HBV感染产妇血清和初乳中HBV-DNA载量分析及临床意义

目的:探讨 HBV感染产妇血清和初乳中 HBV-DNA 载量的相关性.方法:用荧光定量聚合酶链式反应(FQ-PCR)技术对240例 HBV 感染产妇的血清和初乳进行检测,按产妇血清 HBV-DNA载量分为 HBV-DNA<5.00E+02 IU/mL、5.00E+02~9.99E+03 IU/mL、1.00E+04~9.99E+05 IU/mL、1.00E+06~9.99E+07 IU/mL、≥1.00E+08 IU/mL,分析比较产妇血清、初乳中病毒 HBV-DNA载量.结果:240例 HBsAg(+)产妇血清 HBV-DNA 阳性率为72.9%(175/240),初乳阳性率为30.8%(74/240),两者比较差异有统计学意义(χ2=112.203,P<0.001);HBsAg(+)产妇血清 HBV-DNA 载量<5.00E+02 IU/mL时,其对应的初乳中均未检出HBV-DNA,血清HBV-DNA载量在5.00E+02~9.99E+03 IU/mL、1.00E+04~9.99E+05 IU/mL、1.00E+06~9.99E+07 IU/mL、≥1.00E+08 IU/mL区间时,其对应初乳中 HBV-DNA检出率分别为4.7% (2/42)、41.8% (23/55)、52.5% (32/61)、100% (17/17),初乳中 HBV-DNA≥5.00E+02 IU/mL 者所占人数比值在血清 HBV-DNA 不同层级载量组别中比较,差异有统计学意义(χ2=96.986,P<0.001);当血清载量 HBV-DNA≥5.00E+02 IU/mL时,初乳中 HBV-DNA载量和检出率随血清 HBV-DNA 载量的升高而增加,二者高度相关(r=0.876,P<0.001).结论:产妇血清 HBV-DNA载量决定其初乳 HBV-DNA 水平,初乳中 HBV-DNA 载量低于血清;当产妇血清 HBV-DNA 载量<5.00E+02 IU/mL 时,其对应的初乳中均未检出 HBV-DNA,提示此时母乳喂养发生母婴传播的风险较小.     

TRIzol法与磁珠法用于丙型肝炎病毒RNA定量检测的比较

目的 比较TRIzol法与磁珠法对丙型肝炎病毒(HCV) RNA定量检测结果的影响.方法 收集117例丙型肝炎病毒感染阳性患者的血清及其基因分型信息.分别采用TRIzol法与磁珠法提取患者血清样本的HCVRNA,qPCR检测提取HCV RNA的病毒载量,分析两种提取方法所得HCV RNA检测结果的差异.结果 qPCR结果显示TRIzol法和磁珠法具有良好的线性相关性:y=0.978x+0.063(R2 =0.973).Bland-Altman统计分析显示TRIzol法提取的HCV RNA病毒载量对数值的平均值略低于磁珠法,但差异无统计学意义(P＞0.05).基因型分析结果显示1a、1b、2a、3a和6a基因型中两种提取方法差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 TRIzol法提取HCV RNA的定量检测结果和磁珠法相当,且成本低廉,可在国内广泛用于试剂盒的开发和HCV RNA临床检测.     

一种国产HIV-1核酸定量试剂与罗氏试剂的临床对比研究

目的对比分析一种国产人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)核酸定量试剂和进口罗氏试剂检测HIV-1血浆病毒载量的相关性和一致性。方法收集2018年1-5月期间在深圳市第三人民医院就诊的HIV/AIDS患者临床检测剩余血浆样本652份,采用某国产HIV-1核酸定量检测Ⅰ代试剂(简称国产试剂)和罗氏Cobas TaqMan HIV-1 Test Version 2.0试剂,平行检测HIV-1感染者血浆病毒载量,采用配对t检验、线性回归和Bland-Altman等方法,对检测结果进行统计分析,评价两种检测试剂检测结果的相关性和一致性。结果进口与国产试剂检测结果均高于或均低于检测下限的样本分别为362例和209例,检测结果一致性较高,达到87.58%(571/652)。两种试剂检测结果均高于检测下限的362例样本中,国产试剂和进口试剂检测的平均病毒载量分别为(74 642±11 077)IU/mL和(103 694±14 883)IU/mL,差异有统计学意义(t=3.842,P=0.000 1)。两种检测方法在病毒载量高于1 000 IU/mL时差异有统计学意义(t=3.867,P=0.000 1),但是在病毒载量低于1 000 IU/mL时差异并无统计学意义(t=1.074,P=0.285 2)。相关性分析显示,两种方法检测结果具有很强的相关性(r=0.962 0,P0.000 1);差异分析显示,Cobas TaqMan与国产试剂定量值差异平均值为-0.009 2 log10IU/mL,95%可信区间为(-0.641 6～0.623 2)log10IU/mL,95%(344/362)的样本检测值在95%可信区间内。结论国产试剂与和罗氏Cobas TaqMan试剂,检测HIV-1血浆病毒载量的结果具有较好的相关性和一致性。     

TRIzol法与磁珠法用于丙型肝炎病毒RNA定量检测的比较

目的 比较不同核酸提取方法TRIzol法与磁珠法对丙型肝炎病毒核酸（HCV RNA）定量检测结果的影响。 方法 收集117例丙型肝炎病毒感染阳性患者的血清及其基因分型信息。分别采用TRIzol法与磁珠法提取患者血清样本的HCV RNA,定量PCR检测提取HCV RNA的病毒载量,比较两种提取方法HCV RNA检测结果的差异性。 结果 定量PCR检测结果显示TRIzol法和磁珠法具有良好的线性相关性：y=0.978x+0.063（R2=0.973）。Bland-Altman统计分析显示TRIzol法的检测平均值略低于磁珠法,但无明显统计学差异（P>0.05）. 基因型分析显示1b、2a、3a和6a 亚型之间无显著性差异（P>0.05）.结论TRIzol提取法的HCV定量检测结果和磁珠法相当,且标本用量更少,成本低廉,可在国内广泛使用,且能更大范围地应用在试剂盒的开发和HCV RNA临床检测中。     

两种HCV RNA荧光定量试剂盒检测丙型肝炎病毒的比较分析

目的 比较分析两种丙型肝炎病毒（HCV）核酸定量检测试剂盒的临床性能.方法 随机抽取63例临床血清样本进行平行检测,分别采用HCV磁珠法试剂和对照试剂检测血清中RNA水平.结果 对照试剂检测63例临床样本中有22例阳性,41例阴性;磁珠法试剂检测63例样本中有27例阳性,36例阴性,两种试剂的阳性样本具较好的一致性（P=0.000）,磁珠法试剂与对照试剂的定量检测结果具有线性相关性（r=0.935,P＜0.05）.结论 两种试剂都可以应用于HCV临床检测,磁珠法试剂具有更高的灵敏度,是一种比较理想的HCV RNA定量检测试剂.     

HBV DNA免提取核酸荧光定量PCR检测法应用评价

目的评价乙型肝炎病毒核酸免提取荧光定量PCR方法(一步法)对不同病毒载量时检测性能。方法评价试剂为圣湘公司HBV DNA荧光定量PCR检测免提取试剂盒,对照试剂为匹基公司、科发公司、达安公司3家煮沸核酸提取法试剂盒。将4种试剂盒按各自要求对配套的不同浓度标准品、阴性、临界值的反应曲线考核其线性和灵敏度。另检测1份已知浓度质控品、5份未知浓度样本血清考核其准确性、可比较性。检测仪器为瑞士罗氏公司Light Cycler荧光定量仪。结果一步法、匹基公司、科发公司、达安公司4家标准品浓度相关性R2分别为0.992、0.998、0.999及0.963,线性均满意。4个不同浓度标准品扩增曲线图形:一步法曲线比其他3家更为光滑,呈间距均匀的S形抛物线,2次结果重复曲线更趋重迭。对已知定值为(1.5E+06)IU/mL的质控品检测:一步法、匹基公司、科发公司、达安公司相应结果为(1.16E+06)、(5.27E+05)、(4.32E+05)及(4.90E+06)IU/mL,一步法最接近靶值。5份血清结果显示:4种试剂盒除P公司对2号样本结果为低于检出下限外,其他对1号、2号、3号、5号检出结果均与其他3家接近,可为临床接受。4号样本为一个低值临界范围,出现低于报告限、低值及临界追踪值3种结果现象。结论 4家HBV DNA荧光定量PCR检测检测试剂线性结果均满意,对中、高浓度样本检测结果较接近,但在低浓度临界范围检测报告可能会对临床诊断带来误导,需追踪复查。HBV PCR一步法检测技术免除了核酸高温裂解提取步骤,操作简便,人为误差减少,性能稳定,有利提高检测灵敏度、结果准确性。     

两种HCV RNA载量检测试剂相关性分析

目的:分析进口与国产试剂在HCV RNA定量检测中的相关性,评价国产HCV RNA荧光定量PCR试剂在不同病毒载量时的检测能力.方法:以美国Roche 公司COBAS Amplipreo/cobas TaqMan HCV test试剂(Roche试剂)对标本的HCV RNA 定量为标准,评价某国产HCV荧光定量PCR试剂(DA试剂)对不同病毒滴度标本的检测性能.分析两种试剂检测HCV RNA结果的相关性,对DA试剂在不同病毒载量时的检测能力进行评价.结果:两种试剂检测结果存在线性相关(R2=0.916,P＜0.01),Roche试剂检测结果[(5.68±1.22)IU/ml,lg]高于DA试剂检测结果[(4.16±1.24)IU/ml,lg],差别有统计学意义(P＜0.01);对检测HCV高病毒载量[(≥5～＜7)IU/ml,lg和≥7IU/ml,lg]组,两种试剂相关性较高(R2分别为0.781 、0.729,P＜0.01)对低HCV病毒载量(≥3～＜5)IU/ml,lg组,两种试剂相关性较低(R2=0.483,P＜0.01);病毒载量在(≥3～＜4)IU/ml,lg组,DA试剂假阴性为45.4%(5/11);病毒载量(≥1.18～＜3)IU/ml,lg组及＜1.18 IU/ml,lg组,DA试剂均未检出.结论:与Roche试剂相比,DA试剂在高病毒载量标本的相关性较好,低病毒载量标本的相关性低于高病毒载量标本.DA试剂检测HCV RNA的线性范围较窄,与Roche试剂相比存在一定差距.     

两种HCVRNA载量检测试剂相关性分析

目的：分析进口与国产试剂在HCV RNA定量检测中的相关性,评价国产HCV RNA荧光定量PCR试剂在不同病毒载量时的检测能力。方法：以美国Roche公司COBAS Amplipreo/cobas TaqMan HCV test试剂（Roche试剂）对标本的HCV RNA定量为标准,评价某国产HCV荧光定量PCR试剂（DA试剂）对不同病毒滴度标本的检测性能。分析两种试剂检测HCV RNA结果的相关性,对DA试剂在不同病毒载量时的检测能力进行评价。结果：两种试剂检测结果存在线性相关（R2=0.916,P〈0.01）,Roche试剂检测结果[（5.68±1.22）IU/ml,lg]高于DA试剂检测结果[（4.16±1.24）IU/ml,lg],差别有统计学意义（P〈0.01）;对检测HCV高病毒载量[（≥5~〈7）IU/ml,lg和≥7IU/ml,lg]组,两种试剂相关性较高（R2分别为0.781、0.729,P〈0.01）对低HCV病毒载量（≥3~〈5）IU/ml,lg组,两种试剂相关性较低（R2=0.483,P〈0.01）;病毒载量在（≥3~〈4）IU/ml,lg组,DA试剂假阴性为45.4%（5/11）;病毒载量（≥1.18~〈3）IU/ml,lg组及〈1.18 IU/ml,lg组,DA试剂均未检出。结论：与Roche试剂相比,DA试剂在高病毒载量标本的相关性较好,低病毒载量标本的相关性低于高病毒载量标本。DA试剂检测HCV RNA的线性范围较窄,与Roche试剂相比存在一定差距。     

PCR与ELISA检测乙肝病毒的对比及临床意义

目的 探讨荧光PCR法检测HBV-DNA定量ELISA定性检测乙肝病毒标志物临床价值比较.方法 取受试者空腹血清标本同时以荧光定量PCR法检测HBV-DNA和酶联免疫法捡测乙肝病毒两对半.结果 HBV-DNA定量在9.99×10^8 IU/mL～1.00×10^6 IU/mL之间的404例,大三阳比例为85.89％;HBV-DNA定量在9.99×10^5 IU/mL～1.00×10^3 IU/mL之间的416例,小三阳比例为59.38％;HBV-DNA定量在1.00×10^3 IU/ml～1.00×10^2 IU/mL的140例中,HBsAg、HBcAb阳性患者比例为71.43％;HBV-DNA定量＜1.00×102 IU/mL的992例中,HBsAg、HBeAg阴性模式比例为95.67％.结论 荧光定量PCR法检测HBV-DNA和ELISA定性检测HBV表面标记物呈正相关,即HBV-DNA拷贝数多的以大三阳居多,HBV-DNA拷贝数少的以无传染性病毒携带者和阴性者居多.荧光定量PCR可以直接反映体内乙肝病毒感染状态及病毒载量情况,较ELISA更利于判断疾病的严重程度和传染性,更有利于指导临床药物选择和疗效观察.     

携带HBV孕产妇血清免疫标志物含量与HBV-DNA载量分析

目的:探讨携带HBV孕产妇血清免疫标志物(HBV-M)含量与乙型肝炎病毒DNA(HBV-DNA)载量之间的关系.方法:应用电化学发光法(ECLIA)检测240例携带HBV孕产妇血清标本中HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb含量,用荧光定量聚合酶链式反应(FQ-PCR)技术同时检测HBV-DNA载量,对2组检测结果进行统计学分析.结果:ECLIA检出不常见模式47例,出现10种血清模式,模式1～5组均有HBV-DNA阳性检出,其中模式1,2,5组的检出率为100％,HBV-DNA载量分别为6E+07±9.02E+07、4.85E+06±3.01E+06、1.51E+07±2.13E+07,模式6～10组HBV-DNA载量<5E+02;HBV-DNA阳性患者HBsAg、HBsAb、HBeAg的定量结果与阴性患者差异有统计学意义(P<0.05),而HBV-DNA阳性患者HbeAb、HBcAb的定量结果与阴性患者差异无统计学意义(P>0.05).240例携带HBV孕产妇血清HBsAg、HBeAg、HBeAb含量与HBV-DNA载量呈正相关(r=0.657、0.562、0.501,P<0.05),HBsAb含量与HBV-DNA载量呈负相关(r=-0.438,P<0.05).结论:HBV-M含量和HBV-DNA载量密切相关,建议将两者相结合,合理制定HBV母婴传播的预防措施.     

全自动核酸纯化系统在临床分子检测中的应用研究

摘要：目的探讨全自动核酸纯化系统在实时荧光定量检测中的应用价值。方法手工法和全自动核酸纯化系统配套不同磁珠法试剂,分别提取HCV及肠道病毒核酸样本,通过实施荧光定量检测不同方法提取的RNA,对比CT值,比较不同方法的提取效率。结果同一检测项目不同试剂的机提之间无显著差异（t1=0．805,P1=〉005;1．952,P4〉O．05）,机提与手工法之间有显著差异（t3=-3．314,P3〈0．01;t1=-3．576,P2〈0．01）;手工法提取30个样本所需时间均为2h左右;而全自动核酸纯化系统同时提取32个样本所需时间均在1h以内;结论全自动核酸纯化系统提取效率明显优于手工法,NP968全自动核酸纯化系统磁珠法试剂是全开放性的,全自动核酸纯化系统操作简单、快速、提取效率高,值得临床检验推广。     

两种HBV DNA定量试剂在慢性乙型肝炎医疗决策点的比较研究

目的比较两种实时荧光定量HBV-DNA检测试剂对慢性乙型肝炎（CHB）患者管理的一致性。方法选取某国产试剂H和Roche公司COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan（CAP/CTM）高灵敏核酸检测系统作为比较对象,分别检测133例CHB患者血清HBV-DNA。选择HBV-DNA〈500 IU/mL、500～2000 IU/mL、〉2000 IU/mL等三个浓度进行两检测系统的一致性监测。结果 （1）两系统检测结果比较,试剂H组HBV-DNA浓度为500～2000 IU/mL时,其结果的Log值为2.84±0.27,相应标本在CAP/CTM组的检测结果为3.48±0.54,两种系统检测结果差异有统计学意义（P=0.000）。试剂H组HBV-DNA浓度为〉2000 IU/mL时,其结果的Log值为4.74±1.06,相应标本在CAP/CTM组的检测结果为5.32±1.01,两种系统检测结果差异有统计学意义（P=0.000）。（2）以CAP/CTM为标准,试剂H在HBV-DNA〈500 IU/mL、500～2000 IU/mL、〉2000 IU/mL时的敏感度分别为100%、81.5%和75.9%;特异度分别为87.5%、95.3%和100%。结论国产试剂H系统和CAP/CTM系统在对CHB患者的抗病毒治疗筛选上以及停药的关键医疗决策浓度监测上有较大差异。     

ELISA法检测乙肝标志物的临床应用

目的探讨ELISA法检测健康体检者血清中HBsAg的临床效果。方法用三个不同公司生产的乙肝表面抗原（HBsAg）检测试剂盒,通过ELISA法检测220例健康体检患者血清中HBsAg水平,检测出的阳性标本再用免疫胶体金试纸条检测,比较三个不同公司生产试剂盒检测阳性率及与金标试纸条法检测的一致性。结果江莱、万泰、新创三家厂家生产的试剂盒检测HBsAg阳性率分别为12.3%（27/220）、9.5%（21/220）、13.6%（30/220）。新创阳性率最高。阳性血清经金标试纸条检测阳性结果分别为24、18、27例。新创试剂盒ELISA法检测抗原包被浓度为1.25 IU/L时,仍可检出阳性标本。其他两个试剂盒最低检出浓度为2.5 IU/L,差异无统计学意义（χ2=1.25,P〉0.05）。结论不同厂家ELISA试剂盒检测结果存在差异,临床检测时需综合几个试剂盒结果及其他试验进行印证。     

严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)核酸检测试剂盒临床诊断效能评估

目的: 了解三种严重急性呼吸综合征冠状病毒2（SARS-CoV-2）核酸检测试剂盒的检测效果及临床诊断效能。方法: 采集40例临床诊断为2019冠状病毒病（COVID-19）和16例非COVID-19住院患者的咽拭子样本。采用湖南圣湘生物科技有限公司（以下简称“圣湘公司”）、硕世生物科技股份有限公司（以下简称“硕世公司”）、深圳华大基因股份有限公司（以下简称“华大基因”）SARS-CoV-2核酸RT-PCR检测试剂盒检测上述样本并分析其敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值和Kappa值。比较一步裂解法和磁珠法、两种不同核酸提取仪（圣湘公司Natch CS S12C全自动核酸提取系统和西安天隆科技有限公司NP968-C核酸提取仪）磁珠法提取咽拭子样本中病毒核酸的效果及其RT-PCR检测结果的阳性符合率、阴性符合率、总符合率及Kappa值。结果: 圣湘公司试剂盒检测SARS-CoV-2核酸的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值和Kappa值分别为95.00%、87.50%、95.00%、87.50%和0.825,硕世公司试剂盒分别为90.00%、87.50%、94.74%、77.78%和0.747,华大基因试剂盒分别为82.50%、81.25%、91.67%、65.00%和0.593。一步裂解法和磁珠法提取的病毒核酸检测结果阳性符合率、阴性符合率、总符合率和Kappa值分别为95.24%、100.00%、96.43%、0.909,但一步裂解法仅耗时25 min,而磁珠法需180 min。两种不同核酸提取仪磁珠法提取的RNA检测结果阳性符合率、阴性符合率、总符合率和Kappa值分别为85.00%、100.00%、89.29%和0.764。结论: 圣湘公司试剂盒检测SARS-CoV-2核酸效果略优于其他两家公司试剂盒。一步裂解法提取咽拭子样本中总RNA具有操作简单、省时和检测结果符合率较高的优点。     

弓形虫(TOXO)IgG抗体ELISA诊断试剂盒的研制

目的用间接ELISA法检测人弓形虫(TOXO)IgG抗体进行了优化改良，建立了快速法诊断TOXO-IgGELISA试剂盒。方法用自己生产的原材料采用间接ELISA法研制TOXO-IgG检测试剂，对随机选择的352份临床孕妇血清标本进行了检测，并与德国DIMATOXO-IgGELISA试剂进行比较。结果自制试剂盒敏感性、特异性和诊断指数分别为91．4％，94．6％和186．0％，两者符合率为94．3％。结论本试剂盒的质量与国外商品试剂相似，有较好的特异性和敏感性，可广泛应用于临床优生优育检测。     

单纯疱疹1型病毒(HSV1)IgM抗体ELISA试剂盒的研制

目的 建立快速、敏感、特异性好的抗单纯疱疹1型病毒（HSV1）IgM的检测方法。方法 制备纯化抗原及单抗，对间接ELISA法检测人单纯疱疹1型病毒（HSV1）IgM抗体方法进行了优化改良，并对随机选择的331份临床孕妇血清标本进行了检测，用德国DIMA HSV1-IgM ELISA试剂与本试剂同时比较。结果 本试剂盒的敏感性、特异性和诊断指数分别为82．1％，93．5％和175．6％，与德国试剂的符合率为92．1％。结论 本试剂的质量与国外商品试剂相似，具有较好的特异性和敏感性，可广泛应用于临床优生优育检测。