两种HCV RNA荧光定量试剂盒检测丙型肝炎病毒的比较分析

目的 比较分析两种丙型肝炎病毒（HCV）核酸定量检测试剂盒的临床性能.方法 随机抽取63例临床血清样本进行平行检测,分别采用HCV磁珠法试剂和对照试剂检测血清中RNA水平.结果 对照试剂检测63例临床样本中有22例阳性,41例阴性;磁珠法试剂检测63例样本中有27例阳性,36例阴性,两种试剂的阳性样本具较好的一致性（P=0.000）,磁珠法试剂与对照试剂的定量检测结果具有线性相关性（r=0.935,P＜0.05）.结论 两种试剂都可以应用于HCV临床检测,磁珠法试剂具有更高的灵敏度,是一种比较理想的HCV RNA定量检测试剂.     

FQ-PCR检测HCV RNA及其临床应用

目的评价荧光定量—聚合酶链反应(FQ-PCR)检测HCV RNA的临床应用价值。方法用FQ-PCR和酶联免疫吸附试验(ELISA)分别检测126例HCV感染患者血清的HCV RNA和血清标志(抗-HCV)。结果126例肝炎患者血清标本中,HCV RNA检出率为61.90%,抗-HCV检出率为92.86%。急性丙型肝炎患者HCV RNA载量均值达5.0×106拷贝/ml,慢性肝炎次之,肝硬化相对偏低,为5.3×103拷贝/ml。结论FQ-PCR对丙型肝炎的早期诊断、病毒复制水平及抗病毒治疗的疗效评估具有重要的临床应用价值。     

TRIzol法与磁珠法用于丙型肝炎病毒RNA定量检测的比较

目的 比较TRIzol法与磁珠法对丙型肝炎病毒(HCV) RNA定量检测结果的影响.方法 收集117例丙型肝炎病毒感染阳性患者的血清及其基因分型信息.分别采用TRIzol法与磁珠法提取患者血清样本的HCVRNA,qPCR检测提取HCV RNA的病毒载量,分析两种提取方法所得HCV RNA检测结果的差异.结果 qPCR结果显示TRIzol法和磁珠法具有良好的线性相关性:y=0.978x+0.063(R2 =0.973).Bland-Altman统计分析显示TRIzol法提取的HCV RNA病毒载量对数值的平均值略低于磁珠法,但差异无统计学意义(P＞0.05).基因型分析结果显示1a、1b、2a、3a和6a基因型中两种提取方法差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 TRIzol法提取HCV RNA的定量检测结果和磁珠法相当,且成本低廉,可在国内广泛用于试剂盒的开发和HCV RNA临床检测.     

116例血清中HCV RNA定量检测与抗-HCV结果对比分析

目的探讨丙型肝炎病毒抗体(抗-HCV)和HCVRNA定量检测阳性结果对丙型肝炎诊断治疗的临床意义。方法采用第三代ELISA夹心法检测抗-HCV，荧光定量PCR法检测HCVRNA检测116例血清抗-HCV或HCVRNA阳性标本。结果在116例标本中，抗-HCV( )／HCVRNA( )双阳性者83例，抗-HCV( )／HCVRNA(-)者12例，抗-HCV(-)／HCVRNA( )者21例)。两者阳性符合率为71．6％(83／116)。在HCVRNA定量阳性结果中，则有104例为HCV感染，其中抗-HCV的阳性检出率为80．0％(83／104)。随着血清HCVRNA滴度的增高，抗-HCV的阳性率也增加，两者变化趋势一致。结论抗-HCV检测，HCVRNA荧光定量PCR法检测均有一定的局限性，同时应用抗-HCV和HCVRNA检测对临床上完善HCV诊断、评价抗病毒疗效更为准确。     

荧光定量PCR技术在检测HCV—RNA中的应用

目的 评价荧光定量ＰＣＲ技术测定ＨＣＶ－ＲＮＡ水平的价值,探讨ＰＢＭＣ中检出ＨＣＶ－ＲＮＡ的意义。方法 采用荧光定量ＫＲ及ＲＴ－ＰＣＲ技术同时检测８７例血液透析患者的血清和淋巴细胞中ＨＣＶ－ＲＮＡ。结果血清、淋巴细胞中ＨＣＶ－ＲＮＡ的荧光定量ＰＣＲ检出率（４９．４％、６９．０％）,分别高于相应标本中ＨＣＶ－ＲＮＡ的ＲＴ－ＰＣＲ阳性率（３３．３％、３５．６％）（Ｐ ＜０．０５）。血清、淋巴细胞中同时检出ＨＣＶ－ＲＮＡ的一致率,荧光定量ＰＣＲ法（３１．０％）显著高于ＲＴ－ＰＣＲ定性法（６．９％）（Ｐ＜０．００１）． 荧光定量ＰＣＲ法,淋巴细胞中ＨＣＶ－ＲＮＡ检出率高于血清（Ｐ＜０．０１）。结论 与 ＲＴ－ＰＣＲ相比,荧光定量ＰＣＲ技术检测 ＨＣＶ－ＲＮＡ敏感性较高,对ＰＢＭＣ内ＨＣＶ－ＲＮＡ检测有利于提高ＨＣＶ检测的阳性率。     

实时定量PCR和ELISA法快速检测角膜组织HBV和HCV的效果

角膜损伤是主要的致盲性疾病之一。我国目前角膜盲患者大约有300万人,而且每年还以10%的率增加;角膜移植是惟一有效的治疗方法[1-2]。多年以来,角膜供体材料匮乏和供体角膜安全性问题一直是困扰我国眼科学者的两个主要问题[3]。由于     

Roche定量试剂和国产PCR试剂检测HBV-DNA的比较分析

目的探讨Roche定量试剂和国产PCR试剂检测慢性HBV感染者血清HBV-DNA的差异。方法收集慢性HBV感染患者366例,包括慢性乙型肝炎患者247例,乙肝肝硬化失代偿患者72例,乙肝相关性肝癌患者28例,乙型慢加急性肝衰竭患者19例;采用Roche定量试剂(试剂A)和和国产PCR试剂(试剂B)检测患者血清HBV-DNA,比较检测结果的差异、相关性及影响因素。结果试剂B 124例(33.88%)低于检测下限而试剂A高于检测下限(包括24例超过1.00×10~3IU/m L,考虑试剂B为假阴性);试剂A的阳性率(70.49%)显著高于试剂B(36.61%)(P0.01)。试剂A的HBV-DNA检测均值高于试剂B(P0.05),HBe Ag滴度低者、终末期患者更容易出现COBAS系统的血清HBV-DNA检测值高于国产试剂的情况。Spearman相关分析显示,两种试剂在1.00×10~3IU/m LHBV-DNA1.00×10~7IU/m L时的相关性较好(r=0.74,P0.01)。结论国产PCR试剂可以满足慢性HBV感染患者抗病毒治疗随访、监测的需求;但针对那些怀疑有低病毒复制状态或病毒变异导致HBV-DNA检测结果假阴性的患者,有必要用COBAS系统予以复核。     

不同基因型丙型肝炎病毒RNA定量分析

目的　根据定量 PCR检测结果 ,了解血清不同基因型 HCV- RNA的含量 .方法　采用荧光定量 PCR和逆转录巢式定性 PCR同时检测 16 6例丙肝患者的血清 HCV- RNA,再进行酶切分型 .计算各型 HCV- RNA平均含量 .结果　定量 PCR阳性血清 (131例 ) HCV- RNA含量在 1× 10 4 .0 4～ 1×10 8.1 1拷贝· m L- 1 .HCV- 型 (10 6例 )、HCV- 型 (18例 )和 / 混合型 (3例 ) RNA平均滴度分别为 1× 10 6 .88± 2 .0 1拷贝· m L- 1 ,1× 10 5.79± 1 .82 拷贝· m L- 1 和 10 5.50± 1 .6 2 拷贝· m L- 1 .结论　定性和定量检测结果有很好的一致性 .HCV- 型病毒含量显著高于 HCV- 型 .     

HBV DNA和HCV RNA检测试剂抗干扰能力验证

目的:评估乙型肝炎病毒(HBV)脱氧核糖核酸(DNA)和丙型肝炎病毒(HCV)核糖核酸(RNA)定量检测试剂的抗干扰能力.方法:选择高、低浓度HBV DNA和HCV RNA阳性血清标本,采用实时荧光定量PCR技术检测不同浓度血红蛋白(hemoglobin,Hb),总胆红素(total bilirubin,TBIL)和甘油三酯(triglyceride,TG)对2种阳性血清标本检测的干扰.以偏差<±7.5％ 为可接受范围.结果:HBV DNA检测,当Hb浓度≤4.5 g/L时,各样本均未受到干扰,Hb浓度≥8.1 g/L时,各样本受到不同程度的干扰;当TBIL浓度≤370μmol/L时,高浓度样本检测未受到明显干扰,TBIL浓度≥666μmol/L,各样本受到不同程度的干扰;TG浓度≤12.6 mmol/L时,未对检测造成干扰.HB≤8.1 g/L,TBIL浓度≤666μmol/L,TG浓度≤12.6 mmol/L均未对HCV RNA检测造成干扰.结论:HBV DNA和HCV RN A定量检测试剂具有一定的抗干扰能力.     

荧光定量PCR检测丙型肝炎RNA结果分析

目的：分析丙型肝炎病毒RNA[HCV—RNA]与丙型肝炎抗体（抗-HCV）及转氨酶（ALT）之间的关系.方法：荧光定量PCR（FQ—PCR）、酶免化学发光法、全自动生化分析仪分别检测含量与ALT水平之间无明显相关性，但是HCV—RNA阳性率在ALT正常组与异常组之间差异有显著性（P〈0．005）。结论：在丙肝的诊断、治疗中，检测HCV—RNA含量有积极的意义。     

TRIzol法与磁珠法用于丙型肝炎病毒RNA定量检测的比较

目的 比较不同核酸提取方法TRIzol法与磁珠法对丙型肝炎病毒核酸（HCV RNA）定量检测结果的影响。 方法 收集117例丙型肝炎病毒感染阳性患者的血清及其基因分型信息。分别采用TRIzol法与磁珠法提取患者血清样本的HCV RNA,定量PCR检测提取HCV RNA的病毒载量,比较两种提取方法HCV RNA检测结果的差异性。 结果 定量PCR检测结果显示TRIzol法和磁珠法具有良好的线性相关性：y=0.978x+0.063（R2=0.973）。Bland-Altman统计分析显示TRIzol法的检测平均值略低于磁珠法,但无明显统计学差异（P>0.05）. 基因型分析显示1b、2a、3a和6a 亚型之间无显著性差异（P>0.05）.结论TRIzol提取法的HCV定量检测结果和磁珠法相当,且标本用量更少,成本低廉,可在国内广泛使用,且能更大范围地应用在试剂盒的开发和HCV RNA临床检测中。     

丙型肝炎病毒核酸、核心抗原和抗体联合检测的临床意义

目的探讨丙型肝炎病毒核酸、核心抗原和抗体检测联合应用的意义。方法抗-HCV和HCV-cAg用ELISA法检测,HCV-RNA用RT-PCR法检测。结果1761例病人共测得阳性标本57例,其中抗-HCV阳性54例,HCV-cAg阳性22例,同时阳性为19例。3例HCV-RNA而抗-HCV阴性样本中检出HCV-cAg。22例HCV-cAg阳性标本经HCV-RNA检测均为阳性。结论HCV-RNA、抗-HCV和HCV-cAg联合检测可起到互补作用,提高检出阳性率,有利于早期诊断。     

丙型肝炎病毒核酸、核心抗原和抗体联合检测的临床意义

目的探讨丙型肝炎病毒核酸、核心抗原和抗体检测联合应用的意义。方法抗-HCV和HCV-cAg用ELISA法检测,HCV-RNA用RT-PCR法检测。结果1761例病人共测得阳性标本57例,其中抗-HCV阳性54例,HCV-cAg阳性22例,同时阳性为19例。3例HCV-RNA而抗-HCV阴性样本中检出HCV-cAg。22例HCV-cAg阳性标本经HCV-RNA检测均为阳性。结论HCV-RNA、抗-HCV和HCV-cAg联合检测可起到互补作用,提高检出阳性率,有利于早期诊断。     

HCV RNA水平对HCV/HIV合并感染自然进程的影响

目的 探讨HCV RNA PCR水平对丙型肝炎病毒（HCV）/人类免疫缺陷病毒（HIV）合并感染自然进程的影响.方法 采用实时荧光定量PCR方法检测HCV RNA,比较初次就诊高效反转录病毒治疗（HAART）前的HCV/HIV合并感染（HCV/HIV组）、HCV单纯感染（HCV组）、HIV单纯感染（HIV组）患者的HCV RNA、HIV RNA、CD4＋T淋巴细胞计数、天冬氨酸转氨酶（AST）、总胆红素（TBIL）、透明质酸酶（HA）、层粘连蛋白（LN）、甘胆酸（CG）、Ⅲ型胶原（PCⅢ）、Ⅳ型胶原（CⅣ）、年龄等指标.结果 HCV/HIV组与HCV组和HIV组CD4＋T淋巴细胞计数分别为139.75±91.586、647.16±363.379、288.0±219.6个/微升（P＜0.01）.与HCV组患者的发病年龄分别为37±15和52±13岁（P＜0.01）.HCV RNA分别为6.0417±0.93524和5.2553±1.62773log/ml（P＜0.05）;CⅣ分别为105.30±24.630和95.41±52.889ng/ml（P＜0.05）;CG分别为1444.98±1721.597、139.00±165.640μg/ml （P＜ 0.01）;PCⅢ分别为285.52±244.558、159.82±86.928ng/ml（P＜ 0.01）;ALT分别为104.42±107.90、46.22±32.589U/L（P ＜0.01）.与HIV组HIV RNA分别为4.8±0.9和4.1±1.0log/ml（P ＜0.01）.结论 HCV/HIV合并感染可以加重和加快HCV、HIV疾病的自然进程.高水平的HCV RNA是HCV/HIV合并感染患者的HCV、HIV疾病自然进程的危险因素之一.     

151例血清抗-HCV阳性患者的HCV RNA检测分析

目的:探讨丙型肝炎抗体(抗-HCV)和丙型肝炎病毒核糖核酸(HCV RNA)的关系.方法:研究对间接ELISA法检测抗-HCV阳性患者的血清进行HCV RNA检测(采用RT-PCR法).结果:151例血清抗-HCV阳性患者有85例HCV RNA阳性,阳性率为56.2%.另外,还观察了40例抗HCV阳性病人的双份血清,急性期第一份血清ALT升高、HCV RNA为阳性;经抗病毒治疗后的第二份血清,部分病人ALT复常,HCV RNA阴转,另外部分病人反复ALT异常,HCV RNA则始终为阳性.结论:HCV RNA能鉴别活动性HCV感染及非活动性感染,可为抗病毒药物疗效的评价和临床合理用药提供依据.     

基于自动化提取HCV RNA荧光定量检测系统的性能验证

目的　基于Stream SP96 全自动核酸提取仪、ABI7500 实时荧光定量PCR仪对丙型肝炎病毒（HCV）RNA 定量检测系统的性能指标进行验证。方法　依据《临床实验室对商品定量试剂盒分析性能的验证》WS/T 420-2013 性能 验证方案,采用Stream SP96 全自动核酸提取平台及ABI7500 荧光定量PCR仪检测HCV RNA,对其准确度、精密度、线性 区间、检测限、定量限和抗干扰能力等进行方法学性能验证。结果　低、高浓度标准物质的均值与靶值的误差分别为 0.20 和 0.25,均小于靶值对数值±0.4 log;低浓度样本的批内、批间不精密度变异系数值分别为 0.79%、1.01%,高浓度样本的 批内、批间不精密度变异系数值分别为 0.52%、1.22%,均<5%;线性相关系数r>0.980,线性区间可达 20~1.0×10 8 ,呈良好 线性（R 2 =0.997 3）;检出限为 20 IU/mL,最低定量限为 50 IU/mL;含胆红素（300 mg/L）、血红蛋白（300 g/L）、甘油三酯 （3 000 mg/L）的干扰物质对样本检测结果无影响。结论　HCV RNA 实时荧光PCR定量法检测系统准确度、精密度、线 性范围、检出限、定量限、抗干扰能力均符合厂家声明,能够满足临床对HCV RNA定量检测的需求。     

定量聚合酶链反应检测血清中HCV RNA^＋

目的：探讨定量聚合酶链反应用于检测丙型肝炎病毒HCV含量变化的意义。方法：用信号引物能量转移定量聚合酶链反应（PCR），检测68例丙型肝炎患者血清HCVRNA水平。结果：其HCVRNA含量范围103～1011拷贝／ml，急性丙肝106.83±3.72拷贝／ml，慢性丙肝106.54±2.67拷贝／ml，而无症状携带者104.95±2.16拷贝／ml。血清HCVRNA水平同ALT水平呈相关。结论：丙肝病毒感染后HCV复制水平与肝损害相关，定量检测HCVRNA的水平变化是预测和评价干扰素疗效的重要指标。     

慢性丙型病毒性肝炎患者相关自身抗体、血清HCV RNA水平及AST/ALT比值的关系探讨

目的对比分析丙型肝炎患者血清自身抗体、HCV RNA水平和AST/ALT比值,以进一步探讨丙型病毒性肝炎的发病机理。方法采用间接免疫荧光法测定抗核抗体（ANA）、抗平滑肌抗体（SMA）、抗线粒体抗体（AMA）和抗肝肾微粒体抗体（LKM）,采用核酸扩增（PCR）荧光定量技术检测标本HCV RNA含量,并同时检测肝功能指标丙氨酸氨基转移酶（ALT）、门冬氨酸氨基转移酶（AST）。结果HCV RNA阳性组和HCV RNA阴性组自身抗体检出率差异无统计学意义（P〉0.05） 自身抗体阳性组和自身抗体阴性组中AST/ALT比值≥1检出率有显著性差异（P〈0.01） HCV RNA阳性组和HCVRNA阴性组AST/ALT比值≥1检出率有显著性差异（P〈0.01）。结论病毒的直接作用和自身免疫是HCV损伤机体的两个重要因素。     

ALT与HCV核心抗原及HCV—RNA相关性研究

目的研究ALT与HCV核心抗原、HCV—RNA间关系。方法对81例HCV—RNA阳性标本检测HCV核心抗原和ALT水平。结果81例HCV—RNA阳性标本检出HCV核心抗原阳性32例,灰区26例,ALT水平超过临床参考值56例,ALT检测水平与HCV核心抗原阳性程度呈正相关性。结论HCV—cAg仅与HCV—RNA复制密切相关,与复制水平无关。HCV核心抗原可联合HCV抗体检测提高血液标本HCV感染检出率,结合ALT可以评测感染状态。