模型,大黄素组于造模后12h开始腹腔注射大黄素10mg／kg,每天2次。模型组及大黄素组分别在造模后24、72和120、168h,随机各取6只,留取门静脉血及肝组织。结果造模后24h,大鼠血清ALT、AST值明显升高,分别为（537．3±133．7）U／L和（797．2±159．3）U／L,显著高于正常组的（34．5±4．2）U／L和（81．6±5．1）U／L,差异有统计学意义（t=-5．579、-4．825,P〈0．01）,以72h最为显著。造模后24h,大黄素组与模型组血清ALT、AST差异无统计学意义,造模后72h,大黄素组血清ALT、AST分别为（116．8±56．2）U／L和（165．5±78．7）U／L,显著低于模型组的（728．0±137．4）U／L和（1416．7±254．7）U／L,差异有统计学意义（t=-6．735、-6．544,P〈0．05）。至120h和168h,两组血清ALT、AST均持续下降。结论大黄素具有改善急性肝衰竭大鼠肝功能的作用,具体机制有待进一步研究。     

细胞因子信号转导抑制因子在内毒素耐受大鼠肝组织中的作用

目的 研究内毒素耐受(endotoxin tolerance,ETT)及正常大鼠接受D-胺基半乳糖(D-galactosamine,D-GaiN)/脂多糖(lipopolysacharide,LPS)刺激后肝组织细胞因子信号转导抑制因子(SOCSs)基因表达的异同,探讨内毒素耐受的可能机制.方法 雄性SD大鼠随机分为急性肝功能衰竭模型组(acute liver failure,ALF组)和内毒素耐受组(ETT组).ETT组及ALF组先分别以0.1mg/kg LPS和生理盐水腹腔注射,每日1次,连续5次,于LPS或生理盐水第5次注射24 h后同时腹腔注射D-GaIN 800 ms/kg和LPS 8μg/只,分别在注射D-GaIN/LPS前(0 h)和注射后2.6、12、24和48 h 6个时间点留取大鼠血及肝脏标本.HE染色及透射电镜下观察肝组织病理及超微结构变化;RT-PCR法检测动物肝组织中SOCS1和SOCS3 mRNA表达;采用鲎试剂基质显色法测定血清内毒素水平,ELISA法检测TNF-α水平.结果 ETT组大鼠肝组织病理改变及超微结构变化明显轻于ALF组,其血清内毒素、TNF-α水平明显低于ALF组.内毒素:6 h组分别为1.11±0.38和0.74±0.22,24h组分别为1.12±0.24和0.86±0.21,均P<0.05,12 h组分别为1.88±0.35和0.62±0.16,48 h组分别为1.10±0.13和0.84±0.19,均P<0.01.TNF-α:6 h组分别为86.9±12.6和70.0±12.8,P<0.05,12 h组分别为77.0±18.1和48.8 ±12.8,24 h组分别为63.8±9.2和39.1±5.7,48 h组分别为53.2±8.3和38.2±9.9,均P<0.01.ALF组大鼠肝组织SOCS1和SOCS3 mRNA表达均明显上调,造模后2 h即明显高于对照组,分别于12 h、6 h达峰值,ETT组的SOCS1和SOCS3 mRNA表达较模型组明显上升.SOCS1:6 h组分别为0.955±0.186和1.349±0.390,48 h组分别为0.766±0.145和0.970±0.205,均P<0.05,2 h组分别为0.554±0.164和0.841±0.175,12 h组分别为1.130±0.181和1.888±0.573,24 h组分别为0.990±0.212和1.550±0.439,均P<0.01.SOCS3:6h组分别为0.914±0.054和1.039±0.109,12 h组分别为0.781±0.044和0.863±0.063,均P<0.05,2 h组分别为0.681±0.139和0.898±0.058,24 h组分别为0.700±0.065和0.811±0.055,均P<0.01.结论 内毒素耐受时,大剂量的D-GalN和LPS腹腔注射引起的肝脏损害减轻,内毒素、TNF-α释放减少,可能与肝组织SOCS1、SOCS3的高表达有关.     

内毒素诱导D-半乳糖胺致敏大鼠急性肝衰竭的研究

目的探讨内毒素(即脂多糖)诱导D-半乳糖胺致敏大鼠急性肝衰竭肝细胞凋亡情况及肝损伤发生机制。方法48只Wistar大鼠进行随机对照分组实验,分为6 h、24 h和48 h取材3大组(各16只),每个大组再分为处理组和对照组(各8只)。处理组大鼠以脂多糖(50μg／kg)+D-半乳糖胺(300 mg／kg),用1 ml无菌生理盐水溶解后腹腔内注射,对照组动物仅腹腔内注射1 ml生理盐水。在相应时间点,门静脉或下腔静脉采血查丙氨酸氨基转移酶(ALT);肝组织切片分别行透射电镜检查和脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记分析(TUNEL分析);基因表达通过逆转录。聚合酶链反应(RT-PCR)的方法检测。结果所有处理组大鼠ALT水平均显著高于对照组(66 U／L±3 U／L),而6 h组ALT水平(399 U／L±83 U／L)显著低于24 h组(3178 U／L±63 U／L)和48 h组(1506 U／L±56U／L)。48 h组ALT水平则低于24 h组。透射电镜检查见正常对照组肝组织内罕有凋亡细胞,脂多糖／D-半乳糖胺处理6 h组凋亡的肝细胞明显较多,且多表现为早期细胞凋亡的特征,24 h和48 h组的肝细胞凋亡明显多于6 h组,并多表现为晚期凋亡的特征。肝组织的TUNEL分析显示,对照组可见少量凋亡的肝细胞(凋亡指数为2．6％±1．1％),6 h组凋亡的肝细胞明显增多(凋亡指数为7．3％±1.5％),24 h和48 h组肝组织内则可见大量肝细胞凋亡(凋亡指数分别为71．8％±10．3％和68．2％±11．9％)。iNOS mRNA在正常对照组无表达,脂多糖／D-半乳糖胺作用后早期(6 h)有高水平的表达,24 h和48 h则显著较低;p53基因在对照组和6 h组有低水平表达,在24 h和48 h组表达明显较高;p21waf1/cip1基因在对照组无表达,6 h出现低水平表达,24 h mRNA表达水平达峰值,在48 h则迅速下降到0。结论小剂量脂多糖可诱导D-半乳糖胺致敏大鼠发生急性肝衰竭;细胞凋亡是其重要的病理形态学改变;肝衰竭肝损伤的发生与iNOS基因早期高水平的表达有密切关系。     

PLA-O-CMC纳米粒子培养的猪肝细胞移植对急性肝衰竭大鼠肝再生作用的初步研究

目的:探讨胶原凝胶包埋聚乳酸-O-羧甲基壳聚糖(PLA-O-CMC)纳米粒子粘附培养猪肝细胞移植对急性肝衰竭(ALF)大鼠肝的再生作用。方法:D-氨基半乳糖腹腔内注射制作大鼠ALF模型;48h后分别将5mlⅠ型胶原凝胶包埋的PLA-O-CMC纳米粒子粘附培养24h猪的肝细胞、5mlⅠ型胶原凝胶固定培养24h的猪肝细胞、5ml培养24h的猪肝细胞悬液(均含5.0×107个)移植到各组ALF大鼠腹腔内,并以5mlRPMI1640腹腔内注射作为阴性对照。观察大鼠14天存活率和受体肝脏的病理变化。结果:移植后14天ALF大鼠的存活率:单纯肝细胞移植组(Ⅰ组)为56.25%,胶原肝细胞移植组(Ⅱ组)为62.5%,纳米胶原肝细胞移植组(Ⅲ组)为75%,阴性对照组(Ⅳ组)为18.75%,各移植组14天存活率高于对照组(P<0.05),各移植组间无统计学意义(P>0.05)。ALF大鼠肝脏再生于ALF后5～7天最为显著;各组肝脏病理变化以Ⅲ组恢复最好,双核细胞最多,肝再生最快。结论:应用PLA-O-CMC纳米粒子和Ⅰ型胶原联合培养猪肝细胞移植于ALF大鼠腹腔内能促进肝脏的再生。     

不同压力下Ⅰ期压疮组织中炎性反应因子水平表达

目的:分析不同压力致I期压疮组织中炎性反应因子白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-a(TNF-a)水平随时间变化的影响。方法:选择清洁级大鼠60只,随机分为低压力组、中压力组、高压力组各20只。低压力模型组给予组织承压22kPa;中压力组给予组织承压25kPa;高压力组给予组织承压28kPa;I期压疮建模成功后,分别与解压后0h、6h、24h、48h观察受压组织病理改变,采用酶联免疫吸附法检测组织匀浆液中IL-6、TNF-a水平,观察不同时间点各组大鼠组织匀浆中IL-6、TNF-a水平变化趋势以及差异影响。结果:建模大鼠减压后,模型组大鼠受压皮肤表面均呈持续性红斑表现,表皮组织完整。病理HE染色镜下观察大鼠组织鳞状上皮变薄,部分结构不清,细胞层次减少,胶原纤维变性、炎性细胞浸润程度不一。低压力组解压后0h、6h、24h、48h组织匀浆中IL-6水平[(12.13±2.74)U/L比(15.61±3.10)U/L比(11.27±2.60)U/L比(5.09±0.52)U/L,F=3.272],中压力组解压后0h、6h、24h、48h组织匀浆中IL-6水平[(13.86±2.90)U/L比(19.80±2.37)U/L比(25.17±3.21)U/L比(22.18±3.27)U/L,F=3.052],高压力组解压后0h、6h、24h、48h组织匀浆中IL-6水平[(14.09±2.53)U/L比(27.69±3.18)U/L比(35.21±4.10)U/L比(33.27±5.02)U/L,F=3.804]。低压力组解压后0h、6h、24h、48h组织匀浆中TNF-a水平[(15.38±3.27)U/L比(16.90±4.09)U/L比(13.28±3.80)U/L比(8.27±1.13)U/L,F=2.487],中压力组解压后0h、6h、24h、48h组织匀浆中TNF-a水平[(16.49±3.27)U/L比(25.18±3.07)U/L比(30.17±4.29)U/L比(26.70±3.25)U/L,F=3.321],高压力组解压后0h、6h、24h、48h组织匀浆中TNF-a水平[(23.16±3.09)U/L比(33.27±4.09)U/L比(42.87±3.80)U/L比(40.95±3.27)U/L,F=3.327]。不同压力模型大鼠组间以及不同时间点差异有统计学意义(P0.05)。结论:不同压力致I期压疮组织中炎性因子白介素-6、肿瘤坏死因子-a水平存在差异。压力越大,组织中炎性反应因子水平越高,组织损伤越严重。     

重症急性胰腺炎大鼠肝损伤HMGB 1/TLR4mRNA的表达

目的研究重症急性胰腺炎(SAP)大鼠肝损伤中高迁移率族蛋白B1(HMGB1)和Toll样受体(TLR)4mRNA的表达。方法采用十二指肠闭襻法制作大鼠SAP模型。50只动物分为假手术组(S组)、胰腺炎组(P组)。P组于建模后6、12、24、48 h分批剖杀,S组于术后6 h剖杀。观察血清淀粉酶、CRP、ALT和AST及肝组织IL-6和TNF-α的变化,RT-PCR方法检测各组不同时点肝组织HMGBl mRNA和TLR4 mRNA的表达。结果与S组比较,P组血清淀粉酶、CRP、ALT、AST、肝组织IL-6和TNF-α浓度升高(P<0.05)。与S组比较,P组大鼠6 h肝组织TLR4mRNA表达开始增高,术后12 h肝组织TLR4 mRNA表达迅速达到峰值(P<0.05);同时,P组HMGB1 mRNA于12 h快速上升,24～48 h时一直保持上升趋势(P<0.05);结论SAP大鼠肝组织内HMGB1和TLR4的基因表达上调;其表达增高可能在SAP肝损伤的发生、发展中起重要作用。     

大黄联合谷氨酰胺对急性肝衰竭模型大鼠肝功能及肠道屏障功能的影响

目的观察大黄联合谷氨酰胺(Gln)对急性肝衰竭(AHF)模型大鼠肝功能及肠道屏障功能的保护作用。方法 SD雄性大鼠60只,随机分成对照组、模型组和防治组(大黄联合谷氨酰胺),各20只。于造模前2天防治组大鼠给予1g/m L大黄煎液0.375m L/100g鼠重和3%Gln溶液0.375m L/100g鼠重灌胃,模型组与对照组大鼠给予0.9%生理盐水0.75m L/100g鼠重灌胃。第3天继续给药灌胃同时,参照文献方法,使用10%D-氨基半乳糖(D-Gal N)溶液按1500mg/kg鼠重给予模型组和防治组大鼠腹腔一次性注射,即完成造模。各组大鼠分别于造模后24、48、72、96h眼眶取血,测定血清总胆红素(TBil)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)水平,大鼠处死后,腹主动脉取血检测血清二胺氧化酶(DAO)水平,取大鼠肠组织并检测其DAO水平,取部分肝右叶对大鼠肝脏炎症的病理变化进行评分。结果模型组大鼠24h TBil(8.14±3.16)μmol/L、ALT(625.21±242.49)U/L、AST(1698.69±669.69)U/L、48h TBil(51.78±20.57)μmol/L、ALT(2620.70±1365.70)U/L、AST(4353.10±1735.05)U/L和72h TBil(32.50±19.01)μmol/L、ALT(345.59±222.82)U/L、AST(883.41±312.02)U/L与对照组24h时TBil(0.01±0.02)μmol/L、ALT(5.41±2.81)U/L、AST(11.38±3.32)U/L、48h时TBil(0.06±0.04)μmol/L、ALT(5.28±2.42)U/L、AST(12.05±4.26)U/L和72h时TBil(-0.69±1.63)μmol/L、ALT(5.03±2.75)U/L、AST(11.79±2.38)U/L比较,差异有统计学意义(P0.01,P0.05);与模型组比较,防治组24h TBil(0.58±2.91)μmol/L、ALT(119.25±197.65)U/L、AST(248.30±343.85)U/L、48h TBil(8.18±14.27)μmol/L、ALT(346.58±464.84)U/L、AST(792.81±954.35)U/L和72h TBil(3.94±5.72)μmol/L、ALT(91.97±133.00)U/L、AST(178.59±288.41)U/L水平有明显降低,差异均有统计学意义(P0.05,P0.01)。对照组及防治组大鼠肝脏炎症的评分分别为0、(3.00±1.04)分,与模型组(7.75±0.46)分相比,差异均有统计学意义(P0.01)。对照组及防治组大鼠血清DAO水平皆低于模型组[(7.12±2.05)U/L、(8.96±1.99)U/L比(25.01±4.10)U/L],差异均有统计学意义(P0.01);对照组及防治组大鼠肠组织DAO水平明显高于模型组[(21.13±7.82)U/L、(18.30±3.35)U/L比(7.98±1.94)U/L],差异均有统计学意义(P0.01)。结论大黄联合Gln对AHF模型大鼠肝功能损伤和肠道功能紊乱有防治作用。     

大黄素联合骨髓间充质干细胞治疗大鼠急性肝衰竭

目的探讨大黄素联合骨髓间充质干细胞对急性肝衰竭大鼠的治疗作用。方法选择SD大鼠51只,随机分4组:健康对照组6只,急性肝衰竭(ALF)模型组15只,骨髓间充质干细胞(BMSCs)组15只,大黄素联合骨髓间充质干细胞(EMD+BMSCs)组15只。D-氨基半乳糖(D-Gal N)诱导大鼠急性肝衰竭模型;BMSCs组及EMD+BMSCs组于造模后12 h尾静脉注射BMSCs悬液1.5 m L(约含BMSCs1.0×106 cells/m L),共1次;EMD+BMSCs组于造模后12 h开始腹腔注射大黄素10 mg/kg,每天2次,共3 d。ALF模型组于造模后12 h尾静脉注射等体积无菌PBS。各组大鼠均在造模后72 h,以10%的水合氯醛腹腔注射麻醉,取门静脉血及肝组织标本。测血清ALT、AST、TBil,免疫组化测肝组织Bcl-2、Bax及PCNA蛋白表达。结果造模后72 h,ALF模型组大鼠血清ALT、AST和TBil指标显著升高,与健康对照组相比,差异有统计学意义(t=7.191、6.796、6.835,P均0.05)。与ALF模型组比较,BMSCs组及EMD+BMSCs组血清ALT、AST、TBil均有不同程度下降,以EMD+BMSCs组为著。EMD+BMSCs组中Bcl-2、PCNA表达明显高于健康对照组及ALF模型组,而Bax表达则显著低于ALF模型组,差异有统计学意义(t=5.557,P0.05)。结论大黄素联合骨髓间充质干细胞治疗对急性肝衰竭大鼠肝功能的改善及促进肝细胞再生作用更佳,此种作用可能部分与Bcl-2/Bax的调节有关。     

急性肝内胆汁淤积大鼠肝组织法尼醇受体表达的变化及意义

目的观察异硫氰酸萘酯(ANIT)诱导的急性肝内胆汁淤积大鼠肝组织法尼醇受体(FXR)的表达的变化及意义。方法雄性SD大鼠随机分为正常组8只,模型组24只,模型组采用4%ANIT(麻油配制)100mg/kg一次性灌服诱导大鼠肝内胆汁淤积,于给药后24、48、72h 3个时相点随机处死8只大鼠,正常组以等容量麻油一次性灌胃后48h处死;生化法检测血清TBA水平,荧光定量PCR检测肝组织FXRmRNA的表达,免疫组化法检测FXR蛋白的表达。结果模型组大鼠血清TBA水平在灌服ANIT 24h后明显升高并达高峰,之后逐渐下降,3个时间点均较正常组明显升高;而肝组织FXRmRNA和蛋白表达在3个时间点均较正常组明显下降,其中24h最低,随时间推移,48、72h逐渐增高;相关性分析发现,大鼠肝组织FXRmRNA表达与血清TBA水平均呈明显的负相关(r=-0.589,P<0.01)。结论大鼠肝组织FXRmRNA和蛋白表达的下降可能参与ANIT诱导的急性肝内胆汁淤积病理过程。