耐碳青霉烯鲍曼不动杆菌耐药机制研究进展

鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii,Ab)作为医院感染中最重要的致病菌之一,因抗生素不合理使用等多个因素使耐碳青霉烯鲍曼不动杆菌(Carbapenem resistant Acinetobacter baumannii,CRAB)检出率逐年上升,导致交叉耐药或多重耐药。其耐药机制主要包括碳青霉烯酶产生、外膜孔蛋白改变、外排泵活性增强、青霉素结合蛋白位点改变及整合子机制。本文就耐碳青霉烯鲍曼不动杆菌耐药机制研究进展做一综述,为临床抗感染治疗及新药研制提供参考。     

耐碳青霉烯类抗生素鲍曼不动杆菌耐药机制的研究

目的：调查和研究南昌地区鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类抗生素的耐药机制。方法：收集南昌大学第二附属医院2012年间临床分离的耐亚胺培南鲍曼不动杆菌（CRAB）非重复株。Vitek-32型全自动微生物分析仪进行菌株鉴定,K-B法进行药敏试验,三维试验检测AmpC酶,EDTA协同试验检测金属β-内酰胺酶,采用聚合酶链反应（PCR）扩增耐药基因,并对阳性产物进行双向测序分析,确定其基因型。结果：84株CRAB对临床常用的12种抗菌药物有9种耐药率〉90%,对头孢哌酮-舒巴坦的耐药率最低（44.0%）,所有菌株均为多重耐药株。三维试验在83株菌（98.8%）中检出AmpC酶,协同试验未检出产金属酶菌株。所有菌株均携带blaOXA-23、blaOXA-51及blaADC基因,1株携带blaOXA-58基因,未检测到blaOXA-24及金属酶基因（blaIMP、blaVIM-2、blaNDM-1及blaSIM-1）;外排泵编码基因adeB、调控基因adeS和adeR的检出率分别为98.8%（83/84）、81.0%（68/84）和67.9%（57/84）;所有菌株均检出外膜蛋白carO基因;69株（82.1%）检测出I类整合酶基因（intI1）,全部菌株携带插入序列ISAba1。结论：南昌地区CRAB耐药性及多重耐药性非常严重,鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类抗生素耐药的主要机制为产OXA-23型碳青霉烯酶,AmpC酶、外排泵AdeABC、I类整合子和插入序列ISAba1,可能与CRAB的多重耐药性密切相关。     

耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌外膜蛋白研究进展

近几年来,多重耐药或泛耐药的鲍曼不动杆菌已经在全球各地出现播散或暴发流行,并且耐药率也不断上升。世界各地都收集到对碳青霉烯类抗生素耐药的鲍曼不动杆菌,呈暴发流行。鲍曼不动杆菌外膜蛋白对碳青霉烯类抗生素低渗透性参与了其耐药机制形成。现就耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌外膜蛋白的种类特点与耐药性的关系综述如下。     

我院鲍曼不动杆菌携带blaOXA-23基因及其耐药机制研究

目的研究我院分离鲍曼不动杆菌携带bla_OXA-23基因的携带情况及其诱导细菌耐药机制。方法收集江阴市青阳医院2019年1月至2019年12月间临床分离鲍曼不动杆菌,经VITEK-2全自动微生物鉴定及药敏分析系统鉴定耐亚胺培南菌株100株,敏感菌株100株。通过多重PCR法检测上述菌株中bla_OXA-23、bla_OXA-24、blaOXA-51和bla_OXA-58基因携带情况。通过PCR法扩增亚胺培南耐药的鲍曼不动杆菌bla_OXA-23的ORF序列,构建过表达载体bla_OXA-23/pYMAb3并电转化鲍曼不动杆菌(ATCC 17978),以硫酸卡那霉素和美罗培南共同筛选过表达bla_OXA-23基因的菌株。采用稀释法检测转化bla_OXA-23/pYMAb3载体和pYMAb3空载体的菌株对亚胺培南的MIC。结果我院耐亚胺培南的鲍曼不动杆菌均携带bla_OXA-23,敏感株未检出携带该基因。RT-PCR法可检出转化bla_OXA-23/pYMAb3载体菌株表达bla_OXA-23基因,而转化pYMAb3空载体菌株未检出bla_OXA-23基因表达。转化bla_OXA-23/pYMAb3载体菌株对亚胺培南MIC为32μg/mL,转化空载体菌株MIC仅为0.5μg/mL。结论我院耐亚胺培南的鲍曼不动杆菌均携带bla_OXA-23基因,可以作为耐药菌株筛选的分子标记。由质粒携带的bla_OXA-23基因是诱发我院鲍曼不动杆菌耐药的重要原因,在院感工作中需高度重视。     

耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌中碳青霉烯酶基因的检测

目的 研究本院耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌(CRAB)中碳青霉烯酶基因流行状况,为治疗和控制其感染提供参考依据。方法 收集抚州市第一人民医院2015—2016年间临床分离的CRAB非重复株,Vitek-2 Compact型全自动微生物分析仪进行菌株鉴定和药敏实验,改良Hodge试验进行碳青霉烯酶初筛,EDTA协同试验检测金属β-内酰胺酶,采用聚合酶链反应(PCR)扩增耐药基因。结果 69株CRAB对替加环素耐药率为1.4%,复方磺胺甲噁唑耐药率81.2%,其他抗生素耐药率均在90%以上,全部表现为多重耐药。改良Hodge试验阳性55株(80.0%),EDTA协同试验未检出阳性菌株。基因扩增KPC酶基因38株(55%),OXA-23酶基因68株(98.6%),OXA-51酶基因69株(100%),未检测出IMP-1、VIM-1、NDM-1、SIM-1、OXA-24和OXA-58等酶基因。结论 本院69株CRAB耐药性非常严重,OXA-23和OXA-51型酶基因是其携带的主要碳青霉烯酶基因。     

多重耐药鲍曼不动杆菌的β内酰胺酶基因型研究

目的了解临床分离的多重耐药鲍曼不动杆菌β内酰胺酶基因的存在情况。方法采用MicroScan40微生物全自动鉴定系统微量肉汤稀释法测定菌株的耐药性。采用聚合酶链反应(PCR)方法检测β-内酰胺酶基因型。结果 30株鲍曼不动杆菌除对阿米卡星和左氧氟沙星耐药率分别为23.3%和30.0%外,对其他抗菌药物均达80.0%以上。检出β-内酰胺酶基因26株(86.7%),OXA-23样阳性20株(66.7%),OXA-51样阳性18株(60.0%),AMPC酶阳性18株(60.0%),TEM阳性5株(16.6%),SHV阳性4株(13.3%),PER阳性3株(10%),14株(46.6%)同时携带2种以上基因,未检出IMP、VIM、CTX-M-9,DHA、OXA-24、OXA-58。结论我院多重耐药鲍曼不动杆菌携带多种β-内酰胺酶基因,而且同时携带3种以上β-内酰胺酶基因比率高。     

鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类耐药机制研究进展

鲍曼不动杆菌是一种常见的院内感染菌,由于碳青霉烯类在临床上的经常使用,细菌对碳青霉烯类耐药率逐年增高。其耐药机制涉及因素较多,其中主要是产生碳青霉烯酶、膜孔道蛋白缺失、药物主动外排和青霉素结合蛋白改变等。耐药性的产生通常是由其中一种或几种机制共同作用导致。在耐药性的传播方面,质粒和整合子可能起到一定作用,但可能还是以克隆株的水平传播为主。     

鲍曼不动杆菌整合子阳性与多重耐药的相关性研究

目的在鲍曼不动杆菌中检测1~3类整合子,并分析整合子对细菌多重耐药性的影响。方法用琼脂二倍稀释法测定24种抗菌药物对临床分离68株鲍曼不动杆菌的抗菌活性,用聚合酶链反应进行整合子的初筛,对整合子阳性的菌株进行测序,并分析其多重耐药性。结果在68株临床分离多重耐药鲍曼不动杆菌中,发现19株I类整合子阳性,占27.9%;未检测到II、III类整合子。整合子阳性菌株对青霉素类(哌拉西林)、头孢菌素类(头孢噻肟、头孢哌酮、头孢曲松、头孢他啶、头孢吡肟)、氨基糖苷类、四环素类均呈现出高度耐药为86.7%~100%;对第3代头孢菌素类(头孢噻肟、头孢哌酮、头孢曲松)为100%耐药;对β内酰胺酶抑制剂复合制剂耐药率也达82.5%以上。比较整合子阳性与整合子阴性鲍曼不动杆菌耐药性,发现对氨基糖苷类、磺胺类抗菌药物耐药率差异有统计学意义。结论鲍曼不动杆菌耐药性严重,I类整合子广泛地存在于鲍曼不动杆菌中,I类整合子阳性菌株对氨基糖苷类、磺胺类抗菌药物的耐药率大于整合子阴性的菌株,提示整合子对细菌耐药性的播散有重要作用。     

耐亚胺培南鲍曼不动杆菌耐药机制研究

目的 研究鲍曼不动杆菌对亚胺培南的耐药机制。方法 对临床分离的3株耐亚胺培南的鲍曼不动杆菌，采用KB纸片扩散法（CLSI／NCCLS2004年标准）进行药敏试验，三维试验检测ESBLs和AmpC酶，PCR方法检测TEM、SHV、PER、VEB、AmpC、IMP、VIM、OXA-23和OXA-24等9种耐药基因型，PCR阳性产物进行基因测序，结果在GenBank基因库中比对分析。结果 3株鲍曼不动杆菌为多重耐药菌株，三维试验均产生ESBLs，1株产生AmpC酶，耐药基因型检测3株TEM阳性，2株PER阳性，2株AmpC酶阳性及SHV、VEB和IMP、VIM、OXA-24型等均为阴性；3株OXA-23型均阳性；另外27株对亚胺培南敏感鲍曼不动杆菌IMP、VIM，OXA-23和OXA-24型检测结果均阴性。结论 耐亚胺培南鲍曼不动杆菌携带TEM、PER、非诱导AmpC酶、OXA-23型碳青霉烯酶基因，产生OXA-23型碳青霉烯酶是主要耐药机制。     

鲍曼不动杆菌及其耐药基因的检测

目的：探索一种检测鲍曼不动杆菌及其耐药基因的新方法。方法首先对近几年医院内鲍曼不动杆菌的耐药情况进行分析,选择临床上治疗鲍曼不动杆菌的首选药,再采用聚合酶链反应对鲍曼不动杆菌及其突变株进行检测。结果鲍曼不动杆菌对亚胺培南的耐药率最低,为9.37%,OXA-51基因扩增结果与细菌培养相符,OXA-23基因扩增与鲍曼不动杆菌耐亚胺培南的结果相符。结论采用PCR法对OXA-51基因扩增可以检测是否存在鲍曼不动杆菌,采用PCR法对OXA-23基因扩增可以检测鲍曼不动杆菌是否存在亚胺培南耐药性。从而快速检测鲍曼不动杆菌及其耐药基因,指导临床用药。     

临床分离鲍曼不动杆菌耐药性及qnr基因检测

目的了解临床分离鲍曼不动杆菌中qnr基因和ESBLs基因的分布及其耐药特征。方法采用PCR法对115株鲍曼不动杆菌进行qnrA、qnrB、qnrS基因筛查,并用PCR法检测qnr阳性菌株SHV、TEM、CTX-M-14及CTX-M-3型ESBLs基因;用琼脂对倍稀释法测定15种抗菌药物对qnr阳性株的MIC值。结果115株鲍曼不动杆菌中,2株(1.74%)细菌检出qnrB基因;qnr阳性菌株同时检出SHV、CTX-M-14、TEM、CTX-M-3型ESBLs基因。1株qnr阳性菌株对4种喹诺酮类耐药,1株对左氧氟沙星及莫西沙星中介,对环丙沙星和洛美沙星耐药;2株阳性菌除对亚胺培南和头孢哌酮/舒巴坦敏感外,对其他的β-内酰胺类抗菌药物均耐药。结论临床分离鲍曼不动杆菌中存在qnrB基因,qnr阳性株同时含有ESBLs基因,且呈多重耐药,临床应加强监测。     

耐碳氢酶烯类鲍曼不动杆菌的分子流行病学研究

目的：了解某医院临床分离耐碳氢酶烯类鲍曼不动杆菌的菌株同源性及其耐药情况。方法收集2013年1月－2014年12月,某院临床分离到的48株耐碳氢酶烯类鲍曼不动杆菌,采用 K －B 法进行药敏试验,肠杆菌科基因间重复序列聚合酶链反应（ERIC －PCR）试验研究上述菌株的基因同源性和科室分布。结果48株耐碳氢酶烯类鲍曼不动杆菌用 ERIC －PCR 方法可分为三个基因型,A 型2株,B 型43株,C 型3株,其中 B 型为主要的流行株,主要来自于重症监护病房、呼吸科和神经外科。结论耐碳氢酶烯类鲍曼不动杆菌的多重耐药性严重,该医院内存在耐碳氢酶烯类鲍曼不动杆菌的克隆流行,以 ICU 最为严重,应采取有效措施防止和延缓其院内交叉感染的发生和耐药性的进一步增高。     

鲍曼不动杆菌的临床分离及其耐药性分析

目的 分析鲍曼不动杆菌（Ab）对抗菌药物的耐药性,以指导临床医师合理用药. 方法 应用法国生物-梅里埃ATB Expression型全自动鉴定等系统分析我院2009年1月1日至2010年2月28日住院患者分离出的56株Ab,对其分离率,耐药性进行分析. 结果 总分离率分别为：2009年1～4月1.25%（9/720）;2009年5～10月2.07%（15/726）;2009年11月至2010年2月4.34%（32/738）.其中重症监护室在各病区占的比例较高,百分比为53.6%,该菌在临床各种标本中的分布情况以百分比计其中痰标本高达87.5%. 结论 Ab目前对多黏菌素E无耐药,对亚胺培南、美罗培南敏感,对其他抗菌药物已高度耐药;重视细菌培养、合理使用抗菌药物有利于控制耐药菌的产生.     

鲍氏不动杆菌耐喹诺酮类药物的机理研究

目的：研究鲍氏不动杆菌对喹诺酮类药物的耐药机制。方法：对临床上收集的耐环丙沙星鲍氏不动杆菌进行氟罗沙星摄取试验、外膜蛋白电泳、PCR扩增gyrA和parC基因、酶切分析和测序。结果：耐药株药物聚积量不及敏感株的1／2，经碳酰氰间氯苯腙（CCCP）处理后，聚积量上升并接近敏感株；经SDSPAGE电泳，耐药株与敏感株比较，外膜蛋白在约29ku条带处消失，而24ku处条带却明显增强；PCR－RFLP分析，gyrA基因能产生1条DNA片段，而parC基因则能产生2条片段；测序结果显示，其GyrA蛋白中所编码83位（相应于大肠埃希氏菌）氨基酸由丝氨酸变为亮氨酸，ParC蛋白未见氨基酸改变。结论：该株对环丙沙星耐药鲍氏不动杆菌存在DNA促旋酶变异，药物主动外运及外膜的改变。     

耐亚胺培南鲍曼不动杆菌耐药性及OXA碳青霉烯酶检测

目的 分析97株临床分离的耐亚胺培南鲍曼不动杆菌的耐药特点及OxA碳青霉烯酶分布.方法 用国际标准平皿二倍稀释法,明确研究菌株的耐药表型;用脉冲场凝胶电泳法,对其进行分型并用PCR的方法,检测OXA碳青霉烯酶.结果 97株耐亚胺培南鲍曼不动杆菌均为多药耐药菌株,其中2株为泛耐药菌株;主要存在7个流行克隆株;有78株菌携带bal-oxa-23基因(80.4%);2株菌携带bal-oxa-58基因(2.1%);未发现携带bal-oxa-24基因的菌株.结论 在我国的亚胺培南耐药的鲍曼不动杆菌中,OXA-23仍为主要分布的碳青霉烯酶.     

安徽地区耐碳青霉烯鲍曼不动杆菌分子流行病学研究

目的 研究安徽地区耐碳青霉烯鲍曼不动杆菌(carbapenem-resistant Acinetobacter baumannii, CRAB)的耐药性、碳青 霉烯酶基因型及分子流行病学研究,为控制医院感染提供理论依据。方法 收集安徽地区43家三级医院2015年9月和2016年9月 CRAB非重复菌株312株,从中挑选出两年内均有CRAB的医院12家,菌株147株。对挑选出的147株CRAB采用琼脂稀释法测定 16种抗菌药物的最低抑菌浓度(minimal inhibitory concentration, MIC);PCR扩增碳青霉烯酶耐药基因;采用多位点序列分型技 术(multilocus sequence typing, MLST)进行分子分型,使用eBURST软件分析菌株亲缘性。结果 147株临床分离的CRAB均为多 重耐药菌株,对16种抗菌药物耐药性均较高,其中对替加环素和米诺环素耐药性较低,分别为9.27%和54.26%。147株CRAB中 有134株携带blaOXA-23基因,1株携带blaOXA-24 基因,4株携带blaIMP基因,全部携带blaOXA-51基因,其余碳青霉稀类耐药基因均未检 出。147株CRAB分为26个ST基因型,其中13个ST分型属于CC92克隆群,ST195有48株,为安徽地区最常见ST型,另外新发现 15个ST基因型。结论 本研究中安徽地区147株CRAB对临床常用抗生素耐药性严重,除替加环素和米诺环素外,耐药率均在 76%以上。blaOXA-51是位于染色体上的固有基因,检出率为100%;blaOXA-23 是安徽地区最主要的碳青霉烯酶基因型,检出率为 91.15%。CC92为安徽地区最主要克隆群,与世界流行克隆群一致。本研究所测147株菌株间存在进化间关系,提示可能存在水 平传播趋势。     

鲍曼不动杆菌的临床调查

目的　了解鲍曼不动杆菌在医院的分布 ,动态观察其耐药性发展情况 ,为临床合理应用抗生素提供依据。方法　用法国生物梅里埃公司的API及VITEK2鉴定系统对临床分离菌株进行鉴定 ,用K- B纸片扩散法进行药敏试验 ,用WHONET5软件对药敏结果进行统计学分析。结果　鲍曼不动杆菌对所监测的 11种抗生素均有不同程度的耐药 ,动态观察其耐药率有逐渐增高的趋势 ,尤以 2 0 0 3年增高最为明显 ,重症监护室 (ICU)的耐药率明显高于非ICU。结论　多重耐药的鲍曼不动杆菌感染在临床上呈上升趋势 ,尤其在ICU ,使临床医生对鲍曼不动杆菌感染的治疗越来越棘手 ,因此对鲍曼不动杆菌进行规范的连续的耐药监测 ,及时发现耐药菌株 ,对临床调整治疗方案、预防医院感染的发生是十分重要的。