3种乳腺癌相关基因联合检测在乳腺癌诊断中的应用

目的建立荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）检测细胞角蛋白19（CK19）、C-erbB2和核内原癌基因（c—myc）表达水平,探讨其联合检测在乳腺癌诊断和治疗监测中的应用。方法建立FQ-PCR法,并以β2-微球蛋白（β2-MG）为内对照,测定15例健康女性体检者、30例良性乳腺疾病患者和81例乳腺癌患者外周血中CKl9、C—erbB2和c—myc的表达量。结果CK19、CerbB2和e-myc表达水平在健康对照组与良性乳腺疾病组间差异无统计学意义（P〉0．05）,乳腺癌组均高于前两组（P〈0．05）,β2-MG在三组间差异无统计学意义（P〉0．05）。CK19、C-erbB2和c—myc联合检测的灵敏度高于单个基因的检测。结论FQ-PCR技术是高度灵敏、特异的快速定量检测CK19、C—erbB2和c-myc的方法,三者联合检测可有效提高对乳腺癌诊断的灵敏度。     

CCND1和myc的mRNA联合检测在乳腺癌诊断中的临床研究

目的建立荧光定量聚合酶链反应（FQ—PCR）法检测细胞周期蛋白D1（CCND1）基因和核内原癌（myc）基因表达水平,探讨其联合检测在乳腺癌诊断和治疗监测中的应用。方法建立FQ—PCR法,并以β2-微球蛋白为内对照测定15名健康女性体检者、30例良性乳腺疾病患者和151例乳腺癌患者外周血中CCND1和myc的表达量。结果CCND1和myc表达水平在健康女性体检者、良性乳腺疾病扣乳腺癌患者中分别为（1．45±0．12）×10^-3,（1．45±0．11）×10^-3,（4．15±1．02）×10^-3;（1．15±0．07）×10^-3,（1．15±0．08）×10^-3,（2．86±1．51）×10^-3,它们在正常对照组和良性乳腺疾病组间差异无统计学显著性意义（P〉0．05）,乳腺癌组均高于前两组（P〈0．05）,β2-微球蛋白在三组间差异无统计学显著性意义（P〉O．05）。CCND1和myc联合检测的灵敏度高于单个基因的检测。结论FQ—PCR技术是高灵敏度、高特异度的快速定量检测CCND1和myc的方法,两者联合检测可有效提高乳腺癌的诊断灵敏度。     

荧光定量聚合酶链反应检测CCND1基因扩增在乳腺癌诊断中的应用

目的应用荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）法检测细胞周期蛋白D1（CCND1）基因表达水平,探讨其在乳腺癌诊断和治疗监测中的应用价值。方法应用FQ-PCR法,并以β2-微球蛋白为内对照测定15例健康女性体检者、30例良性乳腺疾病患者和81例乳腺癌患者外周血中CCND1的表达量。结果CCND1表达水平在健康对照组和良性乳腺疾病组间差异无统计学意义（P〉0．05）,乳腺癌组均高于前2组（P〈0．05）,β2-微球蛋白在3组间差异无统计学意义（P〉0．05）。81例乳腺癌患者阳性率为45．7％,良性乳腺疾病组为0。结论FQ-PCR技术是高度灵敏、高度特异的快速定量检测CCND1方法,可有效监测乳腺癌的诊断：疗效、转移,评估其预后。     

乳腺癌组织中VEGF-C的表达与淋巴结转移及骨髓微转移的相关性的研究

【目的】探讨乳腺癌组织中血管内皮生长因子-C（VEGF-C）的表达及其与淋巴结转移和骨髓微转移的关系。【方法】应用免疫组织化学SP法,检测59例乳腺癌组织和10例乳腺良性病变组织中VEGF-C的表达情况;同时抽取相应的骨髓血标本,应用实时定量反转录聚合酶链反应（qRT-PCR）方法检测标本中细胞角蛋白19（CK19） mRNA 的表达水平,并进行相关性分析。【结果】乳腺癌组织中 VEGF-C 阳性表达率62．71％（37/59）及表达程度均明显高于乳腺良性病变组（0％）,差异有统计学意义（ P ＜0．05）。乳腺癌淋巴结转移阳性组VEGF-C表达阳性率及表达水平均高于淋巴结转移阴性组（ P ＜0．05）。VEGF-C表达水平与发病年龄、肿瘤大小、病理分型、临床分级、雌激素受体（ER ）水平、孕激素受体（PR ）水平无关,但其表达水平与人类表皮生长因子受体2（HER-2）表达水平显著相关（ P ＜0．05）。CK19 mRNA在乳腺纤维腺瘤患者骨髓标本中未见表达,在乳腺癌患者骨髓血中有34例57．6％（25/59）阳性表达,乳腺癌骨髓微转移阳性组VEGF-C阳性表达率及表达水平均高于骨髓阴性表达组（ P ＜0．05）。骨髓CK19 mRNA表达水平与VEGF-C蛋白表达水平呈正相关（ P ＜0．05）。【结论】乳腺癌患者VEGF-C表达水平与淋巴结转移及骨髓微转移密切相关,提示V EG F-C可能参与了乳腺癌细胞的侵袭和播散。     

乳腺浸润性导管癌患者外周血CEA mRNA的检测及临床意义

目的观察乳腺浸润性导管癌患者外周血中癌胚抗原信使核糖核酸（CEAmRNA）的表达情况,从而探讨其在乳腺癌诊治方面的临床价值。方法使用实时荧光定量RT—PCR方法,分别检测48例乳腺浸润性导管癌患者、28例乳腺良性疾病患者外周血中CEAmRNA的表达情况。结果乳腺浸润性导管癌组患者外周血CEAmRNA阳性表达率（18／48）明显高于乳腺良性疾病组（2／28）,差异具有统计学意义（x0=8．40,P〈0．05）。各分期乳腺浸润性导管癌患者外周血中均有CEAmRNA阳性表达,II期和III期患者的CEAmRNA表达阳性率明显高于I期患者,差异具有统计学意义（X2=7．74,P〈0．05）。结论外周血中CEAmRNA的联合检测,可提高乳腺浸润性导管癌的检出率,有助于判断患者发生微转移的风险．值得临床上进一步研究。     

乳腺癌组织KLK7 mRNA的表达及其与临床病理特征的关系

目的建立人KLK7mRNA荧光定量检测方法,对正常乳腺组织和癌组织KLK7 mRNA进行定量,分析其表达与部分临床病理特征的关系,探讨其临床意义。方法应用实时荧光定量PCR检测48例乳腺癌切除的组织中KLK7基因mRNA的表达量,并分析KLK7 mRNA的表达量与年龄、TNM分期、组织学类型、淋巴结转移、雌激素受体（ER）、孕激素受体（PR）等临床病理特征的关系。结果KLK7 mRNA在乳腺正常组织相对表达水平为0．091±0．139,在乳腺癌组织中的相对表达水平为0．107±0．122,无统计学意义（P〉0．05）。但KLK7 mRNA在有淋巴结转移的患者乳腺癌组织中的表达水平高于未转移组（P〈0．05）;在Ⅲ-Ⅳ期患者乳腺癌组织中高于Ⅰ．Ⅱ期患者（P〈0．05）;ER（＋）阳性乳腺癌组织明显低于ER（-）乳腺癌组织（P〈0．05）。KLK7 mRNA表达水平与患者年龄、组织病理分类以及孕激素受体状态无相关性（P〉0．05）。结论乳腺癌组织KLK7 mRNA表达与TNM分期、ER状态及肿瘤转移情况有关。     

C-erbB2、c-myc和CCND1 mRNA联合检测在乳腺癌诊断中的应用

目的建立荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）法检测C-erbB2、核内原癌基因（c-myc）和细胞周期蛋白D1（CC-ND1）mRNA水平,探讨其联合检测在乳腺癌诊断和治疗监测中的应用。方法建立FQ-PCR法,并以β2-微球蛋白为内对照测定15名健康女性体检者（正常对照组）、30例良性乳腺疾病患者（良性乳腺疾病组）和121例乳腺癌患者（乳腺癌组）外周血中C-erbB2、c-myc和CCND1的mRNA水平。结果 C-erbB2、c-myc和CCND1的mRNA水平在正常对照组和良性乳腺疾病组间差异无统计学意义（P〉0.05）,乳腺癌组均高于前两组（P〈0.05）,β2-微球蛋白三组间差异无统计学意义（P〉0.05）;三种mRNA联合检测的阳性率高于单个mRNA的检测。结论 FQ-PCR技术可快速定量检测C-erbB2、c-myc和CCND1的mR-NA,三者联合检测可有效提高对乳腺癌诊断的阳性率。     

实时荧光定量RT-PCR检测乳腺癌VEGF mRNA的表达

目的：建立实时荧光定量逆转录一多聚酶链反应（real—timequantitative,RT—PCR）检测乳腺癌患者肿瘤组织VEGFmRNA表达的方法,并验证其与免疫组织化学LsAB方法检测VEGF蛋白表达的相关性。方法：提取组织总RNA,逆转录成mRNA,采用实时荧光定量RT—PCR检测44例乳腺浸润性导管癌、25例癌旁正常小叶组织、13例乳腺良性疾病组织中VEGFmRNA表达;采用免疫组织化学LSAB法和彩色图像病理分析系统半定量检测其VEGF蛋白表达。结果：乳腺癌组织中VEGFmRNA表达水平显著高于癌旁和良性病组织（｜P〈0．001）,而后两者之间无明显差异（P〉0．05）;VEGF蛋白表达在癌组织,癌旁和良性病组中的分布特点与VEGFmRNA完全一致。结论;本研究所建立的用于检测人乳腺组织VEGFmRNA表达的实时荧光定量RT—PCR方法,是一种快速有效、灵敏度高、特异性好的定量检测方法,与免疫组化LSAB方法检测的VEGF蛋白表达具有良好相关性,在乳腺癌的早期诊断和良恶性鉴别诊断中具有重要的参考价值。     

荧光定量聚合酶链反应检测人乳腺癌C-erbB2基因扩增及过度表达的研究

目的建立荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)法检测C-erbB 2基因表达水平,探讨其在乳腺癌诊断和治疗监测中的应用。方法建立FQ-PCR法,并以2β-微球蛋白为内对照测定15名健康女性体检者、30例良性乳腺疾病患者和81例乳腺癌患者外周血中C-erbB 2的表达量。结果C-erbB 2表达水平在正常对照组和良性乳腺疾病组间差异无显著性意义(P>0.05),乳腺癌组均高于前两组(P<0.05),2β-微球蛋白在三组间差异无显著性意义(P>0.05)。81例乳腺癌患者阳性率为50.6%,良性乳腺疾病组为0。C-erbB 2表达与患者年龄和肿瘤大小和类型无关(P>0.05),与乳腺癌临床分期、组织学分级以及腋淋巴结转移相关(P<0.05)。结论FQ-PCR技术是高度灵敏、高度特异的快速定量检测C-erbB 2方法,可有效地诊断乳腺癌并对其疗效、转移和预后进行监测。     

细胞角蛋白19、20 mRNA定量在检测结肠癌患者外周血微转移中的应用

目的探讨细胞角蛋白19、20（CK19、20）mRNA表达在诊断结肠癌患者外周血微转移中的作用。方法随机选择和收集36例结肠癌患者、34例结肠良性疾病患者及32名健康献血员外周血,用荧光定量逆转录-聚合酶链反应（FQ—RT-PCR）测定CK19、20mRNA含量。结果CK19、20mRNA在结肠良性疾病组外周血均未见表达。在健康献血员组只有1例CK19表达阳性,CK20均为阴性。在结肠癌组,CK19检测阳性率为58．3％（21／36）;CK20阳性率为36．1％（13／36）;CK19、20联合检测阳性率为77．8％（28／36）。结肠癌组与结肠良性疾病组或献血员组之间比较,CK19、CK20在外周血表达差异均有显著性（P〈0．05）。结合临床资料分析,结肠癌患者外周血CK19、CK20mRNA阳性表达和淋巴结转移、Dukes分期关系密切（P〈0．05）,而与肿瘤类型及分化程度无关（P〉0．05）。结论CK19、20mRNA可作为检测结肠癌外周血微转移的标志物,两者联合检测可提高检出率。     

血清乳腺珠蛋白与乳腺癌的相关性及临床意义探讨

目的探讨血清人乳腺珠蛋白(hMAM)水平与乳腺癌早期诊断和癌微转移的相关性及其临床意义。方法应用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测68例乳腺癌患者、40例其他癌症患者(前列腺癌、胃癌、卵巢癌、直肠癌各10例)、35例良性乳腺疾病患者以及40名体检正常女性(正常对照组)血清hMAM水平并做比较。将68例乳腺癌患者按临床TNM分期、是否存在雌激素受体(ER)表达、是否有腋窝淋巴结转移以及是否绝经分别分组并做比较。通过受试者工作特征(ROC)曲线确定乳腺癌血清hMAM的Cut-off值。结果血清hMAM的ROC曲线下面积为0.825,即诊断乳腺癌的可信度为82.5%[95%可信区间(CI):72.6%~92.4%];当hMAM的Cutoff值为8.43 ng/mL时,敏感性和特异性分别为76.5%、82.9%。乳腺癌组血清hMAM水平及阳性率明显高于良性乳腺疾病组、其他癌症组和正常对照组(P0.05),而良性乳腺疾病组、其他癌症组和正常对照组之间差异均无统计学意义(P0.05)。Ⅲ和Ⅳ期乳腺癌患者的血清hMAM阳性率(55%、75%)明显高于Ⅰ和Ⅱ期患者(25%、40%,P0.05),但hMAM水平无差异(P0.05)。有腋窝淋巴结转移的乳腺癌患者血清hMAM阳性率(88%)明显高于无转移的患者(30%,P0.05),但hMAM水平无差异(P0.05)。不管乳腺癌患者血清中是否存在ER、原癌基因C-erb-2表达及是否绝经,其hMAM水平及阳性率均无差异(P0.05)。结论 hMAM的表达与乳腺癌临床分期和是否有腋窝淋巴结转移相关;检测乳腺癌高危人群血清hMAM水平有助于提高乳腺癌的早期诊断和癌微转移的早期发现。     

人乳腺癌组织支原体感染的检测

目的探讨支原体感染和乳腺癌发生、预后的关系及可能的影响机制。方法应用免疫组化方法及逆转录多聚酶链反应．对165例乳腺癌组织及癌周正常乳腺组织、80例乳腺良性病变组织支原体感染及c—myc、H—ras基因表达进行检测。结果乳腺癌组织、乳腺癌周正常乳腺组织、乳腺良性病变组织猪鼻支原体PD4阳性率分别是30．30％、9．70％、7．50％,前者与后两者之间比较,差异均有统计学意义（x^2分别=21．89、15．89,P均〈0．05）。支原体感染阳性、171性的乳腺癌组织c—myc、H—ras基因表达率分别是50．00％、27．83％,两者之间差异有统计学意义（x^2=7．57,P〈0．05）;支原体感染阳性、阴性的乳腺癌患者5年生存率分别是80．01％、87．02％,两者之间比较差异无统计学意义（x^2=1．31,D0．05）。结论乳腺癌组织支原体感染率较高,支原体感染的乳腺癌组织c—myc、H-ras基因表达率增高,可能和乳腺癌的发生存在一定的相关性,但和预后没有相关性。     

乳腺疾病患者营养状况的现状调查

目的调查乳腺疾病患者营养状况的现状,探讨患者体质量与乳腺癌发生的关系,为预防和筛选乳腺癌提供循证依据。方法便利抽样法选取2012年6-11月在上海交通大学医学院附属瑞金医院乳腺疾病诊治中心住院治疗的1187例患者为研究对象,采用营养风险筛查工具(nutritional risk screening-2002,NRS-2002)对患者的营养状况进行调查,记录其实验室检查指标,并计算体质量指数(body mass index,BMI);随访记录患者住院天数、住院费用及乳腺癌患者的临床分期。结果1187例乳腺疾病患者中有乳腺癌676例(56.95%)和乳腺良性疾病511例(43.05%)。乳腺良性疾病患者中有营养风险患者的比例要高于乳腺癌患者,差异有统计学意义(P0.05)。乳腺癌者中体质量超过正常者的比例要高于乳腺良性疾病患者,差异有统计学意义(P0.05)。乳腺癌患者的白蛋白水平、淋巴细胞计数明显低于乳腺良性疾病患者,而乳腺癌患者的前白蛋白水平却高于乳腺良性疾病患者,差异均有统计学意义(均P0.05)。乳腺癌患者中以临床Ⅰ期(33.38%)和Ⅱ期(53.06%)患者占多数;不同BMI组患者在其临床分期上的差异有统计学意义(P0.05)。结论乳腺癌患者中体质量高于正常者占多数,且超重或肥胖与乳腺癌的发生有一定联系。     

Her-2／neu和CD138在乳腺癌中表达及意义

目的检测乳腺癌组织中Her-2／neu和CD138的表达情况,探讨二者在乳腺癌中表达的意义和相互关系。方法应用免疫组化方法（S-P法）观察102例乳腺癌,30例乳腺良性病变组织（15例乳腺良性肿瘤与15例正常乳腺组织）Her-2／neu和CD138的表达。结果①102例乳腺癌组织和30例乳腺良性病变组织中Her-2／neu阳性表达率分别为58％和0％,CD138阳性表达率分别为41％-42％和100％。乳腺癌组织中Her-2／neu阳性表达率显著高于其在良性病变组织的阳性表达率（P〈0．01）,良性病变组织中CD138阳性表达率显著高于乳腺癌组织（P〈0．015）。②Her-2／neu的表达与乳腺癌的淋巴结转移、临床分期密切相关（P〈o．05）。③CD138表达与乳腺癌的淋巴结转移、临床分期呈负相关（P〈0．05）。结论乳腺癌组织中Her-2／neu阳性表达与CD138的阴性表达显著相关（P〈O．01）。     

PTEN和hMSH2在乳腺浸润性导管癌中的表达及临床意义

目的 探讨抑癌基因PTEN和错配修复基因hMSH2在乳腺浸润性导管癌中的表达,以及与临床病理指标的关系。方法采用免疫组化EnVision法检测75例乳腺浸润性导管癌及30例正常乳腺组织中PTEN和hMSH2蛋白的表达情况。结果乳腺癌与正常乳腺组织相比,PTEN和hMSH2蛋白表达阳性率均明显降低,分别为64％和72％（P均〈0．05）。乳腺癌中PTEN表达缺失与组织分化差、腋窝淋巴结转移、临床分期有关,与患者年龄、肿瘤大小、C—erbB-2、ER、PR表达无关;hMSH2表达降低与肿瘤体积大、组织分化差、腋窝淋巴结转移有关,与患者年龄、临床分期、C—erbB-2、ER、PR表达无关;PTEN蛋白与hMSI-L2蛋白在乳腺癌中表达呈显著正相关（r=0．387,P〈0．01）。结论PTEN和hMSH2表达缺失与乳腺癌的发生发展及生物学行为密切相关;二者相互协同导致肿瘤形成和恶性程度增加。     

动态检测CA-153、VEGF-A探讨乳腺癌预后的相关性研究

目的通过对乳腺癌患者手术前后动态检测其血清CA-153、VEGF-A,探讨CA-153、VEGF-A表达与乳腺癌预后的相关性。方法作者将127例乳腺良、恶疾病患者分为两组：观察组（60例乳腺癌患者）;对照组（67例乳腺良性疾病患者）。手术前、后均采用ELISA分别检测患者血清CA-153、VEGF-A水平。结果①观察组与对照组患者术前检测血清中CA-153、VEGF-A,表达已具有差异性变化（P〈0.01）;②观察组手术前、后乳腺癌患者血清CA-153、VEGF-A水平表达呈差异性改变（P〈0.01）。③观察组手术后与对照组血清CA-153表达（P〉0.05）;VEGF-A表达（P〈0.05）。结论通过对两组血清CA-153、VEGF-A表达的差异,乳腺癌患者手术前后不同的CA-153、VEGF-A表达与其预后呈正相关性改变。     

FGF 1在乳腺癌中的表达与微血管生成的关系

目的 比较酸性成纤维细胞生长因子（acid fibroblast growth factor,aFGF或FGF 1）在正常乳腺组织、乳腺良性肿瘤及乳腺癌中的表达差异,探讨FGF 1与乳腺癌血管生成的关系。方法 应用免疫组织化学（immunohistochemistry,IHC）SP法检测FGF 1在40例乳腺癌组织、12例良性乳腺肿瘤组织及12例正常乳腺组织中的表达情况;以CD34抗体标记血管内皮细胞CD34抗原行乳腺癌组织微血管密度（micro vessel density,MVD）计数。〖HTH〗结果〖HTSS〗 FGF 1在40例乳腺癌中的阳性表达率（57.5%,23/40）显著高于12例乳腺良性肿瘤组织中阳性表达率（16.7%,2/12）以及正常乳腺组织阳性表达率（0,0/12）,差异有统计学意义（P〈0.05）;良性肿瘤组FGF 1表达率和正常乳腺组织比较无统计学意义（P〉0.05）。40例乳腺癌组织MVD计数为（70.17±29.33）个/HP,在23例FGF 1阳性组中MVD计数为（89.48±23.23）个/HP,显著高于17例阴性组（44.06±12.53）个/HP,差异有统计学意义（P〈0.05）。〖HTH〗结论 〖HTSS〗FGF 1可能参与乳腺癌微血管生成。